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RESUMEN SUMMARY
Para evaluar el efecto de un complejo enzimtico To evaluate the effect of two exogenous enzymatic
exgeno (CEE) en raciones con harina de soya con complex (EEC) in diets with soybean meal with
diferente solubilidad de protena sobre la respuesta different protein solubility on the performance of
productiva de pollos de engorde, 990 pollos Cobb broilers, 990 Cobb chickens from 8 to 42 days were
desde 8 a 42 das fueron asignados en un diseo assigned in a completely randomly design with
completamente aleatorizado con arreglo factorial 3x2, factorial arrangement 3x2, to diets with soybean meal
a raciones conteniendo harina de soya con 73, 80 y with 73, 80 and 86% of KOH solubility, and the on
86% de solubilidad en KOH, con (Soya73E, Soya80E top addition (Soy73E, Soy80E and Soy86E) or not
y Soya86E) o sin (Soya73, Soya80 y Soya86) adicin (Soy73, Soy80 and Soy86) of a proteolytic (Allzyme
on top de un CEE fibroltico (Allzyme SSF) y VegPro) and fibrolytic (Allzyme SSF) EEC. The
proteoltico (Allzyme VegPro). CEE no afect la EEC did not affect (P>0.05) live weight variation
variacin de peso vivo (58.9 1.2 g/anim/d), (58.9 1.2 g/anim/d), feed conversion (1.95 0.04),
conversin de alimento (1.95 0.04), viscosidad viscosity (1.35 0.07 cps) neither intestinal pH (6.5
(1.35 0.07 cps) ni pH intestinal (6.5 0.1), 0.1), increasing the intake on Soy 86 in 3.5 and 2.8%
incrementando el consumo en Soya86 en 3.5 y 2.8% for finishing and total cycle. EEC increased the crypts
para finalizacin y ciclo total. CEE aument la depth (P=0.052) on 7.1%, and intestinal lesions were
profundidad de criptas (P=0.052) en 7.1%, con lower on Soy73. The EEC addition increased the feed
menor presencia de lesiones en Soya73. La adicin intake when soybean meal had the lower thermal
CEE aument el consumo cuando la harina de soya processing, and increased the crypts depth in
present menor procesamiento trmico, e increment intestinal villi, without variations in live weight, feed
la profundidad de las criptas en vellosidades conversion, pH neither intestinal viscosity.
intestinales, sin afectar variacin de peso vivo,
conversin de alimento, pH ni la viscosidad intestinal. Key words: enzymes; live weight; viscosity; villi.
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enzimtica de las protenas, generando factores (2005) han postulado que el uso combinado de
antinutricionales denominados compuestos de complejos enzimticos de carcter fibroltico y
Maillard, adems de alterar las propiedades fsicas de proteoltico en dietas con base en maz-soya puede
los PNA lo que impacta su valor funcional en el tracto generar un incremento en la digestibilidad ileal de las
digestivo (Sung-Hee et al., 2009). Debido a lo protenas, como resultado de un aumento en la
anterior, tradicionalmente la determinacin de liberacin de protenas estructurales, tales como las
solubilidad de la protena en KOH y la actividad glicoprotenas.
uresica se emplean como indicadores de la calidad
nutricional del material procesado (Ortz, 2009). A pesar de lo anterior, diversos estudios no han
evidenciado mejoras en la respuesta productiva de
Los PNA son compuestos no degradables por las pollos de engorde alimentados con dietas a base maz-
enzimas endgenas, y se asocian a una mayor soya a las que se adicionan diferentes combinaciones
secrecin de mucus intestinal, lo que genera de CEE, lo cual puede estar asociado a una
incremento de la viscosidad intestinal, mayor interaccin entre el complejo enzimtico y la fuente
secrecin pancretico-biliar y disminucin en la de harina de soya, esto ltimo en relacin a las
capacidad de absorcin de nutrientes (Boros et al., variaciones en su contenido de energa digestible
1993; Malathi y Devegowda, 2001). Las dietas con (Douglas et al., 2000). En este sentido, Malathi y
base en maz-soya son consideradas de alta Devegowda (2001) sealan que la eficacia de estos
digestibilidad, sin embargo ambas materias primas aditivos depende de la especificidad del sustrato, por
contienen PNA como -galactsidos (rafinosa, lo que requieren de una constante evaluacin para
estaquiosa y verbascosa), -glucanos, sustancias garantizar una adecuada respuesta bioeconmica en
pcticas, celulosa, hemicelulosa y xilanos, entre otros los sistemas de produccin.
