Universidad de Santiago de Chile

Facultad de Qumica y Biologa

Bioqumica

Soluciones amortiguadoras y capacidad

amortiguadora.

Felipe Anabaln
Natalia Corrales
Autores:
Siomara Flores
Carlos Riveros
Profesor: Alex Elas
Ayudante: Nelson Garrido
Seccion: L1
Fecha de entrega: 1 de mayo de 2016

1. INTRODUCCIN
En los organismos vivos se producen continuamente cidos orgnicos producto de las
reacciones metablicas, por esto es fundamental la regulacin de pH, ya que una variacin
de ste afecta a los procesos bioqumicos de las protenas, enzimas, entre otras. Una de las
formas en las que se regula el pH es a travs de un tampn fisiolgico, buffer o solucin
amortiguadora. Una solucin amortiguadora es capaz de resistir cambios de pH cuando se
le agregan cantidades moderadas de un cido o una base, es por esto que una solucin
amortiguadora debe contener una concentracin de cido suficiente para reaccionar con la
base que se aada, y una concentracin de base suficiente para reaccionar con el cido que
se aada. Una solucin amortiguadora puede prepararse disolviendo en agua cantidades
adecuadas de un cido dbil y una sal de su base conjugada, o una base dbil y una sal de
su cido conjugado, tambin se puede obtener por reaccin de un cido dbil con una base
fuerte o una base dbil con un cido fuerte.
Debido a la regulacin de pH que hacen los buffer o soluciones amortiguadoras, su uso es
muy requerido en la industria como en los laboratorios, como, por ejemplo, en la industria
alimentaria cuya utilizacin sirve para saber si los alimentos son aptos para el consumo
humano; en la industria farmacutica el control de pH es fundamental en el diseo,
formulacin y a la hora de hacer ensayos previos a la comercializacin de un medicamento,
etc.
El pH de un buffer o solucin amortiguadora puede ser determinado en forma terica, a
partir de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch:

[base conjugada (sal)] (1.1)

pH= pKa+ log
[cidodbil ]

[cido conjugado ( sal ) ] (1.2)

pOH= pKb + log
[ base dbil ]

Dnde:
Ecuacin (1.1) buffer cido.
Ecuacin (1.2) buffer bsico.

pKa=log ( Ka) (1.3)

pKb=log ( Kb) (1.4)

Dnde:
 Ka : Constante de disociacin cida.

Kb : Constante de disociacin bsica.

Otro tipo de amortiguadores que podemos encontrar, son los aminocidos, debido a su
capacidad de disociacin del grupo carboxilo, del amino y de otros grupos ionizables de sus
cadenas laterales. De esta manera, tanto los aminocidos libres como los que se encuentran
en cadenas peptdicas pueden actuar como buffers.

Figura 1.1 Equilibrios de ionizacin de los grupos ionizables de un aminocido.

Figura 1.2 Valores de pKa para los distintos grupos ionizables de los 20 alfa-aminocidos
que forman las protenas.

El punto isoelctrico (PI) es el pH para el que una molcula es elctricamente neutra. La

forma en la que se encuentra la molcula en el punto isoelctrico se denomina zwitterin.
Para calcular el PI de un aminocido o de un polipptido, se comienza escribiendo la
estructura molecular ms protonada, se anotan los pKa de los distintos grupos ionizables y
se va desprotonando la molcula de acuerdo con los pKa crecientes, una vez ubicado el
zwitterin, se calcula el PI como el promedio entre el pKa anterior y el pKa posterior a la
estructura isoelctrica, como lo muestra la figura 1.1.

pKaC + pKa N (1.5)

PI =
2

Se cumple que: a pH inferior al PI, los aminocidos estn en forma catinica, y a pH

superior al PI, los aminocidos estn en forma aninica.

En la siguiente experiencia se calcular el punto isoelctrico experimentalmente, a travs de

una curva de titulacin para un aminocido, que este caso ser Tirosina, en la que se
obtendr una curva como la de la figura 1.3.

Figura 1.3 Ejemplo de curva de titulacin para un aminocido.

