Parmetros cromatogrficos

El detector registra cambios en alguna

propiedad de eluyente. Los cambios son
registrados en funcin del tiempo. El
diagrama de la respuesta del detector
en funcin del tiempo se llama
cromatograma
Cromatograma
 Parmetros cromatogrficos
El trmino parmetro se emplea para
referirse a una cantidad que toma
diferentes valores y caracteriza a un
proceso, operacin o resultado.
Los parmetros cromatogrficos nos
permiten tabular y comunicar los datos
con mayor facilidad
 Parmetros cromatogrficos
Los parmetros cromatogrficos que
describen al cromatograma se correlacionan
exitosamente con las descripciones de los
procesos moleculares que ocurren en el curso
de las separaciones.
Los parmetros son datos primarios
Las descripciones son modelos para explicar
los fenmenos
Los modelos son analogas matemticas que se
deducen de los datos y de la qumica
descriptiva
Parmetros de las bandas individuales
VM o V0: volumen muerto o volumen extra
columna
Es el volumen entre las partculas de fase
estacionaria, ms el volumen de la tubera y el
detector.
Es el volumen mnimo de eluyente que
transporta a una sustancia no retenida por la
fase estacionaria desde el punto de inyeccin
hasta el detector.
Para poder medirlo se inyecta una sustancia
que no interaccione con la fase estacionaria
junto con la muestra.
Es el primer pico que aparece en el
cromatograma.
Volumen muerto
Parmetros de las bandas individuales
VR: volumen de retencin
Es el volumen que eluye de la columna
desde la inyeccin de la muestra hasta
que se produce el mximo del pico
correspondiente a una sustancia que ha
interactuado con la fase estacionaria.
Parmetros de las bandas individuales
tR: tiempo de retencin
Es el tiempo que tarda un soluto que
interacciona con la fase estacionaria
para emerger de la columna, medido en
el mximo del pico.
 Parmetros de las bandas
individuales
Wb: ancho del pico en la base
Se obtiene trazando las tangentes en los
puntos de inflexin a ambos lados del
contorno de banda
(Wb = 4)
 Parmetros cromatogrficos
Los picos o bandas de los cromatogramas son
independientes por lo tanto cada conjunto de
parmetros lo es.
Cada una de las cantidades anteriores describen
cada pico y cada pico (si est resuelto) es una
nica sustancia.
 Qu podemos obtener de los
parmetros anteriores?
Con frecuencia se usan adems otras
cantidades para se obtienen de los
parmetros anteriores:
Volumen de retencin neto:
VNi = VRi - VM
Tiempo de retencin neto:
tNi = tRi tM

Ambos nos permiten caracterizar la sustancia sobre

todo en cromatografa gaseosa
 Eficiencia

Recordemos:

El objetivo principal de las tcnicas cromatogrficas es separar los

componentes de una muestra

Cuanto ms tiempo permanezca un compuesto dentro de la columna

ms interacciona con la fase estacionaria y ms se separa de otro
compuesto poco retenido por la fase estacionaria

Definimos a la eficiencia de una columna cromatogrfica para

separar un componente de otro, como el grado de ensanchamiento de
bandas que experimenta un compuesto a travs de la columna.
 Eficiencia
Se han generalizado dos trminos como
medidas cuantitativas de la eficiencia
de una columna cromatogrfica:

Altura de plato o altura equivalente

de plato terico (HETP) H

Nmero de platos tericos N

 Eficiencia
La eficiencia N es una medida de la
retencin relativa del soluto en
comparacin con el ancho del pico.
Es un parmetro til para comparar
separaciones cromatogrficas
efectuadas en distintas condiciones
 Nmero de platos tericos
Cada banda tiene su propio nmero de
platos tericos.
2 2
VRi VRi

N =
= 16
i Wii
2 2
t t
N = Ri = 16 Ri
i Wii
 Eficiencia

Altura equivalente de plato terico

HETP = H
2
L L Wi
H= =
N 16 t Ri
2
L L Wi
H = =
N 16 VRi
 Problema

Un cromatograma con bandas gausianas ideales

tiene tR = 9,0 min y Wb = 4.0 min. Cuntos
platos tericos tiene? Si la columna tiene 10 cm
de longitud cul es la HEPT?