(Slominski, 2011). La incorporacin a la racin de
complejos enzimticos exgenos (CEE) con El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la
diferentes especificaciones qumicas ha sido adicin de dos complejos enzimticos sobre la
propuesta como una alternativa tecnolgica para respuesta productiva (consumo voluntario, peso vivo
reducir el impacto negativo de los metabolitos y conversin de alimento), viscosidad intestinal y
secundarios sobre el comportamiento productivo de morfometra de las vellosidades intestinales en pollos
pollos de engorde alimentados con dietas con base en de engorde alimentados con raciones que incluyen
soya (Garca et al., 2000; Oliveira et al., 2006), a harina de soya con diferente solubilidad de su
partir de una mejora en el consumo y la digestibilidad protena.
de los nutrientes, reduccin de la viscosidad
intestinal, aumento de la tasa de pasaje de la digesta, MATERIALES Y MTODOS
disminucin del peso del tracto digestivo y mejora
general en la salud intestinal, esto ltimo Ubicacin, animales y manejo
particularmente referido a su positivo impacto sobre
las vellosidades intestinales (Lzaro et al., 2004; La evaluacin se realiz en las instalaciones de la
Hooge et al., 2010). Seccin-Laboratorio de Aves (1016'48.96" N,
6735'57.70" O) de la Facultad de Agronoma de la
Entre los CEE de mayor difusin se encuentran los Universidad Central de Venezuela, localizada a unos
destinados a fuentes proteicas vegetales, y los de 452 msnm, con promedio anual de temperatura,
fermentacin en estado slido. Los primeros mejoran precipitacin y humedad relativa de 25.1C, 1068 mm
la digestibilidad de la energa, protena y y 78.3%, respectivamente (INIA 2011).
aminocidos, sealndose que garantizan un aumento
de 4.17% en la supervivencia de pollos de engorde, Se emplearon 990 pollos Cobb-500, machos y
con una disminucin en la humedad de las excretas hembras de un da de edad, pesados individualmente
(Slominski, 2011). Los de fermentacin en estado con una balanza electrnica (marca Kern, mod. FBK,
slido, dirigidos principalmente a los componentes capacidad 65 kg 1 g). Con una densidad de 8.3
estructurales de las fracciones vegetales de la racin, aves/m2, los animales fueron estratificados por peso
incluyen en su composicin amilasa, -glucanasa, para ser ubicados en 30 corrales de 4 m2,
celulasa, pectinasa, fitasa, proteasa fngica y xilanasa, acondicionados con cama de cascarilla de arroz de
generando incrementos de peso durante el ciclo de unos 10 cm de profundidad, suministro de calor (34 a
3.73%, con una mejora de 2.64% en la conversin de 28C) durante los primeros 7 d de evaluacin
alimento (Wu et al., 2003). Adicionalmente, y a partir mediante lmpara criadora con bombillo de 200
de la reformulacin de las dietas que incluyen estos watts, comedero tipo plato y bebederos de galn,
CEE, se reducen las necesidades de energa sustituidos luego por comederos tipo tolva y
metabolizable en 75 kcal/kg, as como 0.1% calcio, bebederos automticos tipo campana regulados
0.1% fsforo disponible y 1% de aminocidos peridicamente tomando en consideracin la altura de
esenciales (Hooge et al., 2010). Meng y Slominski los animales. Se vacun contra Newcastle (cepa La
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Sota, Avinew) y Gumboro (Bursa-Vac) a los 8 das actividad uresica (0.05 0,01), pero con solubilidad
de edad, aplicando un refuerzo el da 14. Ambas en KOH de 73 y 86.5%. Considerando como ptima
aplicaciones se efectuaron en el agua de bebida, una solubilidad en KOH para la harina de soya de 75
empleando las dosis recomendadas por los a 85% (Araba y Dale, 1990), de la mezcla de las dos
fabricantes. anteriores se obtuvo un tercer tipo de harina de soya
con 80% de solubilidad de la protena. A partir de las
Alimentacin y diseo del experimento necesidades nutricionales para pollos de engorde
(Coob, 2012), se formularon seis raciones
Para la elaboracin de las raciones experimentales, en experimentales (Tablas 1 y 2), tres con solubilidad en
muestras de harina de soya se determin el contenido KOH de la protena de 73% (Soya73), 80 (Soya 80) y
de protena cruda (AOAC, 1990), solubilidad de la 86% (Soya86), y el resto similares a las anteriores
protena en KOH (Araba y Dale, 1990) y actividad pero con la adicin simultnea de dos CEE (Soya73E,
uresica (AOAC, 1990). Esta evaluacin preliminar Soya80E y Soya86E).
