UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

DECANATO

PROYECTO DE TESIS

1. TITULO DE PROYECTO:

FRECUENCIA DE Listeria spp EN PALTA CONGELADA. PROVINCIA DE VIR

DEPARTAMENTO DE LA LIBERTAD - NOVIEMBRE 2015 MAYO 2016

2 .PERSONAL INVESTIGADOR:

2.1 Autor: Ana Rosa Monteza Alarcn

2.2 Asesor: Dr. Martha Vergara Espinoza.

3. Carrera Profesional/Especialidad:
Carrera Profesional de Biologa
Especialidad de Microbiologa y Parasitologa
4. Tipo De Investigacin:
4.1. De acuerdo al fin que se persigue: Descriptiva
4.2. De acuerdo a la tcnica de contrastacin:

Diseo experimental de una sola casilla

5. Rgimen de Investigacin: Libre

6. Localidad e Institucin donde se desarrollar el proyecto:

Laboratorio de alimentos de la provincia de Vir La Libertad

7. Duracin del proyecto: 10 meses

 8. Fechas de inicio y terminacin:

Inicio: Noviembre - 2015

Terminacin: - Mayo- 2016

9. Cronograma de Trabajo:

2015 2016

ACTIVIDADES N
En Fe Ma Ab Ma
o Dic
e b r r y
v

9.1. FASES DE
PLANEAMIENTO
Revisin Bibliogrfica X x x x x x x

Elaboracin de X x x x
proyecto
Presentacin de x
proyecto
Aprobacin de x x
proyecto
Implementacin X x x x x x x
de proyecto
9.2.FASES DE
EJECUCION
Procesamiento de la x x x
muestra
Resultados de las x x x
muestra
x x x
Registro de datos
Anlisis estadsticos x x x
de datos
9.3.FA0SES DE
COMUNICACIN
Anlisis e interpretacin x X

Elaboracin de informe X x

Presentacin de informe x
10. Recursos disponibles:
Personal:
El presente proyecto tiene como personal, la autora, Asesora y personal del
laboratorio de Anlisis de Alimentos de la provincia de Vir La Libertad.

Equipos e Instrumentos:
Estufa marca MEMMERT rango 37C.
Equipo Molecular Detection Assay (MDA) Listeria
Micropipetas
Balanza
Stomacher
Autoclave vertical, rango T 121 C.
Computadora
Microscopio

Materiales y Reactivos:
Kit determinacin de Listeria 3M.
Kit APPI.
Modified Listeria Recovery Broth .
Modified Listeria Recovery Broth Supplement.
Agar Listeria Ottaviani Agosti.
Aloa Enrichment Supplement para Agar
Aloa Selective Supplement.
Agar Oxford selective .
Oxford- Listeria- Selective Supplement
Agar tryptic soy
Fraser Listeria Selective- Supplement.
Fraser Listeria Ammoniun iron.
APPI Listeria ZYMB toxico. Este no encuentro
Perxido de hidrogeno.
Batera Gram.

11. Local

Laboratorio de Anlisis de Alimentos ubicado en la provincia de Viru La

Libertad.
 Laboratorio de Microbiologa y Parasitologa de la Facultad de Ciencias
Biolgicas, Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo en Lambayeque.

