Coleccin y seleccin de microorganismos

benficos

Collection and selection of beneficial microorganisms

Diana Marcela Castaeda Pea

RESUMEN
Los microorganismos benficos son aquellos que cumplen un papel en el ambiente como herramientas del con-
trol biolgico; ste es un fenmeno que ocurre en el campo y que se aplica como una tecnologa para el manejo
de enemigos naturales de plantas, insectos, animales, etc. Los microorganismos benficos pueden ser
entomopatgenos, antagonistas de fitopatgenos o participar en eventos de absorcin de nutrientes, entre
otras actividades. El uso de microorganismos benficos trae grandes ventajas comparado con el uso de productos
qumicos, pero su xito depende de una buena seleccin entre varios candidatos. Dentro del cultivo de la palma
de aceite se han usado microorganismos que se manifiestan en forma natural para el manejo de plagas, y desde
hace unos aos se plante e inici el establecimiento de la coleccin de microorganismos benficos de Cenipalma,
cuyo principal objetivo es proveer a los palmicultores de cepas de microorganismos aptos para ser aplicados en
el campo como herramientas en el manejo integrado de plagas, y se logra mediante la coleccin de las muestras,
el aislamiento y purificacin de los microorganismos, pruebas de eficiencia y eficacia, conservacin y, finalmente,
pruebas de control de calidad peridicas. En la actualidad, la coleccin de microorganismos benficos de Cenipalma
cuenta con 18 aislamientos de entomopatgenos y 15 de antagonistas de fitopatgenos, provenientes de las
diferentes zonas palmeras del pas.

SUMMARY
The beneficial microorganisms are those which have a role in the environment, as biological control tool. This is
a phenomenon that occurs in the country side and its applied as a technology for the management of natural
enemies of the plants, insects, animals, etc. Beneficial microorganisms may be entomo-pathogenous, phyto-
pathogenous antagonistic, or particpate in absorption of nutrients, among other events. The use of the benefi-
cial microorganisms brings great advantages in comparison w i t h the use of chemical products. Its success de-
pends on a good selection between different candidates. In the oil palm crop microorganism that show in
natural form have been used for plague treatment. Some years ago, it was noted and began the collection of
beneficial microorganisms of Cenipalma. Its main objective is to supply the palm growers with stock of benefi-
cial microorganisms ready to be applied in the field, as a tool for integrate plague management, giving guaran-
tee of its viability and effectivity. The objective is achieved through collecting samples, insulation and purifica-
r o n of the microorganisms, efficiency and efficacy tests, conservation, and finally periodic control tests. Nowa-
days, the beneficial microorganisms collection of Cenipalma has 18 insulations of entomo-pathogenous and 15
of antagonistic of phyto-pathogenous, which come from different oil palm regions of the country.

Palabras claves: Control biolgico, Antagonismo, Entomopatgeno, Coleccin de microorganismos.

