PRCTICA 7: TCNICA DE CULTIVO EN

PLACA
CONTENIDO

INTRODUCCIN................................................................................................... 2
OBJETIVOS........................................................................................................... 3
GENERALES:..................................................................................................... 3
ESPECIFICOS:................................................................................................... 3
MARCO TERICO................................................................................................. 3
MATERIALES........................................................................................................ 6
PROCEDIMENTO.................................................................................................. 6
OBSERVACIONES............................................................................................... 12
RESULTADOS..................................................................................................... 13
CONCLUSIONES................................................................................................. 13
DISCUSIN........................................................................................................ 13
RECOMENDACIONES......................................................................................... 13
CUESTIONARIO.................................................................................................. 14
1. Cundo sera necesario utilizar tcnicas para inocular un tubo de
medio lquido con polvo?............................................................................ 14
2. Describa las cabinas de anaerobiosis...................................................14
3. A que se denominan inoculadores multipontos? D ejemplos,...........14
4. Para qu sirven los indicadores de anaerobiosis? Menciones cada uno
de ellos....................................................................................................... 14
5. Por qu es importante evitar de romper o daar el medio de cultivo
durante la siembra?.................................................................................... 14
BIBLIOGRAFA.................................................................................................... 15
 INTRODUCCIN

Para realizar el estudio de los microorganismos, se han diseado diversos

mtodos que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en los que es
posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de
microorganismo. Una de las tcnicas ms usadas en el laboratorio de
microbiologa consiste en transferir una muestra microbiolgica de un
ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos
microbianos. Al efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el
rea de trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es
necesario tomar precauciones para impedir que stos penetren y contaminen
los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no slo el aspecto
nutricional, sino tambin las condiciones ambientales de su hbitat natural, por
lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentracin de sales y
durante la incubacin condiciones tales como la temperatura, aireacin la
luminosidad. La aplicacin de estos procedimientos ha permitido propagar a los
microorganismos en cultivos mixtos, as como su aislamiento y la obtencin de
cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterizacin, aplicacin
y control de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo
de microorganismo y propsito especfico del estudio.
OBJETIVOS

GENERALES
Realizar el sembrado de los microorganismos en total asepsia.
Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscpico y
microscpico de bacterias.

ESPECIFICOS
Interpretar los resultados del anlisis microbiolgico de los alimentos.
Observar e identificar correctamente las caractersticas de crecimiento
de los microorganismos.

MARCO TERICO

Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la

identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea
porcin de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es
posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman
colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que
muestran caractersticas que ayudan a identificar el organismo.
Mtodos - Tcnicas
1) Estriado bsico
Calienta el asa de inoculacin hasta que quede de color rojo intenso para
eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfre durante 20 o 30
segundos, Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o
una placa de Petri. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en
un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrs del plato, toca con el
asa en el medio y psalo a travs de la superficie de la placa con un
movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.
2) Estriar para aislar
Estriar para aislar implica una sola inoculacin de una seccin de la placa de
Petri y, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial
de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de
microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las
bacterias, los bacterilogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea
de bacterias que nacen de un solo progenitor.
3) Estriado en T
Dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la
placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divdela por la mitad. A
continuacin, dibuja una lnea divisoria en una de las mitades para dividirla
hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la seccin ms grande
quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior.
Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces
la lnea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo.
Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones ms pequeas
quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la
esquina derecha de la primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon
el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar
cualquier microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de
la segunda seccin a travs de la tercera.

4) Estriado por cuadrantes

Este es tambin un mtodo de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro
secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro
partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos bsicos
de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las
agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo
hiciste con el mtodo del estratificado en T y calentando el asa antes de
inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el
primero hasta el cuadrante adyacente.
Mantenimiento y preservacin de cultivos puros
.
Se utilizan diversos procedimientos de acuerdo con las caractersticas y la
tolerancia del microorganismo en cuestin :

i.- Resiembra peridica en medios frescos.