La Tirosina, es uno de los 20 aminocidos que forman las protenas. Est formada por un
carbono central alfa unido a un tomo de hidrgeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y
una cadena lateral que posee un grupo fenlico.
 Figura 1.4 Estructura del aminocido Tirosina.
La Teora cido-base de Bronsted-Lowry describe las interacciones cido-base en trminos
de la transferencia de protones en una reaccin qumica. Un cido de Bronsted-Lowry es
cualquier especie que puede donar un protn y una base de Bronsted-Lowry es una especie
que es capaz de aceptar un protn. Hay especies qumicas que son capaces de donar y de
aceptar un protn, por lo tanto pueden actuar como un cido y tambin como una base de
Bronsted-Lowry, un ejemplo de esto, son los aminocidos, que segn el pH en el que se
encuentren adquieren un comportamiento u el otro.

En la experiencia se utilizar un indicador de pH como lo es el azul de bromotimol, que es

un compuesto qumico derivado del trifenilmetano. El azul de bromotimol indica el pH de
una sustancia o variaciones de ste, a travs de la variacin de color. Para soluciones cidas
puede adquirir el color amarillo o fucsia, y para soluciones bsicas puede adquirir el color
verde o azul.

Figura 1.5 Molcula de Azul de Bromotimol

 2. OBJETIVOS

2.1 Conocer el funcionamiento de una solucin reguladora, al comparar su comportamiento con

suero fisiolgico, bajo las mismas condiciones.
2.2 Determinar las regiones de amortiguacin de un buffer, usando como ejemplo el
aminocido tirosina.
 3. METODOLOGA

3.1 Para comenzar con la primera actividad, se marcaron seis tubos de ensayos con ayuda
de masking tape y plumn. A los tubos se le agregaron diferentes soluciones, adems de 3
gotas de indicador de pH Azul de Bromotimol, esto se agit hasta homogenizar el color que
comenzaba a formarse por los reactivos presentes en el tubo. La cantidad de solucin
agregada a cada tubo de ensayo, se especifica en la siguiente tabla:

Tabla 3.1 Tubos etiquetados con sus respectivos reactivos

Solucin[mL]/Tubo 1 2 3 4 5 6
Suero Fisiologico 6 5 5 0,5 - -
Buffer Fosfato pH7 - - - 5 5 5
HCl 0,1M - 0,5 - - 0,5 -
NaOH 0,1M - - 0,5 - - 0,5

3.2 Para la segunda actividad, primero se trasvasijan 50mL de Tirosina (0,5M) a un matraz
Erlenmeyer de 250mL, a lo cual se le adicionan 5 gotas de Azul de Bromotimol. Luego,
con la ayuda de una probeta, se lleno una bureta con 50ml de solucin de NaOH (0,1M). A
la solucin contenida por el matraz Erlenmeyer, se le fue incorporando una alcuota de 5mL
de NaOH desde la bureta hasta adicionar los 50mL, midiendo el pH despus de cada
adicin.
 4. RESULTADOS

Tabla 4.1: Colores obtenidos en cada tubo.

Tubo 1 2 3 4 5 6
Verde Azul Verde Azul
Color Amarillo Azul
turqueza intenso azulado intenso

Tabla 4.2: pH de solucin, segn la cantidad de NaOH aadido.

NaOH [mL] pH solucin
0 1
5 1
10 1
15 2
20 2
25 3
30 3
35 5
40 6
45 6
50 7

Figura 4.1: Curva de titulacin de la tirosina.

5. DISCUSIONES
5.1 Para el tubo nmero 1, etiquetado segn la tabla 3.1 la tonalidad obtenida es debido que
la solucin es neutra, esto indica que la concentracin de los iones H + y los OH- se
encuentran en la misma proporcin. Cabe destacar que la solucin de azul de bromotimol
tiene un pH igual a 9, algo elevado, llevando consigo algunos iones OH- consigo a la
solucin analizada, que al momento de analizar esto de manera cuantificativa llevara
consigo leves cambios en la concentracin de pH esperando entonces tener un pH ms
cercano al neutro.

