MORFOLOGIA BACTERIANA

MARIANA PATRICIA DAZA WALTEROS 20161085029

JORGE ANDRS RUBIANO GUZMN 20161085453
ANGIE JULIETH CARDOSO GUTIRREZ 20161085035
DANILO RIAO 20142181026

INFORME DE LABORATORIO

LUISA FERNANDA VELASQUEZ

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOS DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE
TECNOLOGA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
BOGOT
2017
 MORFOLOGIA BACTERIANA

1. OBJETIVOS.

1.1. OBJETIVO GENERAL.

Observar la morfologa de bacterias.

1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS.

1. Realizar una descripcin macroscpica de las colonias.

2. observar a nivel microscpico las bacterias, diferenciar gnero mediante
tinciones diferenciales.
3. Siembra por agotamiento de poblacin bacteriana por diferentes medios en
selectivo diferencial.

2. METODOLOGIA
AZUL DE METILENO

Poner una gota de azul de metileno en el

portaobjetos

Tomar colonia con asa estril

Diluir la colonia en el
colorante

Poner
cubreobjetos

Adicionar una gota de aceite de inmersin sobre el

cubreobjetos

TINTA
Enfocar CHINA
en microscopio en
100x
 Poner una gota de tinta china en el
portaobjetos

Tomar colonia con asa estril

Diluir la colonia en el
colorante

Dejar secar

Fijar al calor

Poner fucsina sobre la muestra por 15

segundos

Lavar con agua

Dejar secar

Poner aceite de inmersin y enfocar

en 100x

COLORACION DE GRAM

Poner una gota de agua en el portaobjetos

Cristal violeta
Agua
Teir 1 minuto
Fucsina
Dejar
 Tomar colonia con asa estril

Diluir la colonia en el
agua
Dejar secar

Fijar por calor

Agua

Lugol 1 minuto

Agua

Alcohol acetona 15

Microscopio 100x aceite de

inmersinSELECTIVOS
MEDIOS DE CULTIVO

Bacillus cereus Manitol salado kanamicina

esculina
(Bacilos) (Estafilococos)
( Estreptococos )
 Pruebas para
determinar organismos
Gram +

Tomar muestra de colonia con asa

redonda

Manipular las muestras cerca al

mechero

Realizar la siembra en agar por medio de la tcnica de siembra

por agotamiento

Tapar la muestra

Marcar la siembra

Cultivar a 37 grados
C

3. RESULTADOS

3.1. IDENTIFICACION MACROSCOPICA.

Cultivados en agar nutritivo
Colonia # 1 (cocos)
BACTERIA Superficie agar nutritivo
Forma Circular
Borde Ondulado
Elevacin Convexa
Superficie Lisa
Consistencia Cremosa
Color Crema
Luz trasmitida Opaca
Luz reflejada Brillante

Colonia # 2(bacilos)
BACTERIA Superficie agar nutritivo
Forma Irregular
Borde Ondulado
Elevacin Convexa
Superficie Rugosa
Consistencia Membranosa
Color Marfil
Luz trasmitida Traslucida
Luz reflejada Brillante

En la caja de agar nutritivo de la muestra ambiente no creci nada posiblemente a

que el lugar escogido para tomar la muestra (encima de los lockers) se aplica
algn desinfectante.

3.2. TINCIONES

3.2.1. TINCION DE GRAM.

TINCION DE GRAM RESULTADO
Colonia 1 Cocos Gram positivos
Colonia 2 Bacilos Gram positivos
3.2.2. AZUL DE METILENO.
TINCION CON AZUL DE METILENO RESULTADO
Colonia 1 Estafilococos
Colonia 2 Bacilos
 3.2.3. TINTA CHINA.
TINCION CON TINTA CHINA RESULTADO
Colonia 1 No presento resultados, se observ una
mancha de tinta.
Colonia 2 Bacilos

3.3. MEDIOS DE CULTIVO

MEDIO DE CULTIVO CRECIMIENTO

Bacillus cereus creci
Manitol salado creci
Kanamisina esculina azida No creci

Agar: 1.KTA no mostro crecimiento.