12. Presupuesto:
02.00 BIENES
02.06 Materiales y tiles 99
2 Lapiceros Faber Unidad 3
4 Marcadores Faber Unidad 6
2 Tijeras Faber Unidad 3
2 Grapador Faber Unidad 10
2 Perforador Faber Unidad 10
1 Regla Faber Unidad 2
1 Posit Anota Unidad 10
Folder Faber Unidad 15
1 Papel bond A4 Xerox Millar 40
02.09 Material de limpieza 13
2 Escobillas Unidad 3
2 Esponjas Unidad 2
2 Detergentes Unidad 5
2 Leja 3
02.14 Material de laboratorio 9.304,00
1 Agar OXFORD Merck 500 g 500
1 Agar ALOA Merck 500 g 800
1 Caldo MLRB Merck 500 g 250
1 Caldo FRASER Merck 500 g 289
1 Agar TSAYE Merck 500 g 400
6 Suplemen Selectivo OXFORD Merck 500 g 460
6 Suplent enriquecimiento ALOA Merck 500 g 800
Suplemen Selectivo
6 ALOA Merck 500 g 800
OXFORD
Suplent enriquecimiento FRAS
6 Merck 500 g 200
ALOA ER
Suplemen Selectivo FRAS
6 Merck 500 g 500
OXFORD ER
Agua destilada 1000
200 Frascos Boeco Unidad 2000
20 Matraz Pirex Unidad 300
200 Tubos de ensayo Pirex Unidad 140
3 Laminas Caja 12
3 Bageta Unidad 18
400 Cucharas Unidad 50
 4 Gradillas Unidad 20
6 Racks Unidad 96
1 Placas Petri Caja 200
100 Pipetas Unidad 200
1 Puntas Caja 200
4 Mecheros Unidad 40
2 Guantes Caja 11
2 Mascarillas Caja 15
3 Algodn Unidad 3
SERVICIO
03.00 600
S
03.01 Pasajes y gastos de transporte 200
Internet 100
Servicio de impresiones 300
encuadernacin y empastado
Equipamiento y bienes
03.25 2.440,00
duraderos
Computadora VOC 1200
Cmara digital SONNY 1200
U SB 8G 8Gb 40
TOTAL 10.016,00

13. Financiamiento:
El presente proyecto ser financiado por la responsable de la investigacin, adems
se contar con el apoyo del laboratorio de Anlisis de Alimentos y el Laboratorio de
Microbiologa y Parasitologa de la facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad
Nacional Pedro Ruiz Gallo referente a equipos, instrumentos e infraestructura.
II. PLAN DE INVESTIGACION

1. REALIDAD PROBLEMTICA
La Palta es un fruto que se consume directamente como fruta fresca o como
ensalada, tambin se usa en la elaboracin de un producto procesado, es
ampliamente cultivada y procesada en diversas regiones del pas y sus productos
deben cumplir con diferentes especificaciones contempladas en la Norma sanitaria
que establece los criterios microbiolgicos de calidad sanitaria e inocuidad para los
alimentos y bebidas de consumo humano, en ella indica la cantidad de
microorganismos que condiciona la peligrosidad para causar enfermedades
alimentarias; un microorganismo que causa contaminacin de producto congelado
de Palta es Listeria, cuya presencia en alimentos se ve favorecida por la humedad,
temperatura, tolerancia al pH, agente conservantes como NaCl y nitritos y, por la
facultad de adherirse a superficies formando biopelculas para protegerse de la
accin de tratamientos antimicrobianos, esto le permite alojarse en maquinarias,
equipos, fajas, utensilios, cmaras de frio y tneles de congelacin, sobreviviendo
por periodos prolongados e inclusive hasta alcanzar la dosis infectiva la que se
complica con la contaminacin cruzada.(Rodrguez R. 2007)

La Listeriosis es considerada como una enfermedad transmitida por alimentos

(ETAS) consecuencia de su contaminacin con Listeria spp, de las seis especies
incluidas, L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri, L. grayi . L. ivanovii y L.
monocytogenes, esta ltima causa una de las principales zoonosis emergentes que
se caracteriza por abortos, septicemia, encefalitis, gastroenteritis febriles leves
similares a una gripe. La tasa de mortalidad es de 20-30% y la dosis mnima
requerida de L. monocytogenes para causar infeccin clnica en humanos no ha
sido determinada a pesar de que los casos espordicos y epidmicos de Listeriosis
en un 99% es provocado por alimentos. (FAO _OMS 2004)

Otra alternativa de consumo corresponde a la industrializacin, lo que tambin

favorecera el acceso de este producto a zonas lejanas, donde, por la perecibilidad
del producto, su consumo es escaso o espordico.

Entre las posibles alternativas de procesamiento, se consideran, entre otros: el

congelado, refrigerado, deshidratado y enlatado. Una tcnica que ha tenido buenos
 resultados es la conservacin por congelado, combinada con el uso de aditivos para
reducir el obscurecimiento del fruto (oxidacin) que es el principal obstculo para
mantener la calidad del producto. Esta tcnica permite preservar durante un tiempo
prolongado, la calidad de productos alimenticios, ya que, al disminuir la temperatura,
se reduce la velocidad de las reacciones que deterioran las caractersticas fsicas y
qumicas del producto. Para lograr ptimos resultados es necesario considerar que
la congelacin slo se puede utilizar en la medida que existan instalaciones
adecuadas para el proceso, en virtud de que el producto se debe mantener sin
interrupcin a una temperatura de almacenaje (-20C) hasta el momento del
consumo.

