Nama : Gede Suya Raka

NIM : 141411131038

Kelas : BP B

Tugas Telaah Jurnal Analisis Penyakit Ikan 2

Judul Jurnal : Teknik Untuk Mendiagnosis Penyakit Virus Ikan Salmonid

Nama Penulis : F. Sanz, J. Coll

Abstrak :

Kultur sel untuk amplifikasi dan teknik yang paling sering digunakan untuk identifikasi

virus salmonid: netralisasi, immunofluorescence dan, pada tingkat lebih rendah,

immunoperoxldase, fiksasi komplemen, aglutinasi, mikroskop elektron,

immunodifussion atau radioimmunoassay akan segera digantikan oleh teknik lain

seperti enzyme immunoassay (immunodot dan enzyme-linked immunosorbent assay,

ELISA) dan hibridisasi dengan probe DNA. Diharapkan perkembangan antibodi

monoklonal (MAbs) dan amplifikasi oleh polymerase chain reaction (PCR) akan

meningkatkan sensitivitas immunoassay enzim dan hibridisasi DNA, masing-masing.

Beberapa metode baru harus menyediakan deteksi rendahnya tingkat virus hadir dalam

operator dewasa dan mungkin dalam telur (meskipun hal ini lebih rumit). Lain &

agnostik metode, seperti pengukuran imunoglobulin salmonid virus-spesifik (Igs)

dengan ELISA atau stimulasi dari memori selular imunologi secara in vitro kultur

limfosit salmonid dengan protein virus, juga bisa dikembangkan lebih lanjut.

Manfaat Jurnal :

Manfaat dari jurnal ini adalah dapat memberikan informasi pada pembaca untuk

cara mendiagnosis penyakit virus terutama pada ikan salmonid dan beberapa teknik

untuk mengidentifikasi virus.

Isi Jurnal :

Penyakit virus utama yang menyebabkan kematian pada salmonine diantaranya

yaitu nekrosis pankreas yang menular (IPN), septicemia hemoragik virus (VHS) dan

nekrosis haematopoietik infeksius (IHN). Awalnya penyakit ini ditemukan di Amerika

Utara, IHNV telah terdeteksi di Italia dan Prancis. Demikian pula VHSV, yang awalnya

ditemukan di Eropa, baru-baru ini terdeteksi pada ikan salmon di pantai barat Amerika

Serikat. Metode diagnosis yang cepat dan sensitif sangat penting jika penyebaran virus

yang menyebabkan penyakit ini dikendalikan, karena tidak ada vaksin yang ada saat ini

untuk pencegahannya. Diagnosis cepat diinginkan selama fase akut penyakit ini,

sedangkan diagnosis yang sangat sensitif diperlukan untuk mendeteksi virus selama fase

pembawa penyakit. Metode untuk diagnosis penyakit virus dapat dipisahkan menjadi 2

kelompok, yang mengukur keberadaan virus dan yang mendeteksi respons spesifik host.
Teknik Identifikas Protein Viral

1. Netralisasi

Metode ini mengidentifikasi virus dengan menetralkan penularan yang secara

in vitro. Dengan menggunakan PAbs yang diperoleh pada kelinci sebagai reagen

penetralisir kemungkinan untuk membedakan 3 serotipe IPNV. Dengan

netralisasi pun juga mungkin untuk membedakan 3 serotipe VHSV, namun tidak ada

cross-neutralisasi antara IHNV dan VHSV telah ditunjukkan, dan juga tidak ditemukan

serotipe IHNV yang berbeda.

2. Immunofluorescence

Teknik ini telah banyak digunakan untuk mendeteksi antigen virus pada kultur

sel dan jaringan ikan. Untuk mendeteksi virus oleh immunofluorescence, kultur

coverslip terinfeksi dan tetap pada permulaan efek sitopatik. Setengah dari coverslip

dapat digunakan untuk reaksi dengan anti-VHSV dan setengah dengan anti-IPNV.

Dalam kultur terinfeksi dengan virus 10 per baris tertentu fluoresensi anti virus

adalah observable setelah 8 jam, tetapi dengan 1 virus per sel hingga 16 jam yang

diperlukan. Kebutuhan untuk segar, cepat beku ikan jaringan adalah kelemahan dari

teknik ini.

