EVALUACIN DE ALGUNOS MTODOS DE CONTROL DE CRECIMIENTO PARA

CUATRO MICROORGANISMOS DIFERENTES

Programa de Biologa, Facultad de ciencias, Universidad del Tolima
JUAN CARLOS DAZ SANDOVAL 070100242015

RESUMEN

Los microorganismos ofrecen diversos beneficios a la sociedad en diferentes formas. En otro

aspecto son tambin los microorganismos un vehculo para la produccin de enfermedades, por la
produccin de toxinas propiamente dichas o metabolitos txicos. Adems de daos en cultivos,
descomposicin de alimentos y enfermedades en animales. Es por esto que el ser humano ha
buscado los procedimientos necesarios para destruir o controlar el crecimiento de los
microorganismos perjudiciales. En este experimento se plantean algunos medios de control de
crecimiento para su evaluacin en unas bacterias especficas. Muchos de los mtodos de control a
evaluar se basan en modificar los factores ambientales naturales de las bacterias y son
ampliamente utilizados en muchos lugares por funcionar como desinfectantes y por cumplir una
labor al eliminar microorganismos patgenos (antibiticos). Con este estudio se pretende entender
qu tan efectivas son esas sustancias y esos antibiticos en la inhibicin del crecimiento de los
microorganismos

