INTRODUCCIN

En el siguiente informe realizado veremos cmo se forman nuestros sistemas buffer

mediante una titulacin potenciomtrica de un cido polprotico y un aminocido. Un cido
poliprotico es aquel que tiene ms de un protn ionizable en su estructura. Es por eso que
pueden disociarse ms de una vez y estas poseen un valor diferente de Ka por ende
tendrn un pKa diferente y nuestra grafica de pH vs. NaOH tendr unas curvas que
indicaran la segunda o tercera disociacin dependiendo de la cantidad de Hidrogeno del
cido poliprotico. En los aminocidos, primero reaccionaria el cido carboxlico mediante
una adicin de HCl y luego reacciona el grupo amino cada uno tendr un pKa diferente.

A continuacin veremos cmo va cambiando el pH al agregarle ml a ml de NaOH en el

caso del cido fosfrico y HCl en el caso de la Glicina.
RESULTADOS
30 6.71
Titulacin 31 6.81 Potenciomtrica del cido fosfrico
ml pH
32 6.91
0 1.33
33 7.01
1 1.35
34 7.12
2 1.37
35 7.25
3 1.41
36 7.38
GLICINA
4 1.46
37 7.52
5 1.52
38 7.7
6 1.58
39 7.98
7 1.64
Glicina 40 8.54
8
ml 1.72
pH 41 9.97
90 1.83
1.63 42 10.44
101 1.9
1.76 I.
43 10.67 DISCUSIN:
112 1.98
1.9 44 10.84
123 2.06
2.1 Titulacin potenciomtrica
45 10.98
134 2.16
2.34 del cido fosfrico
46 11.09
145 2.26
2.75 Grafico 1. T.potenciometrica del cido fosforico
47 11.19
15 2.37 (DONALD VOET, 2007) las sustancias
}6 4.19 48 11.28
16 2.49 pueden perder ms de un protn o sufrir
7 8.43 49 11.36
17 2.65 ms de una ionizacin, como H3PO4, se
8 9.45 50 11.43
18 2.87 les conoce como cidos poliprticos, un
9 9.94 51 11.52 cido poliprotico tiene numerosos valores
19
10 3.19
10.42 52 11.6 de pK, uno para cada paso de ionizacin.
20
11 3.8
10.99 53 11.67 El H3PO4 , tiene tres constantes de
21
12 5.19
11.43 54 11.74 disociacin por que la carga inica que
22
13 5.57
11.64 55 11.8 resulta de la disociacin de un protn
23 5.84
14 11.8 56 11.88 Grafico
inhibe 2. porTitulacin
va Potenciomtricalas
electrosttica de la glicina
24
15 5.98
11.9 57 11.94 disociaciones posteriores, e incrementan
25
16 6.14
11.98 58 12.01 los valores de pK correspondientes.
26
17 6.29
12.04
27 6.4
28 6.49
29 6.6

Cada forma, del cido fosfrico inico acta como cida respecto a la que tiene a su
derecha y como bsica respecto a la que tiene a su izquierda. Se pueden establecer, por
tanto, tres equilibrios de disociacin, cada uno con una constante caracterstica a 25C
(figura de la derecha):
K1= 5,7 x 10-3 (pK1= 2,2) K2= 6,2 x 10-8 (pK2= 7,2) K3=2,2 x 10-13 (pK3=12,7)

Estos valores indican que el primer H+ se desprende con facilidad an a pH cido (a

pH=2,1 la mitad del H3PO4 se ha disociado para formar H2PO4-), lo que quiere decir que el
H3PO4 es un cido moderadamente fuerte.

El pK de la segunda disociacin (7,2) es el ms prximo al pH del medio interno y por lo

tanto, esta segunda disociacin la que tiene lugar reversiblemente en el medio interno, y
la que posee accin amortiguadora. El tercer H+ se disocia en medio muy alcalino
(pH=12,7), y por tanto no tiene inters biolgico.