3. Immunoperoxidase

Teknik immunoperoxidase memiliki beberapa keuntungan atas

immunofluorescences, seperti sebagai penghapusan latar belakang pada pewarnaan,

menggunakan mikroskop cahaya biasa dan kemungkinan dapat menyimpan hasil

untuk waktu yang lama. Metode ini dapat dianggap menjadi sedikit lebih sensitif

daripada immunofluorescence karena virus antigen yang bisa dideteksi dalam kultur

sel.

4. Aglutinasi

Teknik aglutinasi memiliki keuntungan diantaranya sederhana, spesifik, murah,

mudah diukur dan cocok untuk digunakan di lapangan Teknik ini tidak membutuhkan

peralatan khusus. Hasil diagnostik, bagaimanapun, harus dikonfirmasi oleh teknik

lain karena tingginya insiden positif palsu.

5. Enzyme Immunoassay (ELISA)

ELISA baru saja menerima penerimaan sebagai cepat, Spesifik dan sensitif

untuk mendeteksi dan mengidentifikasi Virus salmonid (Dixon 1985). Keuntungan

utamanya dari ELISA adalah memproses cepat sejumlah besar sampel dengan

kemungkinan otomasi, dan reproduktifitas dari produksi skala besar. Teknik ELISA

menggunakan PAbs juga telah disesuaikan dengan rhabdovirus salmonid, IHNV dan

VHSV. ELISA dalam keadaan sekarang memiliki sensitivitas rendah untuk

mendeteksi IHNV dan terbatas pada jenis IHNV 2. Kenaikan sensitivitas ELISA pada

fase padat ini Tergantung, antara lain variabel, pada jumlah Ab mengikat fase padat.

6. Immunodot
 Teknik imunodot yang sederhana, cepat dan sensitif untuk Deteksi 20 ng ml-

'atau 105 TCID, o ml-' dari IPNV. Dalam uji imunodot, protein virus terikat pada

matriks fase padat (biasanya terbuat dari nitroselulosa) dengan kapasitas pengikat tinggi

dan oleh karena itu memiliki sensitivitas tinggi, dan terdeteksi oleh reaktivitas

immunoenzymatisnya. Hasilnya bisa diartikan dengan inspeksi visual sebagai negatif

atau positif (diwarnai).

Teknik Pengukuran Respon Salmonid

1. Pengukuran Respon Antibodi Salmonid

Jumlah serum serum tetrameric Igs dari rainbow trout dewasa yang bertahan

infeksi IPNV adalah 5- sampai 10 kali lipat Lebih tinggi dari ikan trout pelangi dewasa

dari peternakan bebas IPNV. Titer dari penetral Abs untuk IPNV diukur dalam serum

dari rainbow trout yang dipelihara di lingkungan bebas IPN (Titer 80 sampai 4000) dan

juga dari trout yang terpapar IPNV (titer 300 sampai 3000). Pada ikan trout yang

diimunisasi secara artifisial, titer Ab netralisir meningkat dari 400 menjadi 2800 setelah

suntikan virus. Namun, dari data yang menboned di atas kita dapat menyimpulkan

bahwa akan sangat sulit untuk menemukan nilai diagnostik untuk trout anti-virus Abs.

2. Pengukuran Respon Salmonid Cellular

Investigasi respons seluler salmonid terhadap infeksi virus jarang terjadi.

Stimulasi limfosit ditunjukkan pada trout penyakit VHSV yang masih hidup dan

limfosit canier IPNV telah dibuktikan oleh immunofluorescence dan aliran sitometri
arus, meskipun Abs yang beredar hanya terdeteksi pada tingkat rendah. Pembawa virus

limfosit mungkin bisa dideteksi oleh sitofluorometri, namun sampai saat ini teknik ini

telah diterapkan hanya untuk mempelajari limfosit ikan yang sehat

Kesimpulan :

Kebanyakan diagnosis virus terus diperoleh melalui isolasi virus di monolayers

sel ikan, diikuti oleh netralisasi virus dengan PAb. Namun, teknik ini juga yang paling

memakan waktu. Imunofluoresensi telah memberikan yang alternatif khusus yang cepat,

tapi bagaimanapun kurang sensitif karena itu hanya berlaku selama fase akut infeksi.

Teknik yang lain seperti pada immunoperoxidase, mikroskop elektron, counter

immunoelectrophoresis, komplemen fiksasi aglutinasi dan radioimmunoassay belum

mendapatkan penerimaan luas. Teknik immunodot adalah metode yang cepat, sensitif

dan kuantitatif untuk diagnosis virus, tetapi berbeda dengan ELISA hanya dapat

digunakan dalam lysates kultur jaringan yang terinfeksi.