UNIVERSIDAD LA SALLE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Anabelle Cern

Qumico Farmacutico Bilogo

SEXTO SEMESTRE

PRCTICA 12:

Identificacin bioqumica

EQUIPO 2:
Elia Belen Martnez Serrano
Marina Casanova Rojo
Marelyn Garca Lpez

16 de mayo 2017
OBJETIVOS:

Conocer y utilizar diferentes pruebas metablicas para

identificacin y clasificacin de microorganismos.

MATERIAL:

Tubos con campana Durham de rojo fenol con: glucosa, sacarosa,

lactosa, dulcitol, inositol y manitol.
Tubos con medio SIM
Tubos con medio TSI
Tubos con medio Citrato de Simmons
Tubos con medo VP-RM
Tubos con medio de gelatina
Tubos con medio de nitratos
Reactivos para leer: catalasa, indol, VP-RM, nitratos y nitritos
Cepas: E. Coli, S. Typhi, P. mirabilis
MTODO:
Primera sesin:

1.- Sembrar un
Medios
tubo de cada
uno de los Medios lquidos:
inocular una Medios slidos:
medios semislidos:
asada o una por estra
proporcionados por picadura
colonia por
de la siguiente
tubo.
manera:

Incubar los tubos a 37C durante 24 horas

 Segunda sesin: Despus de la incubacin leer los resultados de acuerdo a
las siguientes indicaciones:

SIM: observar
CARBOHIDRATOS: crecimiento,
NITRATOS: agregar
observar si hay movilidad y
reactivos para
cambio de color y agregar reactivo
observar presencia
produccin de para observar
de nitritos.
gas. presencia de
indol.

VPRM: agregar a
GELATINA:
un tubo reactivo
CITRATO: observar refrigerar media
rojo de metilo y al
cambio de color hora y observar si
otro Voges
hay licuefaccin.
Proskauer.

RESULTADOS EXPERIMENTALES:

Imagen1. Prueba Imagen2. Prueba bioqumica Sulfito

bioqumica Agar Bismuto y MacConkey respectivamente.
Salmonella Sigella
 Imagen3. Prueba bioqumica Eosina Azul de
Metileno y Verde brillante respectivamente.

RESULTADOS TERICOS DE MEDIOS DIFERENCIALES:

Imagen 4. Prueba Imagen 5. Prueba

bioqumica Eosina Azul de bioqumica MacConkey
Metileno. respectivamente.
 Imagen 6. Prueba
bioqumica Agar Salmonella
Shigella

Ilustracin7: pruebas bioqumicas (de derecha a izquierda como se

muestra en el cuadro de resultados).

RESULTADOS EXPERIMENTALES DE PRUEBAS BIOQUMICAS CEPA

E. COLI

PRUEBA RESULTADO OBSERVACIN

TSI cido Color amarillo
LIA Descarboxilacin Color prpura
oxidativa
NITRATOS Positivo Coloracin rosa
UREA No se inocul
SIM Positivo Anillo Rojo
VP-RM Positivo Anillo Rojo
 Negativo No cambio de color
LACTOSA Positivo Desprendimiento de
GLUCOSA Positivo CO2
SACAROSA Positivo

RESULTADOS DE E. COLI TERICOS

RESULTADOS GRUPALES EXPERIMENTALES

E. S. K. P. S. E. P. S.
co typhi pneumo vulgari flexn feculi aerugin enteri
li niae s eri s osa ca
TSI - Gluc Lactosa Glucos + + Glucos +
osa + y a- a+
glucosa
+
CTR - - + - - + - +
Lia + + Descarb Descar Desc - - +
ox + box - ar +
Nitrat + + N/A + + + + +
os
Urea - N/A - + - Amari N/A -
llo
VPR + + + + + - - +
M
(rojo-
metil)
VPR - - + + - - + -
M
(KOH
-a
nafto
l)
S + - +- + + + - -
(naranja
)
G + + + + + + + +
L + - + - + + - -
SIM + - - + + + - +

PRUEBAS METABOLICAS TEORICO:

