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PROCEDIMIENTO:
A)- Determinar el espectro de absorcin del rojo fenol:
1- Colocar 2 ml. de la solucin diluida de rojo fenol o azul de metileno o de otra solucin coloreada en la cubeta
y medir la absorbancia en las siguientes longitudes de onda 415, 445, 460, 490, 520, 535, 550, 580, 610, 640
nm, previamente el equipo calibrado con agua destilada. Luego haga un grfico de las lecturas de las absorbancia
vs. longitud de onda y determine la longitud de onda de mayor absorcin.
TUBO SOL. ROJO FENOL 0,01 mg/ml Agua destilada Absorvancia Concentracin
(ml) (------ nm)
B - 5,0
1 1,0 4,0
2 2,0 3,0
3 3,0 2,0
4 4,0 1,0
5 5,0 -
2- Leer las absorbencias de cada tubo en la longitud de onda seleccionada, utilizando el agua destilada
como blanco de reaccin. Calibrar antes el espectrofotmetro.
3- Hacer el grfico absorbancia Vs. Concentracin de la solucin utilizada y analizar los resultados
4- Determinacin del factor de la curva
REACTIVOS:
- Alcohol antisptico; -Solucin de EDTA 10%;
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1 tubos de ensayos para colecta de sangre de tapa roja de aprox. 5
ml y uno de tapa color violeta, 2 tubos de ensayos medianos o grandes de aprox. 10 ml, pipetas pasteur
plsticas, algodn, torniquete, centrfuga, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1- Extraer aproximadamente 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la
aguja y colocar la mitad de la sangre extrada cuidadosamente en el tubo de colecta de sangre de
tapa roja y la otra mitad en el tubo de tapa color violeta que contiene 50 microlitros (L) de
EDTA, homogenizar.
2- Homogenizar cuidadosamente el tubo con anticoagulante.
3- Dejar el tubo sin anticoagulante en reposo esperar formarse el coagulo despus
4- Centrifugar los tubos por 5 minutos, separar el suero y el plasma respectivamente en tubos de
ensayos por separado, anotar las observaciones
REACTIVOS:
- Alcohol antisptico; -solucin patrn de hemoglobina; reactivo de trabajo para determinar
hemoglobina ( Brabkin)
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, tubo de ensayo para colecta de sangre con tapa violeta, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado
de aprox. 15 cm. Hemocentrifuga, espectrofotmetro., 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml. sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
cuidadosamente en el tubo colector de sangre de tapa violeta conteniendo EDTA, homogenizar.
2- Llenar homogneamente 2 capilares, limpiar la superficie externa del capilar con papel
higinico y sellar los capilares con plastilina blanca.
3- Homogenizar la sangre y alcuotar por duplicado 10 microlitros (L) de sangre total, colocar
en tubos de ensayos limpio y seco separadamente.
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el
tubo colector de sangre tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Separar cuidadosamente el suero
4- Tener cuidado tener todos los reactivos de trabajo a temperatura ambiente
5- Pipetar en una cubeta 2 ml del reactivo de trabajo y 100 l de suero, mezclar e insertar la cubeta
en el fotmetro, poner el cronmetro en marcha.
6- Al minuto medir la absorbancia, anotar la absorbancia inicial, continua anotando la absorbancia
a los 2 minutos y a los 3 minutos.
7- Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio
8- Calcular la concentracin de la enzima en la muestra.
NOTA: Las reacciones enzimticas se harn en orden, grupo por grupo. No mezclar los reactivos hasta
cuando llegue el turno del grupo
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un
tubo pequeo limpio y seco, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Despus de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero con coagulo
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero.
6- Otro tubo marcar como patrn (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solucin patrn presente en el kit
7- A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo, agitar bien los tubos y dejar reposando los
tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
8- Calibrar el espectrofotmetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrn).
