Hernandez Montiel Luis Guillermo PDF

UNIVERSIDAD DE COLIMA
MAESTRA EN CIENCIAS, REA BIOTECNOLOGA
RIZOBACTERIAS Y HONGOS MICORRZICOS COMO AGENTES DE

CONTROL BIOLGICO DEL DAMPING-OFF EN PLNTULAS DE
Carica papaya L.
Tesis que para obtener el grado de

Maestro en Ciencias, rea Biotecnologa
Presenta
LUIS GUILLERMO HERNNDEZ MONTIEL
Asesor Interno: Dr. Sergio Aguilar Espinosa
Asesor Externo: M.C. Andrs Adolfo Muoz Garca
Tecomn, Colima, Mxico

Febrero, 2004
1
NDICE
Pgina
INDICE DE CUADROS
INDICE DE FIGURAS
RESUMEN...................................................................................................... 1
ABSTRACT.................................................................................................... 2
I. INTRODUCCIN ...................................................................................... 3
2.1. Hiptesis ............................................................................................... 5
2.2. Objetivo general ................................................................................ 5
2.2.1. Objetivo especifico ................................................................ 5
III. REVISIN DE LITERATURA ...................................................................... 6
3.1. El cultivo de papayo (Carica papaya L) ........... 6
3.1.1. Damping-off, principal enfermedad en semillero ................ 7
3.1.1.1. Fusarium sp. causante del damping-off . 8
3.1.1.2. Desarrollo de la enfermedad 10
3.1.1.3. Control de la enfermedad . 11
3.2. Rizobacterias y hongos micorrzicos con capacidad de
proteccin en las plantas .............................................................. 12
3.2.1. Mecanismos de proteccin de las rizobacterias en las
plantas ................................................................................... 12
3.2.1.1. Las rizobacterias y sus metabolitos implicados
en el control biolgico de enfermedades ........... 13
3.2.2. Mecanismos de proteccin de los hongos micorrzicos
en las plantas ....................................................................... 17
3.3. Interaccin entre PGPR y HMA ......................................................... 19
3.3.1. Efecto de las rizobacterias en la fisiologa de los HMA ........ 19
3.3.2. Efecto de los HMA en poblaciones de rizobacterias ........... 22
3.4. Efecto de la inoculacin dual de PGPR y HMA en las plantas .... 23
IV. MATERIALES Y MTODOS ..................................................................... 27
4.1. Trabajo en laboratorio ...................................................................... 27
4.1.1. Aislamiento de Pseudomonas fluorescentes ......................... 27
4.1.2. Pruebas para la seleccin de la mejor cepa de
Pseudomonas fluorescentes .............................................................. 27
2
4.1.2.1. Antibiosis in vitro de Pseudomonas fluorescentes
Vs. hongos fitopatgenos .......................................... 27
4.1.2.2. Identificacin de rizobacterias productoras de
cido cianhdrico (HCN) ............................................ 28
4.1.2.3. Produccin e identificacin de siderforos ............. 28
4.1.3. Seleccin e identificacin de la especie de
Pseudomonas que logro el mayor rango de inhibicin
contra los hongos fitopatgenos ........................................... 29
4.1.4. Concentraciones bacterianas y cuantificacin de
unidades formadoras de colonias (UFC) .............................. 29
4.1.5. Preparacin del inoculo de HMA ........................................... 30
4.1.5.1. Propagacin de los HMA ............................................. 30
4.1.5.2. Clareo y tincin de races ............................................ 30
4.1.5.3. Porcentaje de colonizacin micorrzica .................... 31
4.1.6. Aislamiento de hongos fitopatgenos causantes del
damping-off en plantas de Carica papaya L ...................... 31
4.1.6.1. Induccin de la enfermedad .................................... 31
4.1.6.2. Aislamiento e identificacin de fitopatgenos
causantes del damping-off ....................................... 32
4.2. Trabajo en invernadero ..................................................................... 32
4.2.1. Ubicacin del rea experimental ........................................... 32
4.2.2. Material vegetal ........................................................................ 32
4.2.3. Sustrato utilizado ....................................................................... 33
4.3. Fase experimental .............................................................................. 33
4.3.1. Experimento 1. Dosis respuesta de plantas de papayo
inoculadas con la mejor cepa de Pseudomonas
fluorescentes ............................................................................. 33
4.3.1.1. Variables evaluadas en el experimento dosis-
respuesta rizobacteria-papayo ................................. 34
I) Altura y numero de hojas ........................................ 34
II) Unidades formadoras de colonias (UFC) ............. 35
III) rea foliar y biomasa ............................................. 35
4.3.2. Experimento 2. Susceptibilidad de plntulas de Carica
3
papaya L al ataque de hongos fitopatgenos causantes
del damping-off ....................................................................... 35
4.3.2.1. Variables a evaluar durante el desarrollo del

experimento de la susceptibilidad de Carica
papaya L al ataque de hongos fitopatgenos ...... 36
I) ndice de severidad y necrosis ............................... 36
4.3.3. Experimento 3. Efecto de la inoculacin dual de
Pseudomonas fluorescentes y HMA en el control
biolgico del damping-off en plntulas de Carica
papaya L ................................................................................... 37
4.3.3.1. Variables a evaluar en el experimento sobre

inoculacin dual de Pseudomonas fluorescentes y
HMA en el control biolgico del damping-off en
plntulas de Carica papaya L .................................. 39
I) Altura y numero de hojas ........................................ 39

II) Unidades formadoras de colonias (UFC) ............. 39
III) rea foliar y biomasa ............................................. 39
IV) ndice de severidad y necrosis ............................. 40
V) Por ciento de colonizacin micorrzica ............... 40
V. RESULTADOS .......................................................................................... 41
5.1. Seleccin de Pseudomonas ............................................................. 41
5.1.1. Aislamiento de Pseudomonas fluorescentes y su
capacidad de inhibir el crecimiento de fitopatgenos
del suelo .................................................................................... 41
5.1.2. Rizobacterias con capacidad de producir cido
cianhdrico ................................................................................ 43
5.1.3. Sideroforo producido por la rizobacteria seleccionada .... 43
5.1.4. Identificacin de la especie de Pseudomonas
seleccionada .......................................................................... 44
5.2. Identificacin de los hongos causantes del damping-off en
plntulas de Carica papaya ............................................................. 45
5.3. Respuesta de plntulas de papayo var. Maradol a la
inoculacin con diferentes concentraciones de Pseudomonas
4
putida ................................................................................................... 46
5.3.1. Altura y nmero de hojas ......................................................... 46
5.3.2. rea foliar y biomasa fresca y seca ....................................... 48
5.3.3. Dinmica poblacional de P. putida y P. fluorescens de la
rizosfera de plntulas de papayo ............................................ 49
5.4. Efecto de diferentes concentraciones de Fusarium oxysporum
en la susceptibilidad de plntulas de papayo var. Maradol en
vivero .................................................................................................. 50
5.4.1. ndice de Severidad y necrosis ............................................. 50
5.5. Efecto de la inoculacin dual de HMA y P.putida en plantas de
papayo para el control biolgico del damping-off .................... 52
5.5.1. Altura y nmero de hojas ...................................................... 52
5.5.2. rea foliar y biomasa fresca y seca ..................................... 54
5.5.3. ndice de severidad y necrosis .............................................. 55
5.5.4. Evaluacin de la colonizacin de HMA y P. putida en
plntulas de papayo ............................................................. 57
VI. DISCUSIN ............................................................................................. 59
6.1. Pseudomonas fluorescentes y su capacidad de inhibir in vitro el
crecimiento de Fusarium oxysporum y Pythium sp ......................... 59
6.2. Efecto de diferentes concentraciones de Pseudomonas putida
y P. fluorescens en el crecimiento y desarrollo de plntulas de
papayo var. Maradol ......................................................................... 61
6.3. Respuesta de plntulas de papayo var. Maradol a diferentes
concentraciones de Fusarium oxysporum .................................... 64
6.4. Efecto de la inoculacin dual de HMA y P. putida en plantas
de papayo para controlar Fusarium oxysporum agente causal
del damping-off ................................................................................ 67
VII. CONCLUSIONES ................................................................................... 74
VIII. LITERATURA CITADA ............................................................................ 75
5
NDICE DE CUADROS
Pgina
Cuadro 1 Participacin de los principales municipios

productores de papaya en el Estado de Veracruz
(SAGARPA, 1999) 6
Cuadro 2 Efecto de microorganismos del suelo sobre el ciclo de
vida de los HMA (Fitter y Garbaye, 1994) 20
Cuadro 3 Anlisis de las propiedades fsico-qumicas del sustrato
que se empleo en el desarrollo de los experimentos 33
Cuadro 4 Descripcin de los tratamientos para el experimento
dosis-respuesta 34
Cuadro 5 Descripcin de los tratamientos para evaluar que
concentracin de conidias de Fusarium oxysporum
enfermaban a plntulas de papayo de damping-off 36
Cuadro 6 Escala propuesta por St-Arnaud et al. (1994) para
evaluar la severidad del damping-off en plantas de
Carica papaya L. 37
Cuadro 7 Escala propuesta por St-Arnaud et al. (1994) para
evaluar necrosis causado por damping-off en plantas
de Carica papaya L. 37
Cuadro 8 Descripcin de los tratamiento para el experimento
final 38
Cuadro 9 Halo de inhibicin en mm cuantificado en diferentes
medios con rizobacterias y F. oxysporum 42
Cuadro 10 Halo de inhibicin en mm cuantificado en diferentes
medios con rizobacterias y Pythium sp. 42
Cuadro 11 Produccin de biomasa fresca y seca de plntulas de
papayo inoculadas con rizobacterias 49
Cuadro 12 Produccin de biomasa fresca y seca de plntulas de
papayo inoculadas con microorganismos 55
6
Cuadro 13 Porcentaje de colonizacin micorrizca evaluado en
plantas de papayo a los 36 y 72 das despus de la
inoculacin (ddi) con HMA, P. putida y F. oxysporum
57
Cuadro 14 Unidades formadoras de colonias (UFC) cuantificadas
en plantas de papayo inoculadas con HMA, P. putida
y F. oxysporum 58
7
NDICE DE FIGURAS
Pgina
Figura 1 Caractersticas morfolgicas microscpicas del

gnero Fusarium (Nelson et al., 1983) 9
Figura 2 Modelo propuesto sobre la absorcin de fierro por
Pseudomonas fluorescentes (Elad y Chet, 1987; Morris
et al., 1992) 14
Figura 3 Espectro de absorcin realizado para la identificacin
del siderforo producido por Pseudomonas sp.
(rizobacteria nmero tres), la cual es antagonista a F.
oxysporum y Pythium sp. 44
Figura 4 Cuantificacin de altura y nmero de hojas de

plntulas de papayo inoculadas con diferentes
concentraciones de Pseudomonas putida y P.
fluorecens 47
Figura 5 rea foliar de plntulas de papayo cuantificada a los

54 das despus de inoculadas las rizobacterias (P.
putida y P. fluorecens) con diferentes
concentraciones. Las barras con la misma letra son
estadsticamente iguales (P <0.05) 48
Figura 6 Dinmica poblacional de P.putida y P. fluorecens en
la rizosfera de plntulas de Carica papaya L evaluado
durante 54 das 50
Figura 7 Dinmica de severidad y necrosis evaluadas en
plantas de Carica papaya inoculadas con diferentes
concentraciones de conidios de Fusarium oxysporum
agente causal del damping-off 51
Figura 8 Altura y nmero de hojas cuantificadas a lo largo de
72 das en plntulas de papayo inoculadas con el
complejo micorrzico MTZ-1, P. putida (en
concentraciones de 104 y 109 celmL-1) y F. oxysporum
(con 7 conidios/g de suelo seco) 53
8
Figura 9 rea foliar de plntulas de papayo cuantificada a los
72 das despus de inoculados los microorganismos
(HMA, P. putida y F. oxysporum). Las barras con la
misma letra son estadsticamente iguales (P <0.05) 54
Figura 10 Dinmica de severidad y necrosis evaluadas durante
72 das en plantas de Carica papaya inoculadas con
HMA, P. putida y Fusarium oxysporum 56
9
RESUMEN
Para evaluar el efecto protector entre rizobacterias (PGPR) y hongos

micorrzicos (HMA) sobre la severidad del damping-off en papayo, se
aislaron 56 rizobacterias nativas. De las cuales se seleccionaron con base a
la produccin de pigmento amarillo-verdoso 8, evaluando su capacidad
antagnica in vitro contra Fusarium oxysporum y Pythium sp., sobresaliendo
la rizobacteria nmero 3 con halos de inhibicin de hasta 10 mm,
identificndose como Pseudomonas putida, la cual se inoculo en plntulas
de papayo bajo diferentes dosis (109, 108, 106 y 104 celmL) utilizando una P.
fluorescens (A9) de referencia, obteniendo diferencias significativas (Tukey,
P<0.05), cuantificando incrementos con la rizobacteria nativa y la dosis mas
baja en comparacin de A9. Otro experimento se realizo para conocer el
nmero de conidias de F. oxysporum (3, 5 y 7 conidias/g de suelo seco)
con las cuales plantas de papayo se enfermaran de damping-off, el
anlisis estadstico mostr diferencias significativas (P<0.05), siendo la dosis
mas alta la que presento mayor tasa de severidad y necrosis,
cuantificando al final una mortandad del 100%. Por ltimo plntulas de
papayo fueron inoculadas con P. putida y HMA (MTZ-1) para conocer su
efecto protector a F. oxysporum, el anlisis estadstico mostr diferencias
significativas (Tukey, P<0.05), siendo las plantas ms patgeno las que
mayor ndice de severidad y necrosis tuvieron, el tratamiento patgeno, P.
putida y HMA tuvo la menor tasa de severidad y necrosis. Por lo que la
proteccin ejercida por estos dos microorganismos fue tan eficaz, que
posiblemente se deba a un efecto sinrgico entre ellos lo que este
haciendo que sus mecanismos de defensa hacia las plantas se estn
potencializando.
10
ABSTRACT
In order to know the protective effect between rhizobacterial (PGPR) and

mycorrhizal fungi (HMA) on severity damping-off in papaya, 56 native
rhizobacterias were isolated, selecting them bases on the yellow-greenish
pigment production 8, evaluating their antagonistic capacity in vitro
against Fusarium oxysporum and Pythium sp., excelling rhizobacteria 3 with
halos inhibition of up to 10 mm, identifying Pseudomonas putida, as
inoculated in plants of papaya under different doses (109, 108, 106 and 104
celmL) using P. fluorescens (A9) from reference, obtaining significant
differences (Tukey, P<0.05), quantifying increases with rhizobacteria native
and the low dose in comparison of A9. Another experiment was done in
order to know the number of conidias of F. oxysporum (3, 5 and 7
conidias/g dry ground) with which plants of papayo would become ill of
damping-off, the statistical analysis showed significant differences (P<0.05),
being the highest the dose one that presented display greater rate of
severity and necrosis, quantifying in the end a loss of 100%. Finally plants of
papaya were inoculated with P. putida and HMA (MTZ-1) to know their
protective effect F. oxysporum, the statistical analysis showed significant
differences (Tukey, P<0.05), being the pathogenic most plants those with
greater index of severity and necrosis, the treatment of pathogenic, P.
putida and HMA had the smaller rate of severity and necrosis. That is why
the protection exerted by these two microorganisms was so effective,
maybe because of the sinergic effect among them what is doing that their
mechanisms of defense towards the plants are being elevating.
11
I. INTRODUCCIN
En el mercado mundial el cultivo del papayo (Carica papaya L.), se

considera un frutal de importancia econmica por su alta rentabilidad y la
gran aceptacin de sus frutos (PROFRUTA, 1999). Este cultivo se desarrolla
de manera adecuada en lugares donde la precipitacin pluvial oscila
entre 1500 a 2000 mm anuales, siendo las plantas jvenes (desarrolladas
durante etapa de vivero) las que requieren ms agua que las plantas
adultas, sin embargo, este cultivo es muy sensible a contenidos de
humedad altos en el suelo, lo que ocasiona retrasos en el desarrollo
durante las diferentes etapas fenolgicas, ocasionando pudricin de races
e inclusive la prdida total (Arrieta y Carrillo, 2002).
De entre los hongos que causan las enfemedades fungosas que originan
importantes prdidas al nivel de vivero destacan los gneros: Fusarium,
Pythium, Rhizoctonia, Phytophthora, entre otros, los cuales invaden el
sistema radicular de las plantas, obstruyendo principalmente los vasos
vasculares, ocasionando amarillamiento de hojas y estras necrticas de
color marrn en la base del tallo a nivel del suelo, originado un
ahorcamiento denominado comnmente damping-off secadera de
los viveros, el cual trae como consecuencia la muerte de las plantas,
originando prdidas importantes en esta etapa del cultivo (Nishina et al.,
2000).
Tradicionalmente el control de estos patgenos se lleva a cabo con dos

mtodos; el primero de ellos se basa en la utilizacin de fungicidas (como
benlate, manzate, captan, entre otros), los cuales se aplican en intervalos
de cada siete das durante el lapso que dura la planta en ese estadio,
elevando los costos de produccin del cultivo (Latorre, 1999; Yage, 1999),
y el segundo que es el ms utilizado hasta ahora, sobre todo en tierras ms
12
o menos infestadas por estos patgenos, es la desinfeccin del suelo con
fumigantes de amplio espectro. El bromuro de metilo ha sido el
desinfectante ms eficaz pero su aplicacin es cara y, como ya es
conocido por todos, por los problemas medio ambientales y de residuos
que produce, tras el protocolo de Montreal, existe el acuerdo de restringir
su utilizacin progresivamente hasta el ao 2005 en que estar prohibido su
uso (Monera, 1999).
Ante tales casos existe el aprovechamiento de ciertas tecnologas con un

alta grado cientfico que pueden ofrecer soluciones a estos problemas, las
cuales se encuentran ntimamente ligadas a la produccin agrcola sin
causar algn dao a la naturaleza (Torres, 1996), es decir, mantiene un
equilibrio entre el suelo, biota y medio ambiente (Vandermeer, 1995). La
biotecnologa que se utiliza en estos procesos involucra el manejo de
agentes microbianos capaces de fijar nitrgeno atmosfrico, bacterias
promotoras del crecimiento vegetal, hongos micorrzicos, agentes
antagnicos en el control biolgico de plagas y enfermedades de las
plantas, siendo factible de esta manera la disminucin de agroqumicos y
funguicidas, contribuyendo a la sostenibilidad de los sistemas productivos y
del entorno ecolgico (Ferrera-Cerrato, 1995).
El control biolgico de enfermedades de las plantas se ha practicado

mediante la inoculacin de estos microorganismos en la rizosfera con el fin
de mejorar la sanidad y la productividad de los cultivos, entre los
sintetizados biolgicos producidos por estos organismos se encuentran los
sideroforos, cido cianhdrico y antibiticos, destacando a las bacterias y
hongos, como los dos grupos mas importantes antagnicos a
fitopatgenos (Barea, 1998), por lo que su utilizacin de manera conjunta
posiblemente integren una serie de mecanismos beneficiosos de defensa
13
que repercutirn en la sanidad vegetal de las plantas, por lo que este tipo
de interacciones microbiolgicas pueden ser objetivos principales a
abordar en el campo de la investigacin agrcola (Azcn, 2000),
basndose en este hecho donde las interacciones entre microorganismos
benficos del suelo pueden potencializar su accin protegiendo a las
plantas contra patgenos del suelo, se planteo en este trabajo de
investigacin la siguiente hipotesis y objetivos:
2.1. Hipotesis
Si las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR) y los hongos

micorrzicos arbusculares (HMA) ejercen un papel como agentes de control
biolgico de manera individual, entonces la accin conjunta incrementara
su eficiencia, disminuyendo la severidad del damping-off en plntulas de
papayo.
2.2. Objetivo general
Conocer el efecto conjunto entre rizobacterias promotoras del crecimiento

vegetal (PGPR) y hongos micorrzicos arbusculares (HMA) en la disminucin
de la severidad del damping-off en plntulas de papayo.
2.2.1. Objetivo especfico
Cuantificar el efecto conjunto entre rizobacterias promotoras del

crecimiento vegetal (PGPR) y hongos micorrzicos arbusculares (HMA) en el
control biologico del damping-off ocasionado por Fusarium oxysporum en
plntulas de papayo.
14
III. REVISIN DE LITERATURA
3.1. El cultivo de papayo (Carica papaya L)
Se estima que la produccin mundial de frutas tropicales para el ao 2000

fue de 61.4 millones de toneladas, de las cuales, la papaya aport cerca
de 8.4 millones de toneladas, siendo Amrica Latina y el Caribe los
principales productores de esta fruta con cerca de la mitad de la
produccin mundial. Mxico es uno de los principales pases productores
de esta fruta con mas de 361,274 toneladas, ocupando el Estado de
Veracruz el primer lugar con aproximadamente 239,890 toneladas (66.4%
de la produccin nacional) seguido por los estados de Jalisco y
Michoacn con 39,647 y 37,330 toneladas, respectivamente (FAO, 2001).
Los principales municipios productores dentro de la entidad veracruzana
son Paso de Ovejas, Puente Nacional, Manlio F. Altamirano y Soledad de
Doblado, con cerca del 60% de la produccin de este estado (Cuadro 1)
(SAGARPA, 1999).
Cuadro 1. Participacin de los principales municipios productores de

papaya en el Estado de Veracruz (SAGARPA, 1999).
Municipio Superficie Produccin (ton) Participacin
sembrada (ha) (%)
Paso de Ovejas 2313 81480 23.24
Tierra Blanca 1990 16377 4.67
Puente Nacional 1860 65380 18.65
Soledad de Doblado 1147 28600 8.16
Manlio F, Altamirano 1112 29650 8.46
Cotaxtla 572 14352 4.09
Actopan 549 16840 4.80
Isla 410 24600 7.02
Otros 3779 73375 20.91
15
Sin embargo y a pesar que la produccin de papaya origina importantes
divisas para los principales pases productores del mundo en vas de
desarrollo como Mxico, Brasil, Nigeria, Tanzania y Zaire; los niveles de
tecnologa para su manejo son inadecuados sobre todo para el control de
plagas y enfermedades, maleza y manejo poscosecha del fruto, los cuales
representan perdidas importantes para el cultivo desde el semillero hasta
campo (Malo y Campbell, 1994; Smith et al., 1995). Por lo que toda
investigacin que se pueda realizar en el mbito regional, estatal y
nacional en nuestro pas para coadyuvar en estos problemas importantes
que disminuyen la produccin, aumentara notablemente los rendimientos
que ayudarn a lograr un dominio en la produccin de esta fruta en el
mercado mundial, trayendo grandes beneficios tanto para Veracruz como
para Mxico (Gheno, 1998).
3.1.1. El damping-off, principal enfermedad en semillero
Unos de los problemas ms importantes que atacan al cultivo del papayo

