3.

JUSTIFICACION

El volumen total del agua en el Planeta es del 97.7% de ellas el 2.5% es agua dulce de
esta pequea cantidad el 70% se encuentra congelada en los Glaciales y solo un
0.0025% constituye el agua accesible para las actividades del consumo humano.
Parece una cantidad irrisoria considerando la creciente demanda como la
sper poblacin, sin embargo la mayora de la poblacin de Amrica Latina habita en
medio de grandes cuencas hidrogrficas, situacin geogrfica que permite la obtencin
del preciado lquido en forma abundante.
Paradjicamente esa abundancia no est sostenida en el uso racional del mismo,
reflejndose en el ocio domestico (despilfarro). Los procesos industriales y agrcolas, la
explotacin minera entre otras actividades ajenas al ciclo natural y secuencial del recurso,
adems de la ineficacia de polticas gubernamentales, que en forma concreta apliquen
sanciones rigurosas que permitan proteger el vital lquido.
Colombia est reconocida como el pas con mayor riqueza hdrica en el mundo. Las
grandes reservas de este recurso permiten potencializar energa.
La regin Caribe y la Depresin Momposina tambin gozan del privilegio abundante de
este recurso natural, sin embargo estudios realizados arrojan resultados preocupantes al
hallarse presencia de agentes qumicos en el agua y en las especies contenidas en las
mismas.
Estudios fsicos qumicos y microbiolgicos han demostrado la presencia de sustancias
como mercurio y cianuro en el cauce de los ros y en la carne de especies de consumo
como el boca chico, colocando en riesgo la salud de la poblacin en la regin.
Por otra parte la ausencia de tecnologas apropiadas para el tratamiento de aguas (Planta
de Tratamientos) y el desconocimiento pedaggico de la importancia del recurso, hace
necesario la implementacin oportuna y certificada que permita realizar este tipo de
anlisis en el muestreo y hallazgo de resultados que determinen las inconsistencias
y provea soluciones dirigidas a conservar el carcter y composicin del agua, por ello es
necesario la implementacin de este manual de procedimiento.

4. OBJETIVO DE LA TOMA DE MUESTRAS

Obtener muestras de un cuerpo de agua, de un sistema de distribucin a travs de chorro,

tanque o pozo; a la que se le analizarn parmetros fsico, qumico, trazas de metales,
plaguicidas y bacteriolgico de inters, a fin de demostrar el cumplimiento de la Norma
Sanitaria de Agua Potable o agua residual.

5. CONTROL Y VIGILANCIA DEL MUESTREO

El proceso de control y vigilancia del muestreo, preservacin y anlisis es esencial para
asegurar la integridad de las muestras desde su recoleccin hasta el reporte de
resultados, incluye la actividad de monitorear las condiciones de muestra, preservacin,
codificacin, transporte y posterior anlisis. Este proceso es importante en caso de una
denuncia o control de rutina de las muestras.
Se consideran muestras bajo custodia de una persona si estn a su vista, si est bajo su
posesin fsica, individual y en un sitio seguro.
La vigilancia de la calidad del agua comprende:
5.1 La inspeccin sanitaria en instalaciones como pozos, tanque, rebombeo y plantas
potabilizadoras
5.2 Toma de muestras en sitios establecidos por el Programa de Monitoreo.
5.3 Codificacin
5.4 Preservacin y transporte de muestras al laboratorio; actividad realizada por los
Inspectores de los SIBASIS (Gerencia Ambiental).
5.5 Anlisis de las muestras realizada por los analistas en el laboratorio.

Las tcnicas de recoleccin y preservacin de las muestras tienen una gran importancia,
debido a la necesidad de verificar la precisin, exactitud y representatividad de los datos
que resultan de los anlisis, con lo cual se garantiza la calidad de los mismos.

6. CONSIDERACIONES GENERALES
En el sentido estricto, una muestra colectada en un tiempo determinado y lugar en
particular, representa la composicin de esa fuente en ese preciso instante y lugar. Por
ello, el muestreo debe realizarse considerando los mximos cuidados.
Por otra parte de una buena toma de muestra, depende la representatividad de los
resultados analticos que se obtendrn en el laboratorio. La toma de muestra no solo
involucra el proceso de obtener fsicamente la muestra representativa del cuerpo de agua
para el anlisis, sino tambin el de caracterizar el ambiente del cual la muestra fue
tomada y el manejo de la misma para cumplir con los objetivos propuestos.
Normalmente, el muestreo est representado por la obtencin de una parte de la porcin
de agua a ser evaluada, realizndose a nivel de campo las determinaciones de los
parmetros susceptibles de sufrir algn tipo de variacin como consecuencia del tiempo
transcurrido entre el muestreo y su anlisis en el laboratorio; mientras que la porcin
restante, considerada como ms estable en el tiempo, es pre tratada, envasada,
preservada y embalada convenientemente para su transporte hasta el laboratorio en
donde se realizaran los anlisis respectivos.
Una vez obtenida la muestra, el inspector debe rotular el envase que contiene la muestra,
realizar las mediciones de campo, como temperatura y cloro residual, y anotar en la hoja
de muestreo antes de abandonar el lugar de toma de muestra.
Finalmente, si la muestra que llega al laboratorio no rene las condiciones de muestreo
como son: tipo de envase, preservacin, transporte e identificacin, la muestra debe ser
rechazada en su totalidad. Adicionalmente, durante el muestreo se deben tomar todas las
medidas de seguridad adecuadas para evitar accidentes del personal encargado del
muestreo y se debe usar distinta muestra para los anlisis fisicoqumicos, metales,
plaguicidas y bacteriolgicos porque los mtodos de recoleccin y manipulacin son
diferentes.

7. TIPOS DE MUESTRAS
El muestreo consiste en tomar una muestra homognea que sea representativa del
cuerpo de agua. La muestra puede ser simple o compuesta.
7.1. MUESTRAS SIMPLES:
Cuando la composicin de una fuente es relativamente constante a travs de un tiempo
prolongado a lo largo de estancias sustanciales en todas direcciones tal como el agua de
suministro. Estas muestras son tomadas en una sola vez y en un solo sitio de muestreo.
7.2. MUESTRAS COMPUESTAS
Se refiere a la mezcla de varias muestras individuales colectadas en diferentes sitios del
cuerpo de agua que se trate (presa, lago, etc.), o en un solo sitio con intervalos de tiempo
definidos previamente (tomas domiciliares, pozos). La mayor parte de las muestras
compuestas en el tiempo se emplean para observar concentraciones promedio usadas
para calcular las respectivas cargas o la eficiencia de una planta de tratamiento de aguas.
Se considera estndar para la mayora de las determinaciones una muestra compuesta
que representa un perodo de 24 horas. Sin embargo, bajo otras condiciones se considera
que puede ser una muestra compuesta un ciclo completo de una operacin peridica.
Para evaluar los efectos de descargas y operaciones variables o irregulares, tomar
muestras compuestas que representan el periodo durante el cual ocurren tales descargas.
No se debe utilizar muestras compuestas para determinar componentes o caractersticas
sujetas a cambios significativos durante el almacenamiento; sino hacer tales
determinaciones en muestras individuales lo ms pronto posible despus de la toma y
preferiblemente en el sitio de muestreo.
Ejemplo de este tipo de determinaciones son: gases disueltos, cloro residual, sulfuros
solubles, pH y temperatura. Los cambios en estos componentes pueden producir cambios
secundarios en compuestos inorgnicos como: Hierro, manganeso, alcalinidad o dureza.
Las muestras compuestas en el tiempo se pueden usar para determinar solamente los
componentes que permanecen sin alteraciones bajo las condiciones de toma de muestra,
preservacin y almacenamiento.