La tcnica de congelado se basa en que, al disminuir la temperatura a niveles de -

20C, se inhibe el crecimiento y desarrollo de cualquier microorganismo, a la vez
que disminuye la velocidad de las reacciones qumicas y bioqumicas del producto,
mientras que las reacciones metablicas celulares se paralizan completamente,
conservando durante un tiempo prolongado la calidad del producto alimenticio
(OLHAGARAY, 1989; CHEFTEL et al., 1976).

Segn reportes epidemiolgicos, en Estados Unidos se presentan 2500 casos de

Listeriosis, en Europa la incidencia anual es de 0.1 y 11.3 casos por milln de
habitantes, en Chile se ha reportado 27 casos de Listeriosis con una mortalidad de
26% y en el Per, slo en la regin de la Libertad, una mortalidad de 42 casos (4).
As mismo, diversos estudios ejecutados en Per dan cuenta del asilamiento de L.
monocytogenes en hortaliza, queso fresco, ensaladas, yogur, pollo, verduras y
pescado entre otros en porcentajes que oscilan entre el 2% y el 35%.(Ruiz et al.,
2008).

1.1. Identificacin del problema

Listeria spp. en palta congelada.

1.2 Delimitacin del problema

Frecuencia de Listeria spp. en palta congelada de la provincia de Vir,

departamento de la Libertad de Noviembre del 2015 a Mayo del 2016

2. PROBLEMA
 Cul es la frecuencia de Listeria spp. en palta congelada de la provincia de Vir -
La Libertad entre los meses de Noviembre del 2015 a Mayo del 2016?

3. HIPTESIS

Es alta la frecuencia de Listeria spp. en palta congelada de la provincia de Vir

departamento de la Libertad entre Noviembre 2015 a Mayo 2016.

4. JUSTIFICACION E IMPORTANCIA

El presente estudio se justifica porque en la provincia de Vir - departamento de la

Libertad se cultiva palta en extensas reas de terreno debido a su aceptacin en el
consumo por sus propiedades alimenticias, facilidad de preparacin en platos
caseros, agradable sabor, precios al alcance de los consumidores y frecuente
permanencia en lugares de expendio, as mismo tiene gran demanda en el mercado
exterior hacia donde se exporta como producto congelado. Sin embargo, por sus
caractersticas fsico-qumicas y de cultivo, la palta es susceptible de contaminacin
microbiana por Listeria spp desde el campo hasta su procesamiento, lo que
contraviene con las normas de control de calidad para su consumo y exportacin.

Dicha situacin ocasiona un gran costo econmico y social ya que por un lado, se
requiere de un procesado, eliminacin de un producto, paralizacin de la produccin
para extremar las labores de limpieza y desinfeccin, complicacin con
contaminaciones cruzadas; etc. y por otro, se corre el riesgo de que la manipulacin
o consumo cause brotes de Listeriosis con gran riesgo de la salud humana. A pesar
de todo lo mencionado y si bien existen referencias que demuestran, incluso altos
ndices de contaminacin de productos alimenticios, no se encuentran
investigaciones relacionadas con la contaminacin de palta congelada con especies
de Listeria spp.

Esta investigacin permitir conocer la frecuencia de aislamientos de Listeria spp.

en palta congelada a fin de tomar medidas correctivas para evitar la contaminacin
del producto con lo cual se reduciran las prdidas econmicas que se producen por
dicha contaminacin, adems se estara previniendo la presentacin de Listeriosis.
Finalmente se ampliar el conocimiento acerca de la contaminacin alimentaria con
este tipo de microorganismos y se incentivar la ejecucin de ms investigaciones al
 respecto tendientes a resolver los problemas que acarrea la contaminacin
microbiana de los alimentos.

5. OBJETIVOS

Determinar la frecuencia de Listeria spp. en palta congelada de la provincia de

Viru departamento de La Libertad entre Noviembre 2015 a Mayo de 2016.

