DESARROLLO DE UN PROCESO INDUSTRIAL DE PRODUCCION DE XILITOL VIA ENZIMATICA A PARTIR DEL BAGAZO DE CANA DE AZUCAR Y AGAVE AZUL Resumen ejecutivo EI proyecto se desarrolld en tres etapas: en la primera etapa se caracterizé la hidrélisis quimica de bagazo de cafia, bagazo de agave y cascarilla de café, asf mismo se realizé una caracterizacién fermentativa preliminar con levaduras que asimilan xilosa sobre medio de cultivo sintético con xilosa. Inicialmente la empresa CPI Ingredientes participaria con fondos concurrentes pero por politicas de la empresa decidieron retirarse del proyecto. En la segunda etapa se desarrolld un método de hidrdlisis quimica para generar mostos fermentables; se evalué la produccién de xilitol por fermentacién en hidrolizados quimicos y se compar6 contra medio sintético con xilosa, se evalué la actividad de la enzima xilosa-reductasa durante la fermentacién y se realizaron las primeras pruebas de hidrdlisis enzimatica sobre bagazo de cafia, bagazo de agave y cascarilla de café. Asi mismo se logro tener una carta de interés para asimilar la tecnologia desarrollada por parte de la empresa Diversificados Argovia S.A. de C.V. ubicada en Chiapas. En la ultima etapa, debido a que la produccién de xilitol via enzimatica no es factible econémicamente, se le dio un giro al proyecto y se opt6 por desarrollar un método de produccién de xilitol via fermentativa, para lo cual se optimizé un método de hidrélisis combinando un pretratamiento térmico (explosion de vapor) seguido de un tratamiento enzimatico. Una vez optimizada la hidrdlisis se desarrollé un proceso para la obtencién de bioetanol_y xilitol_ con el mismo hidrolizado mediante fermentaciones secuenciadas y utilizando una levadura seleccionada de la etapa anterior y dos de la coleccién del Instituto Tecnolégico de Veracruz. Para la distribucién de particula de la molienda de bagazo de cafia y esquilmo para la obtencién del coctel enzimatico por fermentacién sélida, se utilizaron molinos de cuchillas. Una vez molidos los sustratos se tamizaron con las mallas de 18, 30, 40, 50, 100. A continuacién se realiz6 la comparacién hidrdlisis quimica contra hidrdlisisenzimatica de los sustratos. Se realizaron hidrélisis quimicas en condiciones diferentes utilizando dos sustratos mas; esquilmo de cafia y cascarilla de café. Se utilize HCI y HeSOs a una concentracion de 1 N, con una relacion liquido/sélido 14:1 para los cuatro sustratos, Hoja de esquilmo, Bagazo de cafia, Bagazo de agave y Cascarilla de café. La fermentacion en medio sdlido se realizé con bagazo molido de la malla 30 del tamizado para proceder a la extraccién de los cocteles enzimaticos y se realiz6 la actividad xilanasa y celulasa de los extractos utilizando las soluciones de carboximetil celulosa y xilano junto con los extractos obtenidos de las fermentaciones sélidas con y sin jugo de cafia, los azticares liberados de cada polisacarido se midieron por el método de DNS. A\ realizar la hidrdlisis de los diferentes substratos se observo que los extractos enziméticos obtenidos funcionaron mejor en bagazo de cafia, seguido de esquilmo de cafia, en bagazo de agave fue menor la hidrdlisis y en cascarilla de café no funcioné, por lo que falta optimizar la obtencién de extractos enzimaticos especificos para cada substrato. El extracto enzimatico que mejor funcioné es el obtenido de bagazo de cafia mas jugo En cuanto a las fermentaciones para la produccién de xilitol, éstas se realizaron con las cepas Candida shehatae y Pichia stipitis, sobre los hidrolizados quimicos con las condiciones de hidrdlisis de la etapa anterior (bagazo de cafia y