(Carica papaya L) en semillero es la enfermedad conocida como
damping-off, secadera o mal del talluelo, que es causada por patgenos
del suelo como Fusarium sp., Phytophthora sp., Pythium sp., Rhizoctonia sp.,
entre otros, todos ellos ocasionan pudriciones de raz y tallo, surgiendo
sntomas alarmantes ya que la destruccin de estos rganos es tan rpida
y letal que da como resultado la muerte de las plantas (Saldaa et al.,
1985; Venette y Gross, 1992; Snchez, 1994).
Estos hongos son parsitos no obligados que viven, se desarrollan y

propagan en el suelo, comnmente localizados en climas tropicales donde
la humedad del suelo es ideal para su crecimiento y desarrollo,
reproducindose por medio de micelio o conidios (Agrios, 1998).
16
3.1.1.1. Fusarium sp. causante del damping-off
El inters de los patlogos por Fusarium sp. empieza en los aos 80s,
debido a su amplio espectro de ataque principalmente en plantas
vasculares de inters agronmico, las cuales destrua en poco tiempo
(Kistler, 1997). Dentro de este tipo de hongo imperfecto, las especies ms
importantes que causan marchitamiento vascular, pudriciones a las
semillas, plntulas (ahogamiento), pudriciones de raz, tallos inferiores,
tubrculos, coronas y bulbos, son Fusarium solani, F. roseum y F. oxysporum,
destacando este ultimo por su gran agresividad, atacando diversos cultivos
como caf, pltano, caa de azcar, papayo, pastos, la mayora de las
hortalizas anuales y herbceas perennes de ornato, entre otros (Gonzlez,
1989; Ocamb y Comedla, 1994; Rekah et al., 1999).
Pertenece a la Divisin Ascomycota, Clase Euascomycetes, Orden

Hypocreales y Familia Hypocreaceae. Se propaga por el suelo en forma de
micelio, en ocasiones por esporas, conidios o esclerocios, los cuales son
llevados por el agua, viento, herramienta agrcola, trasplantes, semillas o
esquejes de plantas infectadas y algunas veces por insectos, sobreviviendo
por meses o incluso aos dependiendo del tipo de suelo y de las
condiciones ambientales (Gordon et al. 1992; Freeman et al., 2002).
Su marcada variabilidad en cuanto a sus caractersticas fisiolgicas y

morfolgicas explica su capacidad para colonizar diversos nichos
ecolgicos diseminados por todo el mundo, actualmente la mayora de
estas especies estn clasificadas con base a sus caractersticas macro y
microscpicas del cultivo como el tipo de clamidosporas, monofialide,
conidias, macroconidias, entre otros (Figura 1), siendo su morfologa la
clave para su identificacin, debido a que su forma es constante y estable
17
cuando el hongo crece en substratos naturales y/o condiciones estndar
(Monzn y Rodrguez, 1999).
esporodoquia
Monofialide con
microconidias en
masa
polifialides
clula apical
Monofialide con cadena de

microconidias
macroconidias
clamidosporas
microconidias
clula basal
Figura 1. Caractersticas morfolgicas microscpicas del gnero Fusarium

(Nelson et al., 1983)
De las diversas especies de Fusarium, la especie oxysporum es la mas

comn debido a que su distribucin es universal, se asla como saprfito
del suelo y de numerosas plantas (cereales, soja, algodn, papayo,
pltano, cebolla, papa, manzana, etc.), como fitopatgeno causa
grandes prdidas econmicas, sus microconidias son ovoides o en forma
de rin, con un tamao de 5-12 x 2,3-3,5 m y, ocasionalmente, con uno o
dos tabiques. Nacen de monofilides laterales, cortas y anchas, afiladas
hacia la punta, con collaretes poco definidos, solitarias o ramificadas. Las
microconidias pueden formar masas (simulan cabezas) pero nunca
cadenas. Las macroconidias tienen de uno a cinco septos. Su tamao es
de 23-54 x 3-4,5 m. Tienen forma de media luna, ligeramente curvadas,
18
con pared fina y delicada. Su clula apical es afilada y la clula basal con
forma de pie pero pueden tener ambos extremos afilados. En la mayora
de los cultivos las clamidosporas son abundantes. Son grandes, hialinas, de
pared lisa o rugosa y pueden observarse aisladas o en parejas, intercalares
o terminales (Nelson et al., 1994; Monzn y Rodrguez, 1999).
Este hongo se presenta en regiones templadas y clidas, ya sea en los

trpicos y subtrpicos, principalmente en suelos arcillosos, con pobre
aireacin, mal drenaje y una humedad muy alta, llegando a ser menos
dainos o raros en climas fros, puede sobrevivir en el suelo por tiempo
indefinido, haciendo su control casi imposible o ineficiente, siendo la forma
ms efectiva el uso de variedades vegetales resistentes las cuales se
pueden mantienen por un periodo largo de tiempo sin ser afectadas por
este tipo de patgenos del suelo (Smiley y Uddin, 1992; Gracia-Garza y
Fravel, 1998; Baird y Carling, 1998).
3.1.1.2. Desarrollo de la enfermedad
La forma de invadir de este fitopatgeno empieza cuando los tubos

germinales de las esporas o el micelio existente en el suelo penetra por la
raz o por alguna herida al nivel de las races de las plantas, propagndose
dentro de la corteza de la raz, llegando a los vasos xilmicos, donde se
mantiene en ese sitio viajando a travs de ellos de forma ascendente
hacia toda la planta. El micelio se ramifica y produce microconidios, los
cuales causan una obstruccin de los vasos, dando como resultado una
alteracin en un volumen mnimo de agua disponible para las hojas y
funcionamiento de la planta, trayendo como consecuencia cierre de los
estomas, hojas marchitas y la muerte del resto de la planta (Smith et al.,
1992; Skovgaard et al., 2001).
19
3.1.1.3. Control de la enfermedad
Los problemas causados por este tipo de enfermedades del suelo en el

cultivo de papayo ha sido siempre una de las limitaciones ms importantes
en su manejo, tradicionalmente el control de estos organismos
fitopatgenos se ha basado en la utilizacin de plaguicidas sumamente
txicos, los cuales a travs de los aos permanecen activos por tiempos
indefinidos en el suelo, trayendo como consecuencia un problema de
contaminacin ambiental en perjuicio tanto para el agroecosistema como
para la salud del hombre (Rodrguez-Kabana, 1990; Lloyd, 1992; Hamm,
2001).
Actualmente existen alternativas de manejo de los cultivos mediante la

biotecnologa aplicada la cual ofrece soluciones a estos problemas
mediante el aprovechamiento de ciertas tecnologas con un alto grado
cientfico, las cuales se encuentran ntimamente ligadas a la produccin
agrcola sin causar algn dao a la naturaleza (Torres, 1996), manteniendo
un equilibrio entre el suelo, biota y medio ambiente (Vandermeer, 1995).
Involucrando en estos procesos el manejo de agentes microbianos

capaces de fijar nitrgeno atmosfrico, bacterias promotoras del
crecimiento vegetal, hongos micorrzicos, agentes antagnicos en el
control biolgico de plagas y enfermedades de las plantas, produccin de
compostas y vermicompostas, siendo factible de esta manera la
disminucin de agroqumicos y plaguicidas, contribuyendo a la
sostenibilidad de los sistemas productivos y del entorno ecolgico (Ferrera-
Cerrato, 1995; Jonson y Dileone, 1999). Aunque en Mxico es poco el uso
de agentes microbianos contra patgenos de plantas (Zavaleta-Meja,
1996), el control biolgico se ha practicado mediante el empleo de
20
bacterias y hongos los cuales han demostrado ser altamente eficientes en
el control de estos organismos (Barea, 1998).
3.2. Rizobacterias y hongos micorrzicos con capacidad de proteccin en

las plantas
Dentro de la gama de microorganismos que habitan en el suelo e

interactan con las plantas existen algunos grupos con capacidad para
controlar e inhibir a fitopatgenos, destacando a las rizobacterias (PGPR) y
los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) como los organismos
antagnicos ms importantes encontrados en el suelo, ya que a travs de
los aos se ha reportado que estos organismos son capaces de proteger a
las plantas mediante contra diversos patgenos del suelo como Phytium
sp., Phytophthora sp., Rhizoctonia sp., Fusarium sp., entre otros (Azcn-
Aguilar y Barea, 1996a; Rosales et al., 1995; Wei et al., 1996; Barea, 1998;
Raupach y Kloepper, 1998).
Sin embargo generalmente el uso de rizobacterias y hongos micorrzicos en

las plantas como agentes de control biolgico ha sido de manera
individual por lo que si se llegaran a inocular de manera simultnea estos
dos microorganismos en las plantas probablemente se pudieran generar
una serie de mecanismos beneficiosos que repercutiran en la sanidad
vegetal, considerando estas interacciones objetivos principales de
investigacin a abordar en ambientes naturales y agrcolas (Hamel, 1996;
Larkin et al., 1998; Azcn, 2000; Mar et al., 2000).
3.2.1. Mecanismos de proteccin de las rizobacterias en las plantas
Kloepper y Schroth (1978) clasificaron a las rizobacterias como PGPR (plant

growth promoting rhizobacteria, por sus siglas en ingles) o rizobacterias
21
promotoras del crecimiento vegetal, la cual segn Schroth y Hancock
(1982) definieron como un organismo con alta agresividad para colonizar a
las races de las plantas, siendo este proceso de colonizacin el que
desplazaba eficientemente a otros microorganismos del suelo ejerciendo
un control de fitopatgenos del suelo.
Sin embargo a travs de los aos las investigaciones han demostrado que
estos no solo desplazan de manera eficiente a otros organismos sino que
tambin pueden generar diferentes vas de proteccin para las plantas
mediante la produccin de metabolitos como los siderforos, cido
cianhdrico (HCN), antibiticos (como el 2,4-Diacetilfloroglucinol) e incluso
reportes recientes indican que las rizobacterias inducen un sistema de
resistencia (ISR) en las plantas, que hace que estas puedan sobrevivir al
ataque de diversos patgenos del suelo (Bagnasco et al., 1998; Zehnder et
al., 2000; Park y Kloepper, 2000; Mavrodi et al., 2001; Whipps, 2001).
3.2.1.1. Las rizobacterias y sus metabolitos implicados en el control

biolgico de enfermedades
Ambrosi et al. (2000) y Mercado-Blanco et al. (2001), mencionan que la

eliminacin principalmente de patgenos por las rizobacterias se debe a la
produccin de siderforos que estos microorganismos sintetizan cuando
existe una baja cantidad de fierro en el suelo, estos metabolitos son
compuestos de bajo peso molecular afines al ion Fe+ (Telford y Raymond,

1997) que permite atraparlo y absorberlo a travs de una membrana
receptora, esta produccin esta regulada por tres genes; el sid B que se
encarga de bio-sintetizar el sideroforo, el sid U que lo absorbe y el sid R el
que regula la entrada y salida del compuesto (OSullivan y OGara, 1992)
(Figura 2).
22
Cromosoma
+ Activador
sid B sid U sid R
Represor
__
Fe2+
Sideroforo
fluorescente
Membrana receptora
sideroforo-fierro
Fe3+
Figura 2. Modelo propuesto sobre la absorcin de fierro por Pseudomonas

fluorescentes (Eland y Chet, 1987; Morris et al., 1992)
Una vez que el fierro ingresa a la bacteria este es convertido de ion Fe+ a
Fe2+ por medio de una reaccin enzimtica de xido-reduccin, el cual

una vez reducido lo utiliza para su crecimiento y desarrollo (Kloepper,
1993). Al atrapar (quelar) la rizobacteria a este micronutrimento del suelo
hace que este elemento no este disponible para otros microorganismos
que carezcan del sistema de asimilacin, o bien que su sideroforo posea
una menor afinidad por el fierro, lo que asegura que la rizobacteria sea la
nica capaz de asimilarlo limitando as el crecimiento de otros organismos,
ejerciendo de esta manera el control biolgico de enfermedades
importantes como Fusarium sp. (Duijff et al., 1999; Landa et al., 2001),
Pythium sp., Rhizoctonia sp. (Mahaffee y Backman, 1993; Rankin y Paulitz,
1994), y Phytophthora sp., (Liu et al., 1995). Siendo las Pseudomonas
fluorescentes las que particularmente expresan un potencial como
23
agentes de control biolgico al ser productoras de diversos siderforos
como pseudobactinas, ferribactinas, pioverdinas, pioquelinas, tioforminas,
entre otros (Andriollo et al., 1992; Cook, 1993; Raaijmakers et al., 1995;
Monne-Lloccoz et al., 1996; Duffy y Dfago, 1999; Boer et al., 1999).
Otro de los compuestos microbianos que producen las rizobacterias es el

cido cianhdrico (HCN) (Schippers, 1988), el cual juega un papel muy
importante como supresor de fitopatgenos del suelo, sin embargo esta
inhibicin de otros microorganismos tambin afecta el crecimiento de las
races de las plantas (Bakker y Schipper, 1987; Voisard et al., 1989; strom,
1991; Kunz et al., 1998).
Sin embargo este efecto negativo algunas veces puede ser beneficioso
para las plantas, debido a que el HCN inhibe la oxidacin del citocromo
en el proceso de respiracin, el cual a su vez retrasa la oxidacin de
electrones NADH en la mitocondria reduciendo los niveles de respiracin,
haciendo que las plantas sufran de estrs lo que hace modificar su
metabolismo permitindole generar mecanismos de resistencia sistemica
que la ayudan indirectamente a tolerar el ataque de fitopatogenos del
suelo (Wei et al., 1991; Kloepper et al., 1997 y Pieterse et al., 2001).
Las rizobacterias pueden inducir alteraciones en la fisiologa de la planta,

haciendo que se incrementen las defensas induciendo un sistema de
resistencia en las plantas (Leeman et al., 1995; Hoffland et al., 1996; Han et
al., 2000). Las diferencias de la resistencia sistmica inducida (RSI) como
antagonista en comparacin con un mecanismo de control biolgico son
los siguientes:
24
a) La accin de la RSI esta basada en el mecanismo de defensa de la
planta que puede ser activada o inducida por agentes externos, mientras
que los antagonistas tienen una funcin directa en el control biolgico de
agentes patgenos por medio de antibiticos, sideroforos y cido
cianhdrico (HCN) o como competidores de nutrientes (Wei et al., 1996;
Chen et al., 1999a)
b) La RSI una vez expresada, activa un potencial mltiple de mecanismos

de defensa como lo es el incremento de la actividad de citocininas,
protenas, cido saliclico, produccin de sustancias antimicrobianas de
bajo peso molecular (ejemplo las fitoalexinas) (Rosales et al., 1995; Chen et
al., 1999b) y la formacin de biopolmeros de proteccin (ejemplo la
lignina, celulosa y glicoprotenas) (Bloemberg y Lugtenberg, 2001) y,
c) Un aspecto importante de la RSI es el amplio espectro de patgenos

que puede controlar con solo inducir este sistema, en pepino controlaron
trece patgenos (entre hongos, bacterias y virus) que ocasionaban
necrosis en las hojas, mientras que un organismo antagonista
generalmente no puede disminuir el ataque de diversos patgenos
(Kloepper et al., 1992; Pieterse et al., 2001).
Finalmente algunas rizobacterias principalmente del gnero Pseudomonas

sp. tienen la capacidad de producir antibiticos los cuales estn
involucrados directamente con la inhibicin de otros microorganismos del
suelo, como ejemplo de estos compuestos tenemos al poliquetido 2,4-
Diacetilfloroglucinol (DAPG), omicina, fenazina, pirrolnitrina, pioluteorina,
entre otros, los cuales han mostrado ser altamente eficiente en el control
biolgico de fitopatgenos (Handelsman y Stabb, 1996; Raaijmakers et al.,
25
1999; Schnider-Keel et al., 2000; Mavrodi et al., 2001; Monne-Loccoz et al.,
2001; Notz et al., 2001).
3.2.2. Mecanismos de proteccin de los hongos micorrizicos en las plantas
Los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) han sido reportados como

microorganismos que ejercen un efecto supresivo contra patgenos que
causan enfermedades en las races de las plantas (Azcon-Aguilar y Barea,
1996b; Trotta et al., 1996, Larsen y Bodker, 2001). Algunos autores
mencionan que estos mecanismos de control biolgico estn relacionados
con cambios en la morfologa, fisiologa y bioqumica del hospedero, las
alteraciones morfolgicas se reportan que estn relacionadas con la
lignificacin de la pared celular de las plantas, donde resulta difcil la
penetracin del tejido por los patgenos del suelo (Cordier et al., 1998),
fisiolgicamente el incremento en la concentracin de fsforo y potasio en
los tejidos de las plantas, hacindolas menos susceptibles a las
enfermedades del suelo (Graham, 1983) y finalmente bioqumicamente,
por que la asociacin micorrzica eleva los contenidos de aminocidos
(como la arginina y fenilaminas), fenoles, ligninas, flavonoides (fitoalexinas)
y enzimas como la quitinasa, encontrados algunos de ellos tanto en el rea
foliar como en el sistema radical desencadenan con esto un sistema de
resistencia en las plantas lo que les permite resistir el ataque de los
patgenos del suelo (Sieverding, 1991; Scharff et al., 1997; Benabdellah et
al., 1998; Dais et al., 1998; Fusconi et al., 1999; Slezack et al., 1999).
Al respecto Young y Hwang (1994), reportan que la resistencia de las

plantas hacia el ataque de los fitopatgenos se debe en gran medida a la
presencia de protenas dentro del hospedero, las cuales tienen un papel
importante en el impedimento del desarrollo de la enfermedad hacia los
tejidos vegetales de las plantas. Sin embargo Gianinazzi-Pearson et al.,
26
(1996) y David et al. (1998), encontraron que los hongos micorrizicos
pueden suprimir la presencia de protenas dentro del hospedero. Por su
parte Shaul et al. (1999), analizan si esta interferencia en la activacin de
protenas se restringe solo a la zona infectada o colonizada, por lo que es
importante conocer si estos endfitos inducen o suprimen la expresin de
los mecanismos asociados a la resistencia de las plantas.
En los ltimos aos los investigadores se han enfocado en la bsqueda de

los genes que estan ntimamente ligados con la expresin de la defensa de
las plantas micorrizadas hacia el ataque de los fitopatgenos, incluyendo
los genes que codifican enzimas hidrolticas como las quitinasas y -1,3-
glucanasas (Lambais y Mehdy, 1995; Blee y Anderson, 1996; Pozo et al.,
1999). La induccin de estas enzimas por los HMA han tomado mayor
atencin debido a su posible implicacin en la regulacin de la simbiosis
hongo-hospedero y a la proteccin de las plantas (Azcon-Aguilar y Barea,
1996c; Dumas-Gaudot et al., 1996; Lambais y Med, 1996; Pozo et al., 1998).
Ambas, quitinasas y -1,3-glucanasas son compuestos biolgicos con
diferentes formas y caractersticas qumicas, actividades enzimaticas,
localizacin celular y propiedades antifngicas las cuales pueden estar
expresadas en diferentes rganos y tejidos de las plantas, estas enzimas
juegan un papel importante en la hidrlisis de la pared celular de los
hongos fitopatgenos, considerndose importantes en los mecanismos de
defensas de las plantas contra estos hongos (Simmons, 1994; Kim y Hwang,
1997).
Caron (1989) y Cordier et al., (1996), sealan que otro de los mecanismos
por el cual los HMA pudiera ejercer una influencia en los patgenos del
suelo, es debido a que al penetrar a las races de la planta hospedera
otorga una proteccin contra la penetracin de las hifas o micelio de otros
hongos especialmente los fitopatgenos, obstaculizando sus procesos de
27
infeccin hacia la raz inhibiendo su crecimiento y por consecuencia
disminuyendo su capacidad de invasin hacia la planta. Otro mecanismo
indirecto que pudiera beneficiar a las plantas micorrizadas contra el
ataque de los patgenos es su mejora en la nutricin, ya que una vez que
las plantas estn colonizadas por estos microorganismos estas presentan un
mayor crecimiento y desarrollo que aquellas no inoculadas, debindose
principalmente a que esta simbiosis incrementa la capacidad de las races
para absorber fsforo y otros iones poco mviles del suelo como el cobre,
zinc, magnesio, azufre, manganeso, cloro, hierro, calcio, nitrgeno, boro y
molibdeno (Cooper, 1984; Chen et al., 1999; Hawkins et al., 1999; Jakobsen
et al., 2001).
3.3. Interaccin entre PGPR y HMA
3.3.1. Efecto de las rizobacterias en la fisiologa de los HMA
En aos recientes se ha encontrado que las rizobacterias juegan un papel

muy importante en el desarrollo y crecimiento de los HMA, influyendo de
manera directa en la germinacin de espora (Mayo et al., 1986; Paulitz y
Linderman, 1989; Wilson et al., 1989), estimulacin del crecimiento del
micelio externo, incremento en el establecimiento de los HMA en el
hospedero, entre otros, sin embargo tambin pueden inhibir o aumentar el
nmero de estos propgulos infectivos en la rizosfera y el porciento de
colonizacin de las plantas (Daniels y trappe, 1980; Gryndler y Vostka,
1996; Toro et al., 1997; Budi et al., 1999; Vostka y Gryndler, 1999).
Linderman (1988) y Frey-Klett et al., (1999), comentan que el

establecimiento y colonizacin de los HMA sobre el hospedero aumenta
significativamente cuando estos dos microorganismos son inoculados de
manera dual en las plantas, incrementando la eficiencia de estos endofitos
28
en las plantas. Por su parte Azcon (1987), reporta resultados parecidos al
mencionar que las rizobacterias tienen un efecto directo en el incremento
de la colonizacin del hospedero y germinacin de las esporas, un ejemplo
de esto es lo encontrado por Fester et al., (1999) cuando la colonizacin
micorrzica alcanzada solo con Glomus intraradices fue de 20%, mientras
que la co-inoculacin con Pseudomonas fluorescens, Rhizobium
leguminosarum y Agrobacterium rhizogenes aument la colonizacin en un
40%, 50% y 60%, respectivamente.
Singh y Kapoor (1999), encontraron resultados similares cuando los

porcentajes de colonizacin aumentaron en plantas de trigo que fueron
inoculadas en forma conjunta con PGPR y HMA (Glomus sp.),
incrementndose tambin los contenidos de nitrgeno, fsforo y biomasa
total en las plantas. Por su parte Fitter y Garbaye (1994), explican que el
efecto principalmente de las rizobacterias sobre los HMA est en el ciclo
de vida de estos ltimos (Cuadro 2).
Cuadro 2. Efecto de microorganismos del suelo sobre el ciclo de vida de

los HMA (Fitter y Garbaye, 1994)
Fase Proceso Efecto Microorganismo
Germinacin de Qumico Inhibitorio Bacteria
esporas
Colonizacin Interaccin Estimulacin Bacteria
Cobertura hifal Incierto Inhibitorio Hongos y nematodos
Crecimiento hifal Incierto Desconocido Invertebrados
Esporulacin Desconocido Estimulacin Bacteria
Azcon y Barea (1985) y Gryndler et al., (1995), reportan que el uso de

esporas desinfectadas de HMA dan como resultado un desarrollo nulo por
parte de estos endfitos, lo que sugiere que la microflora bacteriana
contenida en la superficie de la espora es importante para el desarrollo del
29
hongo tanto en el suelo como en la raz. Resultados que concuerdan con
los reportados por Schreiner y Koide (1993), quienes desinfectaron esporas
de Glomus etunicatum con el antibitico estreptomicina, las cuales fueron
inoculadas en plantas de lechuga, encontrando que el efecto de la
desinfeccin de la espora trajo como consecuencia una disminucin en el
crecimiento del hospedero, baja absorcin de fsforo y poca colonizacin
de este endofito, lo que sugiere que al eliminar los microorganismos
(principalmente bacterias) adheridos a la superficie de la espora disminuye
la respuesta de los HMA en sus procesos de colonizacin de la raz.
Bianciotto et al., (1996), revelan que existen bacterias que habitan

intercelularmente dentro de las esporas de los HMA, las cuales viven, se
reproducen y se mueven desde el interior de las esporas hasta el micelio
cuando estas llegan a germinar, por lo que estos organismos son
considerados importantes como componentes del citoplasma de los HMA
y para el establecimiento de estos endfitos en las plantas.
Sin embargo algunas veces estas interacciones no funcionan como lo cita