PALABRAS CLAVE: Crecimiento microbiano, mtodos de control, microorganismos,

antibiticos, factores ambientales

INTRODUCCIN
El crecimiento bacteriano es la divisin de
una bacteria en dos clulas hijas en un
proceso llamado fisin binaria. Entendemos
por crecimiento microbiano el aumento del
nmero de microorganismos a lo largo
del tiempo. Por tanto, no nos referimos al
crecimiento de un nico microorganismo
(ciclo celular) sino al demogrfico de una
poblacin.
El crecimiento de una poblacin resulta
de la suma de los ciclos celulares de
todos sus los individuos. Este crecimiento
suele ser asincrnico puesto que cada
microorganismo se encuentra en un punto
diferente del ciclo celular. Por
consiguiente, en un momento determinado
en una poblacin se encuentran clulas que
acaban de dividirse, otras que estn
replicando su ADN y elongndose, otras que
estn iniciando la divisin celular, etc.
El crecimiento de los microorganismos est
influenciado por los factores ambientales.
Dichos factores determinan la distribucin de
los microorganismos en la naturaleza y nos
permiten controlar sus actividades. Los
principales factores que afectan el
crecimiento son: Temperatura, pH, presin
osmtica, oxgeno, radiacin y presin tener valores de pH ptimos distintos, de este
hidrosttica.
Segn estas definiciones, sera posible en el
laboratorio disear unos medios de
crecimiento controlados donde varen los
diferentes factores que afectan el crecimiento
y de esa manera determinar bajo qu
parmetros puede o no crecer un
microorganismo. Para esto tenemos lo que
se conoce como mtodos de control de
crecimiento microbiano, estos medios
pueden ser tanto fsicos como qumicos.
Los mtodos de control de crecimiento fsicos
incluyen la temperatura y la radiacin UV.
La temperatura es uno de los principales
factores que afectan el crecimiento y la
supervivencia de los microorganismos. Cada
organismo tiene sus temperaturas cardinales,
que son la temperatura mnima, por debajo
de la cual no hay crecimiento; la temperatura
mxima por encima de la cual no existe
crecimiento debido a desnaturalizacin
proteica o debido a lisis celular; y la
temperatura ptima, a la que se da un
crecimiento ptimo pues las reacciones
enzimticas alcanzan su mxima velocidad.
La temperatura ptima de cada
microorganismos puede variar, de manera
que tenemos microorganismos psicrfilos
(temperatura ptima baja), mesfilos
(temperatura ptima moderada), termfilos
(temperatura ptima >45) o hipertermfilos
(temperatura ptima >80).
La radiacin UV tambin se considera un
mtodo de control de crecimiento debido a
que tiene suficiente energa para causar
mutaciones y rupturas en el ADN que lleven a
los microorganismos a la muerte.
Hablando de mtodos de control de
crecimiento qumicos podemos encontrar el
pH y la concentracin de sal.
El pH es tambin un factor determinante para
el crecimiento y la supervivencia de los
microorganismos. La tolerancia de las
bacterias a los cambios en el pH es limitada,
cambios bruscos podran provocar la muerte.
Sin embargo, las diferentes especies pueden
modo tenemos especies acidfilas (pH<7),
neutrfilas (pH entre 5.5 y 8) y alcalfilas
(pH>8)
Por otro lado tenemos que algunas
sustancias qumicas y tambin naturales
pueden tener cierto efecto sobre el
crecimiento microbiano. Los agentes
qumicos para controlar el crecimiento se
conocen como antimicrobianos, Estos
mismos pueden tener diferentes efectos
sobre los microorganismos y de acuerdo a
eso se clasifican en: Bacteriostticos, que
inhiben el crecimiento bacteriano; bactericida,
que producen la muerte sin necesidad de
lisis; y bacteriolticos que producen la muerte
por medio de lisis.
Para el control qumico del crecimiento
microbianos se pueden usar agentes
microbianos para uso externo o agentes
utilizaos in vivo. Estos primeros son
Productos diseados para prevenir el
crecimiento de patgenos para los seres
humanos en ambientes inanimados y en
superficies corporales externas. Se dividen
en esterilizantes, desinfectantes y
antispticos.
Los agentes antimicrobianos utilizados in
vivo son aquellos que se usan en el interior
del cuerpo para el control de enfermedades
infecciosas, pueden ser sintticos o naturales
como los antibiticos.
METODOLOGA
Para la realizacin de los mtodos de control
de crecimiento bacteriano se tomaron cepas
aisladas de diferentes bacterias:
Staphylococcus sp., Bacillus sp.,
Pseudomona sp., y Escherichia coli.
Los primeros mtodos a evaluar fueron los
mtodos fsicos (temperatura y radiacin).
Para la temperatura se tom un agar nutritivo
y se sembraron cada uno de los cuatro
microorganismos en cuadrante diferente,
luego se tomaron otros dos agares y se
utiliz el mismo tipo de siembra. Uno de los
agares fue dejado a 4C, el siguiente a una
temperatura normal de 37 C y el ltimo a
una temperatura elevada de 80 C.
Para el caso de la radiacin UV la siembra se
hizo de la misma manera. Se tomaron dos
agares nutritivos con los microorganismos
sembrados y se dejaron siendo vctimas de la
radiacin por quince (15) y treinta (30)
minutos.
Los mtodos siguientes a evaluar fueron los
qumicos, como la concentracin de sal y el
pH. Para la siembra de ambos mtodos de
control se utiliz el agar BHI. Con el pH se
tomaron tres tubos de ensayo con el medio y
el microorganismo sembrado de manera
directa. Cada uno de los tubos tena un valor
de pH distinto, el primero tubo tena pH=1,el
segundo tena un pH=7 y el tercero un
pH=10. Esto se realizaba para los cuatro
microorganismos, de manera que al final se
tena un total de doce (12) tubos para evaluar
el pH.
La concentracin de sal se evalu de la
misma manera, la siembra del
microorganismo era de manera directa y se
sembraba en agar BHI. El primero tubo tena
un concentracin de sal de 5 %, el segundo
tubo posea una concentracin de 10 % y el
tercero una concentracin de 20 %. De igual
manera se tena un total de doce (12) tubos,
tres por cada microorganismo.
Por ltimo se pretenda evaluar algunas
sustancias qumicas y naturales como
mtodos de control de crecimiento debido a
su supuesta funcin como agentes
microbianos. Tambin se evalu el control
que realizan algunos antibiticos a estos
microorganismos.
En primer lugar se realiz una prueba para
verificar la sensibilidad de los
microorganismos a seis antibiticos. Se
utiliz un agar Mueller-Hinton para esta
prueba y la siembra realizada fue por
pelcula. Cada microorganismo se sembraba
en un agar diferente, pero los antibiticos a
evaluar seran los mismos, de manera que se
tenan cuatro agares con distintos
microorganismos pero los mismos seis
antibiticos. Se utilizaron los antibiticos
penicilina (P10), estreptomicina (S10),
gentamicina (Cn10), bacitracina (B10),
netilmicina (NET30) y ampicilina (AS10/10)
colocados en forma de unos sensidiscos que
se ubicaron en puntos diferentes del medio
para poder evaluar los resultados de manera
correcta.
En segundo lugar se quiso realizar la prueba
de las sustancias qumicas y naturales como
mtodos de control de crecimiento. Para esta
evaluacin se utiliz el agar nutritivo en el
que se sembr el microorganismo por el
mtodo de pelcula. Se utilizan dos agares
por microorganismo pues en uno se
evaluaran las sustancias qumicas y en el
otro las naturales. De esta manera se tenan
ocho agares en total.
Las sustancias qumicas utilizadas fueron el
hipoclorito de sodio, compuesto utilizado
ampliamente como desinfectante de
superficies, alcohol, yodo, perxido de
hidrgeno y jabn. Todos estos utilizados Tabla 2. Resultados del crecimiento al ser
normalmente para procesos de desinfeccin. expuestos a radiacin UV.

