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Una nueva enzima de coagulacin de leche producida

por Bacillus sp. P45 aplica en el desarrollo de queso crema

abstrac

La creciente demanda de coagulantes naturales llev a una mayor necesidad de sustitutos del
cuajo, promoviendo Una bsqueda de nuevas fuentes de proteasas con propiedades
coagulantes. El objetivo de este estudio fue investigar la aplicacin de una enzima bacteriana
como una nueva proteasa de coagulacin de la leche en el desarrollo de queso crema
enriquecido con chia y harina de quinua. En la concentracin de 30 mg / ml, la resistencia a la
coagulacin de la leche fue similar a la observada para la quimosina comercial, lo que
demuestra la capacidad de la enzima para catalizar la hidrlisis de la casena de leche. El
queso desarrollado mostr una alta retencin de agua (\ geq 99,0%) y consecuentemente un
bajo proceso de sinresis. Los resultados indican que el producto elaborado utilizando la
enzima mostr condiciones sanitarias adecuadas y las caractersticas tecnolgicas indicaron
que el producto es altamente estable y viable.

introduccin

La obtencin de coagulantes naturales de la leche es un desafo ya que la disponibilidad de


cuajo es limitada en comparacin con la creciente demanda de la industria lctea. Los
coagulantes naturales de origen animal son caros, y su consumo ha sido restringido por
razones religiosas o dietticas razones. Este escenario ha llevado a una creciente demanda de
nuevos sustitutos de cuajo, promoviendo la bsqueda de nuevas fuentes de proteasas con
propiedades coagulantes (Ahmed, Morishima, Babiker, & Mori, 2009; Jacob, Jaros & Rohm,
2011; Mazorra-Manzano et al. ., 2013).Se han utilizado diferentes proteasas para este
propsito, incluidas las extradas de vegetales (Corrons, Bertucci, Liggieri, Lpez,& Bruno,
2012; Galn, Cabezas,? & Fernandez-Salguero, 2012? ) Y Animales (Rolet-Repecaud et al.,
2013, Shamtsyan, Dmitriyeva, Kolesnikov, & Denisova, 2014; Trujillo, Guamis, Laencina y
Lpez,2000), pero sus aplicaciones pueden estar limitadas por factores como el cultivo y las
variaciones climticas, que pueden afectar su produccin Y suministro.

Por lo tanto, las enzimas microbianas son atractivas y han sido probadas en la coagulacin de
la leche (Daroit et al., 2012). Bacillus sp. P45, aislado del intestino del pez Jaraqui (Piaractus
mesopotamicus) originario de la cuenca amaznica (Sirtori, Cladera-Olivera, Lorenzini, Tsai y
Brandelli, 2006), produce una enzima que presenta un gran potencial para la hidrlisis de
protenas (Daroit, Correa, & Brandelli, 2009). Se purific una proteasa queratinoltica y se
caracteriz como una serina proteasa de tipo subtilisina de aproximadamente 26 kDa que
hidroliza casena a velocidades elevadas (Daroit, Correa, Segalin, ^ y Brandelli, 2010). Esta
enzima tambin produce hidrolizados bioactivos durante la proteolisis de la casena ovina
(Daroit et al., 2012). Por lo tanto, esta proteasa puede ser til para el desarrollo de productos
lcteos a travs de procesos de coagulacin de la leche.

Los productos lcteos enriquecidos con compuestos bioactivos han atrado un mayor inters
del consumidor. Quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) Es una Semilla reconocida por su alto
contenido de aminocidos esenciales, protenas, Fibra y minerales (Madl, Sterk, & Mittelbach,
2006, Nsimba,
Kikuzaki, & Konishi, 2008). Tambin, la cha (Salvia hispanica L.) presenta Altos contenidos de
protena, fibra (Capitani, Spotorno, Nolasco, & Tomas, 2012 Marineli et al., 2014) y una
cantidad elevada de cidos a-linolnicos (acido graso esencial de omega 3) (Ayerza y Coates,
2011). Ambas semillas tienen una alta actividad antioxidante (Capitani et al., 2012), asociados
con la proteccin contra la oxidacin de lpidos, procesos inflamatorios, cncer y otras
enfermedades relacionadas Al estrs oxidativo (Gawlik-Dziki et al., 2013). Esto sugiere que la
quinoa y la chia pueden ser tiles como ingredientes funcionales en las formulaciones de
alimentos (Marineli et al., 2014).