1 Microbiloga. Invest. Auxiliar. rea Sanidad Vegetal. Cenipalma. Apartado Areo 252171. Bogot, D.C., Colombia.

PALMAS Vol. 21 No. Especial, Tomo 1, 2000 2 2 1

 D. M. Castaeda P.
INTRODUCCIN
El c u l t i v o de la palma de aceite, por ser un
monocultivo, brinda las condiciones necesarias
para que organismos p a t g e n o s , insectos y
medio ambiente interacten en forma especial,
m a n i f e s t n d o s e con efectos nocivos en las
palmas; lo anterior, unido a prcticas de manejo
inadecuadas ha generado problemas sanitarios
graves, y con ellos grandes prdidas econmicas.
A pesar de e s t o , el e c o s i s t e m a m i s m o ha
mostrado que las plagas pueden ser manejadas,
y el c o n t r o l b i o l g i c o es la h e r r a m i e n t a que
p e r m i t e l o g r a r ese e f e c t o , m a n i f e s t n d o s e
naturalmente, o despus de la intervencin del
hombre, quien lo puede introducir, para reponer
el equilibrio natural del ecosistema, que es su
principal objetivo (Calvache 1993). La posibilidad
de manejar las plagas propias del cultivo con un
agente o con una mezcla de agentes biolgicos
(hongos y bacterias p r i n c i p a l m e n t e ) , es una
alternativa que por ser exitosa en otros cultivos,
se p r o p o n e c o m o p a r t e de un p a q u e t e
tecnolgico, dentro del cual sera una estrategia
para su manejo.
Antes de llevar al campo un microorganismo con
potencial como agente de control biolgico, se
deben tener en cuenta algunos criterios que
permiten seleccionar al biocontrolador ideal, por
ejemplo, debe ser genticamente estable, ser
efectivo a bajas concentraciones y volmenes,
debe poder ser fcilmente conservado y a esto
lo favorece tener requerimientos nutricionales
simples, ser fcil de propagar en termentadores
con sistemas econmicos, tener la habilidad de
sobrevivir en el campo, tener amplio espectro de
accin, no producir metabolitos secundarios que
puedan afectar al hombre u otros vertebrados,
debe tolerar productos qumicos habitualmente
usados como parte del manejo agronmico y, si
es posible, ser compatible con ellos (Cook y Baber
1996). A d e m s , a l g u n a s caractersticas son
deseables en el metabolismo del biocontrolador;
de los antagonistas de organismos fitopatgenos
se espera la produccin de sustancias inhibidoras
o antimicrobanas (Faull 1988; Hawksworth et al.
1996), y de los organismos entomopatgenos se
espera la produccin de enzimas para degradar
la quitina, las toxinas, etc. (Fuxa y Kumini 1997;
2 2 2 PALMAS
A i n s w o r t e t a l . 1983, Whipps et al. 1988). Por otro
lado, los biocontroladores pueden seleccionarse
teniendo en cuenta mecanismos fsicos como su
habilidad de competir por nutrientes y por el
sustrato de colonizacin, que son ms comunes
en antagonistas de f i t o p a t g e n o s (Cenipalma
1997). Pero an conociendo los criterios bsicos
que p e r m i t e n seleccionar b i o c o n t r o l a d o r e s
ideales, este proceso no se puede iniciar si no se
cuenta con un nmero adecuado de individuos
promisorios, preferiblemente provenientes de
entornos con diferentes condiciones ambientales,
almacenados en las mejores condiciones que
p e r m i t a n usarlos mucho t i e m p o despus, sin
correr el riesgo de que se pierda su efectividad
(Castaeda 2000). Por eso que ha sido inters de
C e n i p a l m a c o n t a r con un banco de m i c r o -
organismos benficos con esas caractersticas,
que pueda b r i n d a r el material biolgico
n e c e s a r i o para d e s a r r o l l a r t r a b a j o s d e
investigacin y para que el sector palmicultor
cuente con nuevas herramientas para el manejo
de plagas.
En este a r t c u l o se p r e s e n t a n resultados de
a l g u n a s de las a c t i v i d a d e s que se v i e n e n
d e s a r r o l l a n d o d e n t r o del p r o y e c t o " M i c r o -
organismos biocontroladores en el cultivo de la
palma de aceite: reconocimiento, seleccin y
produccin", especficamente en cuanto a dos de
sus objetivos que son: la creacin del banco de
microorganismos benficos de Cenipalma, y a
seleccin de los microorganismos ideales para
implementar prcticas de manejo de plagas. Los
microorganismos objeto de estudio son todos los
gneros de hongos y bacterias entomopatgenos
que permiten ser manejados bajo condiciones de
laboratorio, y aquellos hongos y bacterias de los
gneros Trichoderma, Pseudomonas y Bacillus,
p r o m i s o r i o s para el m a n e j o de los agentes
causales de la Pudricin de Cogollo.
MATERIALES Y MTODOS
Las a c t i v i d a d e s necesarias para o b t e n e r la
coleccin de microorganismos y la seleccin de
los ms p r o m i s o r i o s se d e s a r r o l l a n en el
 Coleccion y seleccin de microorganismos beneficos