N = 16(tR/wb)2
N = 16(9,0 min/4.0min)2 = 81
H = L/N = 10 cm/81 =0,123 cm
 Resolucin
La resolucin o grado de separacin
depende de la eleccin de la fase
estacionaria, fase mvil, temperatura y
longitud de columna
Es una medida cuantitativa de la
capacidad de la tcnica cromatogrfica
para separar dos analitos
Resolucin
 Resolucin
RS constituye una medida cuantitativa
del grado de mezclado de los
materiales
Resolucin RS Contenido relativo
de impurezas para
bandas gausianas de
la misma rea
1,5 0,001
1,0 0,023
0,8 0,045
0,5 0,16
Resolucin a partir de parmetros
cromatogrficos

V R 2 V R1
Rs =
1
(W2 + W1 )
2
t R 2 t R1
Rs =
1
(W2 + W1 )
2
 Problema

Los cromatogramas de los compuestos A y B que se muestran en la figura

se obtuvieron empleando dos columnas de la misma longitud y con el
mismo caudal
a) Cul de las dos columnas tiene mayor nmero de platos
tericos?
b) Qu columna tiene mayor altura de plato terico?
c) Qu columna tiene mayor resolucin?
 Problema

Los siguientes datos corresponden a una columna para

cromatografa lquido, cuya longitud es de 24,7 cm, el caudal es
de 0.313 mL/min y el VM de 1,37 mL
El cromatograma de una mezcla de especies A, B, C y D
proporciona los siguientes datos:
analito Tiempo de retencin Ancho de base
A 5,4 min 0,41 min
B 13,3 min 1,07 min
C 14,1 min 1,16 min
D 21,6 min 1,72 min
 Factores que influyen en el
ensanchamiento de bandas
El ensanchamiento de las bandas es una
consecuencia de la velocidad finita a que
tienen lugar los distintos procesos de
transferencia de materia que ocurren
durante la migracin de un soluto a
medida que desciende por la columna.
 Factores que influyen en el
ensanchamiento de bandas
Algunas de estas velocidades se pueden controlar por
ajustes de variables experimentales, permitiendo as
mejoras en las separaciones. Las variables ms
importantes son:

Velocidad de la fase mvil

Coeficiente de difusin del analito en la fase mvil
Coeficiente de difusin del analito en la fase
estacionaria
Dimetro de las partculas en el empaquetado
Espesor de la capa lquida de la fase estacionaria
Ecuacin de van Deemter

B
H = A+ + C

 Ecuacin de van Deemter
difusin turbulenta o efecto
Eddy.
El trmino A proviene de considerar la difusin
turbulenta o efecto Eddy.
Es una constante que no depende de la velocidad de
fase mvil, sino que depende principalmente del
dimetro de las partculas de relleno.
Este trmino se hace cero para columnas capilares y
muy pequeo para columnas muy bien empacadas.
Esto nos indica una ventaja del uso de columnas
capilares (tubulares abiertas) que permiten un rpido
intercambio entre las molculas del analito entre la
fase mvil y la fase estacionaria.
 Ecuacin de van Deemter
difusin molecular longitudinal
La difusin es un proceso por el cual las especies
migran desde una parte ms concentrada del medio a
otra ms diluida.
La difusin longitudinal se debe a la migracin del
soluto desde el centro ms concentrado de una banda
a las regiones ms diluidas a ambos lados de la misma,
como puede observarse en la figura.
La magnitud del trmino B est determinada en gran
parte por el coeficiente de difusin del analito en la
fase mvil.
Es predominante a bajas velocidades de flujo de la
fase mvil ya que las molculas del analito tienen ms
tiempo de difundir.
 Ecuacin de van Deemter
Transferencia de masa
El trmino C proviene de considerar la
transferencia de masa, considera los equilibrios
del soluto entre la fase mvil y la fase estacionaria.
Las molculas de soluto requieren de un tiempo
para difundir en el interior de las fases mvil y
estacionaria
Estos equilibrios se alcanzan lentamente. En
consecuencia las molculas de analito en el frente
de la banda migran hacia delante antes de que
tengan tiempo de equilibrarse con la fase
estacionaria y por lo tanto ser retenidos por ella.
De forma anloga, no se alcanza el equilibrio en la
cola de la banda y las molculas quedan retrasadas
en la fase estacionaria por el rpido movimiento de
la fase mvil.
Este trmino C es ms importante a altas
velocidades
Ecuacin de van Deemter

H = A + B/u + Cu
Ecuacin de van Deemter

 Si la velocidad de la fase mvil es ptima
Entonces
La eficiencia es mxima
Hmin= L/Nmax
Que es lo que buscamos en la cromatografa para mejorar la
separacin.