ABBOTT

REALTIME HCV
Desempenho no
monitoramento teraputico
Luciana G Gentil
Abbott Molecular

Company Confidential 2014 Abbott

Abbott RealTime HCV

Regio-alvo conservada

Desenho nico de sonda

Condies de ciclagem otimizadas

Calibrao externa precisa

Company Confidential 2014 Abbott

Abbott RealTime HCV: desenho do teste

Regio-alvo conservada

Company Confidential 2014 Abbott

Abbott RealTime HCV: desenho do teste

Desenho nico de sonda

Deteco e quantificao
dos gentipos do HCV

Company Confidential 2014 Abbott

Abbott RealTime HCV: desenho do teste

Condies de ciclagem otimizadas

Denaturao

Extenso

Deteco

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 Abbott RealTime HCV: desenho do teste

Calibrao externa precisa

Calibrao Curva de calibrao armazenada Amostra do paciente

Cal B (3) Cal A (3) Cal A

Threshold Cycle CT
Fluorescence

Fluorescence
Cal B

CN log (nmero de CN
CT CT Nmero de cpias
do paciente
cpias)

CT threshold cycle

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 Abbott RealTime HCV
Caractersticas e Desempenho do Abbott RealTime HCV
12 UI/mL para amostras com volume de 0,5 mL
Sensibilidade
30 UI/mL para amostras com volume de 0,2 mL

Intervalo Linear 12 UI/mL (1,08 log UI/mL) a 100 milhes UI/mL (log 8,0 UI/mL)

Desenhado para atingir um desvio padro inter-ensaios inferior ou igual a

Preciso 0,25 log UI/mL de RNA do HCV em amostras contendo concentraes de HCV
entre 100 e 100 milhes de UI/mL.

Especificidade 99,5%

Gentipos Detectados Quantificao precisa de gentipos 1, 2, 3, 4, 5 e 6

De acordo com o Segundo Padro Internacional para RNA do HCV da OMS

Padronizao
(NIBSC Cdigo 96/798)
Adicionado ao tampo de lise durante a extrao e detectado em todos os
Controle Interno
nveis

Fonte: Instrues de uso do ensaio Abbott RealTime HCV (4J8690R09)

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 Abbott RealTime HCV

USO PRETENDIDO:

O ensaio Abbott RealTime HCV destinado para uso como

meio auxiliar no monitoramento de pacientes infectados pelo HCV

submetidos terapia antiviral.

Fonte: Instrues de uso do ensaio Abbott RealTime HCV (4J8690R09)

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 Monitoramento da carga viral do HCV

Recomendaes do Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para

Hepatite C e Coinfeces (PCDT) do Ministrio da Sade:

- Metodologia: Real Time PCR

LoD: < 15 UI/mL

- Para pacientes tratados com sofosbuvir, daclatasvir e simeprevir

recomenda-se o monitoramento:

Antes do incio do tratamento;

Ao final do tratamento (12 semana);
Aps 12 semanas do final do tratamento.

Fonte: Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para Hepatite C e Coinfeces/ Ministrio da Sade, Secretaria de
Vigilncia em Sade, Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais. Braslia : Ministrio da Sade, 2015.

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 Monitoramento da carga viral do HCV

Terapia Guiada pela Resposta (TGR):

- Alguns tratamento ainda podem necessitar do uso de IFN.
- Pacientes em uso de IFN/RBV/daclatasvir devem ser tratados de
acordo com a resposta virolgica (ex.: Gentipo 4)

HCV-RNA 4 semana: indetectvel (< 25 UI/mL) e

10 semana: indetectvel (< 25 UI/mL):
Interromper daclatasvir na 12 sem e manter INF/RBV at
a 24 semana.

HCV-RNA 4 semana: detectvel e

10 semana: indetectvel (< 25 UI/mL):
Manter todos os trs medicamentos at a 24 semana

Fonte: Protocolo Clnico e Diretrizes Teraputicas para Hepatite C e Coinfeces/ Ministrio da Sade, Secretaria de
Vigilncia em Sade, Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais. Braslia : Ministrio da Sade, 2015.

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 Diagntico na era das novas terapias para HCV
Sensibilidade do ensaio

Comparao de seis ensaios para quantificao do RNA Taxas de deteco dos padres PEI e WHO a
1. .
de HCV utilizando diluies de padres: 25, 10 e 5 UI/ml
2. .
3. . (2 Padres x 3 diluies x 3 alquotas por ensaio)
1. Qiagen artus HCV QS-RGQ 4. Roche HPS/CTM HCV v2
2. Roche CAP/CTM HCV v1 5. Abbott RealTime HCV
3. Roche CAP/CTM HCV v2 6. Siemens Versant HCV RNA v1

Nmero de amostras com Taxa de deteco

Ensaio
RNA-HCV Detectado (%)
Abbott RealTime HCV 16/18 89
Roche CAP/CTM 14/18 78
Roche HPS/CTM v2 12/18 67
Siemens Versant kPCR 10/18 56
Qiagen artus HCV QS-RGQ 9/18 50
Roche CAP/CTM HCV v2 7/18 39
Tabela: Abbott (adaptada de: Wiesmann F et al; Med Microbiol Immunol. 2015; 204(4): 515-525)
PEI: Paul Ehrlich Institute

Ensaios de quantificao viral no desempenham igualmente:

Abbott RealTime HCV mostrou uma taxa de deteco maior que os outros cinco ensaios.