La reaccin H3PO4 + NaOH genera H2PO4_ + H3PO4 , donde al inicio no se forma un

sistema buffer, porque H3PO4 supera en volumen al NaOH, para que sea un sistema buffer
sus concentracin deben aumentar, se ira aumentado el volumen de NaOH cada 1mL, en
consecuencia las moles de hidrxido aumentaran ,adems de hacer ms bsica.

(FERNANDO BURRIEL MART, 2002) afirma, que el amortiguador o tampn depende de

las concentraciones de [sal] y [acido] . El intervalo de pH para el cual un sistema buffer
regula adecuadamente es: pKa 1 < pH < pKa + 1.El sistema buffer ms adecuado es
aquel cuyo valor de pKa esta lo ms cerca posible del pH que se desea regular.

Sistema amortiguador formado por H2PO4_ / H3PO4 : en la grfica cuando el pH sea igual al
pK1, la concentracin de H3PO4 y H2PO4_ sern iguales, conforme se sigue aadiendo
NaOH se llega al primer punto de inflexin que indica la neutralizacin del primer
hidrogeno ionizable y la formacin del ion fosfato dicido H2PO4_ .

Sistema amortiguador formado por HPO42- / H2PO4_: el primer punto de inflexin solo
tenemos H2PO4_ este reaccionara con NaOH formando el buffer ya mencionado en
cuando alcancen concentraciones correctas que definan un buffer, cuando el pH sea igual
al pK2, la concentracin de HPO42- y H2PO4_ sern iguales, conforme se sigue aadiendo
NaOH se llega al segundo punto de inflexin que indica la neutralizacin del segundo
hidrogeno ionizable y la formacin del ion fosfato monocido HPO42- .

Sistema amortiguador formado por PO43- / HPO42- : en la grfica cuando el pH sea igual al
pK3, la concentracin de PO43- y HPO42- sern iguales, conforme se sigue aadiendo
NaOH se consumir todo el HPO 42- , en ese momento el NaOH actuara sin buffer, esto
har que el pH cambie bruscamente siendo este bsico, la concentracin del NaOH es de
1N, como es una base fuerte se disocia totalmente, siendo el pOH = 0 , en consecuencia
el valor de pH =14 .

Titulacin potenciomtrica del aminocido Glicina

(LEHNINGER, 2005) los aminocidos tienen un comportamiento anftero; los grupos

carboxilo y amino de los aminocidos actan como cidos o bases dbiles segn el pH
del medio.

Como base aceptando protones: Como cido donando protones:

El pKa es un valor de pH en el que el grupo disociable se encuentra en 50% disociado y

50% sin disociar.

pK1: es el pKa del grupo carboxilo del carbono .

pK2: es el pKa del grupo amino del carbono .
pK3: es el pKa del grupo disociable de la cadena lateral (carboxilo o amino).

En soluciones acuosas el aminocido glicina puede existir en tres formas diferentes:

Vamos a llamar glyH2+ a la glicina protonada; glyH al in hbrido y gly - a la forma aninica.
La concentracin relativa de estas especies depende del pH de la solucin. Todos los
aminocidos poseen un punto en el que se comportan como una sal neutra. En este punto
la carga neta del aminocido es nula ya que los dos grupos disociables tienen su carga de
signo contrario y compensado. Este punto recibe el nombre de punto isoelctrico. El pI, es
un valor de pH donde el aminocido tiene carga neta 0, se calcula como el promedio de
los valores de pKa que rodean al aminocido en su forma como carga neta 0.

La valoracin potenciomtrica de glicina protonada, con hidrxido sdico da lugar a una

curva, pH frente al volumen de valorante, caractersticas de un cido diprtido. A partir de
esta curva se puede calcular la concentracin de glicina y de los valores de las constantes
de equilibrio (Ka1 y Ka2).