8. OBTENCIN DE MUESTRAS
Las tcnicas empleadas para la obtencin de muestras de agua pueden ser de forma
manual o automtica, dependiendo de la profundidad del cuerpo de agua por muestrear y
de los recursos econmicos de que se dispongan.
8.1 MUESTREO MANUAL
Generalmente las muestras obtenidas manualmente se aplican para breves periodos de
tiempo y estn representadas por las muestras simples. Existen equipos para muestreo
manual que pueden adaptarse a las condiciones y necesidades de los diferentes tipos de
puntos de muestreo. El equipo debe estar fabricado a partir de materiales inertes que no
afecten la composicin del agua obtenida, fcil de limpiar y adems fcil de transferir el
contenido muestreado al envase.

8.2 MUESTREO AUTOMTICO

Este tipo de muestreo se realiza por medio de un equipo de bombeo que succiona el agua
y la deposita automticamente en uno o varios envases. Este equipo puede ser
programado para obtener muestras de agua a diferentes intervalos de tiempo y diferentes
volmenes de agua. Por su delicadeza, siempre es necesario brindar un buen
mantenimiento, en especial en lo que respecta a la batera o acumulador de energa

9. CONSIDERACIONES DEL MUESTREO

Las consideraciones generales a tener en cuenta durante el muestreo se pueden resumir
de la siguiente manera:
9.1 Usar envases compatibles con los parmetros que se van a analizar.
9.2 Enjuagar los envases con el agua a muestrear por lo menos dos veces de manera
consecutiva.
9.3 En el caso del empleo de muestreadores, inmediatamente despus de la extraccin
de la muestra, enjuagarlo varias veces hasta eliminar cualquier vestigio de impureza y
finalmente enjuagarlo con agua destilada.
9.4 Identificar clara e inmediatamente la muestra (ver seccin 12). En algunos casos es
mejor emplear un nmero correlativo o una clave que indique la fuente o el lugar de
procedencia de la muestra.

9.5 Las muestras se debern tomar en los sitios de mayor mezcla, o inmediatamente
despus de sta, para asegurar la representatividad del agua contenida en el punto de
muestreo.
9.6 Evitar tomar las muestras en sitios muy cercanos a la orilla o bordes del cuerpo de
agua.
 9.7 No recolectar sedimentos o materiales adheridos a la orilla o bordes del cuerpo de
agua o superficie del mismo, as como tampoco es recomendable recolectar partculas
grandes.
9.8 De preferencia usar solamente recipientes nuevos en la toma de muestras de agua.
10. CUIDADOS A TENER EN CUENTA EN LA
OBTENCIN DE MUESTRAS PROCEDENTES DE DIFERENTES FUENTES DE AGUA.
10.1 REDES DE DISTRIBUCIN
Es necesario que la muestra que se va a tomar represente el verdadero estado de la
calidad de agua que es distribuida a la poblacin. Para ello se dejar correr el agua por
aproximadamente un minuto para asegurar que la muestra es representativa del
suministro.
10.2 POZOS DE AGUA
Extraer la muestra de agua slo despus que el pozo ha sido bombeado por lo menos
durante 15 minutos para asegurar que la muestra representa la calidad de la fuente de
agua subterrnea.
10.3 ROS Y ARROYOS
Cuando se toman muestras de un ro o un arroyo, los valores analticos pueden variar con
la profundidad, el caudal del arroyo y por la distancia a las orillas. Los cuidados atener en
cuenta en estos casos son:

La muestra para que sea representativa debe ser recolectada a la mitad del rea del flujo,
independientemente de la modalidad del muestreo.

Tener presente las inundaciones repentinas. Si es probable un evento de inundacin y

an as se tiene que obtener la muestra, por seguridad hay que conformar siempre
brigadas de por lo menos dos personas e identificar una ruta de fcil escape.

Seleccionar el punto de muestreo cercano a una estacin de aforo para relacionar el

caudal del ro con la muestra de agua.

En el caso de puntos de muestreo situados en las proximidades de confluencias y

descargas, los puntos de muestreo debern estar ubicados a una distancia tal en que
ambas aguas estn uniformemente mezcladas.

En los lugares en donde no se puede ingresar a pie, aprovechar los puentes en cursos de
agua de alta montaa y botes en ros caudalosos.

En el caso de que se tomen muestras individuales, stas deben tomarse preferentemente

a media corriente y a profundidad media.

Cuando se dispone de equipo de muestreo, puede prepararse una muestra integrada a

partir de muestras simples tomadas en el centro del curso receptor y distribuido
uniformemente desde la superficie hasta el mismo.

10.4 LAGOS Y RESERVORIOS

Estos tipos de cuerpos de agua estn sujetos a considerables variaciones por causas
normales tales como estratificacin a causa de la radiacin solar y la velocidad del viento
y descargas de fuentes tributarias. Para determinar la representatividad de la calidad del
agua en embalses, muchas veces se requiere la toma de muestras en ms de una
 posicin. Las ubicaciones dependern de los objetivos del programa de muestreo, el
impacto de las fuentes locales de contaminacin y el tamao del cuerpo de agua. En todo
caso se debe evitar la toma de muestras en lugares donde exista acumulacin de
sedimentos o de material flotante. Los cuidados a tener en cuenta en estos casos son:

Si no se dispone de una lancha, recolectar las muestras lo ms lejano de la orilla y anotar

esta distancia y la profundidad del punto de muestreo.

En muestreo a distancia de las orillas se pueden extraer muestras empleando

muestreadores tipo Van Dorm o bombas peristlticas equipadas con mangueras ligeras.

11. CANTIDAD DE LA MUESTRA

El volumen de la muestra necesario depender de las determinaciones a realizarse. En el
anexo 2 se indican los volmenes requeridos para cada tipo de determinacin.
Es una buena prctica que los frascos sean llenados con la muestra hasta un nivel
determinado, de modo de dejar un espacio con aire de ms o me-nos el 1% de la
capacidad total del recipiente para determinar la expansin trmica y la mezcla de la
muestra previo al anlisis.

