Prctica N7:

AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

1.- OBJETIVOS:

Realizar adecuadamente el aislamiento de enterobacterias y

conocer la importancia de su aislamiento en los alimentos.

2.- MARCO TEORICO:

ENTEROBACTERIAS

Es la forma comn de denominar a las bacterias Gram. negativas.

Reciben este nombre
porque suelen encontrarse en el intestino de los mamferos. Las
especies que poseen flagelos son mviles; el resto, inmviles. La
capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo
sirven para diferenciar los gneros. Los que no realizan la
fermentacin son patgenos, los fermentadores, saprofitos. Hay
enterobacterias que provocan intoxicaciones alimentarias, como la
salmonelosis. Los sntomas son fiebre, diarrea y dolores
abdominales. Es una intoxicacin muy rpida. Las epidemias de
peste, que fueron muy importantes en la antigedad, tambin son
producidas por una enterobacteria.

CLASIFICACIN

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cientfica:

Las enterobacterias constituyen la familia Enterobactericeas

(Enterobacteriaceae). Se clasifican en cinco tribus: Escherichieas,
Klebsielleas, Proteeas, Yersineas y Erwinieas. Cada una comprende
diversos gneros.

IMPORTANCIA DE RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN

ALIMENTOS: MICROORGANISMOS INDICADORES

La presencia de determinados microorganismos en los alimentos se

puede aprovechar como un indicador potente sobre algunos
aspectos fundamentales relacionados con los mismos. Este tipo de
microorganismos recibe la denominacin comn de
microorganismos indicadores y su investigacin y cuantificacin nos
puede aportar informacin sobre la seguridad sanitaria del alimento,
su grado de alteracin, su nivel de envejecimiento, la bondad de su
proceso de elaboracin, etc.

La presencia de microorganismos que modifican o degradan las

caractersticas organolpticas de los productos, aunque no
causen intoxicaciones, incapacitan los alimentos para su consumo
o disminuyen su vida comercial.

ENTEROBACTERIAS PATGENAS

La presencia de Enterobacterias patgenas en los alimentos supone

un grave riesgo para los consumidores que van a ingerirlos.
Debemos garantizar la ausencia de este tipo de microorganismos
en los alimentos.

Bacillus cereus
Clostridium botulinum
Clostridium perfringens
Escherichia coli
Listeria monocytogenes
Salmonella
Shigella
Staphylococcus aureus
Yersinia enterocolitica

3.- DESARROLLO:

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 Tomando como ejemplo una prctica realizada en
la universidad tecnolgica equinoccial

10 conchas negras fueron adquiridas en el mercado de

Santa Clara, norte de Quito. La muestra fue
transportada, tal como fue despachada por su
distribuidor, hasta el laboratorio de microbiologa de la
Universidad tecnolgica Equinoccial. La muestra se
mantuvo a temperatura ambiente hasta su anlisis,
el cual se realiz aproximadamente 2 horas despus
de adquirida.

A. PREPARACIN

Parte 1: Enriquecimiento
Se pesaron aspticamente 25 gr de concha negra
(incluyendo parte del caparazn externo), y se los coloc
en 225 gr. de TSB (Caldo de Soya Triptona), para el
enriquecimiento de las enterobacterias. Luego se
o
procedi a incubar a 37 C, por 24 horas.

Parte 2: Aislamiento de Enterobacterias

Se inocul el caldo en EMB (Eosina Azul de Metileno), por
la tcnica de estriado, para aislar colonias de diferentes
o
enterobacterias. Despus, se incub a 37 C durante 24
horas.

Parte 3: Purifcacin
Tras examinar las colonias aisladas sospechosas de
enterobacterias, se procedi a inocular de nuevo en
EMB, con el fin de obtener una cepa pura de cada una de
las bacterias.
o
Las 2 cajas Petri se incubaron a 37 C, por 24 horas.

Al cabo de 24 horas, se pudo encontrar las 2 cajas Petri

con cepas puras, completamente aisladas. Las primeras,
de color rosa-oscuro y consistencia viscosa y las segundas
de color verde brillante.

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De las colonias aisladas, se realiz una tincin gram, y
se procedi a observar al microscopio.

Parte 4: Identificacin
Para la identificacin de las bacterias, es decir, su
clasificacin en gnero y especie, se procedi a realizar
las pruebas bioqumicas, para saber las caractersticas
particulares de sus metabolismos.

