CROMATOGRAFA LQUIDA

CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA PRESIN

RESOLUCIN (HPLC)
Todas las tcnicas de
cromatografa lquida tienen la F.M
posibilidad de realizarse con estos
sistemas. Columna
Emplean pequeas columnas Cromatograma
Inyector
rellenas de materiales
especialmente preparados y una
fase mvil que es eluida a alta
presin. Esto conlleva una mayor
selectividad, una mejor
resolucin de los cromatogramas
y menor tiempo de anlisis.
Los sistemas ms complicados
son los de particin, segn sea
fase normal o inversa, pues
utilizan ms de un solvente y
necesitan un sistema de bombas
algo ms complejo.
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA PRESIN
RESOLUCIN (HPLC)
Columnas Pre-columna (protectora)

Son de acero inoxidable, Columna analtica

cerradas y reutilizables
cientos de veces.
Largo: 10- 30cm
Cortas y de paredes
espesas para soportar Columna semipreparativa
altas presiones.

Bombas de Alta Presin

Proporcionan flujo reproducible y constante
de la F.M a lo largo de la columna.
Hasta 700 atm
Flujos de 0,1 a 10mL/min
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RESOLUCIN (HPLC)

Sistema de inyeccin

Se emplean vlvulas de inyeccin

de volumen constante (con loop,
bucle o lazo) manuales o
automticas, generalmente de seis
bocas.
Los lazos se pueden cambiar para
inyectar distintos volmenes de
muestra.
VLVULAS DE INYECCIN SIMPLES
VLVULAS DE INYECCIN CON PRECONCENTRACIN
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RESOLUCIN (HPLC)
Detectores
Basados en la absorcin UV-Vis
(ms utilizados, ms econmicos,
amplia variedad)
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA PRESIN
RESOLUCIN (HPLC)
Detectores de refraccin
Basados en mediciones de ndice
de refraccin (universal). Poco
usado por su baja sensibilidad
Celda de vidrio del detector por ndice
de refraccin, dividida en dos
cmaras. Al circular muestra, se
desva el haz de luz y el detector
recibe la seal
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RESOLUCIN (HPLC)
Detectores electroqumicos
Conductividad
Se basa en la medicin de conductividad elctrica, y se aplica a cromatografa
inica. Provee excelente sensibilidad y selectividad para muchas especias inicas
tanto orgnicas como inorgnicas. Los principales anlitos orgnicos son cidos
carboxlicos, sulfnicos y fosfnicos y aminas. Los analitos inorgnicos incluyen
aniones de cidos fuertes como los haluros, sulfato, nitrato y fosfato y cationes
provenientes de lcalis.
Amperometria DC
Se basa en la medida de la corriente resultante del proceso de electrlisis del
analito en la superficie de un electrodo cuando se aplica un voltaje constante.
Amperometria Integrada y de pulsos
Es muy similar a la Amperometria DC. Sin embargo, la corriente es medida por
integracin durante la aplicacin repetida (cclica) de distintos potenciales en
funcin del tiempo (Forma de onda o WaveForm).
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA PRESIN
RESOLUCIN (HPLC)
Otros detectores
Basados
en tcnicas de dispersin de luz (para
macromolculas)
Basados en fluorescencia (compuestos orgnicos
fluorescentes
Espectrmetros de masa acoplados (alta sensibilidad,
selectividad, costo)
 CROMATOGRAFA LQUIDA
DE REPARTO O PARTICIN

La separacin se basa en la diferencia

de los coeficientes de particin
(solubilidades) para cada componente
de la muestra entre dos solventes
inmiscibles, uno fijo e inmovilizado en
la superficie de un soporte slido y
otro mvil.
Fases estacionarias para adsorcin/particin
 CROMATOGRAFA LQUIDA DE REPARTO O
PARTICIN
Existen dos tipos:
Fase Normal y Fase Inversa

CLL FN: fases estacionarias muy

polares, como el agua. Eluyente
no polar como el ter. Sale
primero el componente menos
polar. Al incrementar la polaridad
de la fase mvil, disminuyen los
tiempos de retencin.

CLL FI: Fase estacionaria no polar

(hidrocarburo). Fase mvil polar
como el agua. Sale primero el
componente ms polar. Al
disminuir la polaridad de la fase
mvil, disminuyen los tiempos de
retencin.
CROMATOGRAFA LQUIDA DE REPARTO O
PARTICIN EN "FASE REVERSA"
R = CH3
o C8H17
o C18H37
CROMATOGRAFA LQUIDA DE REPARTO O
PARTICIN EN "FASE REVERSA"
OPTIMIZACIN DEL ELUYENTE
CROMATOGRAFA LQUIDA DE REPARTO O
PARTICIN
CROMATOGRAFA LQUIDA DE REPARTO O
PARTICIN
CROMATOGRAFA LQUIDA DE REPARTO O
PARTICIN - Gradiente de composicin
CROMATOGRAFA LQUIDO-SLIDO DE INTERCAMBIO
INICO o CROMATOGRAFA INICA (CI)
La fase estacionaria est constituida por una matriz
(polimrica) con grupos funcionales ionizables.

Intercambiadores catinicos: con sitios cargados

negativamente.

Intercambiadores aninicos: con sitios

cargados positivamente.
CROMATOGRAFA INICA (CI)

+ -

-
+

+ -
-
+
CROMATOGRAFA INICA (CI)
CROMATOGRAFA INICA (CI)
Anlisis de cationes y aminas
 CROMATOGRAFA INICA (CI)
Aminocidos y azcares en vino tinto
CROMATOGRAFA LQUIDO-SLIDO (CLS)
DE EXCLUSIN POR TAMAO O PERMEACIN EN
GELES O FILTRACIN EN GELES
La fase estacionaria es una matriz (polimrica, ej: Sephadex)
inerte, con partculas de forma, tamao y porosidad uniformes.

Las molculas de menor tamao pueden entrar en los poros y por

eso son ms retenidas, las de mayor tamao pasan entre los
granos sin penetrar y son arrastradas por la fase mvil
CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN
CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN

cidos grasos Resina epoxi

CROMATOGRAFA DE FLUIDOS SUPERCRTICOS
CROMATOGRAFA DE FLUIDOS SUPERCRTICOS