12. RECIPIENTES
Los frascos pueden ser de vidrio o plstico polietileno, y se utilizan de acuerdo con la
naturaleza de la muestra y sus componentes. Los recipientes de vidrio son inconvenientes
para el anlisis de metales trazas; el vidrio libera silicio y sodio, a su vez pueden adsorber
trazas de metales contenidas en la muestra. Por otra parte los recipientes de plstico
(excepto los teflonados) deben descartarse para muestras que contengan compuestos
orgnicos, estos materiales liberan sustancias de plstico (por ejemplo steres de ftalato
del plstico) y a su vez disuelven algunos compuestos orgnicos. Usar de vidrio para
todos los anlisis de compuestos orgnicos voltiles, semivoltiles, plaguicidas, aceites y
grasas.
En general los recipientes para muestras deben ser elegidos con base en tres
consideraciones principales:
El material del recipiente puede causar contaminacin en las muestras. Por ejemplo, el
sodio y slice pueden lixiviarse de vidrio y las sustancias orgnicas del plstico. Las
sustancias a determinar pueden ser absorbidas por las paredes del recipiente. Por
ejemplo, trazas metlicas por los procesos de cambio de iones en superficies de vidrio.
Los constituyentes de la muestra pueden reaccionar con el recipiente. Por ejemplo, el
fluoruro puede reaccionar con el vidrio.
Por regla general deben usarse botellas de vidrio cuando van a determinarse compuestos
orgnicos y de polietileno para las sustancias que sean constituyentes mayores del vidrio,
como el sodio, potasio y slice.
Para la determinacin de trazas de metales, la contaminacin y la perdida son una
preocupacin esencial. El polvo en la atmsfera del laboratorio, las impurezas en los
reactivos y las que se hallen en los aparatos del laboratorio que tienen contacto con la
muestra; todos ellos son fuentes potenciales de contaminacin.
En muestras lquidas, los recipientes pueden introducir errores positivos o negativos en la
medicin de
trazas metlicas al: (a) aportar contaminantes por lixiviacin o absorcin de la superficie y
(b) rebajar las concentraciones por absorcin. Por tanto, la recoleccin y tratamiento de la
muestra antes del anlisis requiere particular atencin.
13. PRESERVACIN DE LA MUESTRA
El tiempo que transcurre desde que se toma la muestra hasta su llegada al laboratorio
puede conducir a cambios fsico qumicos, bioqumicos y biolgicos dentro del envase, lo
que producir un cambio en la calidad intrnseca de la muestra. Por consiguiente, es
necesario preservar la muestra antes de su envo para prevenir o minimizar estos
cambios.
Los mtodos de preservacin son relativamente limitados y tienen por objetivo:
a. Retardar la accin biolgica
b. Retardar la hidrlisis de compuestos y complejos qumicos.
c. Reducir la volatilidad de los constituyentes
La preservacin de las muestras es difcil debido a que casi todos los preservantes
interfieren de una u otra manera con algunas de las pruebas analticas, por ello lo ideal es
realizar los anlisis de manera inmediata. El almacenamiento a baja temperatura es quiz
la mejor manera de preservar la mayora de muestras por 24 horas. En todo caso solo se
deben usar preservantes qumicos cuando ellos no interfieran con los anlisis a realizarse.
Ningn mtodo de preservacin es enteramente satisfactorio por los que debe
seleccionarse el preservantes teniendo en consideracin las determinaciones a ser
efectuadas. Las tcnicas de preservacin incluyen:
Proteccin contra la incidencia de la luz solar,
Adicin de preservantes qumicos,
Disminucin de la temperatura para retardar las reacciones,
Congelacin de la muestra, etc.
Las tcnicas de preservacin solamente retardan los cambios qumicos y biolgicos que
sobrevienen inevitablemente al remover la muestra de la fuente original. Los cambios que
ocurren en una muestra pueden ser qumicos o biolgicos. Los cationes metlicos pueden
precipitarse como hidrxidos o formar complejos con otros constituyentes; los cationes y
aniones pueden cambiar su estado de valencia bajo ciertas condiciones de reduccin u
oxidacin; otros constituyentes pueden disolverse o volatilizarse con el transcurso del
tiempo. Los cationes metlicos tales como hierro y plomo, pueden ser absorbidos en
superficies (vidrios, plsticos cuarzo, etc.).
Los cambios biolgicos en una muestra pueden transformar la valencia de un elemento o
radical en otra valencia distinta. Los constituyentes solubles pueden convertirse en
materiales ligados orgnicamente en estructuras celulares o la destruccin de clulas por
lisis puede resultar en la descarga de materia celular en una solucin. Los ciclos de
nitrgeno y fsforo son ejemplos de influencia biolgica en composicin de muestras.
Los mtodos de preservacin se limitan usualmente al control de pH, adicin qumica,
refrigeracin y congelacin. . En general, la refrigeracin a temperaturas cercanas al
punto de congelacin o mas bajas es la mejor tcnica de conservacin disponible, pero no
resulta aplicable a todo tipo de muestras.
Algunas caractersticas fsico, qumicas o biolgicas del agua tienden a ser afectas por el
almacenamiento de la muestra antes del anlisis. Ciertos cationes estn sujetos a
prdidas por adsorcin o intercambio inico por parte de las paredes del recipiente. Estos
incluyen el aluminio, cadmio, cromo, cobre, hierro, plomo, manganeso, plata, zinc, etc lo
cuales son mejor preservados por la adicin de cido ntrico hasta lograr un pH menor de
2.0 con lo que se logra minimizar la precipitacin y adsorcin en las paredes del
recipiente.
La temperatura tiende a cambiar rpidamente afectando al pH significativamente en
cuestin de minutos, as como a los gases disueltos que pueden perderse (oxigeno,
dixido de carbono). Por ello, las determinaciones de temperatura y gases disueltos
deben realizarse en el campo.
En el anexo 1 se muestran algunos de los preservantes mas usados

14. IDENTIFICACIN DE LA MUESTRA.

Una vez envasada la muestra deber se identificada, para prevenir confusiones en la
identificacin de las muestras, pegar al recipiente antes o en el momento de muestreo
papel engomado o etiquetas adhesivas en las que se anote, con tinta a prueba de agua,
por lo menos la siguiente informacin:
Nmero de muestra
Nombre del recolector
Fecha y hora de muestreo
Lugar y direccin del sitio de muestreo
Tcnica de preservacin realizada
Anlisis requerido

15. PREVENCIN DE LA CONTAMINACIN DE LA MUESTRA

La calidad de los datos reportados por el laboratorio depende principalmente de la
integridad de la muestra. Consecuentemente, el muestreador deber tomar las
precauciones necesarias para proteger la muestra de contaminacin o deterioro.
Al efecto se deber tomar en cuenta los siguientes aspectos:
Las mediciones de campo deben se siempre hechas en una alcuota de la muestra de
agua.
Luego del anlisis, esta alcuota, debe ser descartada.
Los recipientes de muestreo, nuevos u usados se deben de lavar en el laboratorio.
Se deber usar solamente el tipo de frasco recomendado para cada grupo o tipo de
parmetros.
Se debern usar los mtodos de preservacin recomendados.
La parte interna de los frascos de muestreo y tapas no deben ser tocados con la mano,
guantes etc.
Los frascos de muestreo deben ser guardados en un ambiente limpio, lejos del polvo,
gases, tierra, etc. La limpieza del vehculo de transporte y el ambiente en donde se
acomodan los envases de transporte es un factor importante en el control de los
problemas de contaminacin.
Los gases del tubo de escape pueden contaminar la muestra con plomo u otro metal
pesado.
Los frasco que han sido esterilizados deben permanecer estriles hasta que la muestra
se colectada. Descartar el frasco si el sello o cubierta de papel se encuentra rota.

16. TRANSPORTE
El tiempo de entrega de las muestras al laboratorio no deber de exceder de 24 horas. En
el caso especifico de muestras bacteriolgicas y de manera general se deber respetar el
lapso de tiempo que especifica el Standard Methods.19 edicin. Es indispensable, antes
de efectuar el transporte de las muestras recolectadas, verificar que el etiquetado de las
mismas corresponda con el registro de campo y la cadena de custodia, lo que permitir la
rpida y correcta identificacin de todas y cada una de las muestras en el momento de su
recepcin; adicionalmente se debe cuidar que los envases estn perfectamente cerrados
para evitar prdida de muestra y mantener los recipientes con bastante hielo a una
temperatura de 4C, durante el tiempo que dure su traslado hasta el laboratorio.
El transporte de los envases puede hacerse en hileras o en cajas de madera cubiertas
interiormente por un material aislante y que contiene hielo en su interior. El material
aislante permite mantener las muestras a temperaturas (4 0C) durante el tiempo de
almacenamiento.

A) INTERVALO DE TIEMPO ENTRE LA

RECOLECCIN DE LA MUESTRA Y EL ANLISIS.
En general, mientras ms corto sea el tiempo que transcurre entre la recoleccin de la
muestra y el anlisis, ms confiables sern los resultados analticos. Para ciertos
constituyentes y valores fsicos, se requiere realizar la evaluacin analtica en el campo.
Es imposible establecer exactamente cunto tiempo de intervalo se puede permitir entre
la recoleccin de la muestra y su anlisis ya que ella depende del carcter de la muestra,
el tipo de determinacin a ser efectuado y las condiciones de almacenaje. Los cambios
causados por el crecimiento de los microorganismos son retardados al mantener las
muestras en la oscuridad y a baja temperatura. Cuando el intervalo entre la recoleccin y
el anlisis es tan grande que puede producir cambios en la concentracin y
el estado fsico del constituyente a ser medido, se deben seguir las prcticas de
preservacin indicadas en el anexo 2.En la cadena de custodia se debe registrar el tiempo
que transcurre entre el muestreo y el anlisis y el tipo de preservante empleado.