Laboratorio de Control Biolgico de Cenipalma,
ubicado en la Plantacin Unipalma de los Llanos
S.A., en Cumaral (Meta), ubicada en una a l t i t u d
de 370 msnm.
C o l e c c i n de m i c r o o r g a n i s m o s : se o b t i e n e
realizando muestreos, ya sea de insectos con
signos o s n t o m a s de a f e c c i n p o r a l g n
m i c r o o r g a n i s m o , para el caso de e n t o -
mopatgenos de inters. Las muestras se t o m a n
y se m a n t i e n e n en recipientes limpios, secos,
cerrados y d e b i d a m e n t e marcados hasta el
m o m e n t o de su procesamiento, y en caso de
requerirse su envo por tiempos prolongados se
procura refrigerar, especialmente c u a n d o se
sospecha de infeccin por bacterias. Para el caso
de antagonistas de f i t o p a t g e n o s son tiles
muestras de suelo, agua, ambiente o material
vegetal; para el muestreo de suelo se elimina la
capa ms s u p e r f i c i a l y se t o m a n a p r o x i m a -
damente 500 g, cuidando que se t o m e desde la
s u p e r f i c i e hasta 20 cm de p r o f u n d i d a d ; en
algunos casos, dependiendo del t i p o de muestra
a evaluar, son necesarias submuestras para
garantizar representatividad; las muestras de
ambiente se colectan luego de exponer cajas de
Petri con medio de cultivo por algunos minutos
en el rea a evaluar, y las muestras de agua y
material vegetal se toman en el rea deseada,
empleando recipientes adecuados, pero
aspticos, para ese f i n , c u i d a n d o de r o t u l a r
adecuadamente las muestra.
En el laboratorio se realizan aislamientos a partir
de las muestras colectadas, usando medios ge-
nerales como PDA y AN para el aislamiento de
hongos y bacterias, y en otros casos se usan
medios selectivos como TSM y KB para el creci-
miento de Trichoderma spp. y de Pseudomonas
spp., respectivamente, como parte del aisla-
miento y purificacin de gneros especficos. Una
vez p u r i f i c a d o s se r e a l i z a la c o n s e r v a c i n
mediante la tcnica de papel de filtro esterilizado
y, finalmente, con una frecuencia semestral, se
realizan pruebas de control de calidad que se
basan en la calificacin de la viabilidad y pureza
de los microorganismos en coleccin, y de los
procesos necesarios para lograrla. Para el caso
de los hongos se realizan cultivos monospricos
con el f i n de g a r a n t i z a r la u n i f o r m i d a d del
individuo, y se conservan en esa condicin.
Seleccin in v i t r o : Se t r a b a j a r o n m t o d o s
diferentes para evaluar la habilidad metablica
de hongos y bacterias como antagonistas de un
aislamiento catalogado como el ms patognico
de Thielaviopsis paradoxa (De Seynes) van Hohn.
Se montaron antibiogramas en los que se midi
el t a m a o del halo de inhibicin del crecimiento
del hongo causado por las bacterias, y se prepa-
raron extractos en medio lquido, a partir del
c r e c i m i e n t o p o r s e p a r a d o , de 10 de los
aislamientos de Trichoderma spp. colectados; los
extractos se adicionaron al PDA convencional y
sobre los 10 medios as obtenidos, se sembr el
aislamiento del patgeno mencionado, con el f i n
d e e v a l u a r e l e f e c t o d e los m e t a b o l i t o s
producidos por los hongos y ahora contenidos
en los medios, en el desarrollo del patgeno. En
vista de la agresividad en cuanto al crecimiento
in vitro de los g n e r o s Trichoderma y
Thielaviopsis, tambin se realizaron pruebas de
competencia por sustrato entre ellos, con el f i n
de d e t e r m i n a r las cepas de Trichoderma ms
agresivas en cuanto a la habilidad de competir
por sustratos o nutrientes. En el m o m e n t o se
estn estandarizando las pruebas de seleccin in
vitro para hongos y bacterias entomopatgenas,
con las que se podrn determinar los mejores
aislamientos y las dosis letales sugeridas para
aplicarlos en el campo.
Seleccin en invernadero: Los aislamientos de
Trichoderma spp. seleccionados como efectivos
en las pruebas in vitro, se llevaron al invernadero
para ser evaluados por su habilidad de colonizar
sustratos y g a r a n t i z a r su a g r e s i v i d a d en el
momento de ser aplicados en el campo. Como
sustratos se evaluaron las tusas y porciones de
paleras, y sobre ellas se asperjaron suspensiones
en agua y en aceite de los aislamientos del
h o n g o , u s a n d o d i f e r e n t e s v o l m e n e s con
concentraciones alrededor de 5X108 u.f.c/ml de
suspensin.
RESULTADOS
Coleccin de microorganismos: A p a r t i r de
muestreos realizados desde el mes de abril de
1997 en diferentes plantaciones palmeras en los
Llanos O r i e n t a l e s , se han recuperado varios
aislamientos fngicos y bacterianos, de los cuales
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 D. M. Castaeda P.

