DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

FITOQUMICA

INTEGRANTES: NRC: 2408

FECHA: 11/01/16
Balseca Cristina
Bolaos David
Caiza Joselin

TEMA:
Extraccin, identificacin y separacin de compuestos terpnicos y efecto
aleloptico de diferentes especies vegetales.
OBJETIVOS:
GENERAL
Extraer, identificar y separar compuestos terpnicos y efecto aleloptico de
diferentes especies vegetales.
ESPECFICOS
Extraer terpenos mediante arrastre de vapor de hojas y flores de santa
mara (Matricaria parthenium) y calcular el rendimiento del aceite esencial y
del hidrodestilado de santa mara (Matricaria parthenium).
Separar y analizar la composicin del aceite esencial de hojas y flores de
santa mara (Matricaria parthenium) por cromatografa de capa fina y
calcular el factor de retardo de las manchas obtenidas por cromatografa de
capa fina sobre las placas.
Analizar el efecto aleloptico del hidrodestilado de santa mara (Matricaria
parthenium) sobre la germinacin de semillas de rbano y lechuga.
Separar y analizar la composicin del extracto con carotenoides presentes
en la muestra de tomate rin (Solanum lycopersicum) y zanahoria
(Daucus carota), y calcular de los factores de los compuestos para su
identificacin.
 RESULTADOS

1. Extraccin de aceite esencial de la planta Santa Mara

(Matricaria parthenium).
Tabla 1. Extraccin de aceite esencial por arrastre de vapor.

RESULTADOS DESCRIPCIN
Luego de 3
repeticiones de la
tcnica con 299.5 g
de hojas y flores de
la muestra se obtuvo
0.5 ml de aceite
esencial con un
rendimiento de
0.16% y 250 mL de
hidrodestilado con
un rendimiento del
Figura 2. Obtencin de aceite e hidrodestilado 83.47%.

2. Cromatografa en capa fina

b a

Figura 3.Cromatografa en capa fina a) Fase mvil Tolueno: Acetato de etilo (93:7)
b) Cloroformo: Tolueno (75:25) observada en la cmara de luz ultravioleta.
Muestra 1 aceite esencial de santa mara.

Figura 4.Cromatografa en capa fina fase mvil

Tolueno: Acetato de etilo (93:7). Muestra 1 aceite
esencial de santa mara.
Tabla 2. Factor de retardo de los compuestos
obtenidos en la fase mvil Tolueno: Acetato de etilo
(93:7).
 Muestra Distancia Distancia Factor de
recorrida por el recorrida por el retardo
solvente (b) compuesto (an)
(cm) (cm)

a1= 3.2 0.26

santa mara 12.2 a2=7 0.57
a3=8 0.66
a4=10.8 0.89

Figura 5.Cromatografa en capa fina fase mvil Cloroformo: Tolueno (75:25).

Muestra 1 aceite esencial de santa mara.

Tabla 3. Factor de retardo de los compuestos obtenidos en la fase mvil

Cloroformo: Tolueno (75:25).
Muestra Distancia Distancia Factor de retardo
recorrida por el recorrida por el
solvente (b) compuesto (an)
(cm) (cm)

a1= 3.4 0.29

santa mara 11.8 a2=4.4 0.37
a3=5.2 0.44
a4=8.9 0.75
a5=11.3 0.96

1. Efecto aleloptico

Tabla 4. Efecto aleloptico del hidrodestilado de santa mara sobre la germinacin de lechuga y rbano
 Germinacin y crecimiento de Lechuga.
HORAS MUESTRA 1 MUESTRA 2
Agua (control) Hidrodestilado Observaciones

15 semillas para ca
0
tratamiento.
Figura 6-7

Figura 6 Figura 7

5 semillas germinaron
grupo control.
24 (Figura 8)

Ninguna semilla con

hidrodestilado germi
Figura 8 Figura 9 (figura 9)