B) CADENA DE CUSTODIA
Es un documento en donde se registra toda la informacin relevante para asegurar la
integridad de la muestra desde la recoleccin hasta el reporte de resultados por parte de
laboratorio. La importancia LABORATORIO DE de contar con este documento radica en
prevenir la falsificacin y/o alteracin de los datos de campo, as como para definir la
cantidad y tipos de anlisis requeridos, el tipo de pre tratamiento al que ha sido sometido,
la fecha hora de muestreo, el nmero de frascos remitidos por punto de muestreo, la
fecha y hora de remisin, la identificacin del responsable del muestreo y todo lo
relacionado con la recepcin por parte del laboratorio. Ver anexo 3.
Cada muestra deber ser registrada en el formato de cadena de custodio. Adems, el
muestreador firmar la cadena de custodia para garantizar la inviolabilidad de la
informacin registrada, otorgarle la validez legal a la muestra. Cuando las muestras
formen parte de un proceso legal, adems del sello individual se tendr que sellar el
contenedor donde son transportadas las muestras. De ser posible, se sugiere seguir este
procedimiento aunque se trate de un monitoreo de rutina.
En caso de que las muestras sean manejadas por terceros durante el transporte hasta el
laboratorio, los individuos involucrados debern firmar y anotar la fecha y hora en el
registro de cadena de custodia, as como el motivo del cambio de posesin. La cadena de
custodia se depositar dentro del contenedor en que se transportan las muestras.

17. RECEPCIN DE LA MUESTRA

17.1 La recepcionista del laboratorio recibe la muestra. Verifica que no haya transcurrido
ms de 24 horas, y revisa el formato completo de cadena de custodia. Al entregar la
muestra en recepcin del laboratorio, la recepcionista debe firmar el formato de cadena de
custodia y hora de entrega

17.2 Recepcin y registro de la muestra. En el laboratorio la recepcionista inspecciona la

condicin v el sello de la muestra, compara la informacin de la etiqueta con el formato de
cadena de custodia para su ingreso al laboratorio, la registra en el libro de laboratorio.
PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS FSICOQUMICO
18.1 MUESTRAS SIMPLES
18.1.1 Utilizar frascos de vidrio plstico con tapa, limpios y de preferencia
proporcionados por el laboratorio.
18.1.2 Enjuagar el frasco por lo menos tres veces con la muestra.
18.1.3 Tomar porciones individuales del cuerpo de agua en estudio en frascos de boca
ancha, y tapar inmediatamente.
18.1.4 Colocar la muestra en contenedores (hieleras) a menos de 10C, no requiere de
preservantes.
18.1.5 El tiempo de recoleccin de la muestra hasta el inicio del anlisis no debe exceder
de 48 horas (leer las recomendaciones para cada anlisis), por lo que se recomienda
enviar las muestras de inmediato al laboratorio.
18.1.6 Identificar el lugar, fecha y hora de muestreo, tipo de muestra, persona encargada
de tomar la muestra y otras observaciones adicionales en el formato de cadena de
custodia.

18.2 MUESTRAS COMPUESTAS

18.2.1 Utilizar frascos de vidrio plstico con tapa, limpios y de preferencia
proporcionados por el laboratorio.
18.2.2 Enjuagar el frasco por lo menos tres veces con la muestra.
18.2.3 Tomar porciones individuales del cuerpo de agua en estudio en frascos de boca
ancha (en algunos casos cada media hora o incluso cada 5 minutos) y mezclarlas al final
del perodo del muestreo o combinarlas en un solo frasco al momento de tomarlas y tapar
inmediatamente.
18.2.4 Colocar la muestra en contenedores (hieleras) a menos de 10C, no requiere de
preservantes.
18.2.5 El tiempo de recoleccin de la muestra hasta el inicio del anlisis no debe exceder
de 48 horas (leer las recomendaciones para cada anlisis), por lo que se recomienda
enviar las muestras de inmediato al laboratorio.
18.2.6 Identificar el lugar, fecha y hora de muestreo, tipo de muestra, persona encargada
de tomar la muestra y otras observaciones adicionales en el formato de cadena de
custodia.
El volumen final de muestra para anlisis de agua es suficiente en volumen de 2.5 a 3
litros.

19 PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE METALES

19.1 MUESTRAS SIMPLES
19.1.1 Utilizar frascos de plstico con tapa, limpios y de preferencia proporcionados por el
laboratorio.
19.1.2 Enjuagar el frasco por lo menos tres veces con la muestra.
19.1.3 Tomar porciones individuales del cuerpo de agua en estudio en frascos de boca
ancha. Inmediatamente adicionar 1ml/l de cido ntrico conc, de tal manera que todas las
porciones de la composicin sean preservadas tan pronto como se recolectan y tapar
inmediatamente.
19.1.4 Colocar la muestra en contenedores (hieleras) a menos de 10C,

19.1.5 El tiempo de recoleccin de la muestra hasta el inicio del anlisis no debe exceder
de 48 horas (leer las recomendaciones para cada anlisis), por lo que se recomienda
enviar las muestras de inmediato al laboratorio.
19.2 Identificar el lugar, fecha y hora de muestreo, tipo de muestra, persona encargada de
tomar la muestra y otras observaciones adicionales en el formato de cadena de custodia.

19.3 MUESTRAS COMPUESTAS

19.2.1 Utilizar frascos de plstico con tapa, limpios y de preferencia proporcionados por el
laboratorio.
19.3.2 Enjuagar el frasco por lo menos tres veces con la muestra.
19.3.3 Tomar porciones individuales del cuerpo de agua en estudio en frascos de boca
ancha(en algunos casos cada media hora o incluso cada 5 minutos) y mezclarlas al final
del perodo del muestreo o combinarlas en un solo frasco al momento de tomarlas.
19.3.4 Inmediatamente adicionar 1ml/l de cido ntrico conc, de tal manera que todas las
porciones de la composicin sean preservadas tan pronto como se recolectan y tapar
inmediatamente.
19.3.5 Colocar la muestra en contenedores (hieleras) a menos de 10 C,
19.3.6 El tiempo de recoleccin de la muestra hasta el inicio del anlisis no debe exceder
de 48 horas (leer las recomendaciones para cada anlisis), por lo que se recomienda
enviar las muestras de inmediato al laboratorio.
19.3.7 Identificar el lugar, fecha y hora de muestreo, tipo de muestra, persona encargada
de tomar la muestra y otras observaciones adicionales en el formato de cadena de
custodia.