El objetivo de este estudio fue investigar la capacidad de coagulacin de la leche de una


proteasa obtenida de Bacillus sp. P45 y aplicar la enzima en la Desarrollo de queso crema
enriquecido con chia y harina de quinua.

Materiales y mtodos

Microorganismo, inculo, cultivo y purificacin enzimtica

La enzima fue producida por cultivo sumergido de Bacillus sp. P45 usando harina de plumas
como sustrato (Daroit, Correa, & Brandelli, 2011), y luego se purific usando un sistema
acuoso de dos fases integrado en el proceso de diafiltracin (Sala et al., 2014). La preparacin
enzimtica que contiene la proteasa parcialmente purificada con masa molecular alrededor de
26e28 kDa (Daroit et al., 2010, Sala y otros, 2014) se liofiliz y se almacen a 4C para su uso
en etapas posteriores.

La actividad de la enzima coagulante de la leche (MCA)

La MCA fue examinada por el mtodo de Berridge (1952) usando la enzima cruda, la enzima
purificada y la quimosina comercial (Agrolac Parana) como estndar. Se incubaron alcuotas
de leche a 30C y se aadi 1 ml de la solucin de enzima (10 a 50 mg / ml). El tiempo de
coagulacin se determin a partir de la formacin de cogulos en la pared del tubo. MCA se
define como la cantidad de enzima que coagula 10 ml de leche descremada reconstituida en
100 segundos a 30 C (Ec. (1)). La correlacin entre la concentracin inversa de la enzima y
la MCA se realiz para predecir el tiempo de coagulacin y la actividad coagulante de las
enzimas.

Desarrollo del queso crema

El queso crema enriquecido con chia y quinoa fue producido en el Instituto Lechero de la UNL
(Santa Fe, Argentina) utilizando la proteasa purificada obtenida de Bacillus sp. P45 que se
estandariz en relacin con la actividad de coagulacin de la leche de la enzima quimosina
comercial. El queso se obtuvo mezclando leche en polvo, crema y agua a 50C durante 5 min
(Fig. 1). A continuacin, la pastilla se pasteuriz (75 C / 15 s) y se homogeneiz (150 atm). La
leche se pasteuriz de nuevo (75 C / 15 s), se ajust a 50C y se aadi espina corona, chia y
harina de quinua, concentrado de protena de suero de leche, polvo de leche y sorbato de
potasio. La mezcla se agit durante 10 min, se pasteuriz (75C / 15 s) y se enfri (45C) para
la adicin de citrato clcico. La leche se coloc en un bao termosttico a 40 C y un cultivo
inicial que contena Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus,
y la enzima purificada. Despus del proceso de coagulacin, la masa de cuajada se
homogeneiz (50 atm) y se enfri (15C). El producto se evalu en relacin con el pH y la
acidez (cada 5 das), el perfil de textura y la retencin de agua (das 1, 13 y 25 de
almacenamiento), actividad de agua y slidos totales (13 Da de almacenamiento). La
composicin qumica y los anlisis microbiolgicos se realizaron a los 25 das de
almacenamiento. Todas las muestras fueron hechas por el mismo proceso, sin embargo,
presentaron diferentes concentraciones relativas de harina de crema, chia y quinua (Tabla 1),
como previamente establecido por el grupo de investigacin.

Perfil del queso crema

PH y determinacin de acidez durante el almacenamiento de queso crema El pH se midi


potenciomtricamente y la acidez mediante titulacin directa con NaOH 0,1 mol / L (AOAC,
2005). Los resultados se determinaron como grados Dornic y se convirtieron en concentracin
de cido lctico (mol / L).

Retencin de agua y actividad del agua

Se llevaron a cabo anlisis de retencin de agua (% WR) durante el almacenamiento de las


muestras por centrifugacin y gravimetra. El% de WR se determin por centrifugacin de las
muestras (1000 g, 20 min, a 4C) almacenadas a 4C en recipientes adecuados que contenan
50 g de queso. Despus de la centrifugacin, el sobrenadante se dren y se pes para
determinar la retencin de agua.