Marschner y Crowley (1996b), donde encontraron que la interaccin entre
cepas de Pseudomonas fluorescens, Glomus deserticola y Glomus
intraradices disminuy el porcentaje de colonizacin para la primera
especie de HMA, as mismo la interaccin entre estos microorganismos
redujo la poblacin de rizobacterias hasta en un 50%. Hodge (2000), por su
parte comenta que se puede reducir la germinacin de esporas, la
produccin de micelio y el porcentaje de colonizacin. Lo que sugiere que
el antagonismo o sinergismo de esta interaccin entre HMA y PGPR esta
dado por el contacto fsico de estos microorganismos en la rizosfera de las
plantas y por el tipo de especie que acompaa esta interaccin (McAllister
et al., 1994; Requena et al., 1997; Ravnskov et al., 1999a).
30
3.3.2. Efecto de los HMA en poblaciones de rizobacterias
Olsson et al. (1996) y Andrade et al., (1998) proponen que las interacciones
entre rizobacterias y HMA en la rizosfera pueden tener efectos de inhibicin
hasta estimulacin de la esporulacin para el caso de los hongos
micorrizicos y mayor cantidad de unidades formadoras de colonias (UFC)
para el caso de las rizobacterias. No obstante los hongos micorrizicos no
solo influyen en la cantidad de rizobacterias que existen en el suelo, sino
que tambin tienen un efecto directo en el establecimiento y colonizacin
de estos microorganismos en las races de las plantas (Azcn y Barea,
1996).
Por su parte Krishna et al., (1982), Paulitz y Linderman (1989), Christensen y

Jakobsen (1993), Amora-Lozano et al., (1998), encontraron que la
presencia de estos hongos endfitos asociados a las rizobacterias tuvo un
impacto importante en el aumento y actividad de las poblaciones. Sin
embargo, el nmero de ellas puede disminuir considerablemente debido a
la afinidad entre los HMA y la(s) especie(s) que compongan las
poblaciones bacterianas en la rizosfera, pueden verse afectadas si existe
un retraso en el proceso de colonizacin de los HMA como tambin la
etapa de inoculacin de los microorganismos en las plantas. Por ejemplo
algunas poblaciones de Pseudomonas sp. generalmente se ven
disminuidas por la colonizacin de los hongos micorrizicos, debido a que las
races micorrizadas disminuyen la cantidad y composicin de los exudados
radicales, influyendo en la densidad poblacional y en el estado fisiolgico
de la bacteria en la rizosfera (Dixon et al., 1989; Posta et al., 1994;
Marschner y Crowley, 1996).
Meyer y Linderman (1986) observaron una mayor poblacin de bacterias

anaerobias facultativas en la rizosfera de plantas de trbol colonizadas
31
con el hongo micorrzico Glomus fasciculatum en comparacin con
plantas de maz micorrizadas con el mismo hongo. Por su parte Schreiner et
al. (1997), aislaron y cuantificaron diferentes grupos bacterianos (gram-
negativos y gram-positivos) en plantas de soya cuando estas fueron
inoculadas con diferentes hongos micorrzicos (Glomus etunicatum, G.
mosseae y Gigaspora rosea), estos resultados parecen indicar que la
hifosfera de estos hongos (definida como elvolumen de suelo que se
encuentra influenciado por el micelio externo de los hongos micorrzicos)
influye sobre ciertos grupos de bacterias, cuantificando mayor poblacin
cuando el micelio era menos extenso (caso particular de G. etunicatum) e
incrementando estos niveles poblacionales para las gram-positivas cuando
los niveles de fsforo en el suelo eran bajos.
Los efectos donde se benefician estos dos microorganismos pudieran

deberse a la competencia de carbono en la rizosfera (Jonson et al., 1997),
aunque tambin pudiera existir otros mecanismos por los que la inhibicin
entre HMA y rizobacterias se puede dar, por ejemplo: (1) la influencia de los
hongos sobre la cantidad de carbono que las plantas pueden derivar y
que pueden ser utilizadas por las comunidades microbianas (Garland,
1996), (2) competencia por espacio (Ames et al., 1984), (3) las condiciones
desfavorables fsicas y qumicas del suelo y (4) las poblaciones predadoras
del suelo (Andrade et al., 1998).
3.4. Efecto de la inoculacin dual de PGPR y HMA en las plantas
Subba et al. (1985), encontraron que la doble inoculacin de HMA y PGPR,

increment significativamente el porciento de colonizacin de estos
endfitos en plantas de cebada, al mismo tiempo que se aument de
manera significativa la biomasa y el grano total en un 132% y 125%,
respectivamente en comparacin con las plantas no inoculadas.
32
Singh y Kapoor (1998), encontraron incrementos significativos cuando
inocularon plantas de Vigna radiata con rizobacterias solubilizadoras de
fsforo (Bacillus circulans) y HMA (G. fasciculatum), incrementando la
entrada de fsforo y nitrgeno en los tejidos de la planta, mejorando
significativamente la nutricin en las plantas inoculadas con estos dos
microorganismos en comparacin a las dems plantas, adems los valores
mas altos de colonizacin micorrzica (88%) se encontraron en las plantas
inoculadas de manera dual con estos dos microorganismos.
Azcon (1989), reporta un efecto benfico cuando plantas de jitomate

fueron inoculadas con PGPR y HMA, incrementndose el peso areo (88%)
y el contenido de nitrgeno (47%), fsforo (70%) y potasio (47%), con
relacin a las plantas sin inocular, adems de aumentar el porcentaje de
colonizacin micorrizica hasta en un 50% mas en comparacin a la
inoculacin con solo HMA. Resultados similares fueron reportados por
Gryndler y Hrselov (1998), donde plantas de maz inoculadas con
bacterias diazotrficas y Glomus fistulosum incrementaron su contenido de
fsforo en un 16%, por su parte Singh y Kapoor (1999), obtuvieron
incrementos del 68% en la concentracin de fsforo y nitrgeno en plantas
de trigo inoculadas con Bacillus circulans y Glomus sp. 88 con relacin a las
plantas sin inocular.
En otro estudio realizado por Bopaiah y Khader (1989), encontraron que los
niveles de peso seco y hmedo en pimienta negra se incrementaron tras su
inoculacin con Azospirillum sp. y HMA, llegando a tener un incremento en
altura de hasta 63 cm en relacin a las plantas testigo, resultados que
comprueban que puede ser mejor utilizar una mezcla de microorganismos
capaces de interrelacionarse entre s, que utilizarlos por separado.
Resultados similares fueron reportados por Pandwar (1991), encontrando
33
que al inocular trigo con PGPR y HMA, increment el peso, tamao y
rendimiento de grano (hasta en 16%) en comparacin con las plantas
testigo.
Hflich et al., (1994), sealan que la inoculacin de manera conjunta con

HMA y rizobacterias como Rhizobium sp. y Pseudomonas sp. tienen un
efecto positivo en el crecimiento de las plantas, lo cual hace necesario
analizar a fondo las interacciones entre microorganismos-planta y sus
efectos en la produccin de hormonas, competencia por espacio en la
raz, factores climticos, qumicos y fsicos del suelo y clima y su importancia
en el crecimiento de las plantas.
Gryndler et al,. (1995), encontraron que plantas de maz inoculadas de

manera dual con bacterias y HMA (G. fasciculatum) incrementaron el
porcentaje de colonizacin micorrizica (en un 88%) y el contenido de
fsforo (117%) y magnesio (13%) en los tejidos de las plantas. Por su parte
Kim et al. (1998), encontraron que doble inoculacin con PGPR
(Enterobacter agglomerans) y HMA (G. etunicatum) estimularon
significativamente el peso fresco del follaje (13.49 g) y el contenido de
fsforo (3.40 mg) y nitrgeno (60.31 mg) en los tejidos de plantas de tomate
inoculadas con estos dos organismos comparadas con las plantas sin
inocular.
Staley et al., (1992), al inocular plantas de alfalfa y trbol con P. fluorescens

y HMA encontraron que el crecimiento en altura fue un 23% ms que el
testigo. As mismo, lograron observar que obtuvieron decrementos en la
cantidad de biomasa cuantificada, con los tratamientos rizobacteria y
hongo. Esto pudiera deberse a que Pseudomonas produce sustancias
fngicas que debieron minimizar la colonizacin de los HMA, lo que estos
34
autores proponen que en futuras investigaciones se estudie los efectos de
las PGPR sobre los estados iniciales de colonizacin de los HMA, para
entender as, el concepto del manejo de las interacciones microbianas y su
efecto en el crecimiento de las plantas.
Dhillion (1992), encontr resultados similares al inocular HMA y

Pseudomonas sp. en plantas de arroz, observando una reduccin en la
colonizacin micorrzica cuando se inoculaba al mismo tiempo con la
rizobacteria, no obstante el tratamiento donde fueron inoculados estos dos
microorganismos fue el ms alto en cuanto a produccin de biomasa (2.79
g) y concentracin de fsforo (0.33 g) y nitrgeno (1.90 g) en los tejidos de
las plantas. Ravnskov et al., (1999b), observaron incrementos del 85% en la
biomasa radical y acumulacin de fsforo (de 0.67 mg) en plantas de
pepino inoculadas con P. fluorescens (cepa DF57) y G. intraradices,
adems que las poblaciones bacterianas que se contabilizaron se
incrementaron cuando estuvo presente el hongo micorrzico (en un 2.16 x
107 UFC) en comparacin a la poblacin que se cuantifico donde solo
estuvo la bacteria (1.55 x 107 UFC)
Azcn (1993), seala que los tiempos de inoculacin de las PGPR y HMA
puede ser de tres formas: 1) bacterias y hongos de manera simultnea, 2)
despus de la colonizacin micorrzica y 3) en forma repetida,
dependiendo su supervivencia de la calidad y cantidad de exudados
radicales. Por su parte Bashan (1986), comenta que los tiempos de
inoculacin son importantes para la obtencin de un mayor beneficio en
la planta, reportando una mejor respuesta del hospedero en semilla y
plantas jvenes que en plantas adultas.
35
IV. MATERIALES Y MTODOS
4.1. Trabajo en Laboratorio
4.1.1. Aislamiento de Pseudomonas fluorecentes nativas
Se tomaron al azar muestras de aproximadamente 500 g en campo de la

rizosfera de plantas de papayo, las cuales se mezclaron para obtener una
muestra compuesta (Roberts y Henry, 2001) que se ocup como sustrato
para la germinacin de semillas de papayo, mismas que 20 das despus
de su emergencia se ocuparon para tomar muestras de 25 g de races las
cuales se lavaron con agua destilada estril, se maceraron y agitaron por
cinco minutos, realizando diluciones decimales que se sembraron en
placas con medio de Agar Soya Tripticasa (AST) adicionado con 8-
Hidroxiquinolina, incubndose durante 48 horas a 28 C, las colonias ms
abundantes fueron seleccionadas y conservadas en viales a una
temperatura ambiente y en completa oscuridad (Muoz, 1993; Mahaffee y
Kloepper, 1997; Quadt-Hallmann et al., 1997).
4.1.2. Pruebas para la seleccin de la mejor cepa de Pseudomonas

fluorecentes
4.1.2.1. Antibiosis in vitro Pseudomonas fluorescentes Vs. Hongos

fitopatgenos
Para conocer la capacidad de antibiosis de las rizobacterias se

seleccionaron para este ensayo a Pythium sp. y Fusarium oxysporum, los
cuales fueron propagados en placas con medio: AST, AST + Peptona, PDA
y V-8 en presencia y ausencia de cloruro frrico (20 ppm), incubndose tres
placas (como repeticin) por medio de cultivo durante 2 das a
temperatura ambiente y en completa oscuridad, posteriormente se
36
estriaron las rizobacterias a una distancia de 2 cm de los fitopatgenos,
nuevamente fueron incubadas en oscuridad durante 72 horas, la
existencia de halo de inhibicin se cuantific en milmetros (Axelrood et al.,
1996; Sturz et al., 1998; Cottyn et al., 2001).
Los datos obtenidos fueron analizados empleando el programa MSTAT y

cuando se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos se
aplic la prueba de Tukey (P<0.05).
4.1.2.2. Identificacin de rizobacterias productoras de cido cianhdrico

(HCN)
Para la realizacin de esta prueba se sigui la metodologa propuesta por

Wei et al., (1991) y Mariano et al., (2000), la cual indica el estriado de la
rizobacteria en placas con medio AST suplementado con 4.4 g/L de
glicina, introduciendo al medio de cultivo tiras de papel filtro impregnadas
previamente con una solucin de cido pcrico (2.5 g/L) y carbonato de
sodio (12.5 g/L), haciendo que la tira se torne de color amarillo, la
produccin de HCN esta indicada como; nula si la tira de papel no
cambia de color, moderadamente si se torna caf y fuertemente si es roja.
4.1.2.3. Produccin e identificacin de siderforos
En este experimento se seleccion la rizobacteria que mayor halo de

inhibicin tuvo en el ensayo de antibiosis, la cual fue sembrada en medio
lquido de Meyer y Abdallah (1978), agitndose a 200 r.p.m. durante 48
horas a una temperatura de 25 C, pasado este tiempo se centrfugo el
medio a 11,500 r.p.m. extrayendo el sobrenadante para ser determinado
sus propiedades espectrales mediante el mtodo propuesto por Teintze et
al., (1981), para la identificacin del sideroforo.
37
4.1.3. Seleccin e identificacin de la especie de Pseudomonas que logr
el mayor rango de inhibicin contra los hongos fitopatgenos
Una vez realizada la prueba de antibiosis se eligi la rizobacteria que

mayor halo de inhibi logr contra los dos fitopatgenos, identificando la
especie segn Klinge (1960), Katoh y Itoh (1983), Fulghum (1994) y el
manual de Bergeys (1994), los cuales toman como base para la
identificacin de las especies de Pseudomonas caracteres morfolgicos y
bioqumicos muy especficos para cada una de ellas.
4.1.4. Concentraciones bacterianas y cuantificacin de unidades

formadoras de colonias (UFC)
Las concentraciones rizobacterianas utilizadas en los experimentos (109, 108,

106 y 104 clulasmL-1 de medio) fueron preparadas de la siguiente manera;
la primera concentracin fue ajustada por medio de un espectrofotmetro
marca Milton (Modelo 20D) a una absorbancia de 1, la cual fue tomada
como base para realizar diluciones decimales para ajustar las dems
concentraciones (Reddy et al., 1994; Glick et al., 1997), aplicando de cada
concentracin 1 mL por planta (Enebak et al., 1998).
Para la cuantificacin de unidades formadoras de colonias (UFC) se utiliz

el mtodo de dilucin para cuenta en placa realizando cinco repeticiones
por cada una de estas (Burr et al., 1978; Suslow y Schroth, 1982; Chiarini et
al., 1998), haciendo dos evaluaciones a las 24 y 48 horas posteriores a su
incubacin.
38
4.1.5. Preparacin del inculo de HMA
4.1.5.1. Propagacin de los HMA
El inculo micorrzico que se emple fue el complejo denominado MTZ-1,

compuesto por las especies; G. intraradices, G. mosseae, G. geosporum y
Gigaspora sp., proporcionado por el Laboratorio de Biotecnologa de la
Facultad de Ciencias Agrcolas, Campus Xalapa de la Universidad
Veracruzana, el cual tena un 80% de infectividad (determinado por las
tecnicas que en el inciso 4.1.5.2. y 4.1.5.3. se describen) al momento de la
inoculacin de las plantas y contaba con 12.5 esporas por gramo de
sustrato seco.
4.1.5.2. Clareo y tincin de races
El clareo y tincin de races se realiz mediante la tcnica propuesta por

Phillips y Hayman (1970), lavando las races que se tomaron como muestra
de las plantas de papayo con abundante agua, se cortaron en
fragmentos de aproximadamente un centmetro y se colocaran en frascos
segn los tratamientos agregndoles KOH al 10% hasta cubrir las races, se
metieron en autoclave durante aproximadamente 15 minutos a 10 libras
de presin, inmediatamente despus se sacaron y se les retir el KOH
enjuagndolas con agua destilada y agregndoles HCl al 0.1N dejndolas
reposar cinco minutos, transcurrido ese tiempo se elimin el cido y sin
enjuagar se cubrieron con azul tripano al 0.05% colocando los frascos en
autoclave por cinco minutos a 121 C, pasado este lapso el colorante se
elimin y las races se mantuvieron en cido lctico hasta su observacin.
39
4.1.5.3. Porciento de colonizacin micorrzica
Para la evaluacin de las races micorrizadas se utiliz la tcnica de

McGonigle et al. (1990), utilizando para esta metodologa un microscopio
marca Nikon modelo PFX con un aumento de 200X equipado con una
retcula ocular en forma de cruz, estimando el porciento de colonizacin
cuando el eje de la retcula tocaba cualquier estructura como hifa,
vescula o arbusculo en 100 observaciones. Los conteos realizados se
expresaron en porcientos mediante la siguiente formula:
Nmero de intersecciones colonizadas

% de colonizacin = 100 X -------------------------------------------------------------
Nmero total de intersecciones observadas
Los datos obtenidos en los ensayos realizados fueron analizados

empleando el programa MSTAT y cuando se presentaron diferencias
significativas entre las plantas colonizadas de los tratamientos se aplico la
prueba de Tukey (P< 0.05).
4.1.6. Aislamiento de hongos fitopatgenos causantes del damping-off en

plantas de Carica papaya L
4.1.6.1. Induccin de la enfermedad
Se tomaron al azar muestras en campo de aproximadamente 500 g de la

rizosfera de plantas de papayo, las cuales se mezclaron para obtener una
muestra compuesta (Roberts y Henry, 2001), que se ocup como sustrato
para la germinacin y emergencia de plntulas de papayo, manteniendo
el sustrato a capacidad de campo para propiciar una alta humedad
relativa para el desarrollo ptimo de hongos fitopatogenos causantes del
damping-off.
40
4.1.6.2. Aislamiento e identificacin de fitopatgenos causantes del
damping-off
Se aislaron los hongos de las plantas enfermas en placas con medio de

papa-dextrosa-agar (PDA) suplementado con tetraciclina (15 mL/L),
incubndose durante 20 das a 30 C en completa oscuridad (Ocamb y
Kommedahl, 1994; St-Arnaud et al., 1994; Raaijmakers et al., 1995; St-Arnaud
et al., 1997).
Su identificacin fue de acuerdo a lo propuesto por Domsch et al., (1980),

Nelson et al., (1983) y Nelson et al., (1994), los cuales toman como base sus
caractersticas morfolgicas. Para el experimento donde fue evaluado el
nmero de conidias se utiliz un hematocitmetro ajustando las
concentraciones a 3, 5 y 7 conidias por gramo de suelo seco (Reddy et al.,
1994).
4.2. Trabajo en Invernadero
4.2.1. Ubicacin del rea experimental
El trabajo de invernadero se llev a cabo en el campo experimental La

Bandera de Actopan, Veracruz, localizado a 360 m.s.n.m. a una Latitud
Norte de 19 27' 30'' y Longitud Oeste de 96 64' 20'' (Vazquez et al., 1992).
4.2.2. Material vegetal
Las semillas que se emplearon para todos los experimentos fueron de

papayo var. maradol las cuales se adquirieron en la compaa Western
Sedd, International B.V., Holanda, desinfectndose antes de ser utilizarlas
con hipoclorito de sodio al 10% (Berger et al., 1996).
41
4.2.3. Sustrato utilizado
El sustrato que se utilizo para todos los experimentos fue una mezcla de
suelo y arena (1:1) la cual previamente fue esterilizada con Basamid (a una
dosis de 40 g/m2), el cual ha mostrado ser un fumigante del suelo sin
residualidad y altamente eficiente (Lpez-Aranda et al., 2001; Melgarejo et
al., 2001). El anlisis del suelo lo realiz el Laboratorio de Alta Tecnologa de
Xalapa (LATEX), el cual report los siguientes resultados:
Cuadro 3. Anlisis de las propiedades fsico-qumicas del sustrato que se

empleo en el desarrollo de los experimentos
Determinaciones Resultados
Textura (Arena) 68 %
Textura (Limo) 11 %
Textura (Arcilla) 21 %
Densidad Aparente 1.13 g/mL
Color 5 YR 5/1
pH 7.8
Materia orgnica 2.2 %
Nitrgeno orgnico 0.11 %
Nitrgeno de nitratos 53.20 mg/kg
Fsforo 70.0 mg/kg
Potasio 0.80 me/100 g
Sodio 55.9 me/100 g
Calcio 33.1 me/100 g
Magnesio 1.8 me/100 g
Azufre 17 ppm
Hierro 6 ppm
Zinc 1.9 ppm
Manganeso 14.4 ppm
4.3. Fase experimental
4.3.1. Experimento 1. Dosis respuesta de plantas de papayo inoculadas con

la mejor cepa de Pseudomonas fluorecentes
Una vez seleccionada la bacteria que mejor controlo a los fitopatgenos in

vitro se realiz un ensayo de dosis respuesta, inoculando con diferentes
42
concentraciones a las plntulas de papayo, utilizando la cepa aislada de
maz A9 de Pseudomonas fluorescens como referencia, las
concentraciones se detallan a continuacin:
Cuadro 4. Descripcin de los tratamientos para el experimento dosis-

respuesta
Tratamiento Rizobacteria Dosis
Clave
(celulasmL-1)
1 Aislamiento de Pseudomonas sp. 109 Pp9
5 Pseudomonas fluorescens, A9 109 Pf9
9 Control Ninguna C
El diseo experimental empleado tuvo un arreglo completamente al azar