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Abbott RealTime HCV: um ensaio com alta preciso

10 amostras medidas em 10 corridas independentes.

CV CV CV
Ensaio
(1.000 UI/mL) (100 UI/mL) (25 UI/mL)
RealTime (Abbott) 15% 18% 27%
CTM v1 (Roche) 19% 29% -
CTM v2 (Roche) 20% 32% 53%
HPS (Roche) 23% 32% -
artus (Qiagen) 25% 35% -
Versant (Siemens) 27% 31% 49%
Adaptado de Wiesmann F et al. Poster #465. ESCV 2013. Comparison of viral load assays for
the quantification of HCV genotypes 1-4 in the setting of low viremic samples.

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 Abbott RealTime HCV: um ensaio com alta preciso

Amostras de HCV Gentipo 1: Variao intra-ensaios

1000 IU/ml 100 IU/ml 25 IU/ml

7000 900 180
800 160
6000
HCV RNA [IU/ml]

HCV RNA [IU/ml]

HCV RNA [IU/ml]

700 140
5000
600 120
4000 500 100
3000 400 80
300 60
2000
200 40
1000
100 20
0 0 0

Abbott RealTime: melhor preciso na anlise amostras de HCV Gentipo 1

Grficos: Abbott (adaptados de: Wiesmann F et al; Med Microbiol Immunol. 2015; 204(4): 515-525

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 Abbott RealTime HCV: um ensaio com alta preciso

Amostras de HCV Gentipos 2, 3 e 4: Variao intra-ensaios

1000 IU/ml 100 IU/ml 25 IU/ml

7000 900 180
800 160
6000
HCV RNA [IU/ml]

HCV RNA [IU/ml]

HCV RNA [IU/ml]

700 140
5000
600 120
4000 500 100
3000 400 80
300 60
2000
200 40
1000
100 20
0 0 0

Abbott RealTime: melhor preciso na anlise amostras de HCV gentipo 2, 3 e 4

Grficos: Abbott (adaptados de: Wiesmann F et al; Med Microbiol Immunol. 2015; 204(4): 515-525

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HCV Abbott RealTime: pequena faixa de incerteza pode
avaliar a carga viral de forma confivel

Gentipo 1

Faixa de incerteza

Diferenas considerveis em preciso Faixas de incerteza correspondentes

de ensaios (Exemplo: 25 UI/mL) a 25 IU/mL

Adaptado de Wiesmann F et al. Poster #465. ESCV 2013. Comparison of viral load assays for
the quantification of HCV genotypes 1-4 in the setting of low viremic samples.

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 Diagntico na era das novas terapias para HCV
Sensibilidade do ensaio
Monitoramento do RNA do HCV nas novas terapias altamente eficientes:
Terapias curtas podem levar a baixos nveis de viremia ao final do tratamento, seguido de RVS.1

Pacientes ND durante tratamento (%) Pacientes ND ao final do tratamento2

Terapia livre de Interferon 6 sem SOF/LDV/GS-9669; 20 pacientes; 95% RVS

Semana do tratamento
Ao contrrio da experincia passada com
Explicaes possveis: tratamentos contendo interferon, baixos
Vrus residual eliminado pelo sistema nveis de HCV RNA quantificveis no final
imune do hospedeiro aps o final da terapia do tratamento no impedem seu sucesso."
Deteco de partculas virais no infecciosas
Graficos: Abbott (adaptados de:
1) Maasoumy B et al; Poster #P0877 apresentado em EASL 2015, Vienna
2) Sidharthan S et al; Clin Infect Dis. 2015 Jun 15;60(12):1743-51)

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 Deteco de baixos nveis de RNA do HCV

20 pacientes tratados por 12 semanas com Sofosbuvir/Ledipasvir (Harvoni)

Monitoramento de carga viral com o ensaio Abbott RealTime HCV

Dia 0 Sem 2 Sem 4 Sem 6 Sem 8 Sem 12 RVS2 RVS4 RVS8 RVS12

TD= < 12 UI/ml

Abbott RealTime mostrou detectabilidade em 7/20 (35%) pacientes.

Figura adaptada de: Sidharthan S et al; Clin Infect Dis. 2015 Jun 15;60(12):1743-51)

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 Sumrio

O Abbott RealTime HCV tem se mostrado como um ensaio de alta

sensibilidade e preciso confivel para quantificao de baixos nveis de

RNA do HCV, indispensvel no auxlio de decises clnicas na gesto HCV

paciente (TGR):

Os mdicos so capazes de avaliar melhor resposta ao tratamento;

Os laboratrios, responsveis pela execuo dos testes, tem a

segurana necessria para liberar um resultados de qualidade;

Os pacientes so os principais beneficiados com o acesso a resultados

de qualidade.

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 Sumrio

Baixos nveis de vrus quantificveis aps o trmino do tratamento no

significam relapso (populao estudada).

Hipteses:

- Vrus residual eliminado pelo sistema imune do hospedeiro aps o

final da terapia;

- Deteco de partculas virais no infecciosas.

O monitoramento dos pacientes ainda uma forte ferramenta para medir a

adeso do paciente em cenrios do mundo real e detectar o avano viral em

determinados regimes de tratamento.

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OBRIGADA!

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