Cubiertas superficiales

Las cubiertas que rodean la clula bacteriana se han

identificado por medio de tcnicas de tincin en microscopa
ptica y electrnica, y tcnicas de aislamiento y
caracterizacin bioqumica de los componentes celulares.
Las principales cubiertas son:

cpsulas y limos
la pared celular de las bacterias Gram-positivas
la pared celular de las bacterias Gram-negativas
la membrana plasmtica
los mesosomas (invaginacin de la membrana plasmtica)

La relacin topogrfica entre la pared celular y la membrana

plasmtica se observa en la microfotografa electrnica
deMicrococcus lysodeikticus (A) y de Bacteroides
melaninogenicus (B).

A. Microfotografa electrnica de la bacteria Gram positiva Micrococcus

lysodeikticus mostrando la gruesa capa de peptidoglicano que conforma la
pared celular (cw), por debajo de ella la membrana plasmtica (cm), un
mesosoma(m), y el nucleoide (n).

B. Clula bacteriana procesada mostrando la lnea de fractura entre la

membrana citoplasmtica (m.i.) y la pared celular (m.e.). Barra = 1 m.

Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas

poseen una pared celular de peptidoglicanos que les confieren
su forma caracterstica y les provee de proteccin mecnica.

Dos grupos de bacterias carecen de pared celular:

los Mycoplasma que poseen solamente membrana celular

las formas L derivadas de bacterias que perdieron su habilidad de
 sintetizar su pared celular

MET de Mycoplasma

La pared celular bacteriana rodea al protoplasto. La pared

bacteriana es permeable a las sales y a muchas sustancias
de bajo peso molecular. No es rgida sino elstica como el
"cuero" de una pelota de ftbol, el protoplasto bacteriano
confiere una cierta rigidez al conjunto protoplasto + pared
que lo rodea, derivada de su presin interna o turgencia (al
igual que la cmara hinchada de la pelota).

La presin interna del protoplasto esta determinada

osmticamente. Se debe tener en cuenta que la membrana
citoplasmtica es la verdadera barrera
osmtica (es semipermeable y controla la entrada y salida
de sustancias a la clula).

La pared celular y la plasmlisis

La semipermeabilidad de la membrana citoplasmtica y la

permeabilidad de la pared celular originan, entre otros, el
fenmeno de plasmlisis. Este fenmeno se observa cuando
la tonicidad del medio externo es mayor que la del
protoplasto (medio hipertnico) en estas condiciones el agua
sale del protoplasto y este se encoge por lo que lamembrana
citoplasmtica se separa de la pared.

La pared celular y la coloracin de Gram

La pared celular es responsable de lo que le sucede al

colorante utilizado en la Tincin de Gram (1884). La propiedad
de teirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram
negativas) por esta coloracin es un criterio de clasificacin
importante correlacionable con otras propiedades
bacterianas. Unos pocos organismos son Gram-variables.

Tanto las Gram-positivas como las Gram-negativas captan la

misma cantidad de cristal violeta (CV) e iodo (I). El
complejo CV-I sin embargo es atrapado dentro de la clula
Gram positiva por la deshidratacin y la reduccin del tamao
de los poros de la pared resultante del proceso de lavado con
solvente. En contraste en las Gram negativas la fina (y
probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide
la extraccin por el solvente del complejo.

Avala lo antedicho el hecho que, si despus de su tincin se

tratan con lisozima bacterias Gram positivas, se ve que los
protoplastos siguen teidos, pero pierden el colorante si se los
trata con alcohol. Esto indica que el colorante es fijado a nivel
del protoplasto, y que la pared celular de las bacterias
Gram positivas es la que impide la extraccin del
colorante. Corroborando esta suposicin se observa que
cuando Bacillus subtilis emerge de su espora su pared
celularesta "inmadura" y se comporta como Gram negativa.
Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a
ser Gram positiva.