permiti identificar dos tipos de soya con similar
contenido de protena cruda (45.1 0.19%) y
Tabla 1. Composicin (g/100 g MS) de las dietas experimentales para pollos de engorde en iniciacin (8-21 das).
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Tabla 2. Composicin (g/100 g MS) de las dietas experimentales para pollos de engorde en finalizacin (22-42 das)
Respecto a los CEE, uno estuvo dirigido colectndose muestras de los alimentos para ser
principalmente a la ruptura de las cadenas de PNA evaluadas en funcin al anlisis qumico proximal
(Allzyme SSF), con una composicin reportada por (AOAC, 1990), calcio (Fick et al., 1979) y fsforo
el fabricante de: amilasa (30 FAU/g), -glucanasa (Fiske y Subarrow, 1925).
(200 BGU/g), celulasa (40 CMCU/g), pectinasa (4000
AJDU/g), fitasa (300 SPU/g), proteasa fngica (700 El experimento se ajust a un diseo completamente
HUT/g) y xilanasa (100 XU/g). El otro, diseado aleatorizado con arreglo factorial 3x2, considerando
para mejorar la utilizacin de fuentes proteicas de tres niveles del factor solubilidad de la protena de
origen vegetal (Allzyme VegPro), y de acuerdo al harina de soya (73, 80 y 86%), y dos del factor CEE
fabricante contena celulasa (44 CMCU/g) y proteasa (con o sin adicin). Cada tratamiento cont con 5
(7500 HUT/g). Los CEE fueron incorporados on top unidades experimentales, constituida cada una por un
a la racin (Hooge et al., 2010), a razn de 200 y corral con 33 aves.
1000 g/ton de alimento, respectivamente. Todos los
animales fueron sometidos a una racin comercial en Variacin de peso, consumo y conversin de
la fase de preinicio (1 a 7 das), y suministro de las alimento.
raciones experimentales en forma de harina durante
las fases de inicio (8 a 21 das) y finalizacin (22 a 42 Estas variables se registraron semanalmente, previo
das). La oferta de alimento y agua se efectu ad retiro de los comederos de cada corral. Empleando la
libitum durante todo el ciclo de produccin, balanza electrnica antes descrita, el peso vivo se
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obtuvo luego de ayuno de las aves durante 4 h, 1995). Partiendo de imgenes captadas mediante un
mientras el consumo se estim por diferencia entre el Fotomicroscopio Trinocular (Nikon Eclipse, Modelo
alimento ofrecido y el rechazado. La conversin de E400) provisto de montura y cmara digital Nikon
alimento se deriv de la relacin entre variacin de Coolpix 950 de 2.1 Mpx, se evaluaron las lesiones
peso y consumo. (erosin, edema, infiltracin y sinequia, entre otras)
presentes en las vellosidades, asignando valores de
Viscosidad in vivo e in vitro acuerdo al nivel de gravedad, a saber: sin lesin
aparente (0), leve (1), moderada (2) y grave (3).
La viscosidad in vivo se registr los das 21 y 42 del
ciclo productivo, sacrificando por dislocacin cervical Las variables asociadas a la morfometra de las
2 aves (machos) por cada corral, para posteriormente vellosidades intestinales (altura, rea aparente, ancho
extraer la digesta contenida en la seccin del intestino promedio y profundidad de la cripta) se evaluaron a
delgado comprendida entre el final del asa duodenal y partir de imgenes de los cortes histolgicos captadas
el divertculo de Meckel (Lzaro et al., 2004). El con una cmara Panasonic de 7.2 Mpx (modelo
material colectado fue colocado en tubos de ensayo Lumix DMC-L27, aumento de 2X y lente de 12.5X)
(50 ml) e inmediatamente trasladado al laboratorio, adosada a un microscopio de luz (marca OLIMPUS,
donde luego de determinar el pH (potenciomtero modelo: CX41) con lente de 40X. Dichas imgenes
Marca Orion Research, modelo: EA 940) fueron fueron analizadas con el programa ImageJ versin
centrifugados (12000 rpm/3 min) a 4C, para 1.31 (Collins, 2007).