4 semillas ms
germinaron del gru
control.
48 4 tienen radculas co
promedio de crecimie
de 1 cm. (Figura 10

Ninguna semilla con

Figura 11 hidrodestilado germi
(Figura 11)

Figura 10
 2 semillas ms
germinaron del gru
control. 4 tienen radc
con un promedio d
crecimiento de 1.75 c
no tienen cubierta
seminal. 2 presenta
72 plmula
(Figura 13 )

Figura 13 Ninguna semilla con

hidrodestilado germ
(Figura 12)

Figura 12

1 semilla ms germ
del grupo control.
presentaron radculas
promedio de crecimie
de 1.4 cm y sin cubie
seminal. 4 presenta
96 plmula
(Figura 14 )
Ninguna semilla con
Figura 15 hidrodestilado germ
(Figura 15)

Figura 14

12 de 15 semillas d
grupo control germina
5 sin cubierta semin
4 presentaron hipoc
hojas primarias
120 (Figura 16)

Ninguna semilla con e

hidrodestilado germin
Figura 16 Figura 17 (Figura 17)

Germinacin y crecimiento de Rbano

Horas MUESTRA 3 MUESTRA 4
Agua (control) Hidrodestilado Observaciones
 15 semillas para ca
tratamiento.
(Figura 18-19)
0

Figura 18
Figura 19
Figura 20
11 semillas del grup
control germinaron. C
un tamao promedio
24 radcula de 0.4 cm
(Figura 20)

Ninguna semilla con

hidrodestilado germ
(Figura 21)
Figura 21

1 semilla ms del gru

control germin.10
semillas con tama
48 promedio de la radc
2.06 cm y sin cubie
germinal.
(Figura 22)

Ninguna semilla con

Figura 22 Figura 23 hidrodestilado germ
(Figura 23)

Figura 24
Tamao promedio de
radcula es de 2.7
72 semillas sin cubier
germinal.1 present
plmula.(Figura 24

Ninguna semilla con

hidrodestilado germ
(Figura 25)

Figura 25
 11 de las 15 semilla
96 presentaron plmu
(Figura 26)

Ninguna semilla con

hidrodestilado germi
(Figura 27)
Figura 26 Figura 27

12 de 15 semillas
germinaron y crecier
5 semillas presentar
hipoctilo y hojas
120 primarias, las restan
radcula y plmula
(Figura 28)

Ninguna semilla con

Figura 28 Figura 29
hidrodestilado germi
(Figura 29)

2. Extraccin de carotenos
Tabla 5. Extraccin de carotenoides con solvente cloroformo.

RESULTADOS DESCRIPCIN
 Muestra seca pulverizada
despus de 8 das de
secado (figura 6-7)

Figura 6. Zanahoria seca pulverizada Figura 7. Tomate rin seco pulverizado

Extracto con carotenoides

extracto zanahoria
(figura 10-a)
extracto de tomate rin
(figura 10-b)
a) b)

Figura 10. Extracto obtenido

3. Cromatografa en capa fina de carotenoides

Figura 6.Cromatografa en capa fina fase mvil 1.Muestra 6 (tomate rin
(Solanum lycopersicum)) y muestra 8 (zanahoria (Daucus carota)).

Tabla 6. Factor de retardo de los compuestos obtenidos en la fase mvil

C H 2 C l 2 : EtOAc (80:20).

Distancia Distancia
recorrida por el recorrida por el Factor de retardo
Muestra
solvente (b) compuesto (a) (%)
(cm) (cm)
1.6 0.18
Tomate rin 8.1 0.91
8.9 8.7 0.97
1.5 0.17
Zanahoria
8.7 0.98
 Figura 7. Cromatografa en capa fina fase mvil 2. Muestra 6 (tomate rin
(Solanum lycopersicum)) y muestra 8 (zanahoria (Daucus carota)).