.
ii.-Preservacin de cultivos con una capa de aceite mineral.
iii.-Liofilizacin
iv.- Almacenamiento a temperaturas muy bajas en presencia de agentes
estabilizantes como glicerol o dimetilsulfxido. Nitrgeno lquido (- 196
C)

Mtodos para aislar cultivos puros

i.- Tcnica de siembra por estras en placa.

..

Ii.- Tcnica de vertido en placa. m .

Iii.- Tcnica de enriquecimiento del cultivo: consiste en disear

condiciones de cultivo que favorezcan especficamente al
microorganismo que queremos aislar y que se encuentra en pequeas
cantidades.

Iv.- Tcnica de las diluciones en serie: se utiliza para microorganismos

cuya proporcin es mayoritaria dentro de la poblacin mixta.

v.- Tcnica de aislamiento de una sola clula mediante un

micromanipulador.

Para que sirven los indicadores de anaerobiosis

Sirve para el transportes de muestras, es un factor importante para el
aislamiento de anaerobios es el transporte de muestras. Se debe proteger a los
microorganismos de los efectos del O2 durante el tiempo que transcurre entre
la extraccin y la siembra anaerbica. El ms efectivo sistema es "correr".
Las muestras deben ser colocadas en un sistema de transporte que asegure la
anaerobiosis. Existen tubos, comercialmente disponibles en los que se ha
sustituido de aire por otro gas ("Tubos gaseados") y que contienen un indicador
de anaerobiosis. En casos de extraccin de material con aguja y jeringa, si la
demora no supera los 30 minutos puede enviarse el material en la misma
jeringa expulsando el aire residual y obturando la aguja con un tapn de goma.
Existen para perodos prolongados tubos con medios de transporte adecuados
o bolsas plsticas con sistemas de anaerobiosis qumica. Los lquidos
purulentos espesos (Abscesos, Empiemas).

MATERIALES

PROCEDIMENTO

Se hizo lo clculos de macconckey y plate count.

Macconckey
500 g------------1000ml
X g ---------------80 l
X=4 g
Plate count.
23.5 g-----------1000ml
X------------------80 ml
x=1.8 g
se prepar los cultivos y se utiliz para determinados aislamientos.
AISLAMIENTO DE PLACAS POR ESTRAS

Formas de Estras

Usamos el caldo urea 101 para sembrar en la

placa que contiene MacConckey.

Prender el mechero y flamear el asa de siembra hasta que se ponga

color rojizo, esperar a que se enfri y quedar
esterilizado.

Abrir el tubo de ensayo y coger la asa de siembra e introducimos

despacio en el tubo de ensayo.
Extraer una asada.

Inocular en el borde de la placa, por cuadrantes extender sobre un

sector X donde las colonias estn saturadas.
 Se extiende hasta el sector Y, donde la colonia est menos saturada.
Sin tocar los costados.
Se extiende en el sector Z, menos carga de colonias.

Y se extiende con una pequea estra al final.

O puede realizarse en una placa se divide por la mitad comenzando por
la parte superior y hasta llegar a la parte inferior sin extraer la asa de
siembra de la placa formar estra en forma de zig-zag cruzando por la
divisin .
Realizar lo mismo para la cantidad de placas que se tiene.
Luego las placas se invierten.
Rotular las placas en la parte inferior.
se envuelven con papel aluminio y se incuban.
Observar los resultados
AISLAMIENTO POR DILUCIN EN MEDIO SLIDO
o Usamos el cultivo plate count.
o Se extrae 1 ml del caldo urea utilizando la pipeta y lo colocamos en una
placa estril vaca.
o 1ml de cultivo urea 101 en la placa rotulada de 101 .

o 1 ml de cultivo urea 102 en la placa rotulada de 102 .

o 1ml de cultivo de urea 103 en la placa de 103 .

o Sobre ella se agrega 20 ml del medio plate caunt.
 o Luego agitar la placa movindola
de manera horario 4 veces, 4 veces de manera antihoraria, 4
veces hacia arriba y 4 hacia abajo para que se homogenice.