(Reyes, 1990) con nueve tratamientos y siete repeticiones y como unidad
experimental una planta, los datos obtenidos fueron analizados
empleando el programa MSTAT y cuando se presentaron diferencias
significativas entre las plantas de los tratamientos se aplic la prueba de
Tukey (P< 0.05) para separar las medias y determinar la existencia de
mnima significancia estadstica entre los tratamientos.
4.3.1.1. Variables evaluadas en el experimento dosis-respuesta

rizobacteria-papayo
I) Altura y nmero de hojas
La altura de las plantas fue cuantificada en centmetros a partir de la base

hasta la punta del tallo, el nmero de hojas fue contabilizado sin tomar en
cuenta las hojas cotiledonales, las mediciones para estas dos variables
43
tuvieron una periodicidad de cada nueve das a partir de la inoculacin
de los microorganismos.
II) Unidades formadoras de colonias (UFC)
Las unidades formadoras de colonias se cuantificaron por medio del

mtodo sealado en el inciso 4.1.4., contabilizando las UFC con una
periodicidad de cada nueve das a partir de la inoculacin de las
rizobacteras hasta el final del experimento (54 das despus de la
inoculacin), por cada dilucin se realizaron tres repeticiones.
III) rea foliar y biomasa
La determinacin de estas dos variables fue al final del experimento (54

das despus de la inoculacin), utilizando el programa UTHSCSA Image
Tool para la evaluacin en cm2 del rea foliar, para la biomasa en fresco
(peso follaje y raz) se emple una balanza digital Swiss Quality (Modelo
125ASCS) utilizando como unidad de medida los gramos, para el caso de
la biomasa en seco, el material vegetal fresco se meti en una estufa a 70
C durante tres das, evaluando el peso hasta que este fue constante (Toro
et al., 1997; Shishido y Chanway, 1998; Zhu et al., 2000).
4.3.2. Experimento 2. Susceptibilidad de plntulas de Carica papaya L al

ataque de hongos fitopatgenos causantes del damping-off
Una vez aislado e identificado el hongo patgeno causante del damping-

off (Fusarium oxysporum) en plntulas de papayo, se realiz un ensayo
para determinar la concentracin de conidios (Reddy et al., 1994) con la
que se manifiesta la sintomatologa de esta enfermedad (Cuadro 5).
44
Cuadro 5. Descripcin de los tratamientos para evaluar que concentracin
de conidias de Fusarium oxysporum enfermaban a plntulas de papayo de
damping-off
Tratamiento Patgeno Concentracin
1 Fusarium oxysporum 3 conidios/g de suelo seco
4 Control Ninguna
Una vez inoculadas las plantas con el patgeno estas se mantuvieron en

una cmara hmeda con una temperatura controlada de 28 2 C,
manteniendo el sustrato con una humedad entre el 80% y 85% dando las
condiciones mas favorables para el desarrollo de la enfermedad
(Hannusch y Boland, 1996; Landa et al., 2001).
El diseo experimental tuvo un arreglo completamente al azar (Reyes 1990)

con cuatro tratamientos y siete repeticiones y tres unidades experimentales
por cada repeticin, los datos obtenidos fueron analizados empleando el
programa MSTAT y cuando se presentaron diferencias significativas entre
las plantas de los tratamientos se aplic la prueba de Tukey (P< 0.05) para
separar las medias y determinar la existencia de mnima significancia
estadstica entre los tratamientos.
4.3.2.1. Variables a evaluar durante el desarrollo del experimento de la

susceptibilidad de Carica papaya L al ataque de hongos fitopatgenos
I) Severidad y necrosis
Para la evaluacin de la severidad y necrosis se utilizaron las escalas

propuestas por St-Arnaud et al., (1994), que indican lo siguiente:
45
Cuadro 6. Escala propuesta por St-Arnaud et al. (1994) para evaluar la
severidad del damping-off en plantas de Carica papaya L.
Escala Severidad
1 El tallo presenta de 0-1 manchas necrticas
5 El tallo presenta 1/3 de la superficie daada
Cuadro 7. Escala propuesta por St-Arnaud et al. (1994) para evaluar

necrosis causado por damping-off en plantas de Carica papaya L.
Escala Necrosis
1 Dao en la raz menor al 1%
2 Dao en la raz del 1 al 3%
5 Dao en la raz mayor del 10%
Para conocer el ndice se utiliz la metodologia propuesta por Dugassa et

al. (1996), en lacual se toman como base las escalas antes citada y se
utiliza la formula siguiente:
ndice de severidad (IS%) = ( (nxb / NxB) x 100

Donde:
n = Nmero de plantas de la misma clase
b = Clase
N = Nmero total de plantas medidas
B = Nmero total de clases
4.3.3. Experimento 3. Efecto de la inoculacin dual de Pseudomonas

fluorescentes y HMA en el control biolgico del damping-off en plntulas
de Carica papaya L
Una vez determinada la concentracin de respuesta tanto de la

rizobacteria como del hongo fitopatgeno, se inocularon plntulas de
46
Carica papaya con la mejor concentracin de Pseudomonas sp. (104 cel.
mL-1), hongos micorrzicos arbusculares (10 g por planta) y Fusarium
oxysporum (7 conidios/g de suelo seco), plantendose los siguientes
tratamientos:
Cuadro 8. Descripcin de los tratamientos para el experimento final

Tratamiento Descripcin Clave
1 Pseudomonas sp. 10 celulasmL
4 -1 P4
2 Pseudomonas sp. 10 celulasmL
9 -1 P9
3 HMA H
4 Pseudomonas sp. 10 celulasmL + F.
4 -1 P4F
oxysporum
5 Pseudomonas sp. 109 celulasmL-1 + F. oxysporum P9F
6 HMA + F. oxysporum HF
7 Pseudomonas sp. 104 celulasmL-1 + HMA P4H
8 Pseudomonas sp. 109 celulasmL-1 + HMA P9H
9 Pseudomonas sp. 104 celulasmL-1 + HMA + F. P4HF
oxysporum
10 Pseudomonas sp. 109 celulasmL-1 + HMA + F. P9HF
oxysporum
11 F. oxysporum F
12 Control C
Las plantas inoculadas con el patgeno se mantuvieron en una cmara

hmeda con una temperatura controlada de 28 2 C, manteniendo el
sustrato con una humedad entre el 80% y 85% dando las condiciones mas
favorables para el desarrollo de la enfermedad (Hannusch y Boland, 1996;
Landa et al., 2001). El diseo experimental tuvo un arreglo completamente
al azar (Reyes, 1990) con doce tratamientos y cinco repeticiones y tres
unidades experimentales por repeticin, los datos obtenidos fueron
analizados empleando el programa MSTAT y cuando se presentaron
diferencias significativas entre las plantas de los tratamientos se aplico la
prueba de Tukey (P< 0.05) para separar las medias y determinar la
existencia de mnima significancia estadstica entre los tratamientos.
47
4.3.3.1. Variables a evaluar en el experimento sobre inoculacin dual de
Pseudomonas fluorescentes y HMA en el control biolgico del damping-off
en plntulas de Carica papaya L
I) Altura y nmero de hojas
La altura de las plantas fue cuantificada en centmetros a partir de la base

hasta la punta del tallo, el nmero de hojas fue contabilizado sin tomar en
cuenta las hojas cotiledonales, las mediciones para estas dos variables
tuvieron una periodicidad de cada nueve das a partir de la inoculacin
de los microorganismos.
II) Unidades formadoras de colonias (UFC)
Las unidades formadoras de colonias se cuantificaron por medio del

mtodo sealado en el inciso 4.1.4., determinndose las UFC a los 32 das
despus de la inoculacin de las rizobacterias y al final del experimento.
III) rea foliar y biomasa
La determinacin de estas dos variables fue al final del experimento (63

das despus de la inoculacin), utilizando el programa UTHSCSA Image
Tool para la evaluacin en cm2 del rea foliar, para la biomasa en fresco
(peso follaje y raz) se empleo una balanza digital Swiss Quality (Modelo
125ASCS) utilizando como unidad de medida los gramos, en el caso de la
biomasa en seco se utilizo una estufa calibrada a 70 C, hasta alcanzar un
peso constante (Toro et al., 1997; Zhu et al., 2000)..
48
IV) Severidad y necrosis
Para la evaluacin de la severidad y necrosis se utilizaron las escalas

propuestas por St-Arnaud et al. (1994) (ver 4.3.2.1.1.), cuantificando estas
variables hasta el final del experimento.
V) Porciento de colonizacin micorrzica
El nivel de colonizacin se determin a los 32 das despus de la

inoculacin de los hongos micorrzicos y al final del experimento, la tcnica
de clareo y tincin que se utiliz se describe en el inciso 4.1.5.3. y para
calcular el porcentaje de colonizacin se ocup la formula descrita en el
inciso 4.1.5.4.
49
V. RESULTADOS
5.1. Seleccin de Pseudomonas
5.1.1. Aislamiento de Pseudomonas fluorescentes y su capacidad de inhibir

el crecimiento de fitopatgenos del suelo
Cincuenta y seis rizobacterias fueron aisladas de la rizosfera de Carica

papaya L. a partir del medio AST suplementado con 8-Hidroxiquinolina, de
las cuales solo ocho produjeron pigmento fluorescente amarillo-verdoso el
cual es muy caracterstico del genero Pseudomonas, sobre todo cuando
se crecen en medios con poco fierro disponible como el que se utiliz en
este experimento.
Solo las ocho rizobacterias fluorescentes se probaron en este caso, debido

a que se buscaba aislar una especie nativa de Pseudomonas con
capacidad antagnica contra hongos fitopatgenos causantes del
damping-off, logrando todos los organismos aislados inhibir en todos los
medios de cultivo probados, el crecimiento de F. oxysporum y Pythium sp.,
siendo la mas sobresaliente para estos dos casos la rizobacteria
catalogada con el nmero tres.
Cuando se realiz el anlisis de varianza, ste report diferencias

significativas (P<0.05), para el halo de inhibicin cuantificado a partir de las
72 horas despus de estriadas las rizobacterias en los medios de cultivo
donde crecan los dos hongos fitopatgenos. Para el caso de F.
oxysporum, la cepa nmero tres produjo los mayores halos de inhibicin del
crecimiento en todos los medio de cultivos probados, sobresaliendo en los
medios AST, AST + fierro y AST + peptona, con ms de 10 mm de inhibicin
(Cuadro 9).
50
Cuadro 9. Halo de inhibicin en mm cuantificado en diferentes medios con
rizobacterias y F. oxysporum
Halo de inhibicin (mm)
Nmero de AST +
aislamiento AST + AST + V-8 + PDA +
AST Peptona V-8 PDA
Fierro Peptona Fierro Fierro
+ Fierro
1 4.1 cd 3.9 b 3.9 b 3.1 c 0 c* 0 b* 0 b* 0 b*
2 3.9 d 4.1 b 3.2 c 4.2 b 0c 0b 0b 0b
3 11.1 a 10.1 a 11.2 a 9.2 a 7a 6a 4a 3a
4 3.1 de 4.1 b 3.2 c 3.1 c 0c 0b 0b 0b
5 5.1 b 4.2 b 4.1 b 4.1 b 3b 2b 0b 0b
6 4.1 cd 3.2 bc 3.1 c 3.2 c 0c 0b 0b 0b
7 2.9 e 3.1 c 3.1 c 4.2 b 0c 0b 0b 0b
8 4.9 bc 4.2 b 4.2 b 4.1 b 3b 2b 0b 0b
Pr > F 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
C.V. (%) 6.81 7.14 3.68 6.19 7.28 4.03 5.07 5.14
Valores con la misma letra son estadsticamente iguales (P<0.05)
*Los datos se transformaron para realizar el anlisis de varianza con la formula raz de (X+1)
Para el caso de Pythium sp. nuevamente la rizobacteria numero tres fue la

que mayor halo de inhibicin caus en el crecimiento de este hongo,
cuantificando mas de 9 mm en los medios AST, AST + Fierro y AST + peptona
(Cuadro 10).
Cuadro 10. Halo de inhibicin en mm cuantificado en diferentes medios

con rizobacterias y Pythium sp.
Halo de inhibicin (mm)
Nmero de AST +
aislamiento AST + AST + V-8 + PDA +
AST Peptona V-8 PDA
Fierro Peptona Fierro Fierro
+ Fierro
1 2.8 cd 3.8 bc 3.1 c 3.1 c 0 b* 0 b* 0 b* 0 a*
2 2.8 cd 2.9 cd 3.1 c 3.1 c 0b 0b 0b 0a
3 9.1 a 9.3 a 9.1 a 8.2 a 5a 4a 2a 1a
4 2.1 d 2.8 de 2.1 d 3.1 c 0b 0b 0b 0a
5 4.1 bc 4.1 b 3.1 c 3.0 c 1b 1b 0b 0a
6 3.2 cd 3.2 bcd 3.1 c 3.1 c 0b 0b 0b 0a
7 2.9 cd 2.1 e 2.1 d 3.0 c 0b 0b 0b 0a
8 4.8 b 4.1 b 4.1 b 4 b 1b 1b 0b 0a
Pr > F 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
C.V. (%) 12.13 7.31 7.00 9.10 4.96 4.87 5.83 4.34
Valores con la misma letra son estadsticamente iguales (P<0.05)
51
Con estos resultados se procedi a la seleccin de la rizobacteria
fluorescente tomando como base el mayor halo de inhibicin hacia en los
dos fitopatgenos en la mayora de los medios de cultivo probados, para
posteriormente ser identificada y probada en plntulas de papayo en
invernadero.
5.1.2. Rizobacterias con capacidad de producir cido cianhdrico
Del total de rizobacterias aisladas cuarenta y uno de ellas no produjeron

este compuesto, siendo las quince restantes las que sintetizaron el cido
cianhdrico (HCN) en diferentes intensidades.
Siendo solo cinco rizobacterias las que produjeron este compuesto de

manera fuerte, debido a la coloracin marrn que lograron cambiar en la
tira de papel filtro que se introdujo en el medio de cultivo donde estaban
creciendo, y diez organismos lograron producirlo de forma moderada
(cambio de color anaranjado), destacando dentro de estas ltimas a dos
cepas fluorescentes catalogadas como nmeros 5 y 8.
5.1.3. Siderforo producido por la rizobacteria seleccionada
Una vez caracterizadas las rizobacterias se seleccion la nmero tres,

determinndole el tipo de siderforo que produca mediante lecturas
espectrales. Cuantificando su pico mximo de absorcin en una longitud
de onda entre 400-410 nm a una absorbancia de 0.224, para lo cual segn
Teintze et al., (1981), est clasificado como del tipo pseudobactina las
cuales poseen en sus molculas porciones de tipo catecol e hidroxamato
(Figura 3).
52
0.24
Pico mximo: 400-410 nm
0.21
0.18
Absorvancia
0.15
0.12
0.09
0.06
0.03
0
0 70 140 210 280 350 420 490 560 630 700
Longitud de onda (nm)
Figura 3. Espectro de absorcin realizado para la identificacin del

siderforo producido por Pseudomonas sp. (rizobacteria nmero tres), la
cual es antagonista a F. oxysporum y Pythium sp.
Este tipo de sideroforo es muy caracterstico del genero Pseudomonas, el

cual generalmente este implicado en el control biolgico de hongos
patgenos del suelo causantes de enfermedades en las plantas.
5.1.4. identificacin de la especie de Pseudomonas seleccionada
Una vez seleccionada la rizobacteria nmero tres, se determin que el

gnero al que pertenece este microorganismo es Pseudomonas debido a
que produjo pigmentacin amarillo-verdoso en el medio Agar Cetrimida, el
cual es especfico para la deteccin de este gnero. Se prob que esta
rizobacteria no estuviera contaminada por otros hetertrofos
(Enterobacterias), para esto se estro en medio Agar Bilis Rojo Violeta,
53
presentando reaccin como lactosa negativa, lo que demuestra no estar
contaminada debido a que no produjo pigmentos de color rojo o naranja.
Una vez identificado el gnero de Pseudomonas se procedi a determinar

la especie a la cual perteneca, resultando ser putida, debido a que no
creci en los medios de cultivo P-3 y P-4, los cuales se utilizan para la
diferenciacin de especies entre P. fluorecens y P. putida mismos que
utilizan como fuente de carbono a la trehalosa y mio-inositol (Manual de
Bergeys, 1994). Posteriormente, la P. putida se sembr en el medio NZCYM
y se puso a crecer a una temperatura de 4 C para la identificacin del
biovar, el cual result ser del tipo B, debido a que creci bajo estas
condiciones donde el tipo A no crece.
Concluidas todas las pruebas bioqumicas se determin que la rizobacteria

seleccionada y catalogada como la numero tres, se identific como
Pseudomonas putida Biovar B.
5.2. Identificacin de los hongos causantes del damping-off en plntulas

de Carica papaya
El hongo aislado de las races de plntulas de papayo resulto ser Fusarium

oxysporum, el cual present colonias blanquecinas-prpuras con micelio
areo abundante,mismo que llegaba a cubrir toda la cpsula de Petri en
un perodo de 6 a 7 das. Este micelio se observ hialino y septado,
observndose la presencia de; a) Microconidias: abundantes, de forma
ovalada, sin septas, con dimensiones de 5.75 14.6 m X 2.5 5.20 m. b)
Macroconidias: de forma ovalada, con dimensiones de 20.8 31 m X 2.6
5.0 m; con 1 a 5 septas. c) Clamidiosporas: de forma redonda, paredes
oscuras y gruesas, con un dimetro de 5.20 12 m, abundantes en la
54
medida que el medio de cultivo tiende a deshidratarse lo que indica su
funcionalidad como estructura de resistencia (Domsch et al., 1980).
5.3. Respuesta de plntulas de papayo var. Maradol a la inoculacin con

diferentes concentraciones de Pseudomonas putida
5.3.1. Altura y nmero de hojas
El anlisis de varianza estableci diferencias significativas (Tukey, P<0.05)

para estas dos variables a partir de los dieciocho das despus de
inoculadas las plntulas con las diferentes concentraciones tanto de P.
putida (aislamiento nativo de Carica papaya L.) como de P. fluorescens
(rizobacteria de referencia) (Figura 4).
Las plantas que mayores alturas alcanzaron al final del experimento (54
das despus de la inoculacin) fueron las inoculadas con los tratamientos
Pp4, Pp6 y Pp9, logrando incrementos del 62%, 40% y 39%, respectivamente
con relacin a las plantas sin inocular (tratamiento C).
Para el caso de la variable nmero de hojas las plantas que mejor

respondieron fueron las inoculadas con las concentraciones de los
tratamientos Pp4, Pp6 y Pp8, logrando incrementar su follaje con relacin a
las plantas del tratamiento C en valores de 135%, 90% y 87%,
respectivamente.
Estos resultados demuestran que las plantas respondieron mejor con la

inoculacin a bajas concentraciones con la cepa nativa de P. putida, no
obstante se obtuvieron incrementos al inocular las plantas con la cepa de
P. fluorescens en toda las concentraciones.
55
10
9
8
7
Altura (cm)6
5
4
3
2
1
0
0 9 18 27 36 45 54
Diasdespues
Das despues dede
laino
lacinoculacin
ulacin
Pp9 Pp8 Pp6 Pp4 Pf9
Pf8 Pf6 Pf4 C
14
12
Nmero de hojas
10
0
0 9 18 27 36 45 54
Das despues de la inoculacin
Pp9 Pp8 Pp6
Pp4 Pf9 Pf8
Pf6 Pf4 C
Figura 4. Cuantificacin de altura y nmero de hojas de plntulas de

papayo inoculadas con diferentes concentraciones de Pseudomonas
putida y P. fluorescens
56
5.3.2. rea foliar y biomasa fresca y seca
Al final del experimento (54 das despus de la inoculacin) las plntulas de

papayo inoculadas con las Pseudomonas putida y fluorescens mostraron
un efecto superior a las plantas control (tratamiento C) para la variable
rea foliar (Figura 5), existiendo diferencias significativas (Tukey, P<0.05)
entre las plantas de los tratamientos, siendo superiores aquellas que fueron
inoculadas con los microorganismos benficos, resaltando las del
tratamiento Pp4, donde se obtuvo un incremento por arriba del 366% con
relacin a las plantas control.
80
a
70
b b
60
Area foliar (cm )
2
b
50 c
40 d d
d
30
20 e
10
0
Pp9 Pp8 Pp6 Pp4 Pf9 Pf8 Pf6 Pf4 C
Tratamient os
Figura 5. rea foliar de plntulas de papayo cuantificada a los 54 das

despus de inoculadas las rizobacterias (P. putida y P. fluorecens) con
diferentes concentraciones. Las barras con la misma letra son
estadsticamente iguales (Tukey, P<0.05).
Para el caso de las variables biomasa fresca y seca de las plntulas de

papayo, el anlisis estadstico report diferencias significativas entre las
plantas de los tratamientos (Cuadro 11).
57
Siendo las inoculadas con la dosis de 104 celmL-1 (tratamiento Pp4) las que
mejor biomasa produjeron, con incrementos de follaje y raz fresco en un
198% y 162%, y biomasa seca de follaje y raz en un 283% y 162%, en
relacin a las plantas del tratamiento C (sin inocular).
Cuadro 11. Produccin de biomasa fresca y seca de plntulas de papayo

inoculadas con rizobacterias
Peso fresco Peso fresco raz Peso seco Peso seco
Tratamiento
follaje (g) (g) follaje (g) raz (g)
Pp9 1.18 b 0.78 abcd 0.15 cd 0.16 bc
Pp8 1.15 b 0.81abc 0.17 bc 0.18 ab
Pp6 1.20 b 0.85 ab 0.17 bc 0.18 ab
Pp4 1.52 a 0.92 a 0.23 a 0.21 a
Pf9 1.34 ab 0.86 a 0.19 b 0.16 bc
Pf8 0.79 c 0.65 bcd 0.11 de 0.11 cd
Pf6 0.87 c 0.61 cd 0.11 de 0.10 cd
Pf4 0.69 cd 0.57 d 0.09 ef 0.09 d
C 0.51 d 0.35 e 0.06 f 0.08 d
Pr > F 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
C.V. (%) 10.06 14.84 10.11 11.24
Valores con la misma letra son estadsticamente iguales (Tukey, P<0.05)
5.3.3. Dinmica poblacional de P. putida y P. fluorescens de la rizosfera de

plntulas de papayo
El nmero de unidades formadoras de colonias (UFC) al final del

experimento (54 das despus de la inoculacin), se mantuvo en la
mayora de los casos con relacin a las UFC cuantificadas al inicio del
experimento (al momento de inocular las rizobacterias). Siendo las plantas
inoculadas con el tratamiento Pf6 las que reportaron una menor
colonizacin, observando que la poblacin inicialmente de 15.1 x 107 bajo
drsticamente a 1.5 x 107. Por su parte las plantas del tratamiento Pp4
aunque a los 27 y 36 das despus de la inoculacin mostraron los mas
bajos niveles de colonizacin, al final del experimento lograron recuperar
su poblacin (Figura 6).
58
35
Logaritmo 107 UFC/g de raz