Reaccin Interpreta
(indicad
reactiv
Sustrato enzima producto
TSI Cistena Cistena cido pirvico Rojo fenol:
desulforasa H2S Amarillo
NH3 Rojo alca
Superficie r
lactosa y
sacarosa
negativo
Citrato Citrato de sodio citritasa Productos Azul de
metbolicos bromotimol
alcalinos Verde
negativo (p
6.9)
Azul pos
(pH 7.6)
 LIA L- lisina Glutoril CoA CO2 Descarboxi
H2 + prpura
Descarboxi
- amarill
Desaminac
rojo o
anaranjado
Desaminac
sin camb
color
Produccin
H2S
precipitado
negro
Nitratos NO3+ 2e- + 2H+ NO2 A a-
H2O naftilamina
B cido
sulfonlico
Identifica
bacterias
anaerobias
capacidad
reducir los
nitratos a n
Rojo/rosa
positivo
Incoloro
negativo
Urea Urea + 2H2O ureasa CO2+H2O+2NH3 Uva nega
(NH4) 2 CO3 Fucsia po
G glucosa cido actico Rojo de fen
cido lctico Amarillo
positivo
Rojo neg
Formacin
CO2
 SIM 1 Triptofano Triptofanasa Indol anillo rojo
H2O de aminoacin cido piruvico positivo
NH3 anillo amar
2 Reactivo de 3 HCl 5 Compue negativo
Kovac 4 Alcohol sto
(indicador) isoamilico quinodal
p-
dimetilaminobenzaldeh
do+indol

Vogues proskauer:
1. Piruvato+ TPP= acetolactato
Acetolactato + acetolactato descarboxilasa= acetona (neutro)
Rojo de metilo productos cidos, positivo pH= 4 (anillo rojo)
2. Reactivo de a- naftol y KOH negativo (turbidez)

ANLISIS DE RESULTADOS:

En el agar Salmonella-Shigella (SS) es un medio selectivo la cual est dada

por el verde brillante y las sales biliares, las cuales inhiben a las gram
positivas, por lo tanto la E. Coli al ser gram negativa es favorecida en este
medio; en el caso de E. Coli es diferencial al fermentar la lactosa (lactosa
+), las colonias tenan un color rosa.

Por el contrario en el agar bismuto sulfito (SB) es utilizado para el

aislamiento de bacterias como Salmonella typhi y otras bacterias entricas,
el sulfito bismuto acta como inhibidor de la mayora de los organismos de
los comensales, en este caso no hubo crecimiento de E. Coli, ya que en
este medio no se vio favorecida.

En el agar MacConkey (McK) contiene cristal violeta y sales biliares que

van a ejercer una inhibicin en las bacterias gram negativas (como ya se
haba mencionada en el agar SS) la lactosa y el indicador rojo neutro
permiten comprobar que la bacteria pudo degradar la lactosa; por lo cual, E.
Coli present ser lactosa positiva y las colonias presentaron un color rojo-
rosa.

En las pruebas bioqumicas de la urea para e coli no se inocul porque el

mtodo es muy sensible a cambios de temperatura y pudo haberse perdido
la muestra al momento de manipularlo con el calor.

En la prueba de TSI se pudo determinar que nuestra bacteria es cida

debido a que present una coloracin amarilla por la produccin de cido
pirvico. En la prueba de LIA hubo una descarboxilacin positiva en la L-
lisina por la presencia de una coloracin prpura. En la prueba de Nitratos
se present una reduccin de nitratos a nitritos comprobndolo con una
coloracin rosada. En la prueba de SIM al haber un anillo rojo nos indica la
produccin de indol a partir del triptfano y tambin se pudo comprobar que
la bacteria es mvil ya que en el tubo que se inocul por picadura se puede
observar turbidez.

CONCLUSIONES:

Por medio de distintas pruebas metablicas logramos identificar la

bioqumica de distintas especies bacterianas. La identificacin bioqumica
es muy importante ya que nos permite identificar factores especficos en
una bacteria por medio de caractersticas bioqumicas como pH, produccin
de productos orgnicos, CO2 entre otros productos, esto nos lleva a
identificar como est compuesta la bacteria por ejemplo si la bacteria es G+
o G-, si tiene cpsula, si es aerobia o anaerobia.
Cabe mencionar que es muy importante seleccionar el medio que se va a
utilizar para cada prueba ya que estos deben ser selectivos, gracias a la
eleccin de medios de cultivo adecuados y aplicacin de reaccines
metablicas logramos aislar e identificar distintas bacterias.

Comparamos los resultados obtenidos con la teora de E. Coli y

coincidieron a la vez, esto nos ayud a comprobar que nuestra bacteria no
sufra de contaminacin y nuestros medios de cultivos haban sido los
adecuados, excepto en la reaccin de urea ya que los resultados no fueron
los esperados, esto fue debido a que el medio no estaba bien preparado y/o
la manipulacin no fue correcta.

BIBLIOGRAFA:

Sitio web: http://www.britanialab.com/productos/B23114%20REV%2001-

MAC%20CONKEY%20AGAR.pdf (Revisado el 15 marzo de 2017)

Granados R. et al (2003); Microbiologa, Editorial Thomson, Madrid

Espaa.