Consideraciones de seguridad:

Tenga cuidado con el material de vidrio y el agar caliente. Rotule las

placas u lizadas. Cuando termine, coloque todo el material en su
PRCTICA 3. lugar y deje limpia su rea de trabajo.

Elaboracin de medio PDYA (papa, extracto de levadura, dextrosa

y agar)

Introduccin
Los orgenes de los medios de cul vo se remontan al siglo 19, cuando la ciencia de la
bacteriologa acababa de empezar. La empresa matriz original, Compaa de extracto de carne
Liebig (Lemco) se fund en 1865 y fabricaba extractos de infusin de carne bajo el nombre
comercial Lab Lemco. Este extracto poda ser u lizado en los laboratorios para cul var bacterias,
adems de ser un alimento popular que comenz como extracto de carne de Liebig Company",
que ms tarde se convir en Oxo. Pronto los bilogos, que generalmente hacan crecer
microorganismos en alimentos o en una muestra en donde el organismo haba sido observado
por primera vez, mostraron gran inters; por ejemplo, el estudio de las "manchas de sangre" en
hos as, causadas por Serra a marcescens, en donde Bartolomeo Bizio u lizaba el pan como
sustrato (1832). Sin embargo, cuando se trata de organismos no pigmentados y patgenos,
Robert Koch descubri que los caldos a base de suero de carne de ternera o extractos de carne
fresca (bouillions) daban los mejores resultados en el crecimiento.
En 1881 Robert Koch, en el Congreso Internacional de Medicina en Londres, demostr una nueva
tcnica. Koch haba reconocido las dicultades de usar caldo de cul vo para el aislamiento de
cul vos puros y haba buscado alterna vas de medios slidos. El evalu medios tales como
albmina de huevo coagulada, pasta de almidn y una rebanada asp camente cortada de una
patata (como la usado por la Schroeter bilogo alemn), pero luego se traslad a un extracto de
carne con gela na. El 'nutriente gela na' resultante se vierte sobre placas de vidrio planas, que
fueron inoculados y se colocan bajo una campana de cristal. Esta nueva tcnica de placa podra
ser u lizada tanto para aislar cul vos puros de bacterias y en sub-cul vos, bien en placas frescas
o en tubos en pendiente con gela na y una rama de algodn en el tubo. Aunque la gela na fue
un avance importante, tena dos desventajas importantes como agente gelicante. Se convierte
en lquido a par r de 25 C previniendo que las placas puedan ser incubadas a temperaturas
ms altas. Se hidroliza por geli nasa, una enzima producida por la mayora de los
microorganismos proteol cos.
Fue en 1882 que Fannie Hesse sugiri sus tuir la gela na con agar. Fannie, esposa de Walther
Hesse, estaba trabajando en el laboratorio de Koch como tcnico de su marido y haba u lizado
anteriormente agar para preparar jaleas, despus de enterarse de sus propiedades gelicantes
a travs de amigos. El agar es un polisacrido derivado de algas rojas, y result ser un agente
gelicante superior. El Agar ene notables propiedades sicas: se derrite cuando se calienta a
aproximadamente 85 C, y sin embargo, cuando se enfra no se vuelve un gel a 34-42 C. El Agar
es tambin ms claro que la gela na y se resiste a la diges n por las enzimas bacterianas. El
uso de agar permite la creacin de un medio que puede ser inoculada a 40 C en su estado
fundido que se enfra y se incuba a 60 C sin fundir. Aunque el extracto de carne es una fuente
valiosa de factores de crecimiento, para las bacterias que carece de suciente nitrgeno. En
1884 Fredrick Loeer aadi peptona y sal a la formulacin bsica de Koch de extracto de carne.
La peptona que se us como un compendio enzim co de la carne, y que se produjo en el siglo
19 como un producto farmacu co, por lo general prescrito para los trastornos nutricionales.
Esta peptona aadi amino-nitrgeno, mientras que la sal elev la osmolaridad del medio de
cul vo.
En 1887 Julius Richard Petri, otro trabajador en el laboratorio de Koch, modic la placa de vidrio
plano y produjo un nuevo po de placa de cul vo para medio. La placa de Petri se dise con
una tapa sobrepuesta para mantener por fuera los contaminantes. Por la dcada de 1890 se
desarrollaron los medios de cul vo que conocemos hoy en da, con placas de Petri, peptonas y
agar. Sin embargo, muchos de los mtodos anteriores se siguieron u lizando. En el pasado los
medios de cul vo se desarrollaron mediante experimentos empricos, hoy en da pueden ser
diseados u lizando un vasto conocimiento en bioqumica de los microorganismos y de las
materias primas.1
El Agar Papa, extracto de levadura y dextrosa, es un medio de propsito general para levaduras
y mohos que puede ser suplementado con cidos o an bi cos para inhibir el crecimiento
bacteriano. Es recomendado para uso con mtodos de recuento en placa para alimentos,
productos lcteos y pruebas realizadas en cosm cos. El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser
usado para el cul vo de levaduras y mohos clnicamente signica vos. La base (infusin de papa)
nutricionalmente rica, es mula la esporulacin de los mohos y la produccin de pigmentos en
algunos dermatotos2

Obje vos de aprendizaje

1. Desarrollar un medio de cul vo a par r de materias primas de fcil acceso.
2. Evaluar, mediante siembra en supercie, la viabilidad del medio de cul vo elaborado.
Material
125 g de patatas con cscara, lavadas y libres de ojos o puntos negros.
10 g de agar.
5 g de dextrosa.
0,75 g de extracto de levadura.
Placa con Aspergillus niger.
Mtodos
Lavar, secar y cortar las patatas con agua des lada. Aada 500 ml de agua des lada a las patatas
y cueza hasta que estn blandas. Filtre el caldo de patata a travs de un lienzo, guarde el caldo y
descarte la patata. Aada agua des lada hasta obtener el volumen nal de 500 ml. Lleve el caldo
a ebullicin y aada lentamente el agar, la dextrosa y el extracto de levadura. Agite hasta disolver
y observe cuidadosamente hasta que hierva. Autoclave por 15 min a 121 C. Enfre a 45 C en
bao termost co. Vierta aproximadamente 20 ml de agar en placas Petri, deje enfriar y luego
siembre la cepa de Aspergillus niger. Incube por 5 das a 25 C.
Gua de pronunciacin
Aspergillus niger (ass-per-jill -us nye -jer)

Por qu u lizamos estas bacterias?

El agar de patata y dextrosa es el medio ms u lizado para el crecimiento de hongos y levaduras
que atacan a las plantas vivas o materia vegetal muerta en descomposicin.
Resultados
Describa e interprete los resultados obtenidos.
Cues onario
Explique, cul es el mo vo para que el agar papa preparado permita el crecimiento de un
moho.
Lea la informacin de la pgina web h p://www.disknet.com/indiana_biolab/b029.htm
y explique detalladamente cmo preparara un medio para el cul vo de bacterias.

1Bridsen, E. (1994) The Development, manufacture and control of microbiological culture media. Publicado por Oxoid, Basingstoke, Reino
Unido.
2
Murray, P.R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (eds.). 1995. Manual of clinical microbiology, 6th ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C