Las sustancias naturales utilizadas fueron el Microorganismo/Ti 15 30

wasabi, la canela, salsa de miel, ajo y miel empo de Crecimiento
pura. Todos estos compuestos usado a exposicin
manera de extracto y requeridos aqu debido E.coli + +
a su conocimiento como desinfectantes Staphylococcus sp. + +
naturales. Bacillus sp. ++ ++
Pseudomona sp. - -
Para la incorporacin de estas sustancias en
el agar se utiliz un asa redonda para crear Tabla 3. Resultados para diferentes valores
un pequeo agujero donde se pondra cada de pH.
sustancia. Cada agar contaba con cinco
agujeros: cuatro en los bordes y uno en el Microorganismo/p 1 7 10
medio. H Crecimiento
E.coli - +++ ++
Para incorporar las sustancias en los
Staphylococcus sp. - +++ -
agujeros se utilizaba un gotero de manera
Bacillus sp. - +++ -
que no hubiera un exceso de sustancia que
Pseudomona sp. - +++ -
daara los resultados. Luego se dejaba todo
incubando para su posterior anlisis de Estos resultados de pH, como se dijo
resultados. anteriormente, se evalan en base a la
turbidez que presente el medio. En las
RESULTADOS
siguientes imgenes se pueden observar
resultados positivos y negativos para dos
El anlisis de resultados para cada una de
microorganismos diferentes.
las pruebas se haca de diferente manera.
Para evaluar el efecto de la temperatura y de
la radiacin se observaba la formacin de
colonias en el medio de cultivo; para el
anlisis de pH y concentracin de sal se
evaluaba el crecimiento en base a la
turbidez; y finalmente para las sustancias
qumicas y el antibiograma se meda el
tamao del halo formado alrededor de la
sustancia para saber qu sensible era el
microorganismo a dichas sustancias o
antibiticos.

Los resultados se muestras en las siguientes

tablas e imgenes:

Tabla 1. Resultados del factor temperatura

en el crecimiento microbianos

Microorganismo/Te 4C 37 80
mperatura C C Imagen 1. Resultados de pH para la muestra
Crecimiento de Staphylococcus sp. De izquierda a
E.coli - +++ - derecha, valor de pH 1 el primero, pH 7 el del
Staphylococcus sp. - +++ - medio y pH 10 el ltimo.
Bacillus sp. - +++ -
Pseudomona sp. - - - Los resultados para concentracin de sal se
representan y evalan de la misma manera.
Tabla 4. Resultados de diferentes
concentraciones de sal.