Identificar las principales especies de Listeria spp. aisladas de palta congelada

de la provincia de Viru departamento de La Libertad entre Noviembre 2015 a
Diciembre de 2016.

6. MARCO TEORICO

6.1. Bases tericas

La amplia distribucin en el medio ambiente de Listeria spp. su capacidad de

sobrevivir a condiciones adversas, resistencia a antibiticos y capacidad para
multiplicarse a temperatura de refrigeracin de 1C hasta un valor cercano a los
45C, permite a dicho microorganismo, mantener la viabilidad en el interior o en las
superficies de los alimentos que generalmente se conservan a bajas temperaturas,
tales como frutos productos alimenticios y otros (AESAN 2011). A partir de ellos
puede ser adquirido por diferentes huspedes en los que, algunas de las especies,
ocasionan enfermedades de leves a muy severas. (AESAN 2011).

As mismo, las bacterias del genero Listeria tienen la caracterstica de proliferar en

ambientes fros y hmedos, de adherirse a superficies vivas e inertes en slo un
espacio corto de tiempo por tanto forman de manera rpida biofilms, lo que les
permite adherirse a equipos o mquinas, permanentes e inmovibles, que se utilizan
para el procesamiento de los alimentos como las paltas de alto contenido de
nutrientes como aceites grasos esenciales. Por otro lado, despus de las
transformaciones, en los equipos y maquinaria, siempre habr espacios donde la
limpieza cosmtica no ingrese y los microorganismos formadores de biofilms se
adhieran y proliferen, incrementando la probabilidad de contaminar el producto
terminado. (Tllez 2010)

Segn el reglamento de los criterios microbiolgicos aplicados a los productos

alimenticios, los alimentos listos para el consumo humano que puedan favorecer el
crecimiento de Listeria monocytogenes debe tener como resultado ausencia de
dicha bacteria en 25 gramos de un producto alimenticio; cabe resaltar que este
microorganismo se ha convertido en uno de los principales agentes patgenos
transmitidos por alimentos listos para el consumo, por lo que actualmente no existe
ningn acuerdo internacional con relacin a los niveles de tolerancia de este
microorganismo y se mantiene una poltica de tolerancia cero que puede ser
aplicada a todos los alimentos. (FAO - OMS 2004).
6.2. Antecedentes

Prez et al., (2012), en Trujillo ejecutaron estudios en hortalizas tales como

zanahoria, tomate, espinaca, lechuga y rabanito para determinar la frecuencia de
Listeria monocytogenes; el muestreo se aplic segn la tcnica peruana 2850-
1:2009, durante los aos 2010 y 2011, para ello se trabaj con 240 muestras
obtenidas de diferentes mercados de abastos. El porcentaje de positividad total de
aislamiento de Listeria monocytogenes fue del 25.42 y por el tipo de hortalizas fue:
en tomate 10.42; zanahoria 31.25, espinaca 22.92, lechugas 29.17 y en rabanito
una positividad del 33.33%. Se concluy que la fuente de contaminacin es el agua
servida proveniente del alcantarillado la ciudad que se utilizan para el cultivo de la
mayora de los alimentos, as mismo que la contaminacin tambin es debida a la
deficiencia higinica sanitaria que presentan los centros de abastos.

Daz et al., (2012), realizaron una investigacin en leche fresca y queso para
detectar Listeria monocytogenes, se tom de manera asptica 60 muestras de leche
fresca obtenida de establos y comedores de vaso de leche, adems 60 muestras
de queso fresco comercializado en la provincia de Trujillo; el muestreo se realiz
segn la norma tcnica peruana NTP ISO 2859-1 :2009, adems se aplic
encuestas a los comercializadores con la finalidad de evaluar los puntos crticos y
los factores de contaminacin. Como resultado se obtuvo que en leche fresca no se
aisl Listeria monocytogenes, sin embargo para queso fresco se obtuvo 34% de
positividad. Segn la encuesta se detect un sistema inadecuado de limpieza,
desinfeccin y manipulacin.