Perfil de la textura

El perfil de textura se determin usando un textrmetro Instron Bluehill a partir de una


curva de estrs en Newton (N) frente a tiempo (s). Se determinaron las siguientes propiedades
mecnicas: dureza, adhesividad, elasticidad, cohesividad, gumminess, masticabilidad y
resiliencia. Los parmetros utilizados en las pruebas fueron doble penetracin de 30 mm en
las muestras, penetracin de velocidad de 1 mm / s, cerdas de 10 N, penetrmetro de
dimetro de 12 mm y dimetro de cilindro de 36 mm a 10 C (Pons & Fiszman, 1996; Santini
et al., 2007).

Anlisis quimico y microbiologico

La composicin qumica (humedad, ceniza, protena, fibra y lpidos) se determin mediante


procedimientos estndar y los carbohidratos se calcularon por diferencia (AOAC, 2005). Los
valores calricos se calcularon usando factores de conversin basados en la composicin
qumica de la suma del contenido de protena 4, lpidos 9 e hidratos de carbono 4 (Horwitz,
1997). Se realizaron anlisis microbiolgicos de Staphylococcus aureus, Salmonella spp.,
Listeria monocytogenes, coliformes totales y fecales, mesfilos aerbicos, mohos y levaduras,
siguiendo protocolos estndar (Doores, Salfinger y Tortorello, 2013).

Anlisis estadsticos

Los datos se sometieron a anlisis de varianza para detectar diferencias significativas entre
los tratamientos mediante la prueba de Tukey. Las diferencias se consideraron significativas
cuando P <0,05.

Resultados y discusin

Actividad de la coagulacin de la leche

Tanto la enzima cruda como la enzima purificada a la concentracin de 30 mg / ml mostraron


una capacidad de coagulacin de la leche similar a la observada para el coagulante comercial
(Tabla 2), lo que demuestra el potencial para ser utilizado como un coagulante alternativo. Los
resultados indicaron que la MCA era dependiente de la concentracin enzimtica; El tiempo de
coagulacin de la leche disminuy a medida que aumentaba la concentracin enzimtica,
similar a la observada para las enzimas de las plantas (Ahmed et al., 2009; Beka et al., 2014;
Chazarra, Sidrach, Lopez-Molina y Rodrguez-Lpez, 2007). Una clara correlacin lineal entre la
inversa de la enzima y los valores de MCA se verificaron para el crudo y la enzima purificada
(enzima cruda 36,1 2034,9 * x, r 2 0,9994; enzima purificada 23,9 2390,6 * x, r 2
0,9995), permitiendo as Predecir el tiempo de coagulacin y la actividad coagulante de la
enzima. Los cogulos formados por las tres enzimas (crudo, purificado y comercial)
presentaron las mismas caractersticas: estabilidad y exudado de suero transparente. Estos
resultados mostraron que tanto la enzima purificada como la cruda podran usarse como
coagulantes de leche alternativos.

La actividad coagulante ptima para el desarrollo de productos lcteos es crucial debido a su


influencia en las propiedades tecnolgicas del producto, incluidos los parmetros de textura
(Brsting, Stallknecht, Vogensen y Ardo, 2015 ) y los atributos sensoriales (Galan, Prados,
Pino, Tejada, Fern y Andez-Salguero, 2008). A pesar de la similitud en el MCA, el uso de
enzima purificada podra ser ventajoso ya que las pruebas sensoriales preliminares, realizadas
por evaluadores entrenados, indicaron que la enzima cruda caus intenso olor actico y
coloracin marrn, que afecta el color y aroma del producto final y Por lo tanto, la aceptacin
del consumidor. As, la enzima purificada se eligi para ser aplicada en el desarrollo del queso
crema.

Perfil el queso crema

Ph y acidez

Se observ una disminucin del pH y un aumento proporcional en la produccin de cido