Tabla 7. Factor de retardo de los compuestos obtenidos en la fase mvil ter de

Distancia Distancia
recorrida por el recorrida por el Factor de retardo
Muestra
solvente (b) compuesto (a) (%)
(cm) (cm)

3.7 0.43
Tomate rin
8.4 0.97
8.6
3.6 0.41
Zanahoria
8.5 0.99
petrleo: Acetona (95:5)
DISCUSIN
Extraccin de aceite esencial por arrastre de vapor.
Para la extraccin de los compuestos terpenoides de la planta santa mara se
utiliz el equipo de Dean Stark que segn Badui (2006) es un mtodo ideal para la
extraccin de aceites esenciales debido a su bajo peso molecular (Figura1). Por
medio de este mtodo el aceite se obtiene por el calentamiento del agua que se
produce en el baln hasta ebullir dilatando las glndulas y sacos vegetales donde
se encuentra el aceite esencial, finalmente produciendo una ruptura de los
receptculos oleferos, provocando la liberacin del aceite esencial que al
evaporarse forma una mezcla azeotrpica, es decir una mezcla en donde los dos
compuestos ebullicionan a constante temperatura y juntos perecen ser el mismo
compuesto. Esta mezcla asciende y se condensa formando dos fases una acuosa
y otra oleosa (Figura 2) donde se encuentra el aceite esencial (Castaeda, 2007).
El rendimiento de la extraccin del aceite esencial fue del 0.16 % siendo este de
menor rendimiento en comparacin al obtenido con el hidrodestilado que fue de
83.47 %. Las caractersticas organolpticas del aceite esencial difieren del
hidrodestilado en su color, intensidad del aroma y densidad. Segn Castaeda
(2007) generalmente el agua floral obtenida en la extraccin de aceites esenciales
presenta menos color que el aceite extrado debido a que los compuestos que
proporcionan ms color se encuentran en mayor cantidad en el aceite, en este
caso el color del aceite esencial present un color amarillo transparente, mientras
que el hidrodestilado no tuvo color. En cuanto a la densidad, el aceite se separa
fcilmente de la fase acuosa al tener distinta densidad y ser inmiscibles.
Normalmente la fase orgnica formada por el aceite es la fase menos densa y flota
sobre la fase acuosa en este caso el hidrodestilado (Figura 2) (Ortuo, 2006).
Cromatografa de capa fina del aceite esencial
Para la cromatografa se requiere una fase mvil, donde se usa diferentes
combinaciones de eluyentes con diferente fuerza eluyente lo que permite
seleccionar la combinacin que ofrezca una buena retencin y la mxima
resolucin entre los compuestos de inters. En la prctica se utiliz dos solventes
o eluyentes: Tolueno: Acetato de etilo (93:7) con fuerza eluyente 0.29 y 0.57
respectivamente y Cloroformo: Tolueno (75:25) con fuerza eluyente 0.40 y 0.29
respectivamente (Cromlab, 2012).
Para la visualizacin de los compuestos despus de la separacin se requiere el
uso de un revelador. Se utiliz vainillina-cido sulfrico 3% ya que los compuestos
de inters se oxidan con facilidad, evitando de esta manera prdida de informacin
porque este revelador reacciona con los componentes orgnicos produciendo
manchas de diferente coloracin luego de ser carbonizadas (Len, 2007).
El Factor de retardo (Rf) tiene un valor constante para cada compuesto en unas
condiciones cromatografas determinadas. Para el aceite esencial de santa mara
(Matricaria parthenium) se observ varios compuestos separados en cada una de
las fases mviles utilizadas (Figura 4-5). Para la fase mvil 1 se obtuvieron 4
compuestos separados (Tabla 2) y para la fase mvil 2 se obtuvieron 5
compuestos separados (Tabla 3). Los Rf experimentales para comparar con datos
bibliogrficos fueron: 0.26 y 0.57 (Tabla 2). Segn Wagner, Bladt & Zgainski (2001)
es aproximadamente un Rf 0.25 para espatulenol y entre 0.5-0.6 para polienos
empleando como eluyente tolueno-acetato de etilo (93:7).
Segn Polatoglu, Demirci, Demirci, Gren & Baser (2010) el aceite esencial de la
hoja se caracteriza por tener una gran cantidad de alcanfor (50-58 %), mientras
que en los tallos contiene un 26 % de esta sustancia, adems de trans-beta-
ocimeno (23.6 %) y germacreno-d (15 %), el partenlido es una lactona
sesquiterpnica, integrante de las hojas de santa mara, est considerado un
componente principal de la planta. Las partes areas de la santa mara emiten
monoterpenos voltiles como -pineno, camfeno, limoneno, -terpineno, (E)--
ocimeno, linalol, p-cimeno, (E)-crisantenol, alcanfor y acetato de crisantenilo, que