En primer lugar vamos a considerar los dos equilibrios de disociacin cida de la glicina:

La valoracin potenciomtrica de la glicina protonada da lugar a una curva del tipo

propuesto
En la figura:
 Curva de Valoracin Potenciomtrica de Glicina con Valorante
NaOH

Esta curva es caracterstica de la valoracin de un cido diprtido. Los dos puntos de

inflexin corresponden a los dos puntos de equivalencia estos resultados fueron
semejantes a los que se obtuvieron en laboratorio.
En el momento inicial la solucin contiene glicina protonada ( glyH2+), variando poco el
valor de pH por la adicin de valorante, hasta un momento en que se produce un salto
brusco en el valor de pH, alcanzndose aqu el primer punto de inflexin que corresponde
a la valoracin del 1er protn de la glicina, encontrndose la glicina en la forma (glyH, in
hbrido).
Sigue la valoracin con ligera modificacin del pH hasta otro salto, menos brusco, pero
apreciable, que corresponde al 2 punto de inflexin, esto es la valoracin del segundo
protn de la glicina, alcanzndose la forma (gly -, aninica) concluyendo la valoracin.

Habra que tener presente que el punto isoelctrico se toma como la semisuma de los pka
en los cual el amino acido presenta una carga neta de cero.

Se puede observar que en el punto de inflexin de la glicina es 5,97 en el cuadro

elaborado de Excel, el cual coincide con el valor propuesto por (LEHNINGER, 2005)
PROBLEMAS ENCARGADOS

1. En qu se diferencian los tres aminocidos estudiados?

 Estructuralmente los tres aminocidos se diferencian en los grupos amino y
carboxilo. La glicina es monocido y monocarboxilo; el cido glutmico tiene un
grupo amino y dos grupos carboxilo; y la lisina presenta dos grupos amino y uno
carboxilo.

Segn Trudy (2003), seala que los aminocidos tienen los siguientes pKa.

Cuadro : pKa de los aminocidos esenciales: Glicina, Lisina y cido glutmico

Aminocido pKR (de la cadena)

pK1 ( - carboxi) pK2 ( - amino)
Lisina 2.18 8.95 10.79
Glicina 2.34 9.6
Glutamato 2.19 9.67 4.25
Fuente: Trudy (2003).

Considerando el pH de los aminocidos en medio acuoso, la glicina presenta un pH

cercano a la neutralidad, el cido glutmico presenta un pH cido y la lisina
presenta un pH alcalino.

2. De los buffers formados por el cido glutmico, cul es el ms efectivo y

a que pH?

El sistema buffer ms efectivo es aquel que presenta mayor capacidad de impedir

los cambios bruscos de pH de una solucin. El sistema amortiguador ms efectivo
formado por el cido glutmico seria en el punto isoelctrico, ya que el aminocido
se disocia por igual en ambos sentidos. El PI del cido glutmico es 3.0.
3. Proponga las reacciones producidas en la titulacin de la lisina con
NaOH a partir de su especie inica ms positiva.

NH 3 C(CH 2 ) 4 NH 3 COOH
Lisina: (especie inica ms positiva)

NH 3 CH((CH 2 ) 4 NH 3 )COOH NaOH NH 3 CH((CH 2 ) 4 NH 3 )COO - H 2 O

(Carga +2) (Carga +1)

NH 3 CH((CH 2 ) 4 NH 3 )COO - NaOH NH 2 CH((CH 2 ) 4 NH 3 )COO - H 2 O

(Carga +1) (Carga 0)

NH 2 CH((CH 2 ) 4 NH 3 )COO - NaOH NH 2 CH((CH 2 ) 4 NH 2 )COO - H 2 O

(Carga 0) (Carga -1)

4. Calcule los componentes de un litro de tampn de glicina de pH = 8.8 y

concentracin de 0.1M a partir de glicina solida (PM=101.6) y NaOH solido
(PM=40) si el pKa1= 2.35 y pKa2=9.78

Aplicamos la ecuacin de Henderson y Hasselbalch

[S]
pH = pKa + log [ A ]

8.8=pKa2+log[S]/[A] M=nsal/v
 8.8-9.78=log[S]/[A] 0.009=nsal

0.1=[S]/[A] M=nacido/v

0.1[A]=[S] 0.09=nacido

[S]+[A]=0.1

0.1[A]=0.1

[A]=0.09 [S]=0.009

La sal que est en el buffer debe de ser el ion de glicina (+1) y el cido debe
de ser la glicina (0) para formar este buffer se debi e agregar NaOH