posteriormente extraer una alcuota de 0.5 ml del
sobrenadante donde se determin la viscosidad Anlisis estadstico
empleando un viscosmetro Brookfield DV-II+PRO
con aguja CPE 40 y mdulo de lectura a temperatura La informacin fue analizada por medio de un
constante de 40C (Bedford y Classen, 1993). ANOVA, empleando el procedimiento GLM de SAS
(SAS, 1992). Las diferencias significativas entre
Para la determinacin de la viscosidad in vitro (Boros tratamientos y sus interacciones fueron determinadas
et al., 1993), 1 g de muestra de alimento de a travs de la Prueba de Rango Mltiple Tukey (Steel
iniciacin fue molida en criba con dimetro de 1 mm, y Torrie, 1985). Las caractersticas de las
para luego ser colocado por triplicado en tubos de vellosidades intestinales se evaluaron mediante
ensayo (50 ml) donde se adicionaron 4 ml de 0.2 M estadstica no paramtrica, empleando la prueba de
de solucin buffer fosfato a pH 4.8, agitando la Kruskal-Wallis (Siegel y Castellan, 1995).
suspensin a 40C durante 4 h en una plancha de
calentamiento. Transcurrido este lapso, la suspensin El porcentaje de machos en cada rplica fue
fue centrifugada a 13000 rpm/15 min a 4C, para considerado como co-variable para el anlisis de los
posteriormente registrar la viscosidad a 40C de parmetros productivos (ganancia de peso, consumo y
acuerdo a rutina anteriormente descrita. conversin de alimento), descartando su empleo en
virtud a la no existencia de efectos significativos (P=
Para los tratamientos con adicin de enzimas, los 0.89).
CEE fueron disueltos a razn de 0.0012 g por cada 4
ml en solucin buffer fosfato 0.2 M a pH 4.8, siendo RESULTADOS Y DISCUSIN
mantenidos con agitacin durante 1 h a temperatura
ambiente, para posteriormente ser centrifugados a Consumo de alimento
3000 x g durante 15 min (Zhang et al., 2000). El
sobrenadante, fue agregado a tubos de ensayo con 1 g Durante la fase de inicio no hubo diferencias entre
de muestra de las raciones experimentales, para luego tratamientos en el consumo voluntario (Tabla 3),
seguir el procedimiento anteriormente descrito. alcanzando un valor de 883.3 6.0 g/anim. En
finalizacin, y durante todo el ciclo productivo (8-42
Integridad y morfometra de vellosidades das), el tratamiento Soya80 present la mayor ingesta
intestinales de alimento (3136 y 4016 g/anim, respectivamente).
En ambas fases, la adicin del CEE no evidenci una
El da 38 del ciclo productivo se tomaron muestras respuesta lineal (P<0.05), generando el aditivo un
del tracto gastrointestinal de un ave por corral, las incremento del consumo en Soya86 de 3.5 y 2.8%
cuales fueron seleccionadas al azar dentro del grupo para finalizacin y ciclo productivo, respectivamente.
de animales con peso similar al promedio del lote. Paralelamente, se observa como el CEE redujo el
Luego de sacrificadas, de cada ave se extrajo una consumo en Soya80 en niveles de 5.7 y 4.5% para
porcin del intestino delgado (aprox. 3 cm del finalizacin y ciclo productivo, respectivamente.
duodeno) que fue conservada en formol neutro al
10%, y procesada de acuerdo a la tcnica de Una reduccin en el consumo debido a la adicin de
coloracin Hematoxilina-Eosina (Prophet et al., CEE a una racin con soya de adecuado
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procesamiento trmico (Soya80) puede asociarse al CEE (Tabla 3). En este sentido, e independientemente
incremento en la energa disponible a consecuencia de de la adicin de CEE, comparados con el tratamiento
la actividad de las enzimas exgenas incorporadas Soya86, se observ una reduccin de 5.9 y 2.4% en la
(Garca et al., 2000). En el caso de soya subprocesada variacin de peso vivo para Soya73 y Soya80,
(Soya86), probablemente la mejora en la ingesta se respectivamente. Este efecto coincide con estudios
asocie a la actividad de las enzimas proteolticas conducidos con pollos de 1 a 21 das alimentados con
exgenas sobre algunos metabolitos secundarios raciones basadas en harina de soya de diferente
presentes en este tipo de material, y que se identifican solubilidad en su protena (Oliveira et al., 2006),
como la principal limitante al consumo voluntario donde se observ una reduccin (P<0.05) de la
(Oliveira et al., 2006). ganancia diaria de peso (27.9 y 26.9%) y del consumo
voluntario (7.4 y 8.8%) cuando la harina de soya
Variacin de peso control con solubilidad en KOH de 88%, fue
sustituida por harinas con solubilidades de 91 y 66%,
En la fase de inicio la variacin de peso vivo se vio respectivamente.