representan ms del 85 % de todos los compuestos voltiles emitidos.
Experimentalmente se encontr que el aceite esencial de santa mara adems de
los compuestos mencionados anteriormente esta conformado por espatulenol y
polienos.
Efecto aleloptico del aceite esencial
Las semillas de lechuga y rbano en los tratamientos con el hidrodestilado durante
todo el experimento no germinaron (Tabla 4). La composicin del aceite esencial
de santa mara result ser txica para las semillas, debido a que inhibi la
germinacin. Los compuestos responsables de su efecto aleloptico negativos son
alcanfor, canfeno, p-cimeno, -pineno, carvacrol y eugenol. En la cromatografa en
capa fina se comprob la presencia de alcanfor, lo que demuestra que este fue
uno de los compuestos responsables que inhibi la germinacin de las semillas de
rbano y lechuga en el experimento (Anil, 2011).
Extraccin de carotenoides
Para la extraccin de carotenoides se utiliz muestras secas pulverizadas de
tomate rin y zanahoria con cloroformo, para extraer los compuestos deseados.
Segn Cornejo (2011) el cloroformo es el mejor solvente para obtener una mayor
concentracin de carotenoides, ya que es un solvente no polar y permite disolver
compuestos no polares como los carotenoides.
Cromatografa en capa fina de carotenoides
Para realizar cromatografa en capa fina de carotenoides los sistemas estn
conformados por una fase estacionaria de que pueden ser: cromatofolios de
almina o slica y una fase mvil no polar como hexano, ter de petrleo o
benceno y un compuesto orgnico ms polar que los anteriores como acetona,
cloroformo o metanol, con lo que se pueden obtener una amplia variedad de
sistemas con diferentes solubilidades para separaciones especializadas de
carotenoides con diferentes solubilidades (Yeverino, 1997). En la prctica para la
cromatografa se utiliz como fase estacionaria gel de slice. Como fase mvil se
realizaron dos tipos, la primera fue de diclorometano y acetato de etilo en una
proporcin de (80:20), mientras que para el segundo se utiliz ter de petrleo y
acetona en proporcin (95:5), cumpliendo las caractersticas de tener un
compuesto no polar y uno ms polar.
Los valores de Rf son caractersticos para cada compuesto y pueden variar
dependiendo del eluyente utilizado. Los compuestos menos polares tienen un Rf
mayor que los ms polares. En el primer eluyente se encontraron tres compuestos
en el tomate y dos compuestos en la zanahoria, con sus respectivos Rf (Tabla 6).
El primer compuesto en tomate rin tuvo un Rf de 0.18, en zanahoria tuvo un
valor muy prximo de 0.17. Segn Stacey (2014) un Rf prximo a 0.16
corresponde a xantofilas, las cuales proporcionan color amarrillo a los frutos.
Adems encontramos un Rf de 0.97 en el tomate rin y de 0.98 para la zanahoria
y segn el mismo autor los y -carotenos tienen un Rf de 0.98, los cuales son
encargados de dar el color rojo o anaranjado.
Al utilizar como eluyente ter de petrleo: Acetona (70:30) se obtiene un Rf
estndar de 1 para los -carotenos, encargados del color naranja intenso, Rf de
0.92 para -carotenos, encargados de color amarillo, un Rf de 0.73-0.85 para
otros compuestos encargados del color amarillo y naranja tenue (Tejacal, Soto,
Colinas, & Martnez, 2004). Segn Yeverino (1997) al utilizar el mismo eluyente y
en las mismas proporciones los y -carotenos tienen un Rf de 0.94. En las
muestras utilizadas, los Rf encontrados (Tabla 7) fueron: para el tomate un
compuesto tuvo Rf de 0.97 y en la zanahoria un Rf de 0.99, por lo tanto, son
carotenoides. Para los otros valores en tomate rin de Rf= 0.43 y para zanahoria
un Rf= 0.41 no se encontraron datos bibliogrficos.
La zanahoria es la mejor fuente de -carotenos, junto con la calabaza. (Mnguez,
Prez, & Hotnero, 2013). Uno de los compuestos encontrados en la zanahoria
fueron -carotenos, lo que concuerda con la informacin bibliogrfica recopilada.
El licopenos es un pigmento vegetal de color rojo, que se encuentra
principalmente en el tomate, aunque tambin est presente en zanahoria
(Valdiviezo & Reyes, 2010). Segn Cornejo (2011) el Rf del licopeno tiene un valor
muy proximo a 1 en los solventes utilizados en la practica, por esta razn en la
cromatografa realizada tambin se encontr licopeno en la muestra de tomate con
un Rf de 0.97 en el tomate para los dos eluyentes, y de 0.99 para la zanahoria.