La pared bacteriana: Estructura Qumica

El esqueleto de la pared celular bacteriana est constituido
por un heteropolmero, el peptidoglicano murena. El mismo,
y las enzimas que intervienen en su sntesis, son una
caracterstica general de todas las eubacterias.
Lasarqueobacterias no poseen murena.
Esta macromolcula esta formada por una secuencia
alternante de N-acetil-glucosamina (NAG) y el cido N-
acetilmurmico (NAM) unidos mediante enlaces -1,4. La
cadena es recta y no ramificada, constituyendo la estructura
bsica de la pared celular (su "backbone").

El cido N-acetilmurmico es un ter resultante de la unin

del oxhidrilo del C3 de la molcula de N-acetil-glucosamina
con el oxhidrilo del cido lctico.

El grupo cido del lctico enlaza con una pequea cadena

peptdica. Entre los aminocidos tpicos de esta cadena se
encuentran la L-alanina, cido D-glutmico, cido m-
diaminopimlico o la L-lisina o D-alanina.

Los diaminocidos al tener dos grupos amino pueden formar

enlaces peptdicos con aminocidos dicarboxlicos de otra
cadena. A travs de estas uniones peptdicas se unen entre s
las cadenas de heteropolmeros formando una molcula
gigante, el sculo de murena.

Representacin esquemtica de los peptidoglicanos

Debemos destacar lo siguiente:

Las formas D de la Alanina y del cido glutmico no se

presentan en las protenas de los eucariotas. Tampoco en
dichas protenas se encuentra el cido m-diaminopimlico. La
secuencia alternante de N-acetilglucosamina y N-
acetilmurmico no se encuentra en eucariotas Estas
caractersticas estructurales hacen que las bacterias (al igual
que con la diferencia en los ribosomas) presenten un "taln de
Aquiles" susceptible de ser utilizado en su contra por los
frmacos de la terapia medica. Los agentes teraputicos que
actan en el mbito de la pared celular bacteriana y tienen
como "blanco" las enzimas involucradas en su sntesis son en
gran medida inocuos para el organismo eucariota sometido a
una agresin bacteriana (las "balas mgicas" visualizadas por
Paul Erlich).
La pared celular de las bacterias Gram positivas

Sus principales caractersticas son:

La red de murena esta muy desarrollada y llega a tener hasta 40

capas
Los aminocidos implicados varan de una especie a otra.
La constitucin del esqueleto es caracterstica de la especie y
constituye una buen parmetro taxonmico
Es frecuente la presencia de los aminocidos L-diaminopimlico o de
lisina
Los poliscaridos estn unidos por enlaces covalentes (en el caso de
tenerlos) Su contenido proteico es bajo.
En ella se encuentran cidos teicoicos
La pared celular de las bacterias Gram negativas

La red de murena presenta una sola capa

La constitucin del saco de murena es igual en todas las bacterias
Gram negativas.
Contiene siempre nicamente meso-diaminopimlico
Nunca contiene lisina
No se encuentran puentes interpeptdicos.
Se encuentran grandes cantidades de lipoprotenas y
lipopolisacridos que representan hasta el 80 % del peso seco de la
pared celular. Para mantener la estabilidad de las capas de
lipopolisacridos es necesario el in Ca++.
En las bacterias Gram negativas la capa de murena puede ser
atacada por la lisozima cuando se las trata con EDTA (Etilen-
diamino-tetractico). Este agente, al quelar el Ca++ libera una parte
de los lipopolisacridos y permite la accin de la enzima..
Hasta ahora no han podido demostrarse cidos teicoicos.

Accin de la lisozima y la penicilina

Un viejo refrn dice que Dios llama a la puerta de un

hombre solo una vez en la vida. No es el caso
de Sir Alexander Fleming a la de l llamo dos veces (o
ms), aunque es necesario coincidir que no es
suficiente con el llamado, amn de l, es necesario
escuchar y responder.