lctico en todas las muestras (Figura 2). El pH oscil entre 6,6 y 6,3 al comienzo y 5,3 al final
del proceso de fermentacin. La concentracin de cido lctico oscil entre 0,02 y 0,03 en la
fase inicial, alcanzando 0,06e0,1 mol / L al final del proceso de fermentacin, durando
aproximadamente 5 horas. La reduccin del pH y el aumento de la acidez se producen debido
a la fermentacin del cido lctico que se inicia cuando se aade el cultivo de arranque. Los
microorganismos realizan la hidrlisis de lactosa en glucosa y galactosa, y los monosacridos
se transforman posteriormente en cido lctico. La produccin de cido lctico provoca una
disminucin del pH durante la fermentacin y el almacenamiento porque la mayora de las
enzimas permanecen activas y los microorganismos permanecen viables. Sin embargo, este
efecto es menos marcado durante el almacenamiento, ya que se utilizan temperaturas bajas
(Rojas-Castro, Chacn-Villalobos, & Pineda-Castro, 2007). Adems de proporcionar
caractersticas sensoriales especficas, la reduccin del pH es importante para prevenir el
crecimiento de bacterias patgenas. La variacin del pH durante el almacenamiento tambin
depende de la capacidad de almacenamiento del queso, que est relacionada con la cantidad
de protenas y minerales, la formacin de amonio y / o el catabolismo del cido lctico
(Merheb-Dini, Garcia , Penna, Gomes, & da Silva, 2012). Se observ una reduccin del pH
(figura 3A) y un aumento de la acidez (figura 3B) en todas las formulaciones durante el
perodo de almacenamiento. Durante los primeros diez das, el pH disminuy y la produccin
de cido lctico fue ms pronunciada que en perodos posteriores, con tendencia a
estabilizarse al final del almacenamiento. Esto podra deberse a varios factores, como la
inhibicin de la actividad enzimtica presente en el cultivo lctico, la viabilidad de la carga
microbiana, representada por el cultivo iniciador empleado y el agotamiento de la lactosa
combinado con baja temperatura (Rojas-Castro et al. , 2007). El efecto estabilizador del pH al
final del almacenamiento es un fenmeno natural y deseable durante el desarrollo de
productos lcteos fermentados y se ha descrito previamente en varios estudios. Adems, los
valores de pH y la acidez observados en este estudio son comparables con los reportados por
otros autores (Deegan, Holopainen, McSweeney, Alatossava y Tuorila, 2014, Olmedo, Nepote,
& Grosso, Esperado para este producto.

Actividad y composicin qumica del agua

La composicin qumica de las formulaciones (Tabla 3) fue similar a la de otros quesos


cremosos descritos en la bibliografa (Souza, Carneiro, Pinto, Souza, & Stephani, 2012;
Zulkurnain, Goh, Karim, & Liong, 2008). La concentracin de lpidos fue proporcional al
contenido de crema aadida durante el desarrollo y fue significativamente mayor para las
formulaciones 2, 4 y 5. Estas formulaciones presentaron lpidos al 10%, mientras que las
muestras 1 y 3 mostraron lpidos 7,0 y 5,5%, respectivamente. El contenido de humedad de
todas las muestras fue superior al 70,0%, y se caracteriza por una legislacin especfica
(ANVISA, 2001) como producto de muy alta humedad. Los valores de aw fueron similares para
todas las muestras, independientemente de la cantidad de crema, chia o harina de quinua
utilizada. La determinacin de aw es importante porque est relacionada con el agua
disponible, que puede usarse para reacciones de deterioro o metabolismo microbiano
(Ostrowska-Ligeza & Lenart, 2015). Los valores de aw, aproximadamente 0,96, indican que el
producto sera susceptible a la mayora de bacterias y hongos, pero el pH cido del queso
protege contra varias bacterias patgenas. El contenido de fibra vari de 3,00 a 4,96% y la
formulacin 3 mostr el valor ms alto. La Administracin de Alimentos y Medicamentos de los
Estados Unidos permite que los alimentos se etiqueten como "una buena fuente de fibra" o
"fibra alta" si contienen ms de 2,5 g o 5,0 g de fibra diettica por porcin, respectivamente
(Jin, Hsien y Huff, 1994 ). El desarrollo de productos con alta aceptacin sensorial y altos
contenidos de fibra podra minimizar los trastornos dietticos y estimular un estilo de vida
saludable. El aumento de la esperanza de vida ha generado un gran inters en alimentos ricos
en fibras, que pueden prevenir algunas enfermedades como la diabetes mellitus, las
enfermedades cardiovasculares, la obesidad y el cncer de colon (Tharanathan &
Mahadevamma, 2003). El contenido proteico vari de 5,4 a 7,4% y fue significativamente
mayor para las formulaciones 1 y 3, con menores cantidades de crema y menores cantidades
de chia y harina de quinua, respectivamente. La incorporacin de estos productos puede estar
indicada como una fuente de protenas, especialmente con respecto a la contribucin de los
aminocidos esenciales contenidos en las semillas de cha y quinoa (Madl et al., 2006)