20. MUESTREO EN UN SISTEMA DE DISTRIBUCION O BOMBA PARA ANLISIS

BACTERIOLGICO
20.1 Retirar del chorro cualquier suciedad que pueda existir.
20.2 Abrir el chorro por dos minutos para que corra el agua
20.3 Cerrar el chorro, esterilizarlo tomando un pedazo de algodn empapado de alcohol,
sostenindolo con una pinza; o utilizando un encendedor o mechero
20.4 Abrir el chorro que fluya el agua, de uno a dos minutos, disminuir el volumen del
agua.
20.5 Abrir el frasco esterilizado, desamarrar el cordn que ajusta la cubierta protectora de
papel y desenroscar el tapn.
20.6 La tapa protectora se toma con la mano izquierda hacia abajo, poner el frasco bajo el
chorro con la mano derecha, y se llena el frasco, dejando un breve espacio libre.
20.7 Colocar el tapn y la cubierta protectora al frasco.
http://tecnologosencontrolambientalsenacicuc.blogspot.pe/p/manual-de-
procedimiento-de-toma-de.html
 Anlisis fsico - qumico y bacteriolgico de aguas

Agua Potable:

Significa que debe estar libre de microorganismos patgenos, de minerales y sustancias

orgnicas que puedan producir efectos fisiolgicos adversos. Debe ser estticamente aceptable
y, por lo tanto, debe estar exenta de turbidez, color, olor y sabor desagradable. Puede ser
ingerida o utilizada en el procesamiento de alimentos en cualquier cantidad, sin temor por
efectos adversos sobre la salud (Borchardt and Walton, 1971).

Segn el Art. 982 CAA (modificado por Resoluc. 494/94). Con las denominaciones de Agua
potable de suministro pblico y agua potable de uso domiciliario, se entiende la que es apta
para la alimentacin y uso domstico: no deber contener sustancias o cuerpos extraos de
origen biolgico, orgnico, inorgnico o radiactivo en tenores tales que la hagan peligrosa para
la salud.

Deber presentar sabor agradable y ser prcticamente incolora, inodora, lmpida y

transparente.

El agua potable de uso domiciliario es el agua proveniente de un suministro pblico, de un

pozo o de otra fuente, ubicada en los reservorios o depsitos domiciliarios. Ambas debern
cumplir con las caractersticas fsicas, qumicas y microbiolgicas que cita el Art. 982 CAA.

Anlisis fsico - qumico

Volumen de agua a extraer:

No es posible fijar de una manera general el volumen de agua a extraer para el anlisis
qumico, pues variara segn las determinaciones a efectuar entre 1 a 5 litros.

Examen fsico

Color:

El color de las aguas naturales se debe a la presencia de sustancias orgnicas disueltas o

coloidales, de origen vegetal y, a veces, sustancias minerales (sales de hierro, manganeso,
etc.). Como el color se aprecia sobre agua filtrada, el dato analtico no corresponde a la
coloracin comunicada por cierta materia en suspensin.
El color de las aguas se determina por comparacin con una escala de patrones preparada con
una solucin de cloruro de platino y cloruro de cobalto. El nmero que expresa el color de un
agua es igual al nmero de miligramos de platino que contiene un litro patrn cuyo color es
igual al del agua examinada.

Se acepta como mnimo 0,2 y como mximo 12 mg de platino por litro de agua.

Olor:

Est dado por diversas causas. Sin embargo los casos ms frecuentes son:

debido al desarrollo de microorganismos,

a la descomposicin de restos vegetales,

olor debido a contaminacin con lquidos cloacales industriales,

olor debido a la formacin de compuestos resultantes del tratamiento qumico del agua.

Las aguas destinadas a la bebida no deben tener olor perceptible.

Se entiende por valor umbral de olor a la dilucin mxima que es necesario efectuar con agua
libre de olor para que el olor del agua original sea apenas perceptible.

Se aceptan como valores mximos para un agua optima 2 a 10 unidades.

Sabor:

Est dado por sales disueltas en ella. Los sulfatos de hierro y manganeso dan sabor amargo.
En las calificaciones de un agua desempea un papel importante, pudiendo ser agradable u
objetable.

Determinacin de pH:

El pH ptimo de las aguas debe estar entre 6,5 y 8,5, es decir, entre neutra y ligeramente
alcalina, el mximo aceptado es 9. Las aguas de pH menor de 6,5, son corrosivas, por el
anhdrido carbnico, cidos o sales cidas que tienen en disolucin. Para determinarlo usamos
mtodos colorimtricos o potenciomtricos.
Para poder decidir sobre la potabilidad del agua se requiere el control de un nmero elevado
de parmetros qumicos y determinados parmetros bacteriolgicos. Dentro de los primeros
cobra especial importancia el amonio, los nitratos y nitritos, indicadores de contaminacin por
excelencia.

Amonio :

Este ion tiene escasa accin txica por s mismo, pero su existencia an en bajas
concentraciones, puede significar contenido aumentado de bacterias fecales, patgenos etc.,
en el agua. La formacin del amonio se debe a la descomposicin bacteriana de urea y
protenas, siendo la primera etapa inorgnica del proceso.

Nitritos:

Estos representan la forma intermedia, metaestable y txica del nitrgeno inorgnico en el

agua. Dada la secuencia de oxidacin bacteriana: protenas - amonio - nitritos-- nitratos, los
nitritos se convierten en importante indicador de contaminacin, advirtiendo sobre
una nitrificacin incompleta.

Nitratos:

La existencia de stos en aguas superficiales no contaminadas y sin aporte de aguas

industriales y comunales , se debe a la descomposicin de materia orgnica (tanto vegetal
como animal) y al aporte de agua de lluvia ( 0,4 y 8 ppm ).

Cloruros:

Todas las aguas contienen cloruros. Una gran cantidad puede ser ndice de contaminacin ya
que las materias residuales de origen animal siempre tienen considerables cantidades de estas
sales. Un agua con alto tenor de oxidabilidad, amonaco, nitrato, nitrito, caracteriza una
contaminacin y por lo tanto los cloruros tienen ese origen. Pero si estas sustancias faltan ese
alto tenor se debe a que el agua atraviesa terrenos ricos en cloruros. Los cloruros son inocuos
de por s, pero en cantidades altas dan sabor desagradable.

Valor mximo aceptable: 350 mg/l.

Mtodo de Mohr
 Generalidades:

Si se agregan iones de plata a una solucin de pH entre 7 y 9 que contenga cloruros y

cromato, la precipitacin del cloruro de plata est prcticamente terminada cuando se
comienza a precipitar el cromato de plata. Este hecho permite considerar la aparicin de un
precipitado rojo de cromato de plata, como indicador del punto final.

Reactivos:

Solucin 0,00282 N de nitrato de plata

Cromato de potasio 5 %

Tcnica:

Se filtra el agua si contiene materias en suspensin. Se toman 100 ml de la muestra (si el pH

es inferior a 7 se aade 1 gramo de bicarbonato), se agrega 1 ml de cromato de potasio y se
valora aadiendo gota a gota la solucin de nitrato de plata hasta coloracin apenas rojiza. Se
resta 0,2 al nmero de ml empleados ( gasto correspondiente al ensayo en blanco).

Clculo:
n= es el nmero de ml de la solucin de nitrato de plata usada en la valoracin

V= volumen de muestra original

Determinacin de Cloro Libre en aguas:

La ortotoluidina en medio clorhdrico y en presencia de cloro libre se oxida, dando un

compuesto de coloracin amarilla. Como la intensidad de la coloracin aumenta por
concentraciones crecientes de cloro libre se puede determinar por colorimetra, utilizando una
serie de patrones de concentracin conocida.

Reactivo:

Solucin de ortotoluidina.

Tcnica:

Se utilizan tubos de ensayo donde se enfrentan 10 ml de agua y 0,2 ml de reactivo se deja en

reposo 5 o 10 minutos, en oscuridad. Se compara la coloracin obtenida con los patrones
permanentes.
Valor mnimo aceptable de cloro activo residual: 0,2 mg/l.
 Residuos por evaporacin (Slidos Disueltos)

Se denomina as al peso de las sustancias disueltas en 1 litro de agua, no voltiles a 105 C.

Se consideran disueltas aquellas que no son retenidas por filtracin.

Tcnica:

Se tara una cpsula de porcelana que se coloca sobre Bao Mara, se miden 100 ml de agua y
se vierte sobre la cpsula hasta evaporacin. Se coloca luego en estufa a 105 C y se deja
durante 2 horas. Se retira, se deja enfriar en desecador sulfrico y se pesa. El aumento de
peso es el residuo por evaporacin correspondiente al volumen de agua tomado. Los
resultados se expresan en mg/l.