se han seleccionado a q u e l l o s
pertenecientes a los gneros tri-
choderma, Bacillus, y Pseudomo-
nas, que son catalogados como
promisorios c o m o a n t a g o n i s t a s
de f i t o p a t g e n o s , y gracias al
apoyo del rea de Entomologa
de C e n i p a l m a , y de a l g u n o s
encargados de la sanidad vegetal
de diferentes plantaciones se han
o b t e n i d o varios aislamientos de
hongos y bacterias entorno-
p a t g e n o s . Las T a b l a s 1 y 2
p r e s e n t a n un r e s u m e n de los
microorganismos en coleccin.

Seleccin in v i t r o : Se l o g r
Figura 1 Inhibicin del crecimiento de cuatro aislamientos de Thielaviopsis spp. en
estandarizar la tcnica del m e d i o
medio con filtrado de ocho aislamientos de Trichoderma spp.
f i l t r a d o para hacer la seleccin in
vitro de aislamientos de Trichoderma spp.; inicial- aislamientos de Thielaviopsis spp. en estudio, y
m e n t e se p r o b a r o n diez aislamientos de la que otros actan especficamente contra algunos
coleccin contra cuatro aislamientos patognicos de los aislamientos.
de Thieiaviopsis spp., sobre PDA que contena el
f i l t r a d o o b t e n i d o d e l c r e c i m i e n t o d e los Tabla 2. Coleccin de microorganismos antagonistas de
aislamientos de Trichoderma spp., y se m i d i Thielaviopsis paradoxa (aislamiento CPT 007).
d i a r i a m e n t e el a u m e n t o en mm del d i m e t r o de
las colonias del p a t g e n o (Fig. 1). Los resultados
p e r m i t i e r o n observar que hay aislamientos de
Trichoderma sp. e f e c t i v o s c o n t r a los c u a t r o