Retencin de agua

En cuanto a la retencin de agua, no se observaron diferencias significativas entre las


formulaciones para el perodo inicial de almacenamiento. Los valores fueron idnticos cuando
se evaluaron por gravedad (Figura 4A) y muy similares por centrifugacin (Figura 4B). Una
disminucin en la retencin de agua hace que el proceso de sinresis, que se refiere al suero
que se libera de la estructura de gel del queso y se acumula en la superficie. Se observ un
aumento en el proceso de sinresis en el da 13 de almacenamiento, con una elevacin
significativa (P 0,05) durante el almacenamiento durante 25 das, lo que se puede verificar
mediante la reduccin de los valores de retencin de agua (Figura 4). Esta ocurrencia fue ms
evidente cuando las muestras se evaluaron por centrifugacin, lo que indica una mayor
liberacin de agua de la matriz de queso. A pesar del aumento en la liberacin de agua, el
proceso de sinresis verificado por anlisis de gravedad que simula la exposicin del producto
bajo condiciones normales de almacenamiento fue prcticamente nulo, indicando un bajo
riesgo de proceso de sinresis y consecuentemente ausencia de suero en la superficie del
queso. Esto permite suponer que la aplicacin de la enzima, en combinacin con los
componentes utilizados en el queso, produce cogulos con alta estabilidad y retencin de
agua

La estabilidad tambin puede ser favorecida por la adicin de quinoa y chia porque tambin
presentan una alta capacidad de retencin de agua (Bhargava, Shukla, & Ohri, 2006, Capitani
et al., 2012), especialmente debido al alto contenido de protena. Adems, los estabilizantes
utilizados en las muestras, tales como goma espina corona tienden a "unirse" al agua en la
estructura del gel, mejorando generalmente la hidratacin de las protenas. A pesar de la
reduccin de los valores de% WR durante el almacenamiento (P <0,05), el menor valor
obtenido con respecto a la gravedad (99,3%) fue insignificante y no afecta a este atributo de
calidad. Los altos contenidos en protenas y grasas contribuyen a una estructura estable,
reteniendo el agua durante el almacenamiento (Zulkurnain et al., 2008). Las formulaciones 2 y
4, con mayor concentracin de crema, mostraron la mayor retencin de agua cuando se
midieron por centrifugacin y, en consecuencia, un menor proceso de sinresis durante el
almacenamiento, debido principalmente a las propiedades emulsionantes (Mateo et al., 2009).
Tambin se observ lo contrario; Las muestras con menos adicin de crema mostraron la
mayor liberacin de agua de la matriz de queso.

Perfil de la textura

El perfil de textura de las formulaciones se evalu en diferentes tiempos de almacenamiento


(Tabla 4). En general, todos los parmetros mostraron diferencias significativas (P <0,05) en
funcin del tiempo y de las formulaciones estudiadas. La elasticidad fue el nico parmetro
que no mostr diferencias significativas, lo que sugiere que no hay cambios en la
recuperacin de las dimensiones iniciales del queso despus de la eliminacin de la fuerza
deformante (Santini et al., 2007). La formulacin 3, con la quinua ms alta y menos contenido
de crema, tena la dureza ms alta. Esto sugiere que la alta capacidad de la quinoa para
absorber el agua, combinada con una menor concentracin de grasa, que es responsable de
la cremosidad y suavidad, puede contribuir a una mayor resistencia a la deformacin (Santini
et al., 2007). Las formulaciones 1, 2 y 5 mostraron un aumento de la dureza en el 13 da de
almacenamiento, mientras que las formulaciones 3 y 4 mostraron un aumento de la dureza en
el 25 da de almacenamiento. La adhesividad fue mayor para las muestras con mayor
contenido de quinoa, lo que indica la formacin de una estructura resistente que requiere una
mayor fuerza para eliminar el queso de la superficie de contacto de la boca (Bryan, Ustunol, &
Steffe, 1995, Karaman y Akalin, . Las formulaciones 1, 2 y 3 no mostraron variacin
significativa en la adhesividad durante los 25 das de almacenamiento. Sin embargo, las
formulaciones 4 y 5 mostraron un aumento de adhesividad en el decimotercer da de
almacenamiento