bagazo de agave), inoculando 1 x 10° celulas / mi a 30 [6 y 200 r.p.m. Pero ninguna de las dos cepas tuvo actividad de xilosa reductasa extracelular, por lo que fue necesario evaluar la actividad intracelularmente. Para el rompimiento se preparé una solucién que consiste en 50 ml Tris-HCl a pH=7.5 con 30 mg de inhibidor de proteasa (fluoruro de fenil-meti-sulfonilo, PMSF). La actividad de xilosa-reductasa fue mayor para la cepa Candida sehatae y se presente la actividad maxima a las 72 horas, mientras que para la cepa Pichia Spitipis la actividad maxima se presento a las 120 horas. Finalmente el investigador presenta el nuevo método de hidrdlisis quimica, el cual consiste en poner 100 gramos de bagazo de cafia, bagazo de agave y cascarilla de café, los cuales fueron hidrolizados agregéndoles 1400 ml de una solucién de Acido sulfurico 1N y fueron sometidos a un tratamiento térmico (121 por 4 horas), y después neutralizados con sosa 2N hasta alcanzar un pH de45, posteriormente se les agregé 5 gil de urea y 0.25 gil de extracto de levadura. Las fermentaciones se realizaron a 30 [Gy 200 rpm. Se determiné por el método de DNS consumo de los azticares reductores totales y por HPLC el xilitol Demanda o problematica que atiende Desarrollar un proceso industrial de produccién de xilitol via enzimatica con el bagazo de cafia de azticar y agave azul. Resultados obtenidos y/o descripcion. Caracteristicas de la tecnologia generada Produccién de bioetanol y xilitol por fermentaciones secuenciadas a partir de hidrolizados enzimaticos de residuos lignoceluldsicos. Se obtuvo un proceso novedoso para el cual se sometié una solicitud de patente. Condiciones de hidrdlisis de diferentes substratos (bagazo de cafia y agave) para la liberacién de xilosa. Condiciones de fermentacién en las cuales la enzima xilosa-reductasa tiene la mayor actividad Desarrollo de un proceso alternativo con respecto a la produccién del xilitol via enzimatica. Impactos Se logré obtener un proceso mediante el cual se obtienen bioetanol y xilitol a partir de hidrolizados de bagazo de cafia, bagazo de agave y cascarilla de café. Costos estimados de la aplicacién de los resultados y/o tecnologia generada No es posible obtener una estimacién de costos de este proceso alternativo para la produccién de xilitol y bioetanol Ambito de aplicaciénCentro Occidente y Sur Sureste. Informacién adicional o comentario Se desarrolld un nuevo método de hidrélisis de bagazo de cafia y agave, basado en la combinacién de pretratamiento térmico y posterior hidrdlisis enzimética. Lo anterior debido a que en las fermentaciones realizadas con las cepas Candida shehatae, Candida MAGNOLIAE y Pichia stipitis en los mostos que se derivaron de las hidrélisis quimica fueron bajos. También se utilizaron otras cepas para buscar el incremento en la produccién de xilitol. Cabe resaltar que se opté por desarrollar un método de produccién via fermentativa, ya que el _método enzimatico que utiliza la enzima xilosa-reductasa es econémicamente mas costoso, primero porque la enzima producida es intracelular y tiene que ser extraida por rompimiento de levaduras, segundo, porque la conversién de xilosa a xilitol realizada por esta enzima necesita de los cofactores NADH o NADPH, los cuales son bastante caros para el costo final del producto (xilitol) Clave del proyecto: SAGARPA 2004-C01-139 Sistema Producto y/o linea estratégica de atencion: Cafia de aztcar; transformacion; industrializacion Investigador: doctor JAVIER PLACIDO ARRIZON GAVINO Institucién: Centro de Investigacion y Asistencia en Tecnologia y Disefio del Estado de Jalisco, A.C. (CIATEJ)