224 PALMAS
 Coleccion y seleccin de microorganismos beneficos
Seleccin en invernadero y campo: Se prepararon
suspensiones en agua y aceite de Trichoderma
spp., hasta lograr volmenes de 500 ml con
aproximadamente 5x108 ufc/ml, despus de hacer
recuento de esporas en la cmara de Neubawer;
sin e m b a r g o , las c o n c e n t r a c i o n e s de las
suspensiones en aceite no f u e r o n posibles de
medir debido a que el hongo, por tener pared
hidroflica, no se suspende homogneamente en
esa sustancia (aceite de cocina comn), formando
conglomerados que no permitan su recuento;
sin embargo, se us la misma cantidad de hongo
empleado para la preparacin de las suspen-
siones en agua. Con las suspensiones preparadas
se hicieron aspersiones de 10 ml/ tusa bajo condi-
ciones de invernadero. Previamente se haba
d e t e r m i n a d o que 10 ml eran suficientes para
humedecer totalmente una tusa de 5 kilogramos.
Cinco das despus de la inoculacin se observ
colonizacin c o m p l e t a del aislamiento selec-
cionado en las pruebas in vitro sobre las tusas.
DISCUSIN
El t r a b a j o r e a l i z a d o hasta el m o m e n t o ha
p e r m i t i d o establecer una organizacin de los
microorganismos con potencial biocontrolador
propios del cultivo de la palma de aceite, en una
c o l e c c i n que p e r m i t e d i s p o n e r d e esos
individuos en cualquier momento, bien sea para
fines de investigacin que permitan seleccionar
entre ellos los mejores, o para ser usados en el
campo como herramientas del manejo integrado
de plagas. El proceso de formacin de la coleccin
es c o n t i n u o , ya q u e el m e d i o a m b i e n t e es
dinmico, y las condiciones p e r m i t e n que en
d i f e r e n t e s pocas se m a n i f i e s t e n d i f e r e n t e s
plagas y simultneamente diferentes alternativas
para su control; en esos momentos es de gran
i m p o r t a n c i a la c o l a b o r a c i n de t c n i c o s y
agrnomos respecto a la observacin de esos
fenmenos y a la recoleccin de esos especmenes
que son recibidos en el laboratorio de control
b i o l g i c o de C e n i p a l m a , para su a d e c u a d o
manejo, garantizando as la conservacin de una
de las herramientas ms valiosas para el MIP.
A pesar de q u e a un m i c r o o r g a n i s m o se le
brindan en el laboratorio las mejores condiciones
para su desarrollo y funcionamiento, y de hecho
muestran ser efectivos, en el m o m e n t o de ser
llevado al campo no ocurre lo mismo; sin em-
bargo, las tcnicas de seleccin in vitro se realizan
como una prctica que permite discriminar en-
tre una gran cantidad de individuos algunos que
tienen ms posibilidades de actuar efectivamente
en el campo. Respecto al trabajo realizado se
lograron seleccionar algunos microorganismos
antagonistas de fitopatgenos que pasaron a la
etapa de seleccin en invernadero; de ellos un
aislamiento de Trichoderma sp. se catalog como
eficiente en las pruebas d o n d e se calific la
agresividad para colonizar sustratos, que es una
v e n t a j a a la h o r a de c o n f i r m a r q u e b a j o
condiciones de campo pueden competir hbil-
mente contra aislamientos del p a t g e n o ; las
aplicaciones hechas a las paleras f u e r o n difciles
de calificar por lo que esos datos no han sido
t e n i d o s en c u e n t a para la c a l i f i c a c i n d e l
a i s l a m i e n t o de Trichoderma sp. p r o b a d o . La
utilizacin de aceites como vehculo de aplicacin
de los m i c r o o r g a n i s m o s es una a l t e r n a t i v a
interesante ya que de demostrar ser factible,
traera ventajas respecto a la v i a b i l i d a d del
p r o d u c t o en el c a m p o , y r e d u c c i n en los
volmenes de aplicacin por va rea.
CONCLUSIONES
La coleccin de microorganismos benficos de
C e n i p a l m a c u e n t a con 18 a i s l a m i e n t o s de
entomopatgenos y 15 de antagonistas de f i t o -
patgenos, provenientes de diferentes zonas
palmeras del pas. De los 15 antagonistas de
f i t o p a t g e n o s se han seleccionado un aisla-
miento de Trichoderma sp. (por su efectividad y
a g r e s i v i d a d c o m o c o l o n i z a d o r ) y u n o de
Pseudomonas sp. (por su e f e c t i v i d a d ) , como
efectivos mediante pruebas in vitro contra un
aislamiento patognico de Thielaviopsis para-
doxa, uno de los principales agentes causales de
la Pudricin de Cogollo.
PERSPECTIVAS
Teniendo en cuenta la importancia de contar con
u n a c o l e c c i n de m i c r o o r g a n i s m o s y las
posibilidades que la naturaleza brinda, se planea
aumentar el nmero de aislamientos promisorios
P A L M A S - Vol. 21 No. Especial, Tomo 1, 2000 2 2 5
 D. M. Castaeda P.
en ella. O t r o p u n t o a desarrollar es f o m e n t a r el
i n t e r s r e s p e c t o a estos t e m a s en las z o n a s
p a l m e r a s del pas, con el f i n de e s t i m u l a r la
creacin de g r u p o s de l a b o r a t o r i o s por
plantaciones para la multiplicacin comercial de
los microorganismos, que p e r m i t a n llevarlos al
c a m p o d e n t r o d e las prcticas a g r o n m i c a s
normales y as reducir costos en el m a n e j o de
p l a g a s . Por o t r a p a r t e , se p l a n e a c o n t i n u a r
ofreciendo servicios de capacitacin en cuanto
al manejo de estos microorganismos, as como
continuar el proceso de seleccin de antagonistas
de f i t o p a t g e n o s p r o b a n d o los aislamientos que
vayan ingresando en la coleccin.
BIBLIOGRAFA
AINSWORTH, G. C; SPARROW, F. K.; SUSSMAN, A.S. (Eds.). 1983.
The Fungi: An advance treatice. Vol. 4: A taxonomic review
with keys. Academic Press, New York.
CALVACHE, H. 1993. El control microbiano en el manejo de las
plagas de la palma de aceite en Colombia. Palmas (Colom-
bia). v. 14 no.2, p. 13-21.
226 PALMAS
CENIPALMA. 1997. Control biolgico de los agentes causales de
la Pudricin de cogollo en palma de aceite. Ceniavances. No.
40. Cenipalma. Santaf de Bogot, 2p.
CASTAEDA, D. 2000. Banco de microorganismos benficos para
el cultivo de la palma de aceite. Boletn divulgativo
Ceniavances. No. 73. Cenipalma. Bogot. 4p.
COOK, R. J.; BAKER, K.F. 1996. The nature and practice of bio-
logical control of plant pathogens. APS Press, Minneapolis.
FAULL, J. L 1988. Competitive antagonism of soil-borne plant
pathogens. In: M.N. BURGE (Ed.). Fungi in biological control
sistems. University Press. Manchester. p. 125-138.
FUXA, J.R.; KUNIMI Y. 1997. Microorganisms interacting with
inseets. In: C.J. HURST; G.R. KNUDSEN; M.J. McINERNEY; LD.
STETZENBACH; M.V. WALTER (Eds.). Manual of environmen-
tal microbiology. ASM Press, Washington.
HAWKSWORTH, D. L; KIRK, P.M.; SUTTON, B.C.; PEGLER, D.
1996. Dictionary of the fungi. 8a ed., International Mycologi-
cal Institute, CAB International, England.
WHIPPS, J.M.; LEWIS, K.; COOKE, R.C. 1988. Mycoparasitism
and plant disease control. In: M.N. BURGE (Ed.). Fungi in bio-
logical control sistems. University Press. Manchester. p.161-
182.