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Introduccion.
Las tinciones simples,diferenciales y estructuralesC(ver capitulo 3), asi como la
obsrvacion de las caracteristicas de una colonia en un cultivo , no son
suficientes para la identificacin de bacterias aisladas.El resultado de la tincin
y el cultivo entones debe combinarse con los resultados en pruebas bioquimas.
Las pruebasbioquimicas evalan las propiedades metablicas de una bacteria
aislada. Esto permite su identificacin usando el siguiente esquema de
identificacin.
Uso de carbodhidatos.
El medio de fermentacin de carbohidratos, como indicado son usados brotes
de cultivos de color rojo , purpura de fenol son usados para ver la capacidad
que tienen ciertos microorgansmos de fermentar varios carbohidratos-Los
carbohidratos tpicamente probados son adonitol,arabinosa, glucosa,
inositol,lactosa, melibiosa,rhamnosa,sorbitol y sucrosa.
Los medio entonces distinguen entre los fermentadores de lactosa entricos
como E.coli, Enterobacter aerogenes y Kleibsiella pneumoniae, de los no
fermentadores de lactosa entricos como Protheus vulgaris,Shigella flexneri y
Salmonella typhimurium.
Resultados esperados.
Las bacterias al fermentar carbohidratos
producen acidos, o acidos y gas,
como producto final de la
Fundamento de la tcnica.
La fermentacin es un proceso metabolico de oxido reduccin que ocurre en un
medio anaerobio, donde el aceptor final en la Cadena transportadora de
Resultados esperados.
La enzima catalasa ser capaz de degradar el perxido d ehidrogeno en agua y
oxigeno(figura 5.4).El oxigeno causa a formacin de burbujas a los pocos
segundos, dando positivo a la prueba. La ausencia de burbujeo nos indica
negativo a la prueba.Los resultados en tubo de cultivo y frotis son mostrados
en las figuras 5.5 y 5.6 respectivamente.
Uso de citrato
Procedimiento y sumario.
El uso de citrato es la porcin C
en las llamadas pruebas INViC ,
usadas para caratcerizar
bacterias entricas .El citrato
es una molecula organica que
puede ser usada por la bacteria
produciendo la enzima
citrasa.La citrasa es producida
por las bacterias
comoEneterobacter aerogenes
y Salmonella typhirmulium, pero por otras como Escherichia coli y Shigella
flexneri.
El agar de citrqatos de simon ya sea en placa o tubo es usado para determinar
cuando un Mo produce citratrasa.
El medio que contiene citrato es la nica fuente de carbono y como indicador
de pH azul de bromotimol,que es azul a un pH inicial de 6.9 y verde a pH de
7.6.
Resultados esperados.
Las bacterias con la enzima
citrasa metabolizan el citrato con
productos finales alcalinos que
elevan el pH del medio a 7.6, causando
el azul de bromotimol se torne de color azul (figura 5.7).La
presencia de crecimiento asi como el viraje de color a azul nos da un test
positivo a la prueba de citratos .En cambio la ausencia de viraje de color verde
a azul asi como de crecimiento da negativo a la prueba de citratos.Estos
resultados se muestran en la figura 5.8
Prueba de descarboxilasa.
Las descarboxilasas son ensimas que
tienen las bacterias para remover un grupo
carboxilo (-COOH) de los aminocidos.
Este proceso se le llama descarboxilacion, es un paso del
metabolismo de aminocidos . Hay
una enzima descarboxilasa especifica para cada aminocido , pero solo se usan
3 para distinguir en bacterias entricas estas son: lisina
descarboxilasa,ornitonina descarboxilasa,Lisina descarboxilasa,por ejemplo
esta se produce por Enterobacter aerogenes, pero no en Proteus vulgaris.
El medio descarboxilasa es suplementado con uno de los 3 aminoacidos lisina,
ornitonina o arginina para detectar la reaccin de descarboxilacion . Este medio
tambin contiene peptona y extracto de carne para soportar el crecimiento
bacteriano.La presencia de una coenzima llamada pyridoxal permite la
actividad de la descarboxilasa. La glucosa sirve como azcar fermentable. El
indicador de pH es prupura de bromocresol, que se vira a purpura en pH
cercano a 6.8 y amarillo en pH cercano a 5.2.
La inoculacin del Mo se realiza con un asa esteril .El tubo se cubre con 2 a 3
mL de aceite mineral para dismiuir la presencia de oxigeno, esta deficiencia de
oxigeno favorece formacin de acidos por la fermentacin de glucosa, con esto
se crea un medio acido necesario para la formacin de descarboxilasas.
El tubo se incuba a 35c por 24 a 48 hrs despus al examinarlo se obsrva un
cambio en la coloracin.
Tips para un anlisis correcto.
-Comparar los resultados con un tubo control no inoculado para determinar los
cambios ocurridos en el medio.
-Cualquier traza de purpura se considera una prueba positiva el color purpura
puede ir de purpura ligero a purpura oscuro.
Resultados esperados.
Los acidos formados de la fermentacin de glucosa disminuyen el pH del
medio, haciendo que el purpura de bromocresol vire a amarillo. El medio acido
promueve la formacin de descarboxilasas en las bacterias que producen
dichas enzimas.La descarboxilacion genera una alcanizacion del medio debido
a que los producto finales generados elevan el pH del medio, causando que el
purpura de bromocresol vire de color amarillo a purpura(figura 5.9).El color
purpura representa una prueba positiva .Si el medio permanece amarillo y se
inocularon en el medio bacterias con deficiencia en de enzimas descarboxilasa
es una prueba negativa.
Los colores son mostrados
en la figura 5.10 segn
donde se usan los mismos aminocidos.
Desnitrificacion.
Procedimiento y sumario.
La reduccin de nitato a nitrgeno es llamada desnitrificacion , es un proceso
que ocurre en la bacteria que produce la enzima nitrato reductasa.Esta enzima
permite a la bacteria usar el nittrato como aceptor final de electrones en
ausencia de oxigeno, resultando en la producion de gas Nitrogeno.La nitrato
reductasa es producida por ciertas bacterias , como son las pseudomonas
aeuroginosa, pero no por otras como son la Alcaligenes faecalis.
El contenido de culivo de nitrato se usa en un tubo Durham para detectar si un
organismo posee la habilidad para desnitrificar. El cultivo de Ntrato contiene
extracto de carne y
Prueba
de rojo de
metilo.
Procedimiento y sumario.
La prueba de rojo de metilo es la M en la prueba IMViC usada para
glucosa.
acidos formico .Estas bacterias son llamadas rojo de metilo positivo e incluye a
pH rojo de metilo. El tubo se rota de manera suave entre las palmas de las
-No usar mas de 5 gotas de rojo de metilo; usar mas de esta cantidad del
metablicos finales.
Resultados esperados.
otros acidos que disminuyen el pH al medio a 4.2 .A este pH, el rojo de metilo
lo hace virar a rojo.Entonces el color rojo representa una prueba positiva .Las
bacterias entricas
subsecuentemente
6.0, a este pH, el rojo de metilo se torna amarillo.Un color amarillo representa