afectada por el tipo de soya (P<0.01), sin efecto del
Tabla 3. Respuesta productiva de pollos de engorde alimentados con base en harina de soya y adicin de dos
complejos enzimticos
Consumo (g MS/anim)
8-21 895 880 879 884 879 883 13.28 0.54 0.14 0.97
22- 42 3044ab 3136a 2911 b
2993 ab
2958b 3012ab 66.13 0.02 0.37 0.01
8-42 3939ab 4016a 3790b 3878ab 3837ab 3895ab 66.96 0.17 0.35 0.02
Una mayor actividad de factores antitripsnicos, y realizados con dietas con base en maz-soya (Schang
consecuentemente una hipertrofia del pncreas, se et al., 1997; Ortz, 2009). La utilizacin de raciones
presentan como las principales razones del menor con niveles de protena cruda ajustados a lo
desempeo de las aves en inicio ante raciones con establecido para pollos de engorde, y la
procesamiento trmico deficiente de la soya (Oliveira suplementacin con lisina sinttica en niveles
et al., 2006). Para el caso de la fase de finalizacin, y superiores a las necesidades, han sido sealados como
al evaluar todo el ciclo productivo, el tipo de soya y la condiciones que reducen el impacto sobre el peso
adicin de CEE no afectaron la variacin del peso, vivo pollos de engorde de un tratamiento trmico
respuesta que coincide con estudios similares deficiente de la harina de soya (Ortz, 2009).
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Tabla 4. Viscosidad y pH intestinal en pollos de engorde alimentados con base en harina de soya y adicin de dos
complejos enzimticos
Viscosidad (cps)
In vivo 21 1.4 1.31 1.32 1.25 1.39 1.45 0.12 0.79 0.75 0.30
42 1.38 1.34 1.39 1.32 1.27 1.31 0.07 0.62 0.12 0.91
In vitro 21 0.89 0.89 0.91 0.9 0.93 0.96 0.01 0.89 0.55 0.33
pH 21 6.6 6.5 6.4 6.6 6.6 6.7 0.12 0.99 0.19 0.20
42 5.7 5.9 5.9 5.8 5.9 5.7 0.09 0.15 0.35 0.31
S: soya, E: enzima, S*E: interaccin soya*enzima
EEM: error estndar de la media
Tabla 5. Morfometra y lesiones en vellosidades intestinales de pollos de engorde alimentados con base en harina de
soya y adicin de dos complejos enzimticos
Tratamientos Factores
Variables
Soya73 Soya80 Soya86 Soya73E Soya80E Soya86E EEM S E S*E
Morfometra (m)
Altura 917 777 952 825 1009 903 86.23 0.65 0.55 0.07
rea (x103) 92.3 66.4 94.6 71.1 79.3 82.1 11.96 0.21 0.33 0.13
Ancho 102 90 99 91 82 100 7.55 0.06 0.17 0.49
PC 154b 169b 211a 164b 176b 232a 30.31 0.05 0.05 0.06
6 a ab b a ab b
Lesiones 0 1 2 0 1 2 0.04 0.11 0.23
S: soya; E: enzima; S*E: interaccin soya*enzima; PC: profundidad de la cripta
EEM: error estndar de la media
a,b,c
Medias con literales diferentes en la misma fila indican diferencia significativa (*P<0.05)
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CONCLUSIONES
Agradecimiento
(a)
Los autores desean expresar su agradecimiento a
Alltech Venezuela, S.C.S. y al Consejo de Desarrollo
Cientfico y Humanstico de la Universidad Central
de Venezuela (Proyecto CDCH N PG-01-8111-
2011) por el apoyo financiero para la realizacin de
esta investigacin.
REFERENCIAS
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