Microorganismo/C 5% 10 20
oncentracin de % %
sal Crecimiento
E.coli +++ +++ -
Staphylococcus sp. ++ - ++
Bacillus sp. ++ - -
Pseudomona sp. - - -
Imagen 3. Presencia y ausencia de halos en
la prueba realizada para las sustancias
qumicas en Staphylococcus sp.

Tabla 6. Resultado del tamao de lo halo en

sustancias naturales.

Microorga Wasa Ca Sal Ajo Miel

nismo/Su bi nel sa pura
stancia a de
mi
el
Imagen 2. Resultados de diferentes Tamao del halo (cm)
concentraciones de sal para Staphylococcus E. coli 2.2 1.5 3.2
sp. De izquierda a derecha, concentracin de Staphyloc 6 3
20 % para el primer tubo, 10 % para el del occus sp.
medio y 5 % para el ltimo Bacillus 2 1.5
sp.
En los resultados para sustancias qumicas, Pseudomo 1.7
naturales y antibiograma los resultados na sp.
pueden faltar debido a que la bacteria no se
ve inhibida por la sustancia o el antibitico. Tabla 7. Resultados del antibiograma.
Tabla 5. Resultados del tamao de los halos Microorga P10 S10 CN B10 NET AS1
en las sustancias qumicas.
nismo/Ant 10 30 0/10
ibitico Tamao del halo (cm)
Microorga NaCl Alc Yo H2O Jab
E. coli 0.8 1.2 2.1 2.8
nismo/Su O oho do 2 n
Staphyloc 2 1.5 2.2 1.2 2.5 2.2
stancia l
occus sp.
Tamao del halo (cm)
Bacillus 1.3 2.5
E. coli 0.7 1.8 2.4 2.3
sp.
Staphyloc 3 6 2
Pseudomo 2.1 2.4
occus sp.
na sp.
Bacillus 1.5 1.8 3 1.5
sp.
Pseudomo 1.8 6 1.7
na sp.