30
25
20
15
10
0
0 18 27 36 54
Pp9 Pp8 Pp6 Pp4
Pf9 Pf8 Pf6 Pf4
Figura 6. Dinmica poblacional de P.putida y P. fluorecens en la rizosfera

de plntulas de Carica papaya L evaluado durante 54 das.
5.4. Efecto de diferentes concentraciones de Fusarium oxysporum en la

susceptibilidad de plntulas de papayo var. Maradol en vivero
5.4.1. ndice de Severidad y necrosis
El anlisis estadstico para estas dos variables mostr diferencias

significativas (Tukey, P<0.05) entre las plantas de los tratamientos a partir de
los 20 das despus de inoculado el patgeno (Figura 7). Siendo las plantas
inoculadas con la dosis mas alta del patgeno (7 conidios/g de suelo seco)
las que mayores rangos de severidad y necrosis presentaron con relacin a
las plantas inoculadas con los dems tratamientos, cuantificando al final
del experimento (35 das despus de inoculado el patgeno) una
mortandad del 100% de las plantas inoculadas con este tratamiento.
59
80
ndice de severidad
60
40
20
0
5 10 15 20 25 30 35
7 Co 5 Co 3 Co C
100
80
ndice de necrosis
60
40
20
0
5 10 15 20 25 30 35
7 Co 5 Co 3 Co C
Figura 7. Dinmica de severidad y necrosis evaluadas en plantas de Carica

papaya inoculadas con diferentes concentraciones de conidios de
Fusarium oxysporum agente causal del damping-off
60
5.5. Efecto de la inoculacin dual de HMA y P.putida en plantas de papayo
para el control biolgico del damping-off
5.5.1. Altura y nmero de hojas
El anlisis de varianza estableci diferencias significativas (Tukey, P<0.05)

para estas dos variables a partir de los dieciocho das despus de
inoculadas las plntulas con el complejo micorrzico MTZ-1 y P. putida.
(Figura 8). Las plantas que mayores alturas alcanzaron al final del
experimento (72 das despus de la inoculacin) fueron las inoculadas con
los tratamientos P4H y P9H con incrementos del 81% y 79%,
respectivamente con relacin a las plantas control (C).
Para el caso de la variable nmero de hojas las plantas que mejor

respondieron fueron las inoculadas con el tratamiento P4H, PH4F y P9H
logrando incrementar su follaje con relacin a las plantas del tratamiento C
en valores de 90%, 87% y 83%, respectivamente.
Las plantas que fueron inoculadas con el tratamiento F a los 63 das del
experimento todas murieron por ahorcamiento de tallo y necrosis de raz
causado por F. oxysporum, por lo que al final del experimento no fueron
cuantificadas.
Por lo que las plantas que mejor crecieron y desarrollaron fueron las
inoculadas de manera dual con HMA y rizobacteria, no obstante que estos
fueron los mejores tratamientos, en los dems casos las plantas que fueron
inoculadas con uno u otro microorganismo superaron a las plantas del
tratamiento F y C, las cuales para el primer caso, fueron inoculadas con el
patgeno y para el segundo no se les agreg ningn microorganismo.
61
12
10
Altura (cm)
8
0
0 9 18 27 36 45 54 63 72
Dias despues de la inoculacin
P4 P9 H P4F
P9F HF P4H P9H
P4HF P9HF F C
18
16
14
Nmero de hojas
12
10
8
6
4
2
0
0 9 18 27 36 45 54 63 72
P4 P9 H P4F
P9F HF P4H P9H
P4HF P9HF F C
Figura 8. Altura y nmero de hojas cuantificadas a lo largo de 72 das en

plntulas de papayo inoculadas con el complejo micorrzico MTZ-1, P.
putida (en concentraciones de 104 y 109 celmL-1) y F. oxysporum (con 7
conidios/g de suelo seco)
62
5.5.2. rea foliar y biomasa fresca y seca
Al final del experimento (72 das despus de la inoculacin) las plntulas de

papayo inoculadas con Pseudomonas putida y HMA mostraron ser
altamente superiores a las plantas del tratamiento control (C). Existiendo
diferencias significativas (Tukey, P<0.05) entre las plantas de los
tratamientos para la variable rea foliar (Figura 9), siendo las plantas
inoculadas con el tratamiento P4H las que alcanzaron mayores
incrementos con 535% en relacin a las plantas del tratamiento C. Es de
importancia resaltar que de todos los tratamientos las plantas que mejor
rea foliar desarrollaron fueron las inoculadas con hongos micorrzicos y la
rizobacteria.
120
a
ab
100 b
rea foliar (cm 2)
cd
80
e
60 fg ef
gh fgh
hi
40
j
20
0
P4 P9 H P4F P9F HF P4H P9H P4HF P9HF C
Tratamient os
Figura 9. rea foliar de plntulas de papayo cuantificada a los 72 das

despus de inoculados los microorganismos (HMA, P. putida y F.
oxysporum). Las barras con la misma letra son estadsticamente iguales
(Tukey, P<0.05).
63
Para el caso de la variable biomasa fresca y seca el anlisis estadstico
report diferencias significativas entre las plantas de los tratamientos
(Cuadro 12), existiendo incrementos de follaje y raz fresco en un 201% y
98% respectivamente y de biomasa seca de follaje y raz en un 622% y
236%, para las plantas inoculadas con el tratamiento P4H, los dems
tratamientos con HMA y P. putida fueron superiores en todas las variables
cuantificadas de biomasa con relacin a los tratamientos donde solo se
inocularon los microorganismos de manera individual.
Cuadro 12. Produccin de biomasa fresca y seca de plntulas de papayo

inoculadas con microorganismos
Tratamiento Peso fresco Peso fresco raz Peso seco Peso seco
follaje (g) (g) follaje (g) raz (g)
P4 1.58 cd 0.87 bc 0.39 abc 0.21 bcdc
P9 1.42 de 0.86 bc 0.37 abc 0.19 bcde
H 1.36 def 0.82 cd 0.34 abc 0.14 cde
P4F 1.42 de 0.86 bc 0.37 abc 0.18 bcde
P9F 1.27 ef 0.84 bc 0.31 bc 0.16 cde
HF 1.17 f 0.81 cd 0.34 abc 0.14 de
P4H 1.96 a 0.99 a 0.65 a 0.37 a
P9H 1.88 ab 0.94 ab 0.57 ab 0.33 ab
P4HF 1.90 ab 0.96 ab 0.57 ab 0.29 abc
P9HF 1.74 bc 0.94 ab 0.50 ab 0.26 abcd
C 0.65 g 0.50 e 0.09 c 0.11 e
Pr > F 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
C.V. (%) 12.01 7.77 56.13 40.06
5.5.3. ndice de severidad y necrosis
El anlisis estadstico para estas dos variables mostr diferencias

significativas entre las plantas de los tratamientos a partir de los 18 das
despus de inoculado el patgeno, siendo las plantas del tratamiento F las
que mayor ndice de severidad y necrosis tuvieron hasta el final del
experimento (Figura 10). Las plantas que menores rangos tuvieron de
severidad y necrosis fueron las inoculadas con el patgeno mas HMA y P.
putida en sus dos concentraciones (104 y 109 celmL-1).
64
120
100
ndice de severidad 80
60
40
20
0
45 54 63 72
P4F P9F HF P4HF P9HF F
120
100
ndice de necrosis
80
60
40
20
0
45 54 63 72
P4F P9F HF P4HF
P9HF F
Figura 10. Dinmica de severidad y necrosis evaluadas durante 72 das en

plantas de Carica papaya inoculadas con HMA, P putida y Fusarium
oxysporum
65
5.5.4. Evaluacin de la colonizacin de HMA y P. putida en plntulas de
papayo
El anlisis estadstico para la variable porciento de colonizacin micorrzica

mostr diferencias significativas entre las plantas de los tratamientos tanto
a los 36 das despus de la inoculacin (ddi) como al final del experimento
(72 ddi) (Cuadro 13). Obteniendo los mayores porcentajes de colonizacin
en las dos fechas de evaluacin las plantas que fueron inoculadas con la
rizobacteria (a una concentracin de 104 celmL-1) y el complejo de HMA
(tratamiento P4H).
Los dems tratamientos donde las plantas fueron inoculadas de manera

dual con los dos microorganismos benficos en todos los casos, siempre
presentaron mayores valores de colonizacin en comparacin en aquellas
donde solo se incorporo de manera individual tanto rizobacteria como
hongo micorrzico.
Cuadro 13. Porcentaje de colonizacin micorrizca evaluado en plantas de

papayo a los 36 y 72 das despus de la inoculacin (ddi) con HMA, P.
putida y F. oxysporum
Colonizacin micorrzica (%)
Tratamiento
36 ddi 72 ddi
Pp4 0 e* 0 e*
Pp9 0e 0e
H 45 d 64 d
P4F 0e 0e
P9F 0e 0e
HF 43 d 60 d
P4H 62 a 82 a
P9H 55 c 80 a
P4HF 57 bc 75 b
P9HF 59 ab 69 c
F 0e 0e
C 0e 0e
Pr > F 0.0001 0.0001
C.V. (%) 2.06 2.16
66
Para el caso de las unidades formadoras de colonias (UFC), las plantas que
presentaron mayor colonizacin por parte de la rizobacteria fueron las
inoculadas con este microorganismo mas los hongos micorrzicos (complejo
MTZ-1), especficamente los tratamientos P4H y P9H para las dos fechas de
valuacin (Cuadro 14), los dems tratamientos incrementaron su
poblacin de una fecha a otra, resaltando siempre los inoculados con
HMA mas rizobacteria.
Cuadro 14. Unidades formadoras de colonias (UFC) cuantificadas en

plantas de papayo inoculadas con HMA, P. putida y F. oxysporum
Unidades formadoras de colonias
Tratamiento
36 ddi 72 ddi
P4 3.3 x 10 9 4.1 x 1010
P9 2.9 x 10 9 3.1 x 1010
H 0 0
P4F 2.8 x 108 3.7 x 1010
P9F 2.5 x 108 2.6 x 1010
HF 0 0
P4H 5.6 x 1010 4.1 x 1011
P9H 5.1 x 1010 2.9 x 1011
P4HF 5.2 x 10 9 1.8 x 1011
P9HF 4.7 x 10 9 1.6 x 1010
F 0 0
C 0 0
67
VI. DISCUSIN
6.1. Pseudomonas fluorescentes y su capacidad de inhibir in vitro el

crecimiento de Fusarium oxysporum y Pythium sp.
Aunque la inhibicin in vitro del crecimiento tanto de F. oxysporum como

de Pythium sp. fue llevada a cabo por todas las Pseudomonas
fluorescentes en al menos uno de los medios de cultivo probados (Cuadro
9 y 10), solo una de ellas (la catalogada con el No. 3) logr un control del
crecimiento de los hongos en todos los medios de cultivo, disminuyendo la
formacin del micelio aereo sin llegar a tocar el halo que la bacteria
produjo en las placas de petri, el cual presentaba un color verde
fluorescente cuando la bacteria creca en los medios sin fierro, lo que se
debi a la produccin de algn tipo de sideroforo que las bacterias de
este gnero producen y que en este experimento se identifico como del
tipo pseudobactina (Figura 3)(Muoz, 1993). En los medios adicionados con
fierro el halo se observ sin fluorescencia y de color caf claro. La
inhibicin de los patgenos en estos medios de cultivo posiblemente se
deba a que las rizobacterias estn produciendo algn tipo de antibitico u
otro metabolito secundario, que no est permitiendo el crecimiento radial
de los hongos fitopatgenos.
Las diferentes respuestas en inhibicin del crecimiento de las rizobacterias

hacia los hongos fitopatgenos, se debe por una parte a su capacidad de
producir metabolitos en los medios de cultivo y por otra a la adaptacin
de estos microorganismos a los diferentes componentes del sustrato
(medios de cultivo) a las que fueron sometidas, por lo que los mejores
aislamientos que mostraron mejor adaptacin bajo esta circunstancia y
que adems controlaron el crecimiento de los fitopatgenos, se pueden
considerar organismos con un alto potencial de control biolgico. Glick
68
(1995), menciona que uno de los mtodos de seleccin ms utilizados para
obtener microorganismos como agentes de control biolgico en el
laboratorio, es por su capacidad de producir metabolitos que inhiban el
crecimiento in vitro de hongos patgenos del suelo, siendo estas sustancias
(siderforos, HCN o antibiticos) las que favorecen el control biolgico del
patgeno, permitiendo seleccionar aquel microorganismo con capacidad
de producir una o ms sustancias de este tipo.
Reddy et al., (1993), evaluaron 120 cepas rizobacterianas de diversos

gneros y especies, resaltando Pseudomonas putida y P. fluorescens como
los microorganismos que inhibieron significativamente (P<0.05) in vitro el
crecimiento miceliar de Pythium ultimum, Rhizoctonia solani y Fusarium
solani, lo que probablemente algn mecanismos de control biolgico
(como la produccin de siderforos, HCN, entre otros), estn provocando
esta reduccin del crecimiento por parte de los hongos. Schmidli et al.,
(1997), encontraron resultados similares cuando la cepa CHA0 de
Pseudomonas fluorecens (productora de metabolitos como el pioluteorin,
cido saliclico, pioquelin y pioverdin), inhibi significativamente (P<0.05) in
vitro el crecimiento de Pythium ultimum y Gaeumannomyces graminis en
comparacin de la cepa mutante CHA89 la cual no present ningn nivel
de inhibicin hacia estos patgenos.
Por su parte Frndberg y Schnrer (1998), aislaron 109 bacterias

provenientes de cereales con actividad de producir quitinasa, del total de
los aislamientos solo entre el 2% y 5% inhibieron in vitro el crecimiento de
Penicillium roqueforti, cuando las mejores cepas fueron probadas contra
otros microorganismos resalto la K122 perteneciente a Streptomyces
halsteddi logrando un porcentaje promedio de inhibicin del 65% contra
Aspergillus flavus, A. fumigatus, Fusarium sporotrichoides, Heterobasidion
69
annosum, Microsporum canis, Mucor hiemalis, Penicillium roqueforti,
Phytophthora infestans, Rhizoctonia solani, Rhizopus stolonifer y Talaromyces
flavus. Landa et al. (2001), aislaron 23 rizobacterias de la rizosfera de
garbanzo y evaluaron su capacidad de inhibir in vitro el crecimiento de
Fusarium oxysporum f. sp. ciceris, encontrando que del total de
aislamientos, 19 de ellos pertenecientes a los gneros Bacillus,
Paenibacillus, Pseudomonas y Stenotrophomonas, que lograron inhibir
significativamente (P < 0.05) el crecimiento hifal del patgeno, quizs
debido a la produccin de algn metabolito secundario como los
antibiticos o siderforos que estn interfiriendo en la expansin del micelio
en los medios de cultivo.
6.2. Efecto de diferentes concentraciones de Pseudomonas putida y P.

fluorescens en el crecimiento y desarrollo de plntulas de papayo var.
Maradol
Las plntulas de papayo que mayores incrementos tuvieron en crecimiento

y desarrollo fueron las inoculadas con la cepa nativa de P. putida,
concretamente cuando este microorganismo se inocul con la
concentracin ms baja (104 celulasmL-1) evaluada en este experimento,
caso contrario result ser el de P. fluorescens, donde las plantas
respondieron mejor con la concentracin ms alta con este
microorganismo. Esto permite inferir tres cuestiones:
a) Al inocular una gran cantidad de clulas bacterianas en la

rizosfera de las plantas, stas por consecuencia tienen una exigencia
mayor en cuanto a aumentar la cantidad de exudados radicales que le
permitan mantener la alta demanda de carbono que las poblaciones de
microorganismos demandan, trayendo como consecuencia que las
70
plantas en principio no se vean beneficiadas con esta asociacin,
reflejando un menor crecimiento y desarrollo
b) Algunas bacterias que son inoculadas en las plantas invaden

inmediatamente el cortex de la raz proliferando dentro del tejido vascular,
lo que hace que algunas veces el efecto positivo en las plantas sea mas
lento debido a que estas poblaciones endofitas son directamente
afectadas por factores abiticos que influyen en el comportamiento de las
plantas, lo que hace que a veces estos microorganismos no se adapten y
mueran antes de empezar sus efectos positivos en ellas.
c) Los incrementos de las plantas de papayo a la inoculacin con la

cepa nativa de P. putida probablemente est relacionado con la
adaptacin a las condiciones fisiolgicas de las races de la plantas de
papayo de donde fue aislada originalmente, mismas que al exudar ciertos
tipos de substancias radicales (las cuales cambian en tipo, cantidad y
calidad, de acuerdo a la planta que se trate) estn condicionando a los
microorganismos que existen en el suelo, siendo esta circunstancia
favorable para la rizobacteria nativa y no para la introducida (P.
fluorescens cepa A9).
Al respecto de estos tres puntos Pillay y Nowak (1997), establecen que la

promocin del crecimiento de las plantas est relacionado con el grado
de colonizacin que las rizobacterias establezcan en la raz, sin embargo
existen factores como la cantidad de inculo, temperatura del ambiente y
genotipo de la planta que influyen sobre las poblaciones bacterianas
afectando en mayor grado aquellas de menor afinidad con el hospedero
lo que influye directamente sobre el crecimiento y desarrollo de las plantas.
Ikeda et al., (1998), por su parte comentan que las plantas crecern y
71
desarrollarn de manera exitosa, en la medida que las bacterias se logren
adaptar a las condiciones de pH, tipo de suelo, temperatura, tipo de
planta y otros microorganismos del suelo, para colonizar el sistemas radical
de las plantas. Hallmann et al., (1997) y Quadt-Hhallmann et al., (1997),
indican que existen otros agentes abiticos como la humedad del suelo,
factores edficos y radiacin UV que afectan a las plantas y a los procesos
de colonizacin de las rizobacterias sobre todo de las poblaciones de
microorganismos endfitos.
Otro factor importante que condiciona la simbiosis microorganismo-planta,

son los exudados radicales, los cuales seleccionan de manera indirecta los
tipos de poblaciones microbianas que existen en la rizosfera,
beneficindose solo aquellos que estn con la capacidad de asimilar las
diferentes fuentes de carbn que las plantas estn emitiendo, limitando el
crecimiento de aquellas otras que no tengan la capacidad de incorporar
a su sistema fisiolgico ese tipo de sustancias (Simons et al., 1996; Dekkers et
al., 1998; Raven y Edwards, 2001; Weissmann y Gerhardson, 2001).
En cuanto a los incrementos en las variables altura, nmero de hojas

(Figura 4), rea foliar (Figura 5) y biomasa fresca y seca (Cuadro 11)
evaluadas en las plntulas de papayo inoculadas con las rizobacterias
estn relacionados, quizs con la produccin de algn tipo de hormona
(como las giberelinas, auxinas, citocininas, entre otras) que estos
microorganismos estn sintetizando y que estn influyendo de manera
positiva en las plantas, posiblemente teniendo un efecto directo en el
aumento de races (principalmente en la formacin de pelos absorbentes),
lo cual incrementa en las plantas su capacidad de exploracin y
desplazamiento en el suelo, aumentando principalmente su absorcin de
agua y nutrimentos, reflejando este beneficio en un aumento en su
72
crecimiento y desarrollo, en comparacin a las plantas no inoculadas con
estos microorganismos.
Al respecto Patten y Glick (1996), comentan que este mecanismo de

promocin del crecimiento de las plantas llevada a cabo por las
rizobacterias es muy caracterstico de los gneros Pseudomonas,
Azospirillum, Enterobacter, entre otros, los cuales generalmente sintetizan
hormonas del crecimiento como el cido-indol-actico (AIA), el cual tiene
un efecto primario en aumentar el crecimiento y desarrollo de las plantas.
Glick et al., (1997), evaluaron incrementos en el peso fresco de follaje (11.9
mg) en plantas de canola inoculadas con Pseudomonas putida mientras
que las plantas sin inocular presentaron los valores mas bajos (8.2 mg).
Resultados que concuerdan con lo reportado por Chiarini et al. (1998), los
cuales cuantificaron aumentos significativos (P<0.05) en el peso fresco de
follaje (7.03 g) y raz (7.62 g) en plantas de sorgo inoculadas con
Pseudomonas fluorescens y Burkholderia cepacia en comparacin a las
plantas no inoculadas con valores de 3.98 g y 5.13 g respectivamente.
Conn et al. (1997), reportan aumentos en el peso fresco raz (22.9 mg) de
plantas de papa inoculadas con la cepa mutante PsJN de Pseudomonas
sp. en comparacin con las plantas control (4.5 mg).
6.3. Respuesta de plntulas de papayo var. Maradol a diferentes

concentraciones de Fusarium oxysporum
A los 15 das despus de inoculado el patgeno (ddi) se observ que las

hojas de las plntulas de papayo presentaban lneas clorticas de color
verde claro, caracterstica muy marcada para las plantas que fueron
inoculadas con las dosis de 5 y 7 conidias/g de suelo seco de Fusarium
oxysporum. A medida que paso el tiempo (25 ddi) las plantas presentaron
mayor nivel de clorosis hasta alcanzar la marchitez total y por
73
consecuencia la muerte y cada de las hojas. Las plantas donde se
inocularon solo 3 conidias/g de suelo seco solo presentaron en algunas
hojas, lneas clorticas a travs de toda la lmina foliar, sin llegar a mostrar
en ningn momento necrosis a nivel del cuello de la planta. Estas
diferencias en sintomatologa pueden estar relacionadas con la cantidad
de inocul que se utiliz en este experimento pudindose originar distintas
respuestas del hospedero, sobre todo cuando las plantas fueron
inoculadas con la dosis ms baja (3 conidias/g de suelo seco) del
patgeno, originando que los sntomas no fueran mas severos con relacin
a las plantas inoculadas con las otras dosis, indicando posiblemente que el
patgeno vive como saprofito en la planta sin causarle la muerte y por
consecuencia no generando una sintomatologa muy marcada.
Estos resultados se asemejan con los obtenidos por Reddy et al. (1993),
donde probaron tres dosis de conidias de Fusarium solani en plantas de
frjol evaluando los mas altos ndices de severidad de la enfermedad (entre
51% y 80%) con la concentracin mas alta (7 conidias/g vermiculita) del
patgeno, concluyendo estos autores que en la medida que se aumenta
la dosis del hongo se incrementan los niveles de la enfermedad. Por su
parte Rekah et al. (2000), cuantificaron en plantas de jitomate los mas altos
ndices de enfermedad (65%) ocasionada por Fusarium oxysporum f. sp.
lycopersici con las dosis de 104 macroconidias/ mL en comparacin con la
concentracin de 102 las cuales presentaron en menor grado, races
necrosadas y cambios en la coloracin del tallo, por lo que al aumentar la
dosis los sntomas de la enfermedad se incrementan.
Esto se puede observar en la Figura 7 donde las plantas que mayor ndice
de severidad y necrosis presentaron fueron las inoculadas con la dosis ms
alta e intermedia del patgeno, observando en las plantas de estos
74
tratamientos una coloracin marrn claro en la base del tallo con una
trayectoria ascendente, acentundose esta sintomatologa a medida que
avanz la enfermedad, lo cual muestra que el hongo obstruye los tejidos
vasculares, impidiendo principalmente el paso de agua y nutrimentos en la
planta, presentando un ahorcamiento del tallo el cual es una
sintomatologa tpica del damping-off. En las plantas tambin se observ
poco desarrollo del sistema radical y las pocas races que estas formaron,
se encontraban con necrosis tanto de las races secundarias como de la
principal, lo cual habla de la invasin que este hongo patgeno hizo hacia
las races de las plantas. Al final del experimento se realiz el reaislamiento
del patgeno, pudiendo constatar la presencia de este en todos los casos.
Al respecto Wolcan et al., (1999), reportan los mismos sntomas cuando