Valor mximo aceptable: 1.500 mg/l.

 Dureza:

Se habla de aguas duras o blandas para determinar calidad de las mismas. Las primeras tienen
alto tenor de sales de calcio y magnesio disueltas. Las blandas son pobres en estas sales.

Bicarbonato de calcio y magnesio: Dureza Temporal

Sulfato y cloruro de calcio y magnesio: Dureza Permanente

Puede haber tambin nitratos, fosfatos, silicatos, etc. (dureza permanente). El agua debe
tener una dureza comprendida entre 60 y 100 mg/l. no siendo conveniente aguas de dureza
inferiores a 40 mg/l, por su accin corrosiva.

valor mximo aceptable de Dureza Total (CaCO3) 400 mg/l.

Alcalinidad:

Esta representada por sus contenidos en carbonatos y bicarbonatos. Eventualmente se puede

deber a hidrxidos, boratos, silicatos, fosfatos. Las soluciones acuosas de boratos tienen un pH
8,3 y las de cido carbnico 4,3. Por estas razones se toman estos pH como puntos finales.
Como indicadores de estos puntos se utilizan fenolftaleina (pH 8,3) y heliantina (pH 4,2).

Reactivos:

cido sulfrico 0,02 N

Fenolftaleina 0,5 %

Heliantina 0,05 %

Tcnica:

Se aade 0,2 ml de fenolftaleina a 100 ml de agua. Coloracin rosada indica presencia de

carbonato, en este caso se agrega gota a gota solucin de cido sulfrico 0,02 N hasta
desaparicin de color. Se designa como F la cantidad de ml gastados. A la misma muestra se le
agregan 2 gotas de heliantina y se aade gota a gota cido sulfrico 0,02 N hasta color
salmn. Se designa por H la cantidad de ml usados en esta ultima determinacin.
 Expresin de resultados:

Alcalinidad de carbonatos en mg/l= 2 x F x 10

Alcalinidad de bicarbonatos en mg/l= (H - F) x 10

Anlisis Bacteriolgico de aguas

Generalidades:

Existe un grupo de enfermedades conocidas como enfermedades hdricas, pues su va de

transmisin se debe a la ingestin de agua contaminada. Es entonces conveniente determinar
la potabilidad desde el punto de vista bacteriolgico.

Buscar grmenes como Salmonella, Shigella, trae inconvenientes, pues normalmente aparecen
en escasa cantidad. Por otra parte su supervivencia en este medio desfavorable y la carencia
de mtodos sencillos y rpidos, llevan a que su investigacin no sea satisfactoria, mxime
cuando se hallen en nmero reducido.

En vista de estos inconvenientes se ha buscado un mtodo mas seguro para establecer la

calidad higinica de las aguas, mtodo que se basa en la investigacin de bacterias coliformes
como indicadores de contaminacin fecal.

El agua que contenga bacterias de ese grupo se considera potencialmente peligrosa, pues en
cualquier momento puede llegar a vehiculizar bacterias patgenas, provenientes de portadores
sanos, individuos enfermos o animales.

Principales enfermedades de origen hdrico y sus agentes responsables

Enfermedad Agente

Origen bacteriano

Fiebres tifoideas y paratifoideas Salmonella typhi

 Salmonella

Paratyphi A y B

Disentera bacilar Shigella

Clera Vibrio cholerae

Gastroenteritis agudas y diarreas Escherichia coli ET

Campylobacter jejuni

Campylobacter coli

Yersinia enterocolitica

Salmonella sp

Shigella sp

Origen viral

Hepatitis A y E Virus de la hepatitis A y E

Poliomielitis Virus de la polio

 Gastroenteritis agudas y diarreas Virus Nortwalk

Rotavirus

Astrovirus

Calicivirus

Enterovirus

Adenovirus

Reovirus

Origen parasitario

Disentera amebiana Entamoeba histolytica

Giardia lambia

Cristosporidium

Toma de muestra:

La muestra para anlisis bacteriolgico debe efectuarse con el mayor cuidado

Envase:

Se deben utilizar frascos esterilizados y con envoltura externa. La capacidad debe ser de 200 a
250 cc.

Envo de muestras:

Debe transcurrir el menor tiempo entre la extraccin y la llegada al laboratorio, y que durante
ese tiempo se mantenga entre 4 y 10 C. De lo contrario se producen modificaciones cuali -
cuantitativas de la flora bacteriana.

Toma de muestra de un grifo en una caera de agua corriente:

 1. Se elige un grifo que este conectado directamente con una caera de distribucin, es
decir, que el ramal del grifo no este comunicado con tanques domiciliarios, filtros,
ablandadores u otros artefactos similares. Tampoco conviene extraer muestras de grifos
colocados en puntos muertos de la caera.

2. Estas precauciones no se tienen en cuenta cuando se desea conocer la calidad del agua
que suministra un determinado grifo, en lugar de la que conduce la caera principal.

3. Se quitan del grifo los dispositivos destinados a evitar salpicado. Luego se limpia la
boca del grifo, cuidando de eliminar la suciedad que a veces se acumula en la parte
interna del orificio. Despus se deja salir agua en forma abundante durante 2 o 3
minutos y se cierra perfectamente el grifo para esterilizarlo.

4. Se esteriliza el grifo calentndolo durante un par de minutos con un hisopo embebido

en alcohol.

5. Se abre con cuidado y se deja salir agua durante medio minuto en forma tal que el
chorro no sea intenso y se llene el envase.

Anlisis bacteriolgico

Caractersticas microbiolgicas segn Art. 982 del C.A.A. (modificado por resolucin 494/94)

Limites permisibles para aguas de consumo

1. Bacterias mesfilas viables: en agar Plate Count 24 hs. a 37C, no mas de 500 UFC/ml

2. Bacterias coliformes: NMP a 37C 48 hs. (Caldo Mc Conckey o Lauril Sulfato), en 100
ml; igual o menor a 3.

3. Ausencia de Escherichia coli: en 100 ml

4. Ausencia de Pseudomona aeruginosa: por 100 ml de muestra

Determinacin del nmero de bacterias aerobias mesfilas por el Mtodo de recuento en

placa
 Generalidades:

El agua contiene bacterias cuyas necesidades nutritivas y de temperatura ptima de desarrollo

son variables.

Ordinariamente esta determinacin se efecta sembrando en medio slido un volumen

conocido de la muestra de agua. Se incuba durante un tiempo y a determinadas temperaturas
y se cuenta el nmero de colonias que se obtienen.

El medio utilizado es agar nutritivo o agar Plate Count (aproximadamente 15 ml por placa).

Diluyentes:

Es importante usar un lquido de dilucin desprovisto de accin bactericida. En la mayora de

los casos puede utilizarse agua corriente, agua destilada o solucin fisiolgica o agua
peptonada 0,1 % con pH ajustado a 7.

Preparacin de las diluciones:

Se preparan tubos estriles con 9 ml de diluyente. Para hacer las diluciones se agita, repetidas
veces, la muestra. Luego se flamea la boca del frasco, se destapa, se vuelca un poco de
contenido y, tapado nuevamente, se agita 10 - 15 veces para asegurar la distribucin uniforme
de las bacterias del lquido.