o Envolver con papel aluminio sin invertir cada placa y llevarla a

incubar.
o Observar los resultados.
OBSERVACIONES

Tambin pudimos observar que el mtodo de siembra no siempre va ser

el mismo tambin va depender del medio analizado, ya que cada
microorganismos tienen comportamiento distintos.
Para obtener los resultados ms precisos es necesario hacer el
procedimiento al pie de la letra para no contaminar la muestra con otros
microorganismos presentes en el ambiente.
RESULTADOS
CONCLUSIONES

- En este laboratorio pudimos aprender cmo se hace la siembra en las

placas, las tcnicas que debemos utilizar y las debidas precauciones
que debemos tomar.
- Debemos tener siempre el concepto de los agares para poder interpretar
el medio as tambin los requerimientos para su desarrollo del
microorganismo.
- El crecimiento en las placas Petri de mostro diferente para un
determinado microorganismo debido a que se usaron tcnicas
diferentes.

DISCUSIN

Los mtodos usados en la siembra fueron dos, uno que es el ms fcil que era
realizar una lnea divisoria y luego realizar zigzag sobre esa lnea, la otra fue la
siembra en cuadrantes, que es la que se realiza al lado de las placas en zigzag;
la siembra debe realizarse son sumo cuidado ya que se trata de evitar la
ruptura del medio, como sucedi en muestro caso en algunas placas.

RECOMENDACIONES

Realizar el peso exacto del agar a usar para no desperdiciar.

No dejar abierto el agar para evitar que hidrate y luego se solidifique.
Esterilizar el asa de siembra antes de usarla y despus de la inoculacin.
Uso constante del mechero a la hora de realizar las siembras.
Los materiales a usar, placas Petri, deben estar correctamente
esterilizados.

CUESTIONARIO

1. Cundo sera necesario utilizar tcnicas para inocular un tubo

de medio lquido con polvo?
Cuando se trabaja con medios y reactivos utilizados para los microorganismos de
cultivo, una tcnica asptica debe ser practicada para asegurar la contaminacin se
 minimiza. Una variedad de mtodos de enchapado se utilizan habitualmente para
aislar, propagar, o bacterias enumerar y fagos, todos los cuales incorporan
procedimientos que mantienen la esterilidad de materiales experimentales.

2. Describa las cabinas de anaerobiosis.

BUG BOX M: Esta especficamente diseado para ajustarse a las
cabinas de Ruskinn y cada uno puede contener hasta 11 placas Petri (12
cuando se cargan en la cmara). Son muy ligeros y se encuentran
perforados para una mejor manipulacin y una mejor recirculacin de
aire durante el ciclo de purgado del sistema intercambiador de placas.
Para que las muestras puedan ser fcilmente identificadas en la rutina
diaria, los soportes se encuentran disponibles en 5 colores diferentes:
negro, blanco, amarillo, verde jade y prpura. Con el equipo estndar se
suministran 3 soportes.

3. A que se denominan inoculadores multipontos? D ejemplos

4. Para qu sirven los indicadores de anaerobiosis? Menciones

cada uno de ellos.

5. Por qu es importante evitar de romper o daar el medio de

cultivo durante la siembra?
Para poder realizar una correcta siembra ya que si se daar el medio
afectara ya que se concentrara ah el cultivo, o tambin introducira
burbujas de aire al medio como paso con las muestras que realizamos en la
prctica.

BIBLIOGRAFA

MARCO TERICO
 , E., Allen, S., Klajn, D. 2006. Diagnostico Microbiolgico. Sexta edicin. Editorial
Mdica Panamericana. Argentina.

PROCEDIMIENTO

Swanson K. M., Petran R. L., J. H. Hanlin (2001) "Mtodos de cultivo para

enumeracin de microorganismos. 4 ed. Downs F.P. Ito y K. (Eds.)
APHA. Washington. 53-67.
Romero Cabello, R. Microbiologa y Parasitologa Humana: Bases etiolgicas de
las enfermedades infecciosas.Editorial Panamericana, Mxico 2001. 2ed. Pp.257-
429

CUESTIONARIO
Manual de usuario cmara de anaerobio BUG-BOX M
US Department of Health and Human Services (DHHS). Biosafety in Microbiological And
Biomedical Laboratories (BMBL). 5th, U.S. Government Printing Office. Washington DC.