9- Determinar la concentracin de glucosa en las muestras
REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinacin deL glucosa
en suero
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja , 2 tubos de ensayos
medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, Cronmetro, espectrofotmetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4. Despus de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero
5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cnico
limpio y seco
6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero para colesterol total y colocar 20
microlitros de suero.
8. Otro tubo marcar como patrn (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solucin patrn presente en el kit
9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo ( para colesterol total), agitar bien los
tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
10. Calibrar el espectrofotmetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrn).
11. Determinar la concentracin de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente
reaccin: Absorbancia de la muestra x concentracin del patrn
Absorbancia del patrn
12. Repetir el mismo procedimiento en otros tubos desde el item 6 para determinar Colesterol HDL
REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinacin deL
glucosa en suero
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete,. Cronmetro,
espectrofotmetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, dejar coagular.
2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4. Despus de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero
5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cnico
limpio y seco
6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero.
8. Otro tubo marcar como patrn (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solucin patrn presente en el kit
9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo ( para triglicridos), agitar bien los tubos y
dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
10. Calibrar el espectrofotmetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrn).
11. Determinar la concentracin de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente
reaccin: Absorbancia de la muestra x concentracin del patrn
Absorbancia del patrn
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3. Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
5. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra y colocar 30 microlitros de suero.
6. Realizar la curva patrn (solo el grupo responsable) por duplicado colocar 5, 10, 20, 30 y 40
microlitros de la solucin patrn de protenas, a cada tubo colocar el reactivo de Biuret teniendo
cuidado que todos los tubos alcance a 2030 microlitros de volumen total.
7. A los tubos muestras colocar 2 ml de reactivo de Biuret mezclar homogneamente los tubos
y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos.
8. Calibrar el espectrofotmetro a 545 nm con el blanco reactivo (Biuret) y leer absorbancia en los
tubos (muestras y curva patrn).
9. Determinar el factor de la curva patrn (concentracin en cada duplicado expresadas en g o mg
dividido por la media de las absorbancia) y de esta relacin de cada duplicado determinar la
media total (factor de la curva)
10. Determinar la concentracin en cada muestra multiplicando
Absorbancia de la muestra x factor de la curva; expresando los valores en g/dl muestra
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el
tubo cnico limpio y seco, reposar para coagular-
2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4- Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
6- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
7- Colocar 2.0 ml de reactivo A de trabajo
8- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos.
9- Adicione 2.0 ml de reactivo B de trabajo, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos
10- Leer absorvancia a 600mn frente al blanco reativo
11- Hacer el mismo procedimiento para el patrn (solo el grupo rsponsable)
12- Hacer los clculos como indica el inserto de la prctica (tcnica de Biosystems)
13- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrn (solo el grupo responsable)
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 2,5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
en el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
6- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo
7- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra.
8- Leer absorvancia a 30 segundos y a 90 segundos
9- Hacer el mismo procedimiento para patrn (solo el grupo responsable)
10- Reste Absorbancia 2- absorvancia 1
11- Hacer los clculos como indica el inserto de la prctica (tcnica de Biosystems)
12- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrn (solo el grupo responsable)
REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - , patrn de cido rico; reactivo de trabajo para cido rico.
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete. Cronmetro,
espectrofotmetro, 1-gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 2,5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
en el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
6- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo
7- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra.
8- Leer absorbancia a 30 segundos y a 90 segundos
9- Reste medias de las absorbancia 2- media de las absorbancia 1
10- Hacer el mismo procedimiento para el patrn (solo el grupo responsable)
11- Hacer los clculos como indica el inserto de la prctica (tcnica de Biosystems)
12- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrn (solo el grupo responsable)
Definicin del cido rico, estructura, propiedades, funciones, sntesis en el organismo, metabolismo
Importancia clnica, valores de referencia en hombres, mujeres y nios, alteraciones metablicas en
valores altos o bajos en el laboratorio. Mtodos de cuantificacin, fundamento del mtodo utilizado en
el laboratorio.
Gota: Definicin, clasificacin, causas, sntomas, diagnostico, tratamiento, consecuencias.