Luego mediante una pipeta esterilizada, se toma 1 ml de muestra que se pasa a un tubo con 9
ml de diluyente. Se tiene as la muestra diluida 10 veces. Se agita esta aspirando y expeliendo
el liquido de la pipeta repetidas veces, y luego, mediante otra pipeta esterilizada, se toma 1 ml
del liquido diluido, el cual se pasa a un nuevo tubo con solucin diluyente, esta operacin se
repite hasta que se estime conveniente. Segn la naturaleza del agua se sembrar
directamente o diluida. Las muestras de aguas superficiales purificadas o profundas se
sembraran directamente y diluidas 1/10, para las aguas superficiales no purificadas se
emplearan diluciones 1/10, 1/100, 1/1000.

Incubacin:

Luego se incuban las muestras a 32 - 35 C durante 24 horas. Se realiza la siembra en

profundidad.
Recuento de colonias en placas:

Seleccionar dos placas correspondientes a una dilucin que contenga entre 30 y 300
colonias.

Tomar la media aritmtica de los 2 recuentos y multiplicar por el factor de dilucin

(recproco de la dilucin utilizada). Informar segn el caso, el resultado como nmero
de microorganismos aerobios mesfilos por ml gramo .

Ejemplo: dilucin 1/100.

Placa 1: 72 colonias x 100 = 7200

Placa 2: 77 colonias x 100 = 7700

Se promedia = (7200 + 7700) = 7450

Se informa: 7.450 UFC/ ml

En la evaluacin de la potabilidad del agua ubicada en reservorios de almacenamiento

domiciliario deber incluirse entre los parmetros microbiolgicos a controlar el recuento de
bacterias mesfilas en agar (APC 24 hs. a 37 C); en el caso de que el recuento supere las
500 UFC/ml y se cumplan el resto de los parmetros indicados, slo se deber exigir la
higienizacin del reservorio y un nuevo recuento.

2. Determinacin del Nmero Ms Probable(NMP) / 100 ml de bacterias de coliformes

totales (Mtodo de Wilson)

Bacterias coliformes:

Son bacterias aerobias o anaerobias facultativas, Gram negativas, no esporuladas, que

fermentan la lactosa con produccin de cido y gas.

A) Ensayo presuntivo:

Siembra:
Se puede hacer por triplicado en tubos que tengan caldo Mc Conckey o Lactosa bilis verde
brillante (LBVB), con la Campana de Durham.

De la muestra de agua se sembrarn:

3 tubos de caldo Mc Conckey o LBVB 2% doble concentracin: 10 ml

3 tubos de caldo Mc Conckey o LBVB simple concentracin: 1 ml

3 tubos de caldo Mc Conckey o LBVB simple concentracin: 0,1 ml

Incubar los tubos a 32 - 35 C durante 48 horas.

Determinar con los tubos positivos (cido y gas) el NMP utilizando la tabla de Hoskins. La
formacin de gas a las 48 horas se considera evidencia suficiente de la presencia de
coliformes.
B) Ensayo confirmativo: Diferenciacin de bacterias coliformes.

1. Pasadas las 48 horas, de los tubos positivos de la prueba presuntiva se siembran con
ansa, en tubos con caldo Mc Conckey o LBVB de simple concentracin, y en tubos con
caldo Triptonado (para realizar la prueba del Indol), que se incuban durante 48 horas en
un bao de agua regulado a 44,5 C 0,5 C Test de Eikman). Sembrar a su vez en
tubos con medio Citrato de Koser o Simmons que se incuban a 32 C durante 48 horas.
Esta ltima siembra se realiza mediante el alambre recto, con el objeto de no llevar a
 los tubos con citrato el material nutritivo del cultivo original. Se consideran positivos los
tubos que dieron turbiedad en Citrato Koser o cambio de color en Citrato de Simmons,
lo que es originado por el desarrollo de bacterias I.A.C.. En casos dudosos se puede
dilucidar agregando gotas del indicador Azul de Bromotimol al medio Citrato de Koser,
que carece del mismo. El lquido permanece verde claro si no ha habido desarrollo,
virando al azulado si el citrato ha sido utilizando por las bacterias. Simultneamente
con el desarrollo se produce cambio de pH.

2. Confirmar con los tubos de caldo Mc Conckey o LBVB seleccionados que son positivos
de organismos coliformes, sembrando por estras una ansada de ellos en agar Endo o
Eosina azul de metileno (EMB). Incubar las placas invertidas a 32 - 35 C examinarlas a
las 24 - 48 horas. Observar en estos medios slidos de confirmacin si existen colonias
tpicas de coliformes. La formacin en el agar EMB de colonias negras o con el centro
negro, con la periferia transparente incolora o la formacin en el agar Endo de colonias
rojas rodeadas de un halo rojo, confirma la presencia de coliformes.

Tabla de Hoskins

Nmero de tubos positivos del total de:

3 tubos de 10 ml 3 tubos de 1 ml 3 tubos 0,1 ml ndice del NMP/100 ml

0 0 1 3

0 1 0 3

1 0 0 4

1 0 1 7

1 1 0 7

1 1 1 11

1 2 0 11
2 0 0 9

2 0 1 14

2 1 0 15

2 1 1 20

2 2 0 21

2 2 1 28

3 0 0 23

3 0 1 39

3 0 2 64

3 1 0 43

3 1 1 75

3 1 2 120

3 2 0 93

3 2 1 150

3 2 2 210

3 3 0 240

3 3 1 460

3 3 2 1100
C) Prueba de identificacin de organismos coliformes mediante los ensayos del IMVIC (indol,
rojo de metilo, Voges Proscauer, citrato).

3. Investigacin de Escherichia coli

1. Escoger tubos gas positivos del caldo Mc Conkey o Lactosa bilis verde brillante (Brila)
procedentes del recuento de bacterias coliformes (NMP/100ml).

2. Inocular una ansada de caldo de los cultivos seleccionados positivos en tubos de:

1. Caldo Mc Conkey o Brila.

2. Una ansada a caldo de peptona.

3. Incubar los tubos de caldo Mc Conckey o Brila a 44,5 C 0,5 C y ver si son positivos
de formacin de gas a las 24 hs. y a las 48 hs.

4. Los tubos de caldo Mc Conckey o Brila que presenten gas son positivos tambin de
organismos coliformes fecales ya que a esta temperatura solo el bacilo coli fecal
produce cido y gas.

5. Despus de 24 hs. de incubacin de los tubos de agua de peptona aadir 0,2 0,3 ml
del reactivo del Indol. Agitar los tubos y dejarlos en reposo 10 minutos. La prueba
positiva de produccin de Indol se manifiesta por una coloracin rojo oscura, en la
prueba negativa se conserva el color original del reactivo.

Los cultivos gas positivos en Mc Conckey o Brila a 44,5 C 0,5 C, y que produzcan indol en
agua de peptona, pueden considerarse como positivos de coliformes fecales.
 3. Aislamiento e Identificacin de Pseudomona aeruginosa

La muestra de agua se siembra en caldo triptena soya - tripticasa soya o caldo nutritivo. Se
incuba a 37 C por 24 horas.

Transcurridas las mismas se repica con ansa al medio de Levine. Las colonias asiladas se
repican al medio agar Cetridime, en pico de flauta o en placa, incubndose 24 a 48 horas a
37C.

Si el aislamiento se realiza a partir de tubos de Mc Conckey (utilizados en el aislamiento de

coliformes) con desarrollo de velo en superficie, se repica tambin a agar Cetrimide. ya sea si
se observa desarrollo y/o pigmentacin se procede a efectuar las siguientes pruebas:

1. Prueba de oxidasa
 2. Prueba de reduccin de nitrato

3. Prueba de licuefaccin de la gelatina

4. Prueba de gluconato

5. Prueba de Citrato

Pseudomona aeruginosa es un bacilo Gram negativo, oxidasa positivo, mvil, produce dos tipos
de pigmentos (piocianina y fluorescena), aunque existen clases no pigmentadas, reduce
nitratos a nitrito y produce gas (esto ltimo no siempre es positivo), lica la gelatina en forma
rpida, reduce el gluconato.