Las pruebas bioqumicas que se utilizaron fueron: el

conjunto IMViC (Indol, Rojo- Metilo, Voges-Proskauer y
Citrato), Hidrlisis de rea, TSI (Tres azcares y Hierro),
SIM (Sulfuro Indol Motilidad) y LIA (Lisina Hierro). Para
realizar estas pruebas, se inoculo la bacteria en cada tubo
con el diferente medio usando la tcnica correspondiente.

Los tubos de ensayo con los medios inoculados, se

o
incubaron a 37 C por 24 horas. Transcurrido ese tiempo,
se dio lectura a los resultados de las Pruebas bioqumicas.
Para realizar algunas pruebas, se debi aadir a los tubos
de ensayo con el medio, el correspondiente reactivo
revelador. (RM: Rojo metilo; VP: K(OH), Alfa-naftol; Indol:
reactivo de Kovacs).

Despus de identificar los 2 tipos de bacterias, se inocul

la cepa pura de cada una en medio TSB, y se la almacen
en la refrigeradora para futuros estudios.

B. RESULTADOS:

Al cabo de las 24 horas de incubado el EMB inoculado

con el caldo TSB, principalmente de 2 tipos de
microorganismos. Se observ que la mayora de colonias
presentaban un color verde brillante, con brillo metlico,
por lo que pudimos especular que se trataba de colonias
de E. coli, debido a que presentaba los colores y forma
de colonias tpicas de esta bacteria en este medio. El
resto de colonias tenan un una consistencia viscosa y un
color rosa oscuro, lo que indicaba que se trataba de
microorganismos glucosa y/o lactosa positivos, es decir,

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que metabolizan una o las 2 azcares.

Tras aislar cada una de las bacterias encontradas, se

pudo encontrar las 2 cajas de EMB con cepas puras. Las
primeras, de color rosa-oscuro y consistencia viscosa y
las segundas de color verde brillante. Al observar la placa
de las primeras bacterias a la que se aplic tincin
Gram. en el microscopio, se encontr que eran Gram.
negativa, y presentaban forma de bacilo.

Las segundas bacterias, por su reaccin de coloracin

verde-claro y con brillo metlico en el medio EMB, se
especul que se trataba de Escherichia coli, por lo que
no se realiz la tincin Gram. con esta cepa.

Despus de analizar los resultados de las pruebas

bioqumicas aplicadas a las 2 diferentes cepas, se pudo
apreciar sus caractersticas de metabolismo propias y por
tanto, las 2 bacterias fueron clasificadas en gnero y
especie. Los resultados de las pruebas bioqumicas se

pueden apreciar en las tablas 1 y 2, y en las figuras 1 y

2.

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 Fig. 1. Pruebas bioqumicas de la 1ra
bacteria aislada

Se compar los resultados obtenidos de la primera

bacteria aislada con la bacteria del manual que
presentaba las caractersticas similares, en este caso
fue la Klebsiella planticola. Los resultados casi indican
que se trata en realidad de esta bacteria, a excepcin de
la prueba de Voges-Proskauer. Esta prueba fue repetida 2
veces, sin embargo expuso el mismo resultado que no
coincida con lo estipulado para la especie.

Se decidi pasar por alto esta variacin, por 2 razones

importantes: La variacin en el resultado de esta
prueba, puede ser atribuida a los cambios que
puede sufrir el microorganismo en el medio donde se
desarrolla. A dems, a excepcin del resultado en el
Voges-Proskauer, se observ en los dems medios de
cultivo la forma tpica de colonia correspondiente al
gnero Klebsiella sp.

Fig. 2. Pruebas bioqumicas del conjunto IMViC para la 2da

bacteria aislada
Para la segunda bacteria aislada, solo se realiz el
conjunto de pruebas IMViC, ya que todas las

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 caractersticas observadas, indicaban que se trataba de
Escherichia coli, lo cual se pudo ratificar con el conjunto
de pruebas, ya que se observ coincidencia en todas las
4.

4.- CONCLUSIONES:

La E. coli es un microorganismo patgeno, y su presencia

en el alimento indica un posible riesgo de intoxicacin
para la persona que lo ingiera.

La Klebsiella planticola es una enterobacteria que se

desarrolla principalmente en las plantas de mangle. La
concha negra habita en las races de los manglares lo
cual podra explicar la presencia del microorganismo en el
alimento.

A pesar de que no se pudo realizar la prctica, mediante

informacin en clase e internet se pudo comprender la
importancia de dicha prctica.

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