Imagen 4. Antibiograma realizado en una
cepa de Staphylococcus sp.
DISCUSIN
La nomenclatura utilizada para explicar los
resultados en las pruebas de temperatura,
radiacin, pH y concentracin de sal es la
siguiente:
Crecimiento inhibido: -
Crecimiento leve: +
Crecimiento: ++
Crecimiento ptimo: +++
As pues, el crecimiento se juzga en base a
la turbidez y las colonias que se presenten.
En la prueba para la temperatura se observ
que ninguno de los microorganismos
utilizados tiene crecimiento a baja
temperatura, por lo que no son psicrfilos.
Sin embargo a una temperatura normal de 37
C se present un crecimiento ptimo de casi Los resultados para la prueba de
todos los microorganismos. Pseudomona sp.
es el nico que no tuvo crecimiento en la
temperatura normal, lo cual probablemente
se debe a errores en la siembra, en la cepa o
al momento de incubar.
A una temperatura elevada de 80 C fue
imposible evaluar el crecimiento debido a que
los agares no resistieron la temperatura y se
quemaron.
En la exposicin de quince (15) minutos a la
radiacin UV ninguno de los
microorganismos present crecimiento
ptimo. E. coli tuvo crecimiento leve,
Staphylococcus sp. tuvo crecimiento leve,
Bacillus sp. present crecimiento medio y
nuevamente Pseudomona sp. no present
crecimiento (probablemente debido a los
mismos errores). Siendo expuestos durante
treinta (30) minutos tuvo el mismo efecto en
todos los microorganismos.
En el momento de evaluar el pH y la
concentracin de sal se tuvo en cuenta la
turbidez. Se tenan tres tubos con diferente
pH para cada microorganismo, los resultados
mostraron que ninguno de los
microorganismos tuvo crecimiento a pH 1 por
lo que ninguno de ellos es acidfilos. A un pH
neutro nicamente E. coli y Pseudomona sp.
tuvieron crecimiento satisfatorio, mientras
que Staphylococcus sp. y Bacillus sp.
tuvieron crecimiento leve. En pH elevado
(valor 10) solamente E. coli present un
crecimiento moderado, por lo que se
presume que es ligeramente alcalfilo.
Para la concentracin de sal de 5 % todos los
microorganismos excepto Pseudomona sp.
presentaron crecimiento. E. coli tuvo
crecimiento satisfactorio mientras
que Staphylococcus sp. y Bacillus
sp. presentaron crecimiento
moderado. En una concentracin de
10 % slo E. coli present
crecimiento ptimo, ningn otro
microorganismos lo present. A una
concentracin de 20 % slo
Staphylococcus sp. present
crecimiento moderado.
sustancias qumicas, naturales y
antibiograma se analizan en base a
la presencia o no de halo y el
tamao de ste. Si posee un halo
alrededor de la sustancia significa
que tuvo protagonismo como
mtodo de control, mientras que si
no lo posee, significa que la
sustancia no afecta el
microorganismo. El tamao de los
halos nos indica qu tan bueno es el
antibitico o la sustancia para
inhibir el crecimiento.
Para las sustancias qumicas
nicamene el yodo, el perxido de
hidrgeno y el jabn lograron crear
un halo en las cuatro muestras de
microorganismos. El hipoclorito de
sodio, usado comnmente como
desinfectante no inhibi el
crecimiento de ninguno, el alcohol
inhibi el crecimiento de E. coli y
Bacillus sp.
Para las sustancias naturales, el
wasabi no logr funcionar como
mtodo de control en ninguno de los
cuatro microorganismos. La canela y
la salsa de miel slo tuvieron efecto
en dos de los cuatro
microorganismos (Staphylococcus
sp. y E. coli respectivamente). La
miel pura logr inhibir crecimiento
en E .coli y Bacillus sp., mientras
que el ajo tuvo el mayor xito de la
prueba al logar tener efecto en
todos los microorganismos.
El antibiograma mostr resultados
variados. En E. coli slo cuatro (4)
de los seis (6) antibiticos tuvieron
efecto (estreptomicina, bacitracina,
netilmicina y ampicilina), para
Bacillus sp. y Pseudomona sp. slo
dos antibiticos tuvieron efecto
(estreptomicina y netilmicina),
mientras que la prueba en
Staphylococcus sp. mostr que
todos los antibiticos logran inhibir
su crecimiento.
CONCLUSIONES
Una vez analizados los resultados se
puede concluir que algunos de stos
eran ya esperados, como el
crecimiento de microorganismos a
37 C, mientras que se encontraron
sorpresas como el hecho de que las
pruebas en Pseudomona sp. fueran
casi todas negativas cuando
deberan ser positivas. Se presume
que la causa de estos resultados
pueden ser varias, entre las que se
incluyen haber sembrado mal la
muestra o una incubadora
defectuosa.
No se pudo evaluar si los
microorganismos eran termfilos
pues el agar no resisti la alta
temperatura y se quem.
Se puede concluir que la radiacin
UV tiene un efecto sobre algunas de
las muestras, por lo que sera un
mtodo de control ligeramente
efectivo excepto para Bacillus sp.
Los resultados para las pruebas de
sustancias qumicas tienen una
sorpresa debido a que una de las
sustancias utilizadas mayormente
como desinfectante (el hipoclorito
de sodio) no logr inhibir el
crecimiento de ninguna de las
bacterias, por lo que se concluye
que sustancias qumicas con buen
poder desinfectante son el yodo, el
perxido de hidrgeno y el jabn.
Las sustancias naturales mostraron
que el extracto de ajo es el nico
que logra inhibir a todos, por lo que
su uso como desinfectante podra
ser bastante til. Sustancias como
el wasabi no tuvieron ningn efecto
por lo que se descartan como
mtodos de control para estas
bacterias.
Del antibiograma se conluye que los
antibiticos con mejor poder para
inhibir el crecimiento son la
estreptomicina y la netilmicina. La
penicilina, el antibitico ms
conocido y utilizado en el mundo,
slo tuvo efecto sobre
Staphylococcus sp. debido a que es
utilizada para bacterias Gram + y
sta es una de ellas.
BIBLIOGRAFA
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