Gram Oxidasa Nitrato Gluconato Gelatina

Pseudomona
- + + + +
aeruginosa
Exmenes para determinar organismos patgenos

Si bien la bsqueda directa de bacterias patgenas especficas no forma parte de los exmenes
bacteriolgicos habituales a los que se someten las muestras de agua, habr casos en que ser
necesario efectuar exmenes para la determinacin de grmenes patgenos intestinales; por
ejemplo, durante una epidemia o cuando se est evaluando una nueva fuente. Las
posibilidades de obtener buenos resultados sern entonces mayores si se analizan volmenes
grandes de agua y si se usan medios selectivos para determinados grmenes patgenos
intestinales. Los anlisis incluirn algunas, sino todas, de las etapas siguientes: concentracin
de los microorganismos en la muestra, inoculacin en un caldo de abono; subcultivos en
medios de agar selectivos, y anlisis bioqumicos y serolgicos de las colonias sospechosas. En
vez de basarse en un mtodo nico, conviene utilizar el mayor nmero posible de mtodos a
fin de que no se pierda ninguna oportunidad de detectar a un germen patgeno. Esto es
especialmente vlido para la deteccin de Salmonella, puesto que no existe un solo mtodo
que se adapte a todos los serotipos.
Concentracin de las muestras

La tcnica que se emplee depender en gran parte de la cantidad de partculas presentes en el

agua. En las aguas de baja turbiedad, la muestra puede pasarse a travs de filtros de
membrana. Debido a que la turbiedad aumenta en las aguas naturales, se puede recurrir a la
filtracin a travs de tierras diatomceas o con filtros de cartucho o vela, con lo cual se
incrementar la filtracin y podrn tratarse volmenes de muestras ms grandes. Como
alternativa, se puede utilizar la tcnica de la almohadilla de gasa, especialmente cuando el
nmero de grmenes patgenos son pocos o su presencia no es permanente.

Salmonella

Es probable que los concentrados de muestras necesiten ser enriquecidos previamente en agua
de peptona amortiguada, para luego ser enriquecidos en caldo que contenga ya sea
tetrationato, selenito, cloruro de magnesio o verde de malaquita. Estos, a su vez, pueden ser
sometidos a subcultivo en medios como el verde brillante, sulfito de bismuto, agar de
desoxicolata xilosa-lisina (DXL), citrato de desoxicolata o agar de MacConkey, examinndose
luego las colonias sospechosas tanto bioqumica como serolgicamente. Entre las pruebas de
depuracin bioqumica se deber incluir: agar triple de azcar y hierro, produccin de indol,
decarbosilasa y actividad de -galactosidasa. En las pruebas serolgicas se incluir la
aglutinacin con sueros polivalentes anti-o, anti-H y anti-Vi. Es imprescindible la eliminacin
previa de cepas autoaglutinables. Cuando el anlisis se realiza para detectar las S. typhi , el
medio de cultivo aconsejado es la selenita F. El procedimiento de los tubos mltiples se
utilizar para calcular el nmero de Salmonella presentes en el agua.

Shigella

Debido a que las bacterias coliformes y la mayora de cepas de Proteus vulgaris son
antagnicas a la Shigella, es aconsejable elegir medios enriquecidos selectivos que reduzcan al
mnimo las acumulaciones de compuestos voltiles y de los subproductos obtenidos a partir de
estos microorganismos antagnicos. Se puede usar caldo nutriente con un pH ajustado de 8,0
(es el nivel de pH que menos favorece el crecimiento de bacterias coliformes). Tambin es
posible obtener un buen enriquecimiento de Shigella con un medio de cultivo autocitotxico
con base en caldo de tripticasa de soja conteniendo 1 mmol/litro de 4-cloro- 2-ciclopentilfenil
-D-galactopiranosida, 2,5 g/litro de lactosa y sustancia amortiguadora de citrato a un pH de
6,2. La incubacin debe hacerse durante 6-18 horas, a una temperatura de 35C. Estrense las
culturas en agar DXL cuando hayan transcurrido 6 y 18 horas. Somtanse las colonias
sospechosas a pruebas de seleccin bioqumica y confrmese las colonias sospechosas con
antisueros de Shigella (sueros polivalentes y de tipo especfico).
Vibriones del clera y de otro tipo

Como forma de enriquecimiento primario se utiliza principalmente el agua alcalina de peptona

y el agua de taurocolato telurita de peptona, los subcultivos se harn utilizando como medios
selectivos un agar de tiosulfato, citrato, bilis, sal y sucrosa o un agar de gelatina de taurocolato
y telurito. Los cultivos que sean sospechosos se inocularn en agar de hierro Kligler. Despus
de 18 horas de incubacin, los V. cholerae producen un caracterstico color amarillo, sin
ninguna produccin de gas. Estos cultivos se depurarn despus para determinar la actividad
de ureasa y oxidasa; las cepas que demuestren ser negativas respecto a rea y positivas en
cuanto a oxidasa debern ser remitidas a un laboratorio de referencia para que se realicen
otras pruebas bioqumicas y de agrupamiento serolgico.

Coli enteropatgenos

En este caso se utilizan las tcnicas para la deteccin de bacterias coliformes fecales en el
agua. Las colonias se confirmarn como E. coli y si la evidencia epidemiolgica as lo garantiza,
los subcultivos pueden ser remitidos a un laboratorio de referencia para agrupamiento
serolgico y, en caso necesario, para realizar las pruebas que determinan la
enterotoxigenicidad.

Yersinia enterocolitica

Se ha encontrado que el agar M-Endo es el medio de cultivo ms conveniente y de mltiple

utilidad debido a las distintas caractersticas morfolgicas de las colonias cuando se incuban
tanto a 25 como a 35C. Despus de transcurridas 72 horas de incubacin, las colonias
aparecern bien definidas y con una coloracin roja oscura. Tambin da buenos resultados
para el desarrollo bacteriano utilizar agar de MacConkey, siempre que la incubacin se haga a
25C. Todos los grupos aislados que resulten sospechosos debern ser depurados
bioqumicamente a 25C y 35C utilizando ramnosa, rafinosa y melibiosa. Si existe evidencia
epidemiolgica que lo garantice, debern enviarse los subcultivos a un laboratorio de
referencia para formar los grupos serolgicos y efectuar las pruebas de susceptibilidad a los
antibiticos.

Campylobacter fetus

Existe una tcnica de membrana filtrante que ha dado buenos resultados para aislar este
germen patgeno, y en la cual se emplea un agar sanguneo que contiene vancomicn,
polimixin y trimetoprim. Los cultivos se incuban a 42-43C, bajo tensin reducida de oxgeno,
en una jarra anaerbica durante 3 das e inspeccionadas diariamente para detectar las colonias
mucoideas grises no hemolticas (con dimetro de 1-2 mm). Las colonias sospechosas son
teidas con Gram para detectar las formas tpicamente curvas y en S, y sometidas a prueba
para determinar la reaccin positiva a la oxidasa y la catalasa, la motilidad y la incapacidad
para desarrollarse aerbicamente a una temperatura de 36C. Los subcultivos deben ser
remitidos a un laboratorio de referencia para mayores pruebas de tipo bioqumico. No sera
prctico que los elementos aislados de brotes espordicos fueran serotipificados, debido a la
heterogeneidad de este organismo; por ahora, tampoco resulta prctico el uso de un antgeno
comn o de un conjunto de serotipos diferenciales.

Bibliografa

http://www.vet.unicen.edu.ar/prodyserv/labaacui.htm
http://edicion-
micro.usal.es/web/educativo/m_especial/29ctexto3.htm

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioAguas.htm