CONCLUSIONES
 Se extrajo aceite esencia por arrastre de vapor con agua, a partir de 299.5
g de flores y hojas de muestra se obtuvo 0.5 mL de aceite esencial y 250
mL de hidrodestilado.En la extraccin el aceite se separa fcilmente de la
fase acuosa al tener distinta densidad y ser inmiscibles. El rendimiento de la
extraccin del aceite esencial fue del 0.16% siendo este de menor
rendimiento en comparacin al obtenido con el hidrodestilado que fue de
83.47%.
Los factores de retardo obtenidos de la cromatografa en capa fina del
aceite esencial fueron: 0.26 y 0.57 que representan a los compuestos
espatulenol y polienos respectivamente, adems se utiliz vainillina-cido
sulfrico 3% como revelador porque los compuestos de inters se oxidan
con facilidad, evitando de esta manera prdida de informacin.
En la cromatografa en capa fina se comprob la presencia de alcanfor, lo
que demuestra que este fue uno de los compuestos responsables que
inhibi la germinacin de las semillas de rbano y lechuga en el
experimento provocando un efecto aleloptico negativo.
Para la zanahoria los factores de retardo fueron en el primer eluyente de
0.17 y 0.98. El primero corresponde a xantofilas y el segundo corresponde
a -carotenos los cuales estn presentes en ella, ya que la zanahoria es
una de las principales fuentes de este compuesto. En el segundo eluyente
se obtuvo un Rf de 0.99, correspondiente a licopeno y un Rf de 0.41 que no
pudo ser identificado utilizando la literatura disponible.
En las muestras de tomate los factores de retardo fueron de 0.91 para un
compuesto no identificado, 0.97 para licopeno y de 0.18 para xantofilas en
el primer eluyente. En el segundo eluyente se obtuvo de la misma manera
licopeno con Rf de 0.97 y otro compuesto no identificado con Rf de 0.43.

BIBLIOGRAFIA

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Pharmacognosy review.
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Valdiviezo, J., & Reyes, M. (24 de Febrero de 2010). Extraccin del Carotenoide
Licopeno a partir de los Rechazos Post Cosecha del Mercado Interno de
Citrullus Lanatus (Sanda) para su futura aplicacion en alimentos. Obtenido
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http://eprints.uanl.mx/7232/1/1080087088.PDF