Agar: 2 manitol salado siembra por agotamiento de colonia 1 estafilo cocos
BACTERIA
Forma Circular
Borde Liso
Elevacin Plana
Superficie lisa
Consistencia Mucosa
Color Blanco
Luz trasmitida Translucida
Luz reflejada Opaca

AGAR 3: BACILLIUS CERIEUS siembra por agotamiento de colonia

BACTERIA
Forma Irregular
Borde Ovulado
Elevacin Convexa
Superficie Rugosa
Consistencia Mucosa
Color Blanca
Luz trasmitida Opaca
Luz reflejada Opaca

4. ANALISIS DE RESULTADOS
 En la tincin de Gram, para la colonia 1 la cual contena Cocos, cultivados
en agar nutritivo se obtuvo como resultado de la tincin Cocos Gram
Positivos, ms especficamente Estafilococos Gram Positivos, este
resultado se puede explicar por la teora de la tincin de gram que segn
Olivas E. Evangelina1 divide las bacterias en dos grupos, las gram positivas
que retienen el primer colorante usado (cristal violeta) y las gram negativas
que se tien con el segundo colorante (safranina). As las bacterias gram
positivas se tien de morado oscuro por su capa gruesa de
peptidoglucano,adems, muchas de estas especies presentan cidos
teicoicos en la pared, las bacterias gram negativas se tien de fucsia o
rosado porque contienen menos peptidoglicano y su capa es ms delgada,
pero est rodeada de una bicapa ms externa de lpidos, llamada
membrana externa. (Oliva. Evangelina. 2001) 2

PARED GRAM NEGATIVO PARED GRAM POSITIVO

En la tincin de Gram, para la colonia 2 la cual contena Bacilos, cultivados

en agar nutritivo se obtuvo como resultado de la tincin Bacilos Gram
Positivos, este resultado se puede explicar por la teora igualmente que se
explic en la colonia 1, en este caso la coloracin fue de un color fucsia
evidenciando la presencia de la capa de peptidoglicano catalogndola como
una bacteria Gram positiva.

En la caja de Petri con el medio de cultivo de agar nutritivo del ambiente

exterior no se evidenci crecimiento al exponer la caja al medio exterior por
aproximadamente 15 minutos, sta se dej encima de los lockers afuera del
 laboratorio, la posible explicacin por la que no hubo crecimiento de ningn
microorganismo se pudo deber a que en esta zona se aplicaba algn tipo
de insecticida o desinfectante inhibiendo el crecimiento bacteriano.

En la tincin de azul de metileno para las 2 colonias, al ser esta una tincin
simple (Washington, C, Winn. Elmer, Koneman. Stephen, Allen. et al .2006) 3
su objetivo es dar contraste a toda la muestra para apreciar mejor sus
principales caractersticas, en este caso se evidenci la forma, tamao y
agrupacin de los microorganismos y as hacer ms fcil su respectiva
identificacin, que en el caso de los cocos se evidenci la forma totalmente
redonda y su agrupacin en forma de racimos, por lo que se logr
identificar que se trataba de Estafilococos.

En el proceso de tincin por tinta china, de la primera colonia no se logr

evidenciar nada al microscopio debido a que muy posiblemente no se tom
la suficiente muestra de las respectiva colonias, o se pudo deber a que al
momento de realizar la tincin se expuso la muestra a demasiada tinta por
lo cual solo se pudo observar la mancha de tinta, en la segunda colonia se
observaron bacilos, determinados por su forma cilndrica.