plantas de Lilum fueron inoculadas con F. oxysporum y F. moniliforme, las
cuales presentaron amarillamiento de las hojas en sentido ascendente con
respecto al tallo, necrosis de color marrn a negro que afecta a los tejidos
parenquimticos y/o vascular de los tallos y prdida de hojas adems de
una baja produccin de races absorventes.
Khalil et al., (2001), observaron que el ataque de F. oxysporum f. sp. gladioli

en plantas de gladiola se presenta afectando los cormos, observando
pudricin en los anillos concntricos de su estructura, iniciando las lesiones
en la parte inferior de ste, justo donde inician las raicillas, por lo que los
sntomas son amarillamiento foliar y posteriormente, la muerte de las
plantas.
Monera (1999), comenta que en sandia una de las limitante mas

importantes de este cultivo es el ataque de F. oxysporum, el cual una vez
que penetra por las races, dificulta la ascensin y circulacin de la savia,
75
produciendo un pardeamiento del tejido leoso y una exudacin gomosa,
presentando las hojas un amarillamiento claro, terminando las plantas por
morir a los tres o cuatro das de observar la presencia de la enfermedad.
6.4. Efecto de la inoculacin dual de HMA y P. putida en plantas de

papayo para controlar Fusarium oxysporum agente causal del damping-off
El efecto de la inoculacin dual de HMA y rizobacteria en el crecimiento y

desarroll de plantas de papayo fue benfico debido a que se observaron
incrementos en altura y nmero de hojas (Figura 8), rea foliar (Figura 9) y
biomasa fresca y seca (Cuadro 12) en comparacin cuando estos
microorganismos fueron inoculados de manera separada y a las plantas sin
inocular (Tratamiento C). Posiblemente estos efectos se deben a:
a) Un incremento posiblemente en la asimilacin de nutrimentos del

suelo debido principalmente a la colonizacin de los hongos micorrizicos,
los cuales aumentaron la capacidad de exploracin de las races de las
plantas de papayo en el suelo (hecho que se cuantific en la cantidad de
biomasa evaluada al final del experimento, cuadro 12), influyendo en una
mayor captacin de nutrimentos (principalmente de fsforo) y de agua.
Este efecto posiblemente se incremento en el sentido que las plantas

inoculadas con HMA y rizobacterias tuvieron el mayor porcentaje de
colonizacin micorrzica (Cuadro 13) en las plantas, lo que probablemente
afecto de manera positiva en el aumento en la nutricin de estas plantas
en comparacin con las que solo fueron inoculadas con estos endfitos de
manera individual (tratamiento H).
Toro et al. (1997), encontraron que los niveles de colonizacin micorrzica

de Glomus intraradices en plantas de cebolla se increment en un 33%
76
cuando estas fueron co-inoculadas con la rizobacteria Bacillus subtilis y
aument en un 50% mas cuando las plantas fueron fertilizadas con roca
fosfrica, lo que influy en el aumento en la nutricin de las plantas
cuantificando significativamente (P<0.05) incrementos en el peso seco del
follaje (66% y 100%), contenido de fsforo foliar (38% y 60%) y nitrgeno
foliar (33% y 42%) con relacin a las plantas sin inocular. Gryndler et al.
(1995), encontraron que plantas de maz inoculadas de manera dual con
bacterias y HMA (Glomus fasciculatum) incrementaron el porcentaje de
colonizacin micorrzica (en un 88%) y el contenido de fsforo (117%) y
magnesio (13%) en los tejidos de las plantas, lo que permiti que las plantas
desarrollaran mas biomasa seca (4.33 g) con relacin a las plantas control
(3.47 g).
Por su parte, Fester et al., (1999), cuantificaron en plantas de cebada un

incremento en el peso fresco de follaje cuando estas se inocularon con G.
intraradices ms diferentes rizobacterias (Pseudomonas fluorescens,
Rhizobium leguminosarum y Agrobacterium rhizogenes), alcanzando los
niveles mas altos (cercanos a 300 g de materia fresca) las plantas co-
inoculadas con el hongo micorrizico mas A. rhizogenes en comparacin a
las plantas con solo este microorganismo(con 100 g de materia fresca), as
mismo los porcentajes de colonizacin micorrzica alcanzados solo con G.
intraradices fue de 20%, mientras que con la co-inoculacin aumentaron
en un 40%, 50% y 60% respectivamente, permitiendo concluir que esta
simbiosis entre bacteria-hongo-hospedero aumentar positivamente el
crecimiento y desarrollo de las plantas debido a su influencia
probablemente en la mejor de la nutricin vegetal.
b) Otro de los mecanismos por los cuales se hayan cuantificado estos

incrementos en las variables evaluadas se deba a que la rizobacteria est
77
sintetizando algn tipo de hormona (giberelinas, auxinas, citocininas, entre
otras) que esta influyendo su crecimiento y desarrollo, efecto que como en
el caso anterior (inciso a) se este potencializando debido a que las plantas
inoculadas con este microorganismo mas HMA incremento la poblacin
bacteriana (Cuadro 14), lo que posiblemente este evidenciando un mayor
aporte hormonal en comparacin a las plantas inoculadas solo con este
organismo, influyendo en una mayor produccin de biomasa radical
(Cuadro 12), que esta permitindoles a las plantas mayor capacidad de
absorcin de nutrimentos y agua.
Al respecto Ravnskov et al., (1999b), observaron incrementos del 85% en la

biomasa radical y acumulacin de fsforo (de 0.67 mg) en plantas de
pepino inoculadas con Pseudomonas fluorescens (cepa DF57) y Glomus
intraradices, contabilizando un mayor numero de colonias cuando estuvo
presente el hongo micorrzico (en un 2.16 x 107 UFC) en comparacin a la
poblacin que se cuantific donde solo estuvo la bacteria (1.55 x 107 UFC),
lo que les permiti inferir que la rizobacteria al ser productora de
giberelinas y al estar en poblaciones mayores cuando las plantas fueron
co-inoculadas, incremento el aporte hormonal hacia las plantas
permitiendo un mayor crecimiento y desarrollo.
Frey-Klett et al., (1999), cuantificaron incrementos en el peso seco de

plantas de Pseudotsuga cuando estas se encontraban inoculadas tanto
con la cepa de Pseudomonas fluorecens BBc6R8 y el hongo
ectomicorrzico Lacaria bicolor, presentando las plantas una poblacin
bacteriana estable (8 x 105 UFC) y un incremento en el porciento de
colonizacin (69%) con relacin aquellas que solo se inocularon con el
hongo (58%), confirmando por una parte la eficiencia de la rizobacteria, la
cual en reportes anteriores ha promovido el crecimiento de otras plantas y
78
por otro lado que la doble inoculacin ayuda a las plantas a incrementar
el crecimiento y desarrollo de las mismas.
Por su parte Mar et al., (2000), encontraron una mayor poblacin

bacteriana y aumentos en el peso seco de follaje (8 g) y raz (1.9 g) de
plantas de maz co-inoculadas con G. deserticola y Azospirillum brasilense
cepa Sp245 con relacin a las plantas sin inocular (2.2 g y 0.8 g
respectivamente), efectos que se vieron favorecidos debido a que la
rizobacteria es productora de cido indol-actico, el cual tuvo sus efectos
en aumentar el crecimiento y desarrollo de las plantas, adems de
promover la germinacin de esporas y el crecimiento micelial del hongo.
c) El efecto de la inoculacin dual de hongos micorrzicos y

rizobacteria posiblemente este potencializando la accin individual de
cada uno de ellos, permitiendo para el caso particular de las plantas que
fueron inoculadas con Fusarium oxysporum una promocin del
crecimiento, desarrollo y proteccin, lo cual posiblemente se deba a:
I) El control del patgeno por la produccin de algn

metabolito secundario como HCN (ver inciso 5.1.2.), siderforos (Figura 3),
antibiticos, entre otros, sintetizados por Pseudomonas putida.
Duijff et al., (1999), comentan que ciertas cepas de este tipo de

rizobacterias tienen la capacidad de suprimir el crecimiento de patgenos
del suelo, debido a su verstil capacidad de producir metabolitos
secundarios, ejemplo de ello es la cepa de Pseudomonas putida WCS358
la cual redujo la necrosis de raz en Linum usitatissimum ocasionada por
Fusarium oxysporum, debido a la produccin de pioverdina, el cual es un
sideroforo que tuvo un efecto directo en la inhibicin del crecimiento del
79
micelio de este hongo. Por parte Delany et al., (2001), encontraron que la
rizobacteria Pseudomonas fluorescens F113 fue una agente efectivo para
el control biolgico de Pythium ultimum en remolacha, debido a su
capacidad de producir el antibitico 2,4-diacetilfloroglucinol el cual acta
directamente sobre la degradacin de la pared celular del hongo.
II) La competencia por espacio para invadir los tejidos radicales

ocasionado especficamente por los hongos micorrzicos desplazando
probablemente al patgeno o bien la proteccin del hospedero por estos
endfitos al funcionar como barreras fsicas impidiendo especficamente la
penetracin del micelio originado por el hongo patgeno hacia las races
de la planta, Gadkar et al. (2001), mencionan que la colonizacin de los
hongos hacia las races de las plantas comienza con la penetracin e
invasin de los tejidos corticales por parte de las hifas de estos hongos,
establecindose intercelularmente a travs de la formacin de hifas,
arbusculos y vesculas, las cuales al establecerse longitudinalmente por
todas las races, las protegen indirectamente contra el micelio de otros
hongos, funcionando como barreras fsicas lo cual permite disminuir los
puntos de penetracin en la raz.
Al respecto Dumas-Gaudot et al., (2000), comentan que posiblemente este

sea el primer mecanismo que los hongos micorrizicos tienen en la
proteccin de las plantas al bloquear la invasin de micelio de hongos
causantes de enfermedades.
III) El desencadenamiento de la resistencia en la planta como

respuesta a la inoculacin de estos dos microorganismos (estmulos
externos) que posiblemente estn de manera indirecta estimulando en
ellas la produccin de algn tipo de sustancia dentro de estas (como
80
glucanasas, quitinasa, cido saliclico, entre otras) que estn haciendo que
la planta sea tolerante al ataque de este patgeno.
Hoffland et al., (1996), reportan que plantas de remolacha resistieron el

ataque de Fusarium oxysporum f. sp. rapan probablemente debido al
incremento en el sistema de resistencia de la planta ocasionado por la
inoculacin de la cepa de Pseudomonas fluorescens la cual bajo los
niveles de necrosis en las plantas.
Chen et al., (1999a), encontraron que la cepa de Pseudomonas 63-28

indujo resistencia en plantas de pepino al ataque de Pythium
aphanidermatum debido a que este microorganismo sintetiza cido
saliclico el cual tiene una influencia en el incremento en las defensas de
las plantas. Pozo et al. (1998), evaluaron que Glomus mosseae incremento
en jitomate la actividad de quitinasas y -1,3-glucanasas, lo cual permiti a
las plantas aumentar sus defensas contra la invasin de Phytophthora
parasitica.
Al respecto Barker et al., (1998), mencionan que los hongos micorrizcos al

intentar colonizar el hospedero, disparan los mecanismos naturales de
defensa de las plantas contra esta invasin, lo cual les permite aumentar la
sntesis de flavonoides, enzymas, quitinasas, entre otras, lo que
indirectamente las ayuda a protegerse contra otros organismos como los
patgenos.
Blilou et al., (1999), cuantificaron en plantas de chcharo un incremento en

el contenido libre de cido saliclico (3.2 g) en la raz, cuando estas fueron
inoculadas de manera dual con Glomus mosseae y Rhizobium
leguminosarum en comparacin con las plantas no inoculadas (1.2 g), lo
81
que permite inferir que posiblemente estas plantas resistan el ataque de
algn patgeno cuando estas se encuentren co-inoculadas tanto con
HMA y rizobacterias.
82
VII. CONCLUSIONES
a. Las plantas de papayo cuando fueron co-inoculadas con hongos

micorrzicos y rizobacteria, expresaron los mayores incrementos en
crecimiento y desarrollo con relacin a aquellas que solo fueron
inoculadas con cada uno de estos microorganismos
b. Las plantas co-inoculadas con hongos micorrzicos, rizobacteria y

Fusarium oxysporum presentaron los ndices ms bajos de severidad y
necrosis, por lo que la proteccin ejercida por estos microorganismos se
potencializ cuando estos fueron inoculados de manera dual, en
comparacin donde solo se utilizaron HMA y P. putida
c. La seleccin de rizobacterias como agentes de control biolgico puede

iniciarse a travs de pruebas in vitro donde se evale la capacidad de
estos microorganismos para antagonizar el crecimiento de patgenos del
suelo
d. Existe una mayor respuesta en crecimiento y desarrollo de plantas de

papayo a la inoculacin de la rizobacteria nativa (Pseudomonas putida)
en comparacin a la introducida (P. fluorescens)
e. Las dosis bacterianas que garanticen un crecimiento y desarrollo de las

plantas pueden establecerse entre 109 y 104 cel mL dependiendo de la
cepa que se trate
f. En la medida que se establezcan dosis de patgenos para inocular

plantas, la respuesta de stas variara dependiendo la cantidad de
conidias inoculadas, lo cual se reflejara en un ndice de severidad distinto
83
VIII. LITERATURA CITADA
Agrios G., N. (1998). Fitopatologa. Grupo Noriega (Ed.). Limusa (Editorial).

Mxico, D.F., 838 p.
Andriollo, N., Guarini, A., and Cassani, G. (1992). Isolation and

characterization of pseudobactin B: A psedobactin-type siderophore
from Pseudomonas species strain PD30. Journal Agriculture and Food
Chemistry, 40: 1245-1248.
Ambrosi, C., Leoni, L., Putignani, L., Orsi, N., and Visca, P. (2000).
Pseudobactin Biogenesis in the Plant Growth-Promoting
rhizobacterium Pseudomonas Strain B10: Identification and Functional
Analysis of the L-Ornithine N5-Oxygenase (psbA) Gene. Journal of
Bacteriology, 182 (21): 6233-6238
Ames, R.N., Reid, C., and Ingham, E.R. (1984). Rhizosphere bacterial
population responses to root colonization by a vesicular arbuscular
mycorrhizal fungus. New Phytologist, 96: 555-563.
Amora-Lazcano, E., Vzquez, M.M., and Azcn, R. (1998). Response of

nitrogen-transforming microorganisms to arbuscular mycorrhizal fungi.
Biology and Fertility and Soils, 27: 65-70.
Andrade, G., Mihara, K.L., Linderman, R.G., and Bethlenfalvay, G.J. (1998).
Soil aggregation status and rhizobacteria in the mycorrhizosphere.
Plant and Soil, 202: 89-96.
Arrieta, A.R. y Carrillo, E. (2002). Respuesta del papayo varaiedad maradol

a tres espaciamientos de drenaje subsuperficial. TERRA, 20: 435-447.
84
strm, B. (1991). Role of bacterial cyanide production in differential
reaction of plant cultivars to deleterious rhizosphere pseudomonads.
Axelrood, P.E., Clarke, A.M., Radley, R., and Zemcov, S.J.V. (1996). Douglas-
fir root-associated microorganisms with inhibitory activity towards
fungal plant pathogens and human bacterial pathogens. Canadian
Journal of Microbiology, 42: 690-700.
Azcon, R. (1987). Germination and hyphal growth of Glomus mosseae in

vitro: effects of rhizosphere bacteria and cell-free culture meda. Soil
Biology and Biochemistry, 19: 417-419.
Azcon, R. (1989). Selective interaction between free-living rhizosphere

bacteria and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi. Soil Biology and
Biochemistry, 21(5): 639-644.
Azcn, R. (1993). Growth and nutrition of nodulated mycorrhizal and non-

mycorrhizal Hedysarum coronarium as result of treatment with
fractions from a plant growth-promoting rhizbacteria. Soil Biology and
Biochemistry, 25: 1037-1042.
Azcn R. (2000). Papel de la simbiosis micorrzica y su interaccin con otros

microorganismos rizosfricos en el crecimiento vegetal y
sostenibilidad agrcola. En: Ecologa, fisiologa y biotecnologa de la
micorriza arbuscular. Alejandro Alarcn y Ronald Ferrera-Cerrato
(Eds.). Mundi-Prensa. Mxico, D.F., pp 1-15.
Azcn-Aguilar, C., and Barea, J.M. (1985). Effect of soil microorganisms on

formation of vesicular-arbuscular mycorrhizas. Transactions of the
British Mycological Society, 84: 536-537.
Azcn-Aguilar, C., and Barea, J.M. (1996a). Interacciones de las micorriza-

arbusculares con microorganismos de la rizosfera. En: Micorrizas;
85
recurso biolgico del suelo. Eduardo Guerrero Forero (Ed). Bogota,
Colombia. 46-68.
Azcn-Aguilar, C., and Barea, J.M. (1996b). Arbuscular mycorrhizas and

biological control of soil-borne plant pathogens an overview of the
mechanisms involved. Mycorrhiza, 6: 457-464.
Bagnasco, P., De La Fuente, L., Gualtieri, G., Noya, F., and Arias, A. (1998).
Fluorescent Pseudomonas spp. as biocontrol agents against forage
legume root pathogenic fungi. Soil Biology and Biochemistry, 30:
1317-1322.
Baird, R., and Carling, D. (1998). Survival of parasitic and saprophytic fungi
on intact senescent cotton roots. Journal of Cotton Science, 2: 27-34.
Bakker, A.W., and Schippers, B. (1987). Microbial cyanide production in the

rhizosphere in relation to potato yield reduction and Pseudomonas
spp-mediated plant growth-stimulation. Soil Biology and Biochemistry,
19: 451-457.
Barea J, M. (1998). Biologa de la rizosfera. Investigacin y Ciencia. 74-81.
Barker, S.J., Tagu, D., and Delp, G. (1998). Regulation of root and fungal
morphogenesis in mycorrhizal symbioses. Plant physiology, 116: 1201-
1207.
Bashan, Y. (1986). Significance of timing and level of inoculation with

rhizosphere bacteria on wheat plants. Soil Biology and Biochemistry,
18: 297-301
Benabdellah, K., Azcon-Aguilar, C., and Ferrol, N. (1998). Soluble and

membrane simbiosis-related polypeptides associated with the
development of arbuscular mycorrhizas in tomato (Lycopersicon
esculentum). New Phytologist, 140: 135-143.
86
Berge, F., Hong, L., White, D., Frazer, R., and Leifert, C. (1996). Effect of
pathogen inoculum, antagonist density, and plant species on
biological control of Phytophthora and Pythium damping-off by
Bacillus subtilis cot1 in high-humidity fogging glasshouses.
Phytopathology, 86: 428-433.
Bergeys Manual of Determinative Bacteriology. (1994). John G. Holt, Noel

R. Krieg, Peter H.A. Sneath, James T. Sately y Stanley T. Williams (Eds.).
Williams and Wilkins (Editorial). 9th. Edition, Baltimore, USA, pp 151-156.
Bianciotto, V., Bandi, C., Minerdi, D., Sironi, M., Tichy, H.V., and Bonfante, P.
(1996). An obligately endosymbiotic mycorrhizal fungus itself harbors
obligately intracellular bacteria. Applied and Environmental
Microbiology, 62(8): 3005-3010.
Blee, K.A., and Anderson, A.J. (1996). Defense-related transcript

accumulation in Phaseolus vulgaris L. colonized by the arbuscular
mycorrhizal fungus Glomus intraradices Schenek and Smith. Plant
Physiology, 110: 675-688.
Blilou, I., Ocampo, J., and Garca-Garrido,J. (1999). Resistance of pea roots
to endomycorrhizal fungus or Rhizobium correlates with enhanced
levels of endogenous salicylic acid. Journal of Experimental Botany,
50: 1663-1668.
Bloemberg, G.V., and Lugtenberg, B.J.J. (2001). Molecular basis of plant

growth promotion and biocontrol by rhizobacteria. Current Oppinion
in Plant Biology, 4: 343-350.
Boer, M., Sluis, I., Loon, C., and Bakker, A.H. (1999). Combining fluorescent
Pseudomonas spp. strains to enhance suppression of Fusarium wilt of
radish. European Journal of Plant Pathology, 105: 201210, 1999.
87
Bopaiah, B. M., and Khader, K.B.A. (1989). Effect of bio-fertilizers on growth
of black pepper (Piper nigrum). Indian Journal of Agricultural
Sciences, 59(10): 682-683.
Budi, S.W., Blal, B., and Gianinazzi, S. (1999). Surface-sterilization of

sporacarps of Glomus mosseae for studying endomycorrhization in
vitro. Mycorrhiza, 9: 65-58.
Burr, T.J., Schroth, M., and Suslow, T. (1978). Increased potato yields by
treatment of seedpieces with specific strains of Pseudomonas
fluorecens and P. putida. Phytopathology, 68: 1377-1383.
Caron, M. (1989). Potential use of mycorrhizae in control of soil-borne

diseases. Canadian Journal of Plant Pathology, 11: 177-179.
Chen, C., Blanger, R., Benhamou, N., and Paulitz, T. (1999a). Role of
salicylic acid in systemic resistance induced by Pseudomonas spp.
against Pythium aphanidermatum in cucumber roots. European
Journal of Plant Pathology, 105: 1477-1486.
Chen, A., Chambers, S., and Cairney, J.W. (1999b). Utilisation of organic
nitrogen and phosphorus sources by mycorrhizal endophytes of
Woollsia pungens (Cav.) F. Muell. (Epacridaceae). Mycorrhiza, 8(4):
181-187.
Chiarini, L., Bevivino, A., Tabacchioni, S., and Dalmastri, C. (1998).