Segn se cuenta el descubrimiento de la lisozima tuvo

lugar cuando las lagrimas de un nio (que estaba en el
laboratorio donde trabajaba Fleming), caen en un tubo
y aclaran una suspensin Micrococcus lysodeikticus,
que, hoy se sabe, es la bacteria mas sensible a la
lisozima, ma siii....

Este hecho esta un poco menos difundido que la

novelesca historia de la espora de Penicilium que entro
por la ventana del laboratorio de Fleming, cayo en una
placa de Petri y al crecer puso de manifiesto la accin
bactericida del antibitico que llamo penicilina....
( Florey y Chain en Oxford la aislaron, dieron las
pautas de su produccin industrial y al hacerlo
pusieron en marcha la era de los antibiticos, por ello,
Fleming , Florey y Chain recibieron el premio Nobel en
1945 )
La lisozima descubierta en 1922, es una enzima que
rompe el enlace beta glucosdico de la murena. Se la
encuentra en el lquido lagrimal, secreciones nasales y
en la clara de huevo. Tambin se la ha aislado de
bacterias y bacterifagos. La accin de la lisozima se
pone en evidencia por un aclaramiento rpido de una
suspensin bacteriana, Micrococcus lysodeikticus ya se
lisa con 1 ug de lisozima / ml. Para lisar otras bacterias
p.e Bacillus megaterium se necesitan 50 ug / ml . La
capa de murena de muchas bacterias Gram negativas
solo es atacada por la lisozima cuando se aade EDTA
(Etilen-diamino-tetractico).

El mecanismo de lisis es el siguiente: la destruccin de

la pared celular deja al protoplasma de las bacterias
rodeado nicamente por la membrana celular
("protoplasto"), lo cual convierte a la bacteria en un
organismo extraordinariamente sensible a las
variaciones de tonicidad del medio, esta es la base
del fenmeno de aclaracinque tiene lugar luego de la
accin de la lisozima, cuando la solucin
es hipotnica.
Los protoplastos son estables en medios hipertnicos e
isotnicos; en medios hipotnicos, tal lo sealado,
estallan y dejan restos de membrana citoplasmtica
llamados "fantasmas" (ghosts).

El proceso de sntesis de la pared celular comienza en

el citoplasma bacteriano, a partir de N-
acetilglucosamina-1-fosfato que se une al UDP (uridin
difosfato).

El UDP se combina con la N-acetilglucosamina-1-fosfato, para dar

UDP-N-acetilglucosamina que primero forma el ter lctico y luego
en sucesivos pasos enzimticos se unen al mismo los cinco
aminocidos para formar el N-acetilmurmico.

En el siguiente paso, que ocurre en el mbito de la membrana

citoplasmtica la molcula que es hidrfila cambia a lipfila, lo cual
facilita su transporte, por el cambio del UDP por undecaprenil-
fosfato y el agregado de un pentapptido de glicina a nivel de la L-
lisina
En la siguiente fase, en el mbito de la pared celular, se produce la
transglucosidacin y formacin del enlace beta alargando de esta
manera la molcula.
Los enlaces transversales entre molculas del polmero se produce
por transpeptidacin, se libera una D-alanina y el grupo carboxilo se
une a un grupo amino de la lisina de otro oligopptido, tambin se
libera el undecaprenil-fosfato.

La penicilina interfiere en este ultimo paso, es decir

impide la unin transversal o puente interpeptdico
pero no la elongacin del polmero. De la misma
manera actan las cefalosporinas, vancomicina,
bacitracina y cicloserina. Debe notarse que la sntesis
de la pared no se realiza cuando no hay lisina
disponible o cuando se impide la racemizacin de la L-
alanina y por lo tanto la disponibilidad de la D-alanina
por efecto de la c-clicoserina (oxamicina).

La membrana externa

En la bacterias Gram negativas se observa por fuera

del saco de murena una capa semejante a la
membrana celular por lo que se ha dado en llamarla
membrana externa, es de composicin compleja y en
ella intervienen fosfolpidos, protenas y
lipopolisacridos.