Moreno et al., (2008) desarrollaron un estudio de sensibilidad a los

antibiticos de Listeria spp. aislada de muestras de pescado de los mercados de la
ciudad de Trujillo, se obtuvo como resultado 10 cepas de Listeria monocytogenes y
15 cepas de Listeria sp. El antibiograma mostr que el 90% de cepas de Listeria
monocytogenes fueron sensibles a gentamicina, antibitico aminoglucsido cuyo
mecanismo de accin es la inhibicin de la sntesis de protenas a nivel ribosomal; el
80% de cepas de Listeria spp. fueron sensibles a vancomicina, ampicilina y
gentamicina.
 Segura et al., (2014), determinaron la presencia de Listeria monocytogenes
en 102 muestras de ensalada de frutas y 102 muestras de yogur natural colectadas
en diferentes centros de expendio de la provincia de Trujillo. De las muestras de
ensaladas de frutas se obtuvo un 7.84% de aislamiento de Listeria monocytogenes
considerndose como factores de contaminacin la manipulacin y limpieza; en
yogur se encontr un 4.90% de positividad, al respecto se afirm que la leche,
materia prima para la preparacin de yogur natural, es inocua al momento de
extraerla por no contener microorganismos patgenos, pero despus de 1 hora
aproximadamente es un excelente caldo de cultivo para el crecimiento de este
microorganismos.

Centurion et al., (2014), ejecutaron una investigacin para determinar la

frecuencia de Listeria monocytogenes y otras Listerias en carne de pollo fresco y
verduras frescas obtenidas en mercados y centros de abasto de Lima metropolitano.
Se procesaron 50 muestras de cada una de las matrices, en verduras se trabaj con
distintas matrices como espinacas, esprragos, lechuga, col y apio; se emple el
mtodo ISO 11290. Se obtuvo 22% de positividad en carne de pollo del cual 2%
correspondi a Listeria monocytogenes y 20% para Listeria inocua, adems se
obtuvo 7.7% de Listeria monocytogenes en verduras especficamente esprragos.

Herrera et al., (2012), realizaron investigaciones en aislamiento e

identificacin de Listeria spp a partir de muestras de pescado fresco de la ciudad de
Pamplona, empleando el mtodo de inmunocromatogrfia, adems se aplicaron
encuestas considerando un muestreo por proporciones. En 51 muestras de
pescado se obtuvo una prevalencia de 3.95% del cual se logr identificar en el
17.6% Listeria innocua, en el 13.7 % Listeria grayi y en el 35,3% Listeria
monocytogenes. Se concluy que la prevalencia de Listeria sp en muestras es muy
alta, debido a que existe una contaminacin de las aguas siendo esto por un
colector de agua residuales domesticas industriales y de diferente ndole,
considerando adems que durante el transporte y distribucin del pescado existe
contaminacin adicional.
 Betancourt et al., (2010), con la finalidad de determinar la presencia de
Listeria monocytogenes en matrices de longanizas, hortalizas y leche que contaban
con resolucin sanitaria y usando la metodologa de Food and Drug Administration
(FDA), se analizaron 72 muestras de longanizas y 48 muestras de hortalizas; se
obtuvo 61% y 16,6% de positividad a Listeria monocytogenes para las muestras de
longanizas y hortalizas respectivamente. En la leche no se report aislamientos de
la bacteria investigada. Se determin la importancia de prcticas higinicas estrictas
durante la manipulacin de los alimentos en las empresas agro alimentaras donde
existe dificultad para el control de la desinfeccin y la higiene.
 7. MATERIALES Y METODOS

7.1. Materiales

7.1.1. Material Biolgico: Palta congelada

7.2. Mtodos

7.2.1. Poblacin y muestra de estudio

Para estimar el tamao muestras se utiliz como prevalencia terica la indicada en

un trabajo realizado en Per en el cual el porcentaje de positividad es 0.18%
prevalencia. (Prez et al., 2012)

Que aplicando la frmula:

n Z 2 p q 1.96 0.18 0.82

2
227 muestras
h2 0.05 2
Dnde:

n = tamao de la muestra.
Z = valor de Z crtico, calculado en las tablas del rea de la curva normal. Llamado tambin nivel de
confianza.
h = nivel de precisin absoluta. Referido a la amplitud del intervalo de confianza deseado en la
determinacin del valor promedio de la variable en estudio.
p = proporcin aproximada del fenmeno en estudio en la poblacin de referencia
q = proporcin de la poblacin de referencia que no presenta el fenmeno en estudio (1 -p). La
suma de la p y la q siempre debe dar 1.