La cohesividad fue significativamente mayor para la formulacin 1, en la que se utilizaron


mayores contenidos de cha y crema inferior. Estas condiciones favorecieron la produccin de
un gel ms elstico que requiere un mayor esfuerzo para deformar el queso crema. No hubo
cambio en el parmetro de cohesividad para las formulaciones 1 y 5. Sin embargo, este
parmetro se alter significativamente en las formulaciones 2, 3 y 4 en el 25 da de
almacenamiento. El gumminess y chewiness mostr el mismo comportamiento. Los valores
ms altos fueron encontrados para muestras con mayor contenido de quinoa, lo que
demuestra su influencia en el perfil de textura. Ambos gumminess y masticabilidad
permanecieron iguales en la formulacin 3 durante 25 das de almacenamiento. Sin embargo,
hubo diferencias significativas para las formulaciones 1, 2 y 5 en el da 13 y un cambio
significativo en estos atributos para la formulacin 4 en el 25 da de almacenamiento. Los
cambios en el perfil de textura durante el almacenamiento pueden ser desencadenados por
protelisis, gluclisis, liplisis y cambios de pH. Estas alteraciones, adems de la solubilidad
total de los constituyentes del queso y las actividades enzimticas continuas, provocan un
cambio en la textura (Lucey, Johnson, & Horne, 2003). Adems, el aumento de acidez durante
el almacenamiento tambin puede causar cambios en las caractersticas de los agregados de
protenas y en el perfil de textura (Queiroga et al., 2013). En general, las diferentes
formulaciones no mostraron variaciones significativas en los parmetros evaluados durante el
desarrollo y almacenamiento. As, es posible designar las formulaciones con menor contenido
de crema, una vez que los consumidores buscan productos con propiedades ms saludables y
funcionales. Adems, un alto contenido de crema puede no ser deseable, ya que se ha
asociado con un mayor riesgo para la salud (Andrade, Mattos, Carvalho, Machado, & de
Oliveira, 2013). Por lo tanto, teniendo en cuenta las caractersticas finales deseables del
producto, especialmente la aceptabilidad por parte de los consumidores, podran sugerirse
dos productos con contenido reducido de crema para la comercializacin: formulaciones 1 y 3
(alto contenido de cha y quinoa, respectivamente). Las propiedades de estas semillas
sugieren su uso como ingredientes funcionales con un alto potencial de aplicacin en este tipo
de producto mediante la mejora de la calidad de los alimentos y el enriquecimiento
nutricional. Adems, los productos que contienen chia o quinoa representan nuevos productos
que satisfacen una nueva demanda del mercado. Adems, la adicin de componentes que
tienen beneficios para la salud humana y presentan ventajas nutricionales y tecnolgicas,
tales como aumentos en la retencin de humedad, textura y elasticidad, justifican el uso de
semillas de cha y quinua como enriquecimientos.

Anlisis microbiolgico

Las formulaciones de queso mostraron condiciones sanitarias adecuadas durante el


almacenamiento, compatibles con la normativa vigente en Brasil (ANVISA, 2001, MAPA, 1996).
Staphylococcus auereus estaba ausente en las muestras. La ausencia de Salmonella spp. Y L.
monocytogenes se encontr en 25 g. Los resultados para coliformes totales y fecales fueron

<0.3 MP n/g conteo total de mesofilos

Conclusiones

Una nueva proteasa de Bacillus sp. P45 despus de la purificacin mostr una alta actividad
coagulante y la capacidad de hidrolizar las protenas de la leche.
La enzima se utiliz eficientemente en el desarrollo de queso crema enriquecido con chia y
harina de quinua. Los parmetros tecnolgicos demostraron que las formulaciones eran
altamente estables y viables. El producto era muy estable, presentando un alto nivel de
retencin de agua y mostrando altos contenidos de fibra, lo que sugiere que el producto
puede ser consumido como fuente de fibra con beneficios para la salud.

Adems, los resultados indican la viabilidad de la enzima purificada como coagulante


alternativo para el desarrollo de procesos biotecnolgicos innovadores, como el desarrollo de
nuevos productos lcteos con ingredientes funcionales.

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