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Introduction
Un milieu de culture doit satisfaire toutes les exigences nutritives des micro-organismes :
- apport de la source d'nergie, de carbone, d'azote;
- besoins en ions minraux, en facteurs de croissance;
- pH et force ionique voisins des valeurs optimum.
2) Cas particuliers :
Certains milieux ncessitent l'adjonction de produits ne supportant pas l'autoclavage (sang frais, jaune
d'uf, antibiotiques, complments vitaminiques...). Ces complments doivent alors tre apports striles
dans la glose en surfusion. La strilit des additifs est assure soit au moment du prlvement, soit par
filtration.
Certains milieux ncessitent d'tre rgnrs avant utilisation : ils sont placs pendant 20 minutes dans
un bain-mari bouillant de sorte chasser l'oxygne dissout (Ex : glose VF, milieu Hugh-Leifson ...).
Les milieux qui doivent tre ensemencs en profondeur sont pralablement liqufis au bain-mari,
puis maintenus en surfusion (45-50C) en bain thermostat jusqu' leur ensemencement.
Milieux enrichis : addition de suspensions riches en molcules organiques (sang, srum, extrait
globulaire ...). Cf plus loin.
Milieux slectifs : contiennent des molcules empchant la culture de certains micro-organismes. Ils sont
utiliss pour isoler les germes de produits poly-microbiens. La nature des inhibiteurs est variable, il peut
s'agir :
- de NaCl : milieu de Chapman 75 pour Staphylococcus, bouillon hypersal 65
pour Enterococcus.
- de sels biliaires (dsoxycholate) : Mac Conkey, Hektoen pour Enterobacteriaceae
- d'antibiotiques: glose au sang + ANC (acide nalidixique, colistine) pour les Strep
tococcus.
- d'antiseptiques : glose au ctrimide pour Pseudomonas
Rmq :
1- On peut galement augmenter la slectivit des milieux en choisissant des conditions de culture
particulires.
Ex : la glose au ctrimide place 42C est plus slective pour Pseudomonas aeruginosa.
2- On parle de milieu "lectif" lorsqu'il ne contient pas d'agent inhibant mais qu'il favorise la croissance
d'un type de germes.
Le principal exemple est la glose au srum coagul pour les corynbactries.
Milieux d'orientation et d'identification ou milieux diffrentiels: la plupart des milieux contiennent des
lments permettant de mettre en vidence des caractres biochimiques en vue d'une orientation du
diagnostic.
La lecture de ces milieux peut :
- soit se faire directement :
- virage d'un indicateur de pH indiquant la consommation d'un sucre (milieu BCP pour le
lactose chez les Entrobactries, Chapman pour le mannitoi chez les Staphylococcus ...)
- prsence d'ions fer III qui rvlent la production d'H2S par apparition d'un prcipit noir
(milieu Hajna-Kligler, milieu SS...)
- soit se faire aprs addition de ractifs :
- addition d'acide suifanilique et d'-naphtylamine pour rvler la rduction des nitrates dans
le bouillon nitrate
- addition de perchlorure de fer pour rvler la prsence d'une tryptophane dsaminase en
milieu Ure-Indole ...
- Milieu au sang cuit : prparation idem sang frais + chauffage 10 min 75C.
- Glose chocolat : autoclavage d'un milieu de base + hmoglobine (milieu moins riche que le
prcdent, souvent ajout de complments poly-vitaminiques)
Intrts : - la cuisson permet de librer certains facteurs de croissance (telle que l'hmine =
prcurseur de coenzyme, transporteur d'lectrons des cytochromes; NAD)
- destruction de certains inhibiteurs
- libration du fer III de la transferrine
2) Autres additifs:
- Extrait globulaire : obtenu par expression d'un caillot de sang au travers d'un linge, il est strilis par
filtration. Ajout dans les milieux de base hauteur de 10%, sa caractristique fondamentale est sa
richesse en hmine (facteur X).
- Srum : obtenu par sparation du coagulum d'un sang normal ou par dcantation d'un sang dfibrin.
Il est strilis par filtration ou par tyndallisation. Ajout 5-10% dans les milieux, il permet la croissance
des germes srophiles (Glose au srum coagul pour Corynebacteriuni)
- Ascite : le liquide est obtenu par ponction strile chez des individus atteints d'hydropisie (accumulation
de srosit dans une cavit naturelle du corps). Il contient les mmes lments que le srum, mais
moins de glucose et d'enzymes pouvant interfrer avec les recherches biochimiques ralises.
- Jaune d'oeuf : prleve strilement, la solution de jaune d'uf est additionne aux milieux usuels pour
permettre la recherche de la lcithinase (milieu Baird-Parker pour Staphylococcus aureus)
- Lait : possibilit d'utiliser le lait UHT, qui est strile. Utilis pour l'isolement et le dnombrement des
bactries lactiques, pour la recherche de l'hydrolyse de la casine.
BIBLIOGRAPHIE
Le laboratoire de bactriologie mdicale (MARCHAL N., BOURDON J.L, BIMET F.)
Microbiologie technique : 1-Dictionnaire des techniques (JOFFIN J.N., LEYRAL 6.)
Microbiologie (PRESCOTT, HARLEY, KLEIN)