Inoculation of Burkholderia cepacia, Pseudomonas fluorescens and
Enterobacter sp. On Sorghum bicolor: root colonization and plant
growth promotion of dual strain inocula. Soil Biology and Biochemistry,
30(1): 81-87.
Christensen, H., and Jakobsen, I. (1993). Reduction of bacterial growth by

vesicular-arbuscular mycorrhizal fungus in the rhizosphere of
cucumber (Cucumis sativus). Biology and Fertility of Soils, 15: 253-258.
88
Conn, K., Nowak, J., and Lazarovits, G. (1997). A gnotobiotic bioassay for
studying interactions between potatoes and plant growth-promoting
rhizobacteria. Canadian Journal of Microbiology, 43: 801-808.
Cooper, K. M. (1984). Physiology of VA mycorrhizal associations. En: VA

mycorrhizal. Powell, C.LL. y Bagyaraj, D.J. (eds.). CRC Press. Boca
Ratn, Florida, pp 155-186.
Cook, R.J. (1993). Making greater use of introduced microorganisms for

biological control of plant pathogens. Annual Review of
Cottyn, B., Regalado, E., Lanoot, B., De Cleene, M., Mew, T.W., and Swings,
J. (2001). Bacterial populations associated with rice seed in the
tropical environment. Phytopathology, 91: 282-292.
Cordier, C., Gianinazzi, S., and Gianinazzi-Pearson, V. (1996). Colonization

patterns of root tissues by Phytophthora nicotianae var. parasitica
related to reduce disease in mycorrhizal tomato. Plant and Soil, 185:
223-232.
Cordier, C., Pozo, M.J., Barea, J.M., Gianinazzi, S., and Gianinazzi-Pearson,
V. (1998). Cell defense responses associated with localized and
systemic resistance to Phytophthora parasitica induce in tomato by
an arbuscular mycorrhizal fungus. Molecular Plant-Microbe
interactions, 11(10): 1017-1028.
Daniels, B.A., and Trappe, J.M. (1980). Factors affecting spore germination
of the vesicular-arbuscular mycorrhizal fungus, Glomus epigaeus.
Mycologia, 72: 457-471.
Dassi, B., Dumas-Gaudot, E., and Gianinazzi, S. (1998). Do pathogenesis-

related (PR) proteins play a role in bioprotection of mycorrhizal
89
tomato roots towards Phytophthora parasitica?. Physiological and
Molecular Plant Pathology, 52: 167-183.
David, R., Itzhaki, H., Ginzberg, I., Gafni, Y., Galili, G., and Kapulnik, Y. (1998).
Suppression of tobacco basic chitinase gene expression in response
to colonization by the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus
intraradices. Molecular Plant-Microbe Interactions, 11: 489-497.
Dekkers, L., Bloemendaal, C., Weger, L., Wijffelman, C., Spaink, H., and
Lugtenberg, B. (1998). A two-component system plays an important
role in the root-colonizing ability of Pseudomonas fluorecescens strain
WCS365. Molecular Plant-Microbe Interactions, 11(1): 45-56.
Delany, I., Walsh, U., Ross, I., Fenton, A., Corkery, D., and Ogara, F. (2001).
Enhancing the biocontrol efficacy of Pseudomonas fluorecescens
F113 by altering the regulation and production of 2,4-
diacetylphloroglucinol. Plant and Soil, 232: 195-205.
Dhillion, S.S. (1992). Dual inoculation of pretransplant stage Oryza sativa L.

plants with indigenous vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi and
fluorescent Pseudomonas spp. Biology and Fertility of Soils, 13: 147-
151.
Dixon, R.K., Garrett, H.E., and Cox, G.S. (1989). Boron fertilization, versicular-
arbuscular mycorrhizal colonisation and growth of Citrus jambhiri Lush.
Journal Plant Nutrition, 12: 687-700.
Domsch, K., Gams, W., and Anderson, T.H. (1980). Compendium of soil fungi.
Academic Press. New York, USA. 1308 p.
Duffy, B.K., and Dfago, G. (1999). Environmental factors modulating

antibiotic and siderophore biosntesis by Pseudomonas fluorescens
biocontrol strains. Applied and Environmental Microbiology, 65(6):
2429-2438.
90
Dugassa, G.D., Alten, H., and Schnbeck, F. (1996). Effects of arbuscular
mycorrhiza (AM) on health of Linum usitatissimum L. infect by fungal
pathogens. Plant and Soil, 185: 173-182.
Duijff, B.J., Recorbet, G., Bakker, P.A., Loper, J., and Lemanceau, P. (1999).
Microbial antagonism at the root level is involved in the supression of
Fusarium wilt by the combination of nonpathogenic Fusarium
oxysporum Fo47 and Pseudomonas putida WCS358. Phytopathology,
89: 1073-1079.
Dumas-Gaudot, E., Slezack, S., Dassi, B., Pozo, M.J., Gianinazzi-Pearson, V,

and Gianinazzi, S. (1996). Plant hydrolytic enzimes (chitinases and -
1,3-glucanases) in root reactions to pathogenic and symbiotic
microorganisms. Plant and Soil, 185: 211-221.
Dumas-Gaudor, E., Gollotte, A., Cordier, C., Gianinazzi, S., and Gianinazzi-
Person, V. (2000). Modultaion of host defense systems. En: Arbuscular
mycorrhizas: Physiology and Functions. Y. Kapulnik y D.D. Douds (Eds.).
Kluwer Academiz Press. Holanda, pp. 173-200.
Elad, Y., and Chet, I. (1987). Posible role of competition for nutrients in
biocontrol of Pythium damping-off by bacteria. Phytopathology, 77:
190-195.
Enebak, S., Wei, G., and Kloepper, J.W. (1998). Effects of plant growth-
promoting rhizobacteria on loblolly and slash pine seedlings. Forest
Science, 44(1): 139-144.
Ferrera-Cerrato, R. (1995). Efecto de rizosfera. En: Agromicrobiologa,

elemento util en la agricultura sustentable. R. Ferrera-Cerrato y J.
Prez-Moreno (Eds.). Colegio de Posgraduados en Ciencias
Agrcolas. Montecillo. Mxico, pp. 36-53.
91
Fester, T., Maier, W., and Strack, D. (1999). Accumulation of secondary
compounds in barley and wheat roots in response to inoculation with
an arbuscular mycorrhizal fungus and co-inoculation with rhizosphere
bacteria. Mycorrhiza, 8: 241-246.
Fitter, A.H., and Garbaye, J. (1994). Interactions between mycorrhizal fungi

and other soil organisms. Plant and Soil, 159: 123-132.
Frndberg, E., and Schnrer, J. (1998). Antifungal activity of chitinolytic

bacteria isolated from airtight stored cereal grain. Canadian Journal
of Microbiology, 44: 121-127.
Freeman, S., Zveibil, A., Vintal, H., and Maymon, M. (2002). Isolation of
nonpathogenic of Fusarium oxysporum f. sp. melonis for biological
control of Fusarium wilt in cucurbits. Phytopathology, 92: 164-168.
Frey-Klett, P., Churin, J.L., Pierrat, J.C., and Garbaye, J. (1999). Dose effect in
the dual inoculation of an ectomycorrhizal fungus and a mycorrhiza
helper bacterium in two forest nurseries. Soil Biology and Biochemistry,
31: 1555-1562.
Fulghum, R. (1994). Characterization and identification of Pseudomonas

strain WRF. Canadian Journal of Microbiology, 40: 152-154.
Fusconi, A., Gnavi, E., Trotta, A., and Berta, G. (1999). Apical meristems of
tomato rotos and their modifications induced by arbuscular
mycorrhizal and soilborne pathogenic fungi. New Phythologist, 142:
505-516.
Garland, J.L. (1996). Patterns of potential C source utilization by rhizosphere

communities. Soil Biology and Biochemistry, 28: 223-230.
92
Gheno, H.Y. (1998). Conservacin de recursos frutcolas nativos utilizando
biotecnologa, el caso de la Carica cauliflora. Fruticultura avanzada.
CICTAMEX. Mxico, pp. 20-26.
Gianinazzi-Pearson, V., Dumas-Gaudot, I., Gollotte, A., Tahari-Alaotti, A.,

and Gianinazzi, S. (1996). Cellular and molecular defense-related root
responses to invasion by arbuscular mycorrhizal fungi. New
Phytologist, 133: 45-57.
Glick, B. (1995). The enhancement of plant growth by free-living bacteria.

Canadian Journal of Microbiology, 41: 109-117.
Glick., B., Changping, L., Ghosh, S., and Dumbroff, E. (1997). Early
development of canola seedlings in the presence of the plant
growth-promoting rhizobacterium Pseudomonas putida GR12-2. Soil
Biology and Biochemistry 29(8): 1233-1239.
Gonzlez L., C. (1989). Introduccin a la fitopatologa. Instituto

Interamericano de Cooperacin para la Agricultura (Editorial). San
Jos, Costa Rica. 148 p.
Gordon, T.R., Okamoto, D., and Milgroom, M.G. (1992). The structure and
interrelationship of fungal populations in native and cultivated soils.
Molecular Ecology, 1: 241-249.
Gracia-Garza, J.A., and Fravel, D.R. (1998). Effect of relative humidity on

sporulation of Fusarium oxysporum in various formulations and effect
of water on spore movement through soil. Phytopathology, 88: 554-
549.
Graham, R.D. (1983). Effects of nutrient stress on susceptibility of plants to

disease with particular reference to the trace elements. Advances
Botanic Resums, 10: 221-276.
93
Gryndler, M., Veejsadov, H., Vostka, M., and Catsk, C. (1995). Influence
of bacteria on vesicular-arbuscular mycorrhizal infection of maize.
Folia Microbiolica, 40(1): 95-99.
Gryndler, M., and Vostka, M. (1996). The response of Glomus fistulosum-

maize mycorrhiza to treatments with culture fractions from
Pseudomonas putida. Mycorrhiza, 6: 207-211.
Gryndler, M., and Hrselova, H. (1998). Effect of diazotrophic bacteria

isolated from a mycelium of arbuscular mycorrhizal fungi on
colonization of maize roots by Glomus fistulosum. Biologia plantarum,
41(4): 617-621.
Hallmann, J., Quadt-Hallman, A., Mahafee, W.F., and Kloepper, J.W. (1997).
Bacterial endophytes in agricultural crops. Canadian Journal of
Microbiology, 43: 895-914.
Hamel, C. (1996). Prospects and problems pertaining to the management

of arbuscular mycorrhizae in agriculture. Agriculture and Ecosystem
Environmental, 60: 197-210.
Hamm, P. (2001). Fusarium hypocotyl rot. In: Major diseases. John Patrick y
James Sturk (Eds.). University of Pennsilvania. USA, pp. 6-7.
Han, D.Y., Coplin, D.L., Bauer, W.D., and Hoitink, H.A. (2000). A rapid
bioassay for screening rhizosphere microorganisms for their ability to
induce systemic resistance. Phytopathology, 90: 327-332.
Hannusch, D.J., and Boland, G.J. (1996). Interactions of air temperature,

relative humidity and biological control agents on grey mold of bean.
European Journal Plant Pathology, 120: 133-142.
Handelsman, J., and Stabb, E.V. (1996). Biocontrol of soilborne plant

pathogens. Plant Cell, 8: 1855-1869.
94
Harrier, L.A. (2001). The arbuscular mycorrhizal symbiosi: a molecular review
of the fungal dimension. Journal of Experimental Botany, 52: 469-478.
Hawkins, J., Denis, M., and George, E. (1999). Root respiratory quotient and
nitrate uptake in hydroponically grown non-mycorrhizal and
mycorrhizal wheat. Mycorrhiza, 9(1): 57-60
Hodge, A. (2000). Microbial ecology of the arbuscular mycorrhiza. FEMS

Microbiology Ecology, 32: 91-96.
Hoffland, E., Pieterse, C.M., Bik, C., and Pelt, V. (1996). Comparison of
systemic resistance induced by avirulent and nonpathogenic
Pseudomonas species. Phytopathology, 86: 757-762.
Hflich, G., Wiehe, W., and Khn, G. (1994). Plant growth stimulation by
inoculation with symbiotic and associative rhizosphere
microorganisms. Experientia, 50: 897-905.
Ikeda, K., Toyota, K., and Kimura, M. (1998). Effects of bacterial colonization
of tomato roots on subsequent colonization by Pseudomonas
fluorescens MelRC2Rif. Canadian Journal of Microbiology, 44: 630-
636.
Jonson, K.B., and Dileone, J.A. (1999). Effect of antibiosis on antagonist

dose-plant response relationships for the biological control of crown
gall of tomato and cherry. Phytopathology, 89: 974-980.
Johnson, N.C., Graham, J.H., and Smith, F.A. (1997). Functioning of

mycorrhizal associations along the mutualism-parasitism continuum.
New Phytologist, 135: 575-585.
Katoh, K., and Itoh, K. (1983). New selective media for Pseudomonas strains
producing fluorescent pigment. Soil Science Plant Nutrition, 29: 525-
532.
95
Khalil, A.G., Cetina, V.M., Ferrera-Cerrato, R., Velsquez, J., Prez, C., y
Larqu, M. (2001). Hongos micorrzicos arbusculares como
componente de control biologico de la pudricin causada por
Fusarium sp. en gladiola. TERRA, 19: 259-264.
Kim, Y.J., and Hwang, B.K. (1997). Isolation of a basic 34 kiloDalton -1,3-
glucanase with inhibitory activity against Phytophthora capsici from
pepper stems. Physiology Molecular Plant Pathology, 50: 103-115.
Kim, K.Y., Jordan, D., and McDonald, G.A. (1998). Effect of phosphate-
solubilizing bacteria and vesicular-arbuscular mycorrhizae on tomato
growth and soil microbial activity. Biology and Fertility of Soils, 26: 79-
87.
Kistler, H.C. (1997). Genetic diversity in the plant-pathogenic fungus

Fusarium oxysporum. Phytopathology, 87: 474-484.
Klinge, K. (1960). Differential techniques and methods of isolation of

Pseudomonas. Journal Applied of Bacteriology, 23(3): 442-462.
Kloepper, J.W. (1993). Plant growth-pomoting rhizobacteria as biological

control agents. En: Soil Microbiol Ecology. Applications in Agricultural
and environmental management. F. Blaine Metting, Jr. Editoral
Marcel Dekker. New York, USA, pp. 255-274.
Kloepper, J.W., and Schroth, M.N. (1978). Plant growth promoting

rhizobacteria on radishes. Station de Pathologie Vegetale INRA. Plant
Pathology Bacteriology, 2: 879-882.
Kloepper, J.W., Tuzun, S., and Kc, J. (1992). Proposed definitions related to
induced disease resistanse. Biocontrol Science and Technology, 2:
349-351.
96
Kloepper, J.W., Tuzun, S., Zehnder, G., and Wei, G. (1997). Multiple disease
protection by rhizobacteria that induce systemic resistance-Historical
precedence. Phytopathology, 2: 136-137.
Krishna, K.R., Balakrishna, A.N., and Bagyaraj, D.J. (1982). Interaction

between a vesicular-arbuscular mycorrhizal fungus and Streptomyces
cinnamomeous and their effect on finger millet. New Phytologist, 92:
401-405.
Kunz, D., Chen, J., and Pan, G. (1998). Accumulation of -keto acids as
essential components in cyanide assimilation by Pseudomonas
fluorescens NCIMB 11764. Applied and Environmental Microbiology,
64(11): 4452-4459.
Lambais, M.R., and Mehdy, M.C. (1995). Differential expression of defense-

related genes in arbuscular mycorrhizal. Canadian Journal of
Botanyc, 73: 533-540.
Lambais, M.R., and Mehdy, M.C. (1996). Soybean rotos infected by Glomus
intraradices strains differring in infectivity exhibit differential chitinase
and -1,3-glucanase expression. New Phytologist, 134: 531-538
Landa, B.B., Navas-Corts, J.A., Hervs, A., and Jimnez-Daz, R.M. (2001).
Influence of temperature and inoculum density of Fusarium
oxysporum f. sp. Ciceris on suppression of Fusarium Wilt of chickpea
by rhizosphere bacteria. Phytopathology, 91: 807-816.
Latorre, G.B. (1999). Enfermedades de los cultivos. En: Enfermedades de las

plantas cultivadas. Editorial Alfa-Omega. Mxico, D.F., 646 p.
Larkin, R.P., Deborah, R., and Fravel, R. (1998). Efficacy of various fungal and
bacterial biocontrol organisms for control of Fusarium wilt of tomato.
Plant Disease, 82, 1022-1028.
97
Larsen, J., and Bodker, L. (2001). Interactions between pea root-inhabiting
fungi examined using signature fatty acids. New Phytologist, 149: 487-
493.
Leeman, M., Van, J.A., Den, F.M., Heinsbroek, M., Bakker, P.A., and
Schippers, B. (1995). Induction of systemic resistance against Fusarium
wilt of radish by lipopolysaccharides of Pseudomonas fluorescens.
Linderman, R.G. (1988). Mycorrhizal interactions with the rhizosphere

microflora: The mycorrhizosphere effect. Phytopathology, 78(3): 366-
371.
Liu, L., Kloepper, J.W., and Tuzun, S. (1995). Induction of systemic resistance
in cucumber by plant growth-promoting rhizobacteria: Duration of
protection and effect of host resistance on protection and root
colonization. Phytopathology, 85: 1064-1068.
Lloyd, O.T. (1992). Problems associated with papaya production in

Jamaica. Proceedings of Interamerican Society of Tropical
Horticulture 34: 139-144.
Lpez-Aranda, J.M., Romero, F., Montes, F., Medina, J., Miranda, L., de los
Santos B., Vega, J., Pez, J., y Domnguez, F. (2001). El problema de la
prohibicin del bromuro de metilo como desinfectante de suelos
agrcolas; Resultados sobre algunas alternativas para el cultivo de la
fresa. Terralia, 19: 33-40.
Mahaffee, W.F., and Backman, A.P. (1993). Effects of seed factors on

spermosphere colonization of cotton by Bacillus subtilis GB03.
Mahaffe, W.F., and Kloepper, J.W. (1997). Bacterial communities of the

rhizosphere and endorhiza associated with field-grown cucumber
98
plants inoculated with a plant growth-promoting rhizobacterium or its
genetically modified derivative. Canadian Journal of Microbiology,
43: 344-353.
Malo, S.E., and Campbell, C.W. (1994). The papaya. Fact Sheet Horticultural
sciences. Institute of Food and Agricultural Sciences, University of
Florida, USA. 85 p.
Mar, M.V., Csar, S., Azcn, RR., and Barea, J.M. (2000). Interactions
between arbuscular mycorrhizal fungi and other microbial inoculants
(Azospirillum, Pseudomonas, Trichoderma) and their effects on
microbial population and enzyme activities in the rhizosphere of
maize plants. Applied Soil Ecology, 15: 261-272.
Mariano, R.L.R., Assis, S.M.P., Silveira, E.B., y Gomes, A.M.A. (2000).

Mecanismos de aco de bacterias promotoras de crecimento. En:
Manual de prticas em fitobacteriologia. Rosa de Lima Ramos
Mariano (Ed.). Recife, Brasil, pp. 139-152.
Marschner, P., and Crowley, D.E. (1996). Physiological activity of a

bioluminescent Pseudomonas fluorescens (strain 2-79) in the
rhizosphere of mycorrhizal and non-mycorrhizal pepper (Capsicum
annum L). Soil Biology and Biochemistry, 28: 869-876.
Mavrodi, D.V., Bonsall, R. F., Delaney, M., Soule, J., Phillips, G., and
Thomashow, S. (2001). Functional Analysis of Genes for Biosynthesis of
Pyocyanin and Phenazine-1-Carboxamide from Pseudomonas
aeruginosa PAO1. Journal of Bacteriology, 183(21): 6454-6465.
Mayo, K., Davis, R.E., and Motta, J. (1986). Stimulation of germination of

spores of Glomus versiforme by spore associated bacteria.
Mycologia, 78: 426-431.
99
McAllister, C.B., Garca-Romera, I., Godeas, A., and Ocampo, J.A. (1994).
Interactions between Trichoderma koningii, Fusarium solani and
Glomus mosseae: effects on plant growth, arbuscular mycorrhizas
and the saprophyle inoculanst. Soil Biology and Biochemistry, 26:
1363-1367.
McGonigle, T.P., Miller, M.H., Evans, D.G., Fairchild, D.G., and Swann, J.A.
(1990). A new method which gives and objective measure of
colonization of root by vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi. New
Phythologist, 115: 495-501.
Melgarejo, P., Cal, A., Salto, T., Martnez-Beringola, M.L., Martnez-Treceo,

A., Bardn, E., Palacios, J., Becerril, M., Medina, J., Clavero, I., Glvez,
J., y Lpez-Aranda, J.M. (2001). El problema de la prohibicin del
bromuro de metilo como fumigante de suelos agrcolas; Resultados
sobre algunas alternativas para viveros de fresa en Espaa. Terralia,
20: 20-29.
Mercado-Blanco, J., Drift, M. , Olsson, P. E., Thomas-Oates, E., Loon, L. C.,

and Bakker, H. M. (2001). Analysis of the pmsCEAB Gene Cluster
Involved in Biosynthesis of Salicylic Acid and the Siderophore
Pseudomonine in the Biocontrol Strain Pseudomonas fluorescens
WCS374. Journal of Bacteriology, (183) 6: 1909-1920.
Meyer, J.M., and Abdallah, M.A. (1978). The fuorescent pigment of

Pseudomonas fluorescens: biosynthesis, purification and
physicochemical properties. Journal Genetic of Microbiology, 107:
319-328.
Meyer, J.R., and Linderman, R.G. (1986). Response of subterranean clover to

dual inoculation with vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi and a
plant growth-promoting bacterium, Pseudomonas putida. Soil Biology
and Biochemistry, 18(2): 185-190.
100
Monne-Loccoz, Y., McHugh, B., Stephens, P.M., McConnell, F.I., Glennon,
J.D., Dowling, D.N., and OGara, F. (1996). Rhizosphere competence
of fluorescent Pseudomonas sp. B24 genetically modified to utilize
additional ferric siderophores. FEMS Microbiology Ecology, 19: 215-
225.
Monne-Loccoz, Y., Hans-Volker, T., O'Donnell, A., Simon, R., and O'Gara, F.
(2001). Impact of 2,4-diacetylphloroglucinol-producing biocontrol
strain Pseudomonas fluorescens F113 on intraspecific diversity of
resident culturable fluorescent pseudomonads associated with the
roots of field-grown sugar beet seedlings. Applied and Environmental
Microbiology, (67)8: 3418-3425.
Monera, R.O. (1999). Los hongos del suelo, factor limitante del cultivo de la
sandia. Vida rural, 96: 1-4.
Monzon, A., y Rodrguez, J.L. (1999). Infecciones casadas por el gnero

Fusarium. Control Calidad SEIMC, 8: 15-21.
Morris, J., OSullivan, D.J., Koster, M., Leong, J., Weisbeek, P.J., and OGara,
F. (1992). Characterization of fluorescent siderophore-mediated iron
uptake in Pseudomonas sp.strain M114: evidence for the existence of
an additional ferric siderophore receptor. Applied and Environmental
Muoz, G. A.A. (1993). Colonizacin de races de maz por cepas

productoras de siderforos de Azospirillum y de Pseudomonas. Tesis
de Maestra en Microbiologa. Benemrita Universidad Autnoma de
Puebla. Puebla, 84 p.
Nelson, P.E., Toussoun, T., and Marasas, W.F. (1983). Fusarium species: An
illustrated manual for identification. Pennsylvania State University
Press. Pennsylvania, USA, 203 p.
101
Nelson, P.E., Dignan, M.C., and Anaissie, E.J. (1994). Taxonomy, biology, and
clinical aspects of Fusarium species. Clinical Microbiological Reviews,
7: 479-504.
Nishina, M., Zee, F., Ebesu, R., Arakaki, A., Hamasaki, R., Fukuda, S., Nagata,
N., Leng, C., Nishijima, W., Mau, R., and Uchida, R. (2000). Papaya
production in Hawaii. Fruits and Nuts, 3: 1-8.
Notz, R., Maurhofer, M., Schnider-Keel, U., Duffy, B., Haas, D., and Dfago,
G. (2001). Biotic factors affecting expression of the 2,4-
Diacetylphloroglucinol biosynthesis gene phIA in Pseudomonas
fluorescens biocontrol strain CHA0 in the rhizosphere. Phytopathology,
91: 873-881.
Ocamb, C.M., and Kommedahl, T. (1994). Rhizosphere competence of

Fusarium species colonizing corn roots. Phytopathology, 84: 166-172.
Osullivan, D., and Ogara, F. (1992). Traits of fluorescent Pseudomonas spp.