Cumple funciones mecnicas y fisiolgicas. En esta

bicapa lipdica (compuesta por el lpido A del
lipopolisacrido en su parte externa y los fosfolpidos
en la interna) se encuentran protenas que la
atraviesan en todo su espesor y que delimitan poros
(por eso se denominan porinas) hidrfilos que
permiten el paso de sustancias hidrfilas de bajo peso
molecular. No se encontraron sistemas de transporte
activo.

La membrana externa se encuentra unida al

peptidoglicano a travs de la protena conocida como
lipoprotena de Braun cuya parte lipdica se encuentra
en la membrana y la protena unida covalentemente a
la murena. de la membrana. La membrana externa
tiene unos puntos de contacto con la membrana
interna que se denominan uniones de Bayer y que se
supone son importantes en el transporte a travs de la
membrana.

ESPACIO PERIPLSMICO

En las bacterias Gram negativas el espacio que va

desde membrana plasmtica a membrana externa (ver
figura abajo) se denomina espacio periplsmico, tiene
aparentemente una consistencia gelatinosa.

En numerosas bacterias contiene abundantes enzimas, por ejemplo

aquellas que inician la degradacin de substratos como la glucosa, o
la transformacin de compuestos inorgnicos como los nitratos.
Tambin se encuentran las depolimerasas que actan sobre los
biopolmeros (proteasas, polisacaridasas, nucleasas y otros).

Otras enzimas importantes presentes en el espacio periplsmico son

las b-lactamasas responsables de la destruccin de los
antibiticos b-lactmicos y, por tanto, de la resistencia de ciertas
bacterias a ellos.

Asimismo se encuentran all sensores qumicos destinados a

detectar variaciones ambientales.

Algunas de estas enzimas estn libres y otras ligadas a

la membrana citoplasmtica.

En las bacterias Gram-positivas no hay, en realidad,

espacio periplsmico; pero pareciera que la parte ms
interna del peptidoglicano puede desarrollar una
funcin similar reteniendo mediante fuerzas
electrostticas molculas de enzimas equivalentes a
las periplsmicas de las Gram-negativas.

Los lipopolisacridos

Los lipopolisacridos con una estructura caracterstica

se encuentran en la capa externa, a diferencia de la
membrana plasmtica los forman:

La parte glucosdica corresponde a dos molcula de N-

acetilglucosamina (es, para ponerlo en un nombre mas largo una
glucosaminadisacrido, es la estructura equivalente al

glicerol de los fosfolpidos) sus grupos hidroxilos

estn esterificados por cidos grasos C12, C16, C18,
que al ser hidrofbicos se orientan hacia el interior. Se
lo conoce como lpido A

unida a ellas y proyectndose al exterior se encuentra una cadena

glicosdica. Esta cadena posee una zona central R y a ella le sigue
extermamente la cadenas heteropolisacrida O- especifica que
representa a los antgenos somticos.

La funcin del lipopolisacrido en las bacterias es la de

incapacitar las defensas del husped, proporcionar
carga negativa a la superficie de la membrana y
estabilizarla.

Constituyen una de las endotoxinas ms activas de las

bacterias, son fuente de origen de fiebre, diarrea y
provocan una fuerte respuesta inmune, siendo uno de
los agentes responsables del llamado shock endotxi
producido cuando las clulas del sistema inmune
entran en contacto con l. Tienen gran importancia en
el diagnstico bacteriolgico y en la identificacin de
infecciones.
Distintas cepas se diferencian entre s por las llamadas cadenas
laterales O especficas ya sealadas, hecho que puede ponerse de
manifiesto por mtodos inmunolgicos.
Las clulas bacterianas crecen sobre agar generalmente como
colonias lisas y brillantes denominadas formas S (por smooth=
lisos); la superficie regular contiene mucha agua debido a la
presencia de las cadenas polisacridas O-especficas.
Estas formas lisas mutan espontneamente a formas que crecen
como colonias planas y rugosas, denominadas formas R (por rough
= rugoso).
Cuando invaden un organismo, la presencia de esas cadenas de
poliscaridos dan a las bacterias S una ventaja selectiva al ser ms
resistentes a la fagocitosis por los leucocitos y por ello ms
virulentas.
Hasta que el hospedador no forme anticuerpos y stos se unan a los
poliscaridos, las bacterias no son atacables, la gran variedad de
polisacridos O-especficos en bacterias patgenas puede deberse a
una seleccin de tipos O-antignicos (mutantes) nuevos cada vez;
tienen por tanto una ventaja en el desarrollo, porque el hospedador
no puede disponer simultneamente de los anticuerpos contra
cientos de antgenos.