7.2.2. Tipo de investigacin y diseo

El presente trabajo de investigacin es de tipo descriptivo y corresponde a una

investigacin con Diseo experimental de una sola casilla.
8. PROCEDIMIENTO:
Se seguir el procedimiento descrito en la NTP ISO 11133-1:2009 Microbiology
of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production
of culture media

8.1 Preparacin de la muestra:

Culture medium for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes in

foods. The culture medium corresponds to Agar Listeria acc. to Ottaviani and
Agosti in line with the recommendations of ISO 11290(2004) and FDA/BAM (2003).

Cepa control: Listeria monocytogenes Culti-loops ATCC7644

Listeria innocua Culti-lops ATCC33090

Desinfectar la superficie del empaque de la muestra con alcohol antes de ser

recortada.
Cerca al mechero con una tijera estril recortar la superficie del empaque de
la muestra.
Homogeneizar la muestra con una cuchara estril y tomar de diferentes
puntos la muestra.
pesar 25gr de muestra en una bolsa estril.
Agregar el caldo Listeria hasta completar los 250ml
Dejar reposar por 15min.
Estomaquear por 2min.
Incubar en estufa de 37 C por 28-30 hrs. Aproximadamente.
Retirar de la estufa y homogeneizar con pequeos movimientos.

8.2. The 3M Molecular Detection Assay (MDA) Listeria

AOAC Performance tested (Certificate 081203)

Retirar el kit de MDS y dejar reposar por 2 hrs. a temperatura ambiente.

Codificar los pocillos de lisis del kit, utilizando un pocillo por muestra y un
control negativo.
Abrir con el auxiliar, las tapas de los pocillos.
Agregar 20ul de la muestra a cada pocillo.
Agregar muestra del reactivo del mismo kit al pocillo de lisis como control
negativo.
Cubrir con las tapas los pocillos e invertir de 3-5 veces, hasta homogenizar.
8.2.1. FASE DE LISIS

Encender el calentador y en conjunto con un termmetro medir que se

encuentre en 100C.
Del mismo modo colocar el bloque de enfriamiento al congelador por lo menos
2 hrs. tiene que estar a una temperatura -20c
Someter a calor el kit por 15 min en el bloque de calentamiento.
Luego colocar al bloque de enfriamiento por 10min.
Invertir de 3-5 veces y dejar reposar por 5 min.

8.2.2. FASE DE AMPLIFICACION

Agregar 20 ul de la muestra de los pocillos de lisis a los pocillos reactivos.

Mezclar suavemente pipeteando de 3 5 veces de abajo hacia arriba.
Agregar 20ul del tubo de control negativo pocillo de lisis, al pocillo reactivo del
control positivo.
Encender el equipo MDS e ingresar los cdigos de todas las muestras al
Software del equipo MDS, este debe alcanzar y mantener una temperatura de
60 C antes de colocar la bandeja cargada de los pocillos reactivos.
Cuando el equipo llegue a su temperatura indicada presentara p una barra de
color verde, haremos clip en botn de inicio y este automticamente abrir la
tapa e ingresaremos la bandeja de pocillos y empezara la lectura.
Esperar 75 minutos y observar el grafico con los resultados Positivo (+) o
Negativo (-) segn corresponda.
Se presenta en un grfico en el cual se expresa en curva las muestras con
Listeria spp presuntiva.

8.2.3. FASE DE CONFIRMACION

UNE-EN ISO11290-1, Microbiologa de los alimentos para consumo humano y

animal. Mtodo horizontal para la deteccin y el recuento de Listeria
monocytogenes.

Realizar la siembra de la muestra presuntiva en placa de agar ALOA de la

misma manera en agar OXFORD incubar por 24 hrs. en estufa de 37c
paralelamente agregar 0.1ml de la Muestra a caldo Fraser e incubar a 37c
por 48 hrs.
 El crecimiento caracterstico de Listeria spp. en agar ALOA las colonias son
verdosas debido al sustrato cromognico que detecta la enzima B glucosidasa
que presentan todas las especies. Del mismo modo en Agar OXFORD la
presencia de colonias con sustrato negro debido a la hidrlisis de la esculina.
Seleccionar del agar Aloa 5 colonias distintas si fuera necesario segn
forma, color y tamao.
Sembrar en agar TSAYE incubar por 18 254 hrs para poder tener un cultivo
joven y puro.
Tomar colonias aisladas y realizarle las pruebas bioqumicas.
Tincin Gram.
Prueba Catalasa.
Motilidad.