Involved in supression of plant root pathogens. Microbiological
Reviews, (56)4: 662-676.
Olsson, P.A., Btah, E., Jakobsen, I., and Sderstrm, B. (1996). Soil bacteria
respond to presence of root but not mycelium of arbuscular
mycorrhizal fungi. Soil Biology and Biochemistry, 28: 463-470.
Pandwar, J.D.S. (1991). Effect of VAM and Azospirillum brasilense on

photosynthesis, nitrogen metabolism and grain yield in wheat. Indian
Journal Plant Physiology, 24(4): 357-361.
Park, K.S., and Kloepper, J.W. (2000). Activation of PR-1a promoter by

Rhizobacteria that induce systemic resistance in Tobacco against
Pseudomonas syringae pv. tabaci. Biological Control, 18: 2-9.
102
Patten, C., and Glick, B. (1996). Bacterial biosynthesis of indole-3-acetic
acid. Canadian Journal of Microbiology, 42: 207-220.
Paulitz, T.C., and Linderman, R.G. (1989). Interaction between fluorescent

pseudomonads and VA mycorrhizal fungi. New Phytologist, 113: 37-
45.
Phillips, J.M., and Hayman, D.S. (1970). Improve procedures for clearing
roots and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi
for rapid assessment of infection. Transactions of the British
Mycological Society, 55: 158-160.
Pieterse, C.M.J., Pelt, J.A.V., Wees, S.C.M.V., Ton, J., Len-Kloosterziel, K.M.,
Keurentjes, J.J.B., Verhagen, B.W.M., Knoester, M., Sluis, I.C.D., Bakker,
P.A.H.M., and Loon, L.C.V. (2001). Rhizobacteria-mediated induced
systemic resistance: triggering, signalling and expression. European
Journal of Plant Pathology, 107: 51-61.
Pillay, V.K., and Nowak, J. (1997). Inoculum density, temperature and

genotype effects on in vitro growth promotion and epiphytic and
endophytic colonization of tomato (Lycopersicon esculentum M)
seedlings inoculated with a Pseudomonas bacterum. Canadian
Journal of Microbiology, 43: 354-361.
Posta, H.K., Marschner, H., and Rmheld, V. (1994). Manganese redution in

the rhizosphere of mycorrhizal and nonmycorrhizal maize. Mycorrhiza,
5: 119-124.
Pozo, M.J., Azcon-Aguilar, C., Dumas-Gaudot, E., and Barea, J.M. (1998).
Chitosanase and chitinase activities in tomato rootos during
interactions with arbuscular mycorrhizal fungi or Phytophthora
parasitica. Journal of Experimental Botany, 49: 1729-1739.
103
Pozo, M.J., Azcon-Aguilar, C., Dumas-Gaudot, E., and Barea, J.M. (1999). -
1,3-glucanase activities in tomato roots inoculated with arbuscular
mycorrhizal fungi and/or Phytophthora parasitica and their possible
involvement in bioprotection. Plant Science, 141: 149-157.
PROFRUTA. (1999). Manual del cultivo de papaya (Carica papaya L.).

Ministerio de Agricultura, Ganadera y Alimentacin (MAGA).
Guatemala, Guatemala, pp 3-15.
Quadt-Hallmann, A., Hallmann, J., and Kloepper, J.W. (1997). Bacterial

endophytes in cotton: location and interaction with other plant-
associated bacteria. Canadian Journal of Microbiology, 43: 254-259.
Raaijmakers, J.M., Leeman, M., Mark, M.P., Orschot, V., Van, I., Schippers, B.,
and Bakker, P.A. (1995). Dose-response relationships in biological
control of Fusarium wilt of radish by Pseudomonas spp.
Raaijmakers, J.M., Bonsall, R., and Weller, D.M. (1999). Effect of population
density of Pseudomonas fluorescens on production of 2,4-
Diacetylphloroglucinol in the rhizosphere of wheat. Phytopathology,
89: 470-475.
Rankin, L., and Paulitz, T.C. (1994). Evaluation of rhizosphere bacteria for
biological control of Pythium root rot of greenhouse cucumbers in
hydroponic culture. Plant Diseases, 78: 447-451.
Raupach, G.S., and Kloepper, J.W. (1998). Mixtures of plant growth-

promoting rhizobacteria enhance biological control of multiple
cucumber pathogens. Phytopathology, 88: 1158-1164.
Raven, J.A., and Edwards, D. (2001). Roots: evolutionary origins and

biogeochemical significance. Journal of Experimental Botany, 52:
381-401.
104
Ravnskov, S., Nybroe, O., and Jakobsen, I. (1999a). Influence of an
arbuscular mycorrhizal fungus on Pseudomonas fluorescens DF57 in
rhizosphere and hyphosphere soil. New Phytologist, 142: 113-122.
Ravnskov, S., and Jakobsen, I. (1999b). Effects of Pseudomonas fluorecens

DF57 on growth and P uptake of two arbuscular mycorrhizal fungi in
symbiosis with cucumber. New Phytologist, 8: 329-334.
Reddy, M.S., Hynes, R.K., and Lazarovits, G. (1993). Relationship between in

vitro growth inhibition of pathogens and suppressin of
preemergence damping-off and postemergence root rot of white
bean seedlings in the greenhouse by bacteria. Canadian Journal of
Rekah, Y., Shtienberg, D., and Katan, J. (1999). Spatial distribution and
temporal development of Fusarium crown and root rot of tomato and
pathogen dissemination in field soil. Phytopathology, 89: 831-839.
Rekah, Y., Shtienberg, D., and Katan, J. (2000). Disease development

following infection of tomato and basil foliage by airborne connidia
of the soilborne pathogens Fusarium oxysporum f. sp. radicis-
lycopersici and F. oxysporum f. sp. Basilici. Phytopathology, 90: 1322-
1329.
Requena, N., Jimnez, I., Toro, M., and Barea, J.M. (1997). Interactions
between plant-growth-promoting rhizobacteria (PGPR), arbuscular
mycorrhizal fungi and Rhizobium spp. In the rhizosphere of Anthyllis
cytisoides, a model legume for revegetation in mediterranean semi-
arid ecosystems. New Phytologist, 136: 667-677.
Reyes, C., P. (1990). Diseo de experimentos aplicados. 3a. ed. Trillas,

Mxico. 348 p.
105
Roberts, T.L., y Henry, J.L. (2001). El muestro de suelos: los beneficios de un
buen trabajo. Informaciones Agronmicas, 42(1): 4-7.
Rodrguez-Kabana, R. (1990). Las tcnicas agronmicas en la regulacin de

las enfermedades de las plantas. Agrcola vergel. Diciembre, pp 976-
980.
Rosales, A.M., Thomashow, L., Cook, R., and Mew, T.W. (1995). Isolation and
identification of fungal metabolites produced by rice-associated
antagonistic Pseudomonas spp. Phytopathology, 85: 1028-1032.
Saldaa, H.M., Marques, M., y Ruiz, B. (1985). Identificacin de

enfermedades fungosas del cultivo de la papaya (Caraca papaya
L.) en el estado de Tabasco. Revista Mexicana de Fitopatologia, 3(1):
14-16.
Sanchez, V.I. (1994). Andean Frutis. In: Neglected crops: 1492 from a
different perspective. Hernndo, B.J. y Len J. (Eds.). Plant Production
and Protection Series FAO, 26: 181-191.
Scharff, A.M., Jakobsen, I., and Rosendahl, L. (1997). The effect of symbiotic
microorganisms on phytoalexin contents of soybean roots. Journal of
Plant Physiology, 151: 716-723.
Schippers, B. (1988). Biological control of pathogens with rhizobacteria.

Biology Science, 318, 283-293.
Schmidli, P.S., Keel, C., and Dfago, G. (1997). The global regulator GacA of
Pseudomonas fluorescens CHA0 is required for suppression of root
diseases in dicotyledons but not in graminae. Plant Pathology, 46: 80-
90.
Schnider-Keel, U., Seematter, A., Maurhofer, M., Blumer, C., Duffy, B., Gigot-
Bonnefoy, C., Reimmann, C., Notz, R., Dfago, G., Haas, D., and Keel,
106
C. (2000). Autoinduction of 2,4-Diacetylphloroglucinol biosynthesis in
the biocontrol agent Pseudomonas fluorescens CHA0 and repression
by the bacterial metabolites salicylate and pyoluteorin. Journal of
Bacteriology, 182(5): 1215-1225.
Schreiner, R.P., and Koide, R.T. (1993). Streptomycin reduces plant response
to mycorrhizal infection. Soil Biology and Biochemistry, 25(8): 1131-
1133.
Schreiner, R.P., Mihara, K.L., McDaniel, H., and Bethlenfalvay, G.J. (1997).
Mycorrhizal fungi influence plant and soil functions and interactions.
Schroth, M.N., and Hancock, J.G. (1982). Disease-suppressive soil and root-
colonizing bacteria. Science, 216: 1376-1381.
Shaul, O., Galili, S., Volpin, H., Ginzberg, I., Elad, Y., Chet, I., and Kapulnik, Y.
(1999). Mycorrhiza-induced changes in disease severity and PR
protein expression in tobacco leaves. Molecular Plant-Microbe
Interactions, 12(11): 1000-1007.
Shishido, M., and Chanway, C.P. (1998). Forest soil community responses to
plant growth-promoting rhizobacteria and spruce seedlings. Biology
and Fertility of Soil, 26: 179-186.
Sieverding, E. (1991). Vesicular-arbuscular mycorrhizal management in

tropical agrosystems. GTZ (Eds.). Repblica Federal Alemana. 180p.
Simmons, C.R. (1994). The physiology and molecular biology of plant 1,3--
d-glucanases and 1,3;1,4--d-glucanases. Critical Review Plant
Sciences, 13: 325-387.
Simons, M., Bij, A., Brand, I., Weger, L., Wijffelman, C.A., and Lugtenberg, B.
(1996). Gnotobiiotic system for studyng rhizosphere colonization by
107
plant growth-promoting Pseudomonas bacteria. Molecular Plant-
Microbe Interactions, 9(7): 600-607.
Sing, S., and Kapoor, K.K. (1998). Effects of inoculation of phosphate-

solubilizing microorganisms and an arbuscular mycorrhizal fungus on
mungbean grown under natural soil conditions. Mycorrhiza, 7: 249-
253.
Singh, S., and Kapoor, K.K. (1999). Inoculation with phosphate-solubilizing

microrganisms and a vesicular-arbuscular mycorrhizal fungus
improves dry matter yield and nutrient uptake by wheat grown in a
sandy soil. Biology and Fertility of Soil, 28: 139-144.
Skovgaard, K., Nirenberg, H.I., ODonnell, K., and Rosendahl, S. (2001).

Evolution of Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum races inferred from
multigene genealogies. Phytopathology, 91: 1231-1237.
Slezack, S., Dumas-Gaudot, E., Rosendahl, S., Kjoller, R., Paynot, M., Negrel,
J., and Gianinazzi, S. (1999). Endoproteolytc activities in pea roots
inoculated with the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus mosseae
and/or Aphanomyces euteiches in relation to bioprotection. New
Phytologits, 142: 517-529.
Smiley, R.W., and Udddin, W. (1992). Influence Of tillage and nitrogen on

crown rot (dryland foot rot). En: Biological and cultural tests for control
of plant diseases. D.S. Wysong (Ed.). APS Press. Minnesota. USA. 76 p.
Smith, I.M., Dunez, J., Phillips, D.H., Lelliott, R.A., y Archer, S.A. (1992). Manual
de enfermedades de las plantas. Mundi-prensa (Editorial). Madrid,
Espaa. 671 p.
Smith, N.J.H., Williams, J.T., Pluncknett, D.L., and Talbot, J.P. (1992). Tropical
forests and their crops. Cornell University Press, USA. 98 p.
108
Staley, T.E., Lawrence, E.G., and Nance, E.L. (1992). Influence of a plant
growth-promoting pseudomonad and vesicular-arbuscular
mycorrhizal fungus on alfalfa and birdsfoot trefoil growth and
nodulation. Biology and Fertility of Soils, 14: 175-180.
St-Arnaud, M., Hamel, C., and Fortin, J.A. (1994). Inhibition of Pythium
ultimun in roots and growth sustrate of mycorrhizal Tagetes patula
colonized with Glomus intraradices. Canadian Journal of Plant
Pathology, 16: 187-194.
St-Arnaud, M., Hamel, C., Vimard, B., Caron, M., and Fortin, J.A. (1997).
Inhibition of Fusarium oxysporum f. sp. Dianthi in the non-VAM species
Dianthus caryophyllus by co-culture with Tagetes patula companion
plants colonized by Glomus intraradices. Canadian Journal of
Botanyc, 75: 998-1005.
Sturz, A.V., Christie, B.R., and Matheson, B.G. (1998). Associations of

bacterial endophyte populations from red clover and potato crops
with potential for beneficial allelopathy. Canadian Journal of
Subba, N.S., Tilak, K.B.B., and Singh, C.S. (1985). Synergistic effect of
vesicular-arbuscular mycorrhizas and Azospirillum brasilense on the
growth of barley in pots. Soil Biology and Biochemistry, 17(1): 119-121.
Suslow, T.V., and Schroth, M. (1982). Rhizobacteria of sugar beets: Effects of

seed application and root colonization on yield. Phytopathology, 72:
199-206.
Teintze, M., Hossain, M.B., Barnes, C.L., Leong, J., and Van, D. (1981).
Structure of ferric pseudobactic a siderophore from plant growth
promoting Pseudomonas. Biochemistry, 20: 6446-6457.
109
Telford, J., and Raymond, K.N. (1997). Amonabactin: a family of novel
siderophores from a pathogenic bacterium. JBIC 2: 750-761.
Toro, M., Azcn, R., and Barea, J. M. (1997). Improvement of arbucular

mycorrhiza development by inoculation of soil with phosphate-
solubilizing rhizobacteria to improve rock phosphate bioavailability
(32P) and nutrient cycling. Applied and environmental microbiology,
63: 4408-4412.
Torres, T. F. (1996). La agricultura orgnica: Bases conceptuales y marco de

referencia en el desarrollo econmico. En: Memorias del prime foro
nacional sobre agricultura orgnica. R.J. Zapata y R. Caldern (Eds.).
Colima, Mxico, pp 136-149.
Trotta, A., Varese, G.C., Gnavi, E., Fusconi, A., Sampo, S., and Berta, G.
(1996). Interactions between the soil-borne root pathogen
Phytophthora nicotianae var parasitica and the arbuscular
mycorrhizal fungus Glomus mosseae in tomato plants. Plant and Soil,
185: 199-209.
Vandermeer, J. (1995). The ecological basis of alternative agriculture.

Annual Review Ecology System, 26: 201-224
Vzquez T., Zulueta, R., y Lara, C. (1992). Anlisis de la flora de malezas del
campo experimental la bandera, municipio de Actopan, Veracruz.
La ciencia y el hombre, 11: 77-106.
Vennete, J.R., and Gross, P.L. (1992). Evaluation of Trichoderma harzianum

for control of seedling diseases on dry bean. En: Biological and
Cultural test for control of plant diseases. D.S. Wysong (Ed.). APS Press
(Editorial) Minnesota. USA. 91 p.
110
Voisard, C., Keel, C., Hass, D., and Defago, G. (1989). Cyanide production
by Pseudomonas fluorescens helps suppress black root rot of tabaco
under gnotobiotic conditions. EMBO Journal, 8: 351-358.
Vostka, M., and Gryndler, M. (1999). Treatment with culture fractions from
Pseudomonas putida modifies the development of Glomus fistolosum
mycorrhiza and the response of potato and maize plants to
inoculation. Applied Soil Ecology, 11: 245-251.
Wei, G., Kloepper, J.W., and Tuzun, S. (1991). Induction systemic resistance
of cucumber to Colletotrichum orbiculare by select strains of plant
growth-promoting rhizobacteria. Phytopathology, 81: 1508-1512.
Wei, G., Kloepper, J.W., and Tuzun, S. (1996). Induction systemic resistance
to cucumber diseases and increased plant growth by plant growth-
promoting rhizobacteria under field conditions. Phytopathology, 86:
221-224.
Weissmann, R., and Gerhardson, B. (2001). Selective plant growth

suppression by shoot application of soil bacteria. Plant and Soil, 234:
159-170.
Whipps, J. (2001). Microbial interactions and biocontrol in the rhizosphere.

Journal of Experimental Botany, 52: 487-511.
Wilson, G.W.T., Hetrick, B.A.D., and Kitt, D.G. (1989). Suppression of vescular-
arbuscular mycorrhizal fungus spore germination by nonsterile soil.
Canadian Journal of Botanyc, 60: 18-23.
Winkelmam, G. (1994). Pyoverdins and Pseudobactins. In: Microbial iron

chelates. CRC Press Boca Raton, Florida USA, pp 139-269.
111
Wolcan, S.M., Lori, G.A., y Monaco, C.I. (1999). Fusarium moniliforme, nuevo
patgeno de los cultivares asiticos de Lilium. Investigacin Agrcola:
Proteccin Vegetal, 14: 117-129.
Yage, G.J. (1999). Gua practica de funguicidas y otros protectores. Ed.

Mundi-Prensa. Espaa. 319 p.
Young, J.K., and Hwang, B.H. (1994). Differential accumulation of -1,3-

glucanase and chitinase isoforms in pepper stem infected by
compatible and incompatible isolates of Phytophthora capsici.
Physiology Molecular Plant Pathology, 45: 195-209.
Zavaleta-Meja, E. (1996). Alternativas ecolgicas par el manejo de

enfermedades en los cultivos. En: Nuevos horizontes en agricultura:
agricultura y desarrollo sostenible. J. Prez-Moreno y R. Ferrera-
Cerrato (Eds.). Colegio de Posgraduados en Ciencias Agrcolas.
Montecillo. Mxico, pp 99-108.
Zehnder, G. W., Yao, C., Murphy, J. F., Sikora, E., R., and Kloepper, J., W.
(2000). Induction of resistance in tomato against cucumber mosaic
cucumvirus by plant growth promoting rhizobacteria. Biocontrol, 45:
127-137.
Zhu, Y.G., Laidlaw, A., Cristie, P., and M., Hammond. (2000). The specificity
of arbuscular mycorrhizal fungi in perennial ryegrass-white clover
pasture. Agriculture, Ecosystems and Environment, 71: 211-218.
112

Hernandez Montiel Luis Guillermo PDF

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Hernandez Montiel Luis Guillermo PDF

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

UNIVERSIDAD DE COLIMA

MAESTRA EN CIENCIAS, REA BIOTECNOLOGA

RIZOBACTERIAS Y HONGOS MICORRZICOS COMO AGENTES DE

Tesis que para obtener el grado de

LUIS GUILLERMO HERNNDEZ MONTIEL

Asesor Interno: Dr. Sergio Aguilar Espinosa

Asesor Externo: M.C. Andrs Adolfo Muoz Garca

Tecomn, Colima, Mxico

4.3.2.1. Variables a evaluar durante el desarrollo del

4.3.3.1. Variables a evaluar en el experimento sobre

I) Altura y numero de hojas ........................................ 39

Cuadro 1 Participacin de los principales municipios

Figura 1 Caractersticas morfolgicas microscpicas del

Figura 4 Cuantificacin de altura y nmero de hojas de

Figura 5 rea foliar de plntulas de papayo cuantificada a los

Para evaluar el efecto protector entre rizobacterias (PGPR) y hongos

In order to know the protective effect between rhizobacterial (PGPR) and

En el mercado mundial el cultivo del papayo (Carica papaya L.), se

Tradicionalmente el control de estos patgenos se lleva a cabo con dos

Ante tales casos existe el aprovechamiento de ciertas tecnologas con un

El control biolgico de enfermedades de las plantas se ha practicado

Si las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR) y los hongos

2.2. Objetivo general

Conocer el efecto conjunto entre rizobacterias promotoras del crecimiento

2.2.1. Objetivo especfico

Cuantificar el efecto conjunto entre rizobacterias promotoras del

3.1. El cultivo de papayo (Carica papaya L)

Se estima que la produccin mundial de frutas tropicales para el ao 2000

Cuadro 1. Participacin de los principales municipios productores de

3.1.1. El damping-off, principal enfermedad en semillero

Unos de los problemas ms importantes que atacan al cultivo del papayo

Estos hongos son parsitos no obligados que viven, se desarrollan y

Pertenece a la Divisin Ascomycota, Clase Euascomycetes, Orden

Su marcada variabilidad en cuanto a sus caractersticas fisiolgicas y

Monofialide con cadena de

Figura 1. Caractersticas morfolgicas microscpicas del gnero Fusarium

De las diversas especies de Fusarium, la especie oxysporum es la mas

Este hongo se presenta en regiones templadas y clidas, ya sea en los

3.1.1.2. Desarrollo de la enfermedad

La forma de invadir de este fitopatgeno empieza cuando los tubos

Los problemas causados por este tipo de enfermedades del suelo en el

Actualmente existen alternativas de manejo de los cultivos mediante la

Involucrando en estos procesos el manejo de agentes microbianos

3.2. Rizobacterias y hongos micorrzicos con capacidad de proteccin en

Dentro de la gama de microorganismos que habitan en el suelo e

Sin embargo generalmente el uso de rizobacterias y hongos micorrzicos en

3.2.1. Mecanismos de proteccin de las rizobacterias en las plantas

Kloepper y Schroth (1978) clasificaron a las rizobacterias como PGPR (plant

3.2.1.1. Las rizobacterias y sus metabolitos implicados en el control

Ambrosi et al. (2000) y Mercado-Blanco et al. (2001), mencionan que la

compuestos de bajo peso molecular afines al ion Fe+ (Telford y Raymond,

sid B sid U sid R

Figura 2. Modelo propuesto sobre la absorcin de fierro por Pseudomonas

Fe2+ por medio de una reaccin enzimtica de xido-reduccin, el cual

Otro de los compuestos microbianos que producen las rizobacterias es el

Las rizobacterias pueden inducir alteraciones en la fisiologa de la planta,

b) La RSI una vez expresada, activa un potencial mltiple de mecanismos

c) Un aspecto importante de la RSI es el amplio espectro de patgenos

Finalmente algunas rizobacterias principalmente del gnero Pseudomonas

3.2.2. Mecanismos de proteccin de los hongos micorrizicos en las plantas

Los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) han sido reportados como

Al respecto Young y Hwang (1994), reportan que la resistencia de las

En los ltimos aos los investigadores se han enfocado en la bsqueda de