En el medio de cultivo selectivo, para el agar de Kanamicina-esculina-azida

(KAA) no se evidenci crecimiento. El cultivo de KAA es un caldo
enriquecido que se utiliza como prueba presuntiva para Streptococcus D de
Lancefield, es un cultivo que inhibe el crecimiento de otro microorganismo
en la muestra, mientras que los Streptococcus crecen sin ninguna
restriccin (Delgadillo O, Et. Al. 2010 ) 4, se puede explicar que no hubo
ningn crecimiento bacteriano debido a que en este tipo de agar se
sembraron Estafilococos, y este al ser un medio selectivo solamente ser el
adecuado para el crecimiento de Estreptococos.

El segundo medio de cultivo contena Manitol Salado, a este agar se le

realiz una siembra por agotamiento de Estafilococos obteniendo como
resultado notorias colonias aisladas de estas bacterias. Lo cual concuerda
con la teora ya que este tipo de agar (selectivo-diferencial) es el indicado
para este tipo de bacterias.

El tercer y ltimo agar contena Bacillum Cereus, al que igualmente se le

realiz la siembra por agotamiento de una colonia de bacilos, y al ser este
un medio selectivo, se obtuvieron las colonias aisladas como se esperaba,
a los 3 tipos de agares se les realiz la tincin de Gram para corroborar los
resultados antes obtenidos, seguidos de una descripcin macroscpica de
las colonias obtenidas.
5. CONCLUSIONES.
 1. Se observaron caractersticas macroscpicas para la colonia 1 y la colonia
2 teniendo en cuenta aspectos como color, forma, borde, superficie,
consistencia, elevacin, luz transmitida y luz reflejada.
2. Se pudo identificar que el gnero de las bacterias presentes en la colonia 1
como Cocos Gram positivos, y el gnero de las bacterias presentes en la
colonia 2 como bacilos gram positivos, esto por medio de la tcnica tincin
gram y confirmado por la tcnicas tincin con tinta china y tincin con azul
de metileno.
3. Se evidencio que los medios de cultivo de tipo selectivo Manitol salado,
Bacillum Cereus , Kanamicina-esculina-azida favorecen el crecimiento de
estafilococos, bacilos y estreptococos respectivamente mediante la
alteracin al medio de las condiciones fsicas y qumicas especficos del
organismo.
4. Se observ que los medios selectivos slo permiten el crecimiento de un
grupo de microorganismos e inhiben el de otros por lo cual no se present
crecimiento en el medio selectivo KTA.
BIBLIOGRAFA
1. Olivias, Evangeline 2001. manual de prcticas. microbiologa l y ll y
parasitologa. editorial. universidad autnoma de la ciudad de Jurez.
primera edicin. Jurez, Mxico. 105 pp.

2. Olivias, Evangeline 2001. manual de microbiologa, programa de

entrenamiento deportivo. universidad autnoma de Jurez. primera edicin.
Jurez, chihuahua, Mxico. 53 pp.

3. Washington, C, Winn. Elmer, Koneman. Stephen, Allen. Garry W, Procop.

William, Janda. Gail, Woods. 2006. Koneman, diagnsticos microbiolgicos.
editorial mdica panamericana. sexta edicin. USA.

4. Delgadillo, Oscar. Camacho, Alan. Prez, Luis. Andrade, Mauricio 2010.

Depuracin de aguas residuales por medio de humedales artificiales.
Universidad Mayor de San Simn. Serie Tcnica. Cochabamba, Bolivia,
66pp.

ANEXOS
1. Procedimiento de tincin de Gram

2. Estafilococos Gram Positivos observados en el microscopio a

100x.

3. Bacilos Gram Positivos observados en el microscopio a 100x.

4. Estafilcocos observados mediante la tincin de azul de metilo.

5. Montaje de tincin por tinta china y azul de metilo

6. Agar nutritivo con cultivo de

bacilos
7. Siembra por agotamiento de cultivo de Cocos.

8. Distintos tipos de agares utilizados para el laboratorio de

medios de cultivo.
9. Resultados de las siembras por agotamiento en Agar Bacillum
Cereus y Manitol Salado,