LAS REACCIONES DE LA DISOCIACION DE GLICINA

GLICINA (+1)+NaOH <=====> NaGLICINA (0)+H2O

0.099 0.099 0.099

Moles de reactivo

NaGLICINA (0)+NaOH <=====> Na2GLICINA (-1)+H20

0.009 0.009 0.009

0.09

0.099 => total de sal presente en el tampn

Con la relacin de moles se halla la masa de los reactivos:

nGLICINA=masa/masa molar n NaOH=masa /masa molar

0.99=masa/101.6 0.108=masa/40

Masa de glicina =100.58 gr masa de hidrxido de sodio =4.32gr

5. qumicamente que es un aminocido, y cuantos buffers puede formar?

La caracterstica ms llamativa de los aminocidos (AA) es la existencia en una

misma molcula de grupos cidos (capaces de ceder H+) y grupos bsicos (capaces
de captar H+). Por lo tanto, en medio cido se comportan como bases, y en medio
bsico se comportan como cidos. Las molculas que presentan esta caracterstica se
dice que son anfteros o anfolitos.
Los grupos cidos y bsicos pueden neutralizarse mutuamente, constituyendo una
sal interna formada por un ion hbrido (carga positiva y carga negativa), que se
llama zwitterin. La cantidad de sistemas amortiguadores varia, como mnimo se
pueden formar 2 sistemas agregando base en una titulacin a un aminocido
protonado, si el aminocido contiene radicales cidos o bsicos puede formar hasta
3 sistemas buffer.

6. describa y dibuje la forma de disociacin del aminocido glicina cuando

reacciona con un cido y una base.

En este caso se ve la disociacin de manera general cuando el radical es hidrogeno

el aminocido se convierte en glicina, los productos de la disociacin son iguales
para cualquier tipo de aminocido.

7. Qu es el Punto isoelctrico y para que se usa?

La carga elctrica de una molcula es la resultante de las cargas de todos los grupos
ionizables .las molculas cuya carga elctrica neta es positiva, negativa o neutra,
segn el pH del medio, se denominan anfolitos. Pueden ser aminocidos,
nucletidos o protenas, y todas ellas tienen propiedades especiales con respecto a
las tcnicas de separacin electroforticas. El pH al cual su carga elctrica neta es
cero recibe el nombre punto isoelctrico. Si el pH del medio es superior al punto
isoelctrico, la carga elctrica de la molcula ser negativa y se mover hacia el
nodo .Si el pH del medio es inferior al punto isoelctrico, la carga elctrica de la
molcula ser positiva y se mover al ctodo.
 La mayor parte de las tcnicas electroforticas se realizan a un pH constante (por
medio de una solucin tampn ),al cual la mayor parte de los componentes que se
quiere n separar tiene carga elctrica neta ptima para realizar dicha separacin .

La electroforesis es una tcnica de separacin que consiste en el transporte de

iones a travs de una disolucin por la accin de un campo elctrico .Se aplica la
diferencia de potencial elctrico entre los dos electrodos con cargas elctricas
opuestas y los iones presentes en la disolucin se mueven hacia uno u otro
electrodo segn su propia carga .

Los cationes (iones con una carga elctrica positiva) se mueven hacia el
ctodo (electrodo con carga elctrica negativa).
Los aniones (iones con carga elctrica negativa) se mueven hacia el nodo
(electrodo con carga elctrica positiva).

8. Escriba las frmulas de los siguientes aminocidos y explique cuantos buffers se

podran preparar con cada una.

Acido asprtico (se pueden preparar 3 buffers)

Arginina (se pueden preparar 3 buffers)

Triptfano (se pueden preparar 2 buffers)

Cistina (se pueden preparar 3 buffers)

Bibliografa
DONALD VOET, J. G. (2007). Fundamentos de Bioquimica. Panamericana.

FERNANDO BURRIEL MART, F. L. (2002). Quimica Analtica Cuantitativa. Madrid:

Paraninfo.

LEHNINGER, N. Y. (2005). Principios de Bioquimica. Omega.