Para la confirmacin de diferentes especies se utilizo

BAM: Rapid Methods for Detecting Foodborne Pathogens

Prueba APPI.

9. ANLISIS Y PROCESAMIENTO DE DATOS:

Los datos sern redactados en una tabla de doble entrada y se les aplicar la
prueba de CHI CUADRADO para determinar si la frecuencia de contaminacin del
producto con Listeria spp. es dependiente o no del tiempo de preparacin y de la
cantidad de producto procesado.

10. BIBLIOGRAFIA

SNCHEZ F. (2003). Deteccin de Listeria monocytogenes y Listeria spp en

puntos crticos establecidos en una planta procesadora de productos
congelados. Vol. IX N 1 2006.

RODRGUEZ R. (2007). Evaluacin de cuatro desinfectantes sobre Listeria

aislada de productos crnicos crudos de una planta procesadoras en Bogot
Pontificia Javeriana facultad de ciencias.
FAO-OMS (2004). Evaluacin de riesgos de Listeria monocytogenes en alimentos
listos para el consumo. 86pp.

FAO-OMS (2004). Caracterizacin de peligros de patgenos alimentos en

alimentos y agua.

RUIZ Z., R. POUTOU, A. CARRASCAL (2008). Resistencia antimicrobiana y a

desinfectantes de Listeria spp.

Comit cientfico de la agencia espaola de seguridad alimentaria (AESAN) 2011.

Estudios de vida til para Listeria monocytogenes en determinados productos
alimenticios.

TLLEZ S. (2010). Biofilims y su repercusin en la industria alimentaria. Centro

de vigilancia sanitaria. (VISAVET).

PREZ E., M. CHVEZ (2012). Frecuencia de Listeria monocytogenes en

tomate, zanahoria, Lechuga y rabanito, expendidos en mercados de Trujillo-
Per, Tesis para obtener el grado de Licenciatura en la Universidad Nacional
de Trujillo. 30pp

DAZ M. CHVEZ M. SAUCEDO E. (2012). Frecuencia de Listeria

monocytogenes en Leche fresca y queso fresco como vehculo transmisor de
Listeriosis humana en la provincia de Trujillo-Per. Tesis para obtener el grado
de Licenciatura en la universidad Nacional de Trujillo. 40pp.

MORENO Y. MERCADO P. (2008). Sensibilidad bacteriana de cultivos de Listeria

spp. de lugares de expendio de pescado de los mercados de la ciudad
Trujillo-Per. Tesis para obtener el grado de Licenciatura en la universidad
Nacional de Trujillo. 40pp.

SEGURA V. C.CASTILLO (2014). Riesgo alimentario de Listeria monocytogenes,

en ensaladas de frutas y yogur natural, en la transmisin de listeriosis
humana. 162pp.
CENTURION M., E. MILAGROS, S. TAKAJARA, C. BENEDICTO, P. LPEZ
(2006). Frecuencia de Listeria monocytogenes y otras Listerias en carne de
pollo fresco y verduras frescas obtenidas en mercados y centros de abasto de
Lima metropolitano. Ciencia e investigacin UNMSM.85pp.

HERRERA F., W.SUAREZ. (2012). Aislamiento e identificacin de Listeria spp. a

partir de muestras de pescado fresco expendido en Pamplona. Vol.15 n 2
Bogot.

BETANCOURT O., K. VILLAGRN, F. MUOZ (2010). Serotipos de Listeria

monocytogenes aislados de alimentos producidos en la provincia de Cautin
Chile.

ISO 11133-1:2009 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on

preparation and production of culture media.

3M Molecular Detection Assay Listeria- Matrix Extension to PTM #081203

NTP ISO11290-1, Microbiologa de los alimentos para consumo humano y

animal. Mtodo horizontal para la deteccin y el recuento de Listeria
monocytogenes.