[ Atrs ] [ Principal ] [ Arriba ] [ Siguiente ]

Acidos teicoico: son cadenas de molculas de glicerina o ribitol

esterificadas entre s por puentes fosfato, portan una fuerte carga
negativa (probablemente sirvan para "secuestrar" cationes). Los
cidos teicoicos se unen probablemente a la murena a travs del
fosfato formando una amida. Son muy antignicos.
Los grupos sustitutivos de los polioles incluyen D-alanina (como
ster), N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina, los sustituyentes
son caractersticos de las especies bacterianas.
Estructura de los cidos teicoicos de la pared celular
(A) Acido Ribitol- teicoico con unidades repetitivas
unidas por enlaces 1,5-fosfo dister de D-ribitol y ster
de D-alanina en posicin 2 y sustituyentes glicosidcos
en posicin 4 (R= N-acetilglucosamina en S. aureus o
alfa-glucosil en B. subtilis .
(B)Acido Glicerol- teicoico con unidades repetitivas
unidas por enlaces 1,3-fosfo dister (1,2,en algunas
especies). (R =H o D-alanina o glucosil).

Pelota de ftbol: En mi poca la "numero 5" tenia un "cuero con

tientos" y una cmara. Con un inflador se inflaba la pelota hasta que
adquira la consistencia debida y, salvo que ahora las pelotas no
tienen tientos y otras sofisticaciones, para que tengan esa
consistencia hay que inflarlas.
El valor osmtico del contenido celular es equivalente al de una
disolucin al 10-20% de sacarosa; . Normalmente la concentracin
de azcares y sales es superior en el interior de las clulas que en el
exterior y la clula capta tanta agua como lo permite la pared
celular
Aqules: hroe de la mitologa griega. La leyenda cuenta que su madre lo
sumergi en la laguna Estige lo que lo hizo invulnerable, excepto en el taln
por donde lo sostuvo. Muere a consecuencia de una flecha que Pars, el
hroe troyano, raptor de la bella Helena, acert en su taln. Por extensin
"taln de Aquiles" = punto dbil.
Tincin de Gram:
 1. El procedimiento se inicia fijando a la llama las bacterias
extendidas en un portaobjetos.

2. Las mismas se tien con una solucin del colorante bsico

cristal violeta.

3. El paso siguiente consiste en un tratamiento con solucin de

Lugol (iodo/ioduro de potasio). El yodo forma una laca con el
cristal violeta, que es insoluble en agua y soluble en alcohol o
acetona

4. El preparado se trata despus con alcohol o acetona

5. Finalmente se procede a realizar una coloracin de contraste

(diferenciacin) con otro colorante (fucsina).

6. Como consecuencia de este tratamiento las bacterias que

retienen el complejo colorante-yodo durante el paso 4 quedan
azules y se denominan Gram positivas.

7. Las clulas que NO retienen el complejo colorante-yodo

durante el paso 4 al tomar el colorante de contraste (paso5)
quedan rojas y se denominan Gram negativas.

Secuencia de las etapas de la coloracin de Gram y la

coloracin
resultante en las Gram negativas y positivas.
Redaccin y diagramacin a cargo de: Dr. Jorge S.
Raisman. Revisado en Setiembre de 2005.