Para el tubo nmero 2, el color obtenido es debido al carcter cido de Brnsted del HCl,
que libera protones al ambiente en que se encuentra, reaccionando as con el azul de
bromotimol. Y debido a la basicidad adicional del azul de bromotimol se esperara que
fuese un poco ms acida el comportamiento de esta.

Para el tubo nmero 3 la coloracin obtenida, es debido al OH - presente en el NaOH, que se

ioniza completamente en solucin acuosa.

Para el tubo nmero 4 el azul obtenido no es intenso debido a que la solucin de indicador
de pH qued bsica, presentando OH al medio.

Para el tubo nmero 5, la pigmentacin obtenida es debido a que el grupo amino(NH 2-) del
aminocido tirosina captaron los protones del HCl que residan en el ambiente, generando
una amortiguacin del pH de la solucin y no llevndola a un pH cido como en el caso del
tubo 2, en este caso queda demostrado el poder amortiguador del aminocido.

Para el tubo nmero 6, la tonalidad obtenida es debida a los hidroxilos presente en el

medio. Al comparar con el tubo nmero 3, no se diferencian en nada a simple vista, esto es
debido a que el indicados tiene pH 9, bsico, presentado iones hidroxilos extras a la
solucin. Se esperara que el tono obtenido hubiese sido turqueza-azulada debido a que la
tirosina presenta dos grupos hidroxilos, el grupo cido es el primero en perder el protn,
despus lo pierde el amino y por ltimo el alcohol, que es el menos cido de los tres,
neutralizando as la solucin bsica.

5.2 Para la segunda parte, se sealan los puntos de pKa 1 que corresponde a la primera
desprotonacin del cido carboxlico quedando la molcula con carga total 0 debido a la
suma del grupo NH3+ y el COO- , el pKa2 corresponde a la desprotonacin del grupo
amino, quedando la molcula con carga -1 por parte del COO -, y el pKa3 se produce a la
desprotonacin del grupo hidroxilo, quedando O- , la molcula con carga total -2.

Entonces para marcar el punto isoelctrico en la figura 4.1, se debe buscar los dos pKa
donde la molcula queda con carga total 0, eso se produce entre el pKa1 y pKa2.
 6. CONCLUSIONES

6.1 La adicin de una solucin reguladora (buffer) permite suavizar las variaciones
fuertes de pH, siendo estas utilizadas a condiciones de organismo (suero fisiolgico)
para evitar cambios bruscos y desnaturalizaciones en protenas. La adicin del
amortiguador a un pH cido terminar por subir el pH en cuestin, mientras que a un
bsico lo disminuye, traducindose para la experiencia en un color verdoso para el
indicador pH utilizado (azul de bromotinol).

6.2 Las regiones de amortiguamiento para una curva de titulacin de una determinada
protena, corresponden a los puntos de inflexin horizontales en los cuales se encuentra
contenido el valor de la constante de acidez para cada forma de zwitterion, los cuales
actan como amortiguacin. En el caso de la tirosina se encuentra 3 valores de pKa
pertenecientes a su grupo amino, carboxilo e hidroxilo (grupo R).

7. REFERENCIAS
7.1 Universidad de Buenos Aires, Lic. Ana Mara Martin, Soluciones amortiguadoras de
pH http://materias.fi.uba.ar/6305/download/SOLUCIONES%20REGULADORAS
%20DE%20pH.pdf Revisado el 28 de abril de 2017.

7.2 Universidad del Pas Vasco, material, Propiedades de los aminocidos,

http://www.ehu.eus/biomoleculas/aa/aa2.htm Revisado el 28 de abril de 2017.

7.3 Quiminet, informacin y negocios, Los buffers y su importancia en la industria,

https://www.quiminet.com/articulos/los-buffers-y-su-importancia-en-la-industria-
3006102.htm Revisado el 28 de abril de 2017.

7.4 Quimitube, Comportamiento cido base de los aminocidos,

http://www.quimitube.com/el-comportamiento-acido-base-de-los-aminoacidos
Revisado el 28 de abril de 2017.