UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA

DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

CUAUTITLAN IZCALLI
CAMPO 1

REPORTE DE LA PRACTICA 7:
DESCOMPOSICIN DE UREA POR UREASA

PROFESOR: JUAN JOS MENDOZA FLORES

MARIA ALEJANDRA RODRIGUEZ
POZOS

EQUIPO No. 1

INTEGRANTES:
Romero Nieto Rubn
Ramrez Barrera Ricardo
Galicia Arcos Rodrigo
Enrique
Martnez Garca No
Mendoza Hernndez
Kevin Salvador
GRUPO: 2251
CARRERA: QUMICA INDUSTRIAL

FECHA DE ENTREGA: 05/ABRIL/2017

OBJETIVO.

Conocer mediante la experimentacin la cintica de descomposicin de urea por

ureasa, utilizando a la enzima ureasa extrada de soya experimentalmente.
Observar el efecto de la temperatura sobre la rapidez de reaccin en la catlisis
enzimtica, obteniendo de esta forma la temperatura de mxima actividad de un
biocatalizador siendo el caso de la ureasa, logrando determinar la energa de
activacin de esta reaccin.
OBJETIVOS ACADEMICOS:
-Investigar la cintica de descomposicin de urea por uresa
-Utilizar a la enzima ureasa extrada de soya
-Estudiar el mecanismo de reaccin para reacciones biocataliticas
-Obtener los parmetros cinticos: constante de Michaelis (K m) y rpidez mxima
(rmx) mediante la ecuacin de Lineweaver-Burk
-Seguir el avance de reaccin por medidas de conductividad
-Investigar el efecto de la temperatura sobre la rapidez de reaccin en la catlisis
enzimtica
-Obtener la temperatura de mxima actividad de un biocatalizador (ureasa)
-Determinar la energa de activacin de una reaccin
-Calcular energa interna, entalpia, entropa y energa de Gibbs de activacin de la
hidrolisis biocatalitica de la urea

INTRODUCCIN.
La observacin de la descomposicin enzimtica de la urea mediante ureasas es
muy interesante pues permite tener varios puntos de vista. En primer lugar, esta
reaccin puede servir como ejemplo para una reaccin de orden cero. Este orden de
reaccin es mostrado en el aumento lineal de la concentracin del producto.
En ella se puede observar la cintica de la catlisis: en primer lugar el sustrato y la
enzima se encuentran en equilibrio con un complejo de enzima-sustrato. Este
equilibrio ya puede ser comparado con la acumulacin de un sustrato, determinado
por la difusin, en una superficie catalticamente activa. En un segundo paso, el
complejo enzima-substrato es transformado rpidamente en los productos.
Adems, la reaccin puede ser utilizada como introduccin a la cintica de enzimas:
a partir de varias mediciones se puede determinar la velocidad mxima de reaccin,
la constante de Michaelis y la concentracin de enzimas.
Como en el curso de la hidrlisis de la urea

se produce carbonato de amonio disociado en varios iones, la reaccin puede ser

seguida mediante mediciones de conductividad. La concentracin de los productos y
la velocidad de la reaccin se calcula a partir de los datos obtenidos.
Desarrollo Experimental.

Diagrama de Flujo.
Fin
 Resultados.
Resultados de conductividad en funcin del tiempo.
Temperatura (C)
Tiempo (s) ambiente 25 C 30c 40 C 50 C

10 43.8 53 53.3

20 45.5 54 54.3

30 46.3 55 55.5 62.1

40 47 55.9 56.9 64.5

50 47.8 57 58.1 66.3

60 49.1 57.9 59 67.8

70 50.4 59 60 68.9

80 51.3 59.8 60.7 69.9

90 52 60.9 61.4 70.7

100 52.7 61.7 62 71.4

110 53.2 62.5 62.6 72

120 54 63.6 63.1 72.7

 ambiente 25 C
12
10
8
ambiente 25 C
6 Linear (ambiente 25
conductividad
4 C )

2
0
0 f(x)
50 = 100 150
R = 0
Tiempo

B=0.0879

30c
70

60 f(x) = 0.1x + 52.12

50 R = 1
30c
40 Linear (30c)
Linear (30c)
30

20

10

0
0 20 40 60 80 100 120 140

b=0.096

40 C
64
f(x) = 0.09x + 53.02
62
R = 0.98
60
40 C
58 Linear (40 C)
56 Linear (40 C)
54
52
50
48
0 20 40 60 80 100 120 140

b=0.0907
 50 C
12
10
8
50 C
6
conductividad Linear (50 C)
4
2
0
0 f(x) 50
= 100 150
R = 0
Tempo

b=0.111

Tiempo 0.004M 0.008M 0.012M 0.016M

10 96.5 105.2 93.4 128.1
20 100.2 105.6 133.2
30 101.8 107.1 114.8 138.7
40 103.5 109.2 116.7 143.3
50 105.8 110.4 119.2 149.1
60 106.7 112.5 120.1 153.4
70 108.1 113.7 123.2 158.4
80 109.4 115.6 125.1 163
90 110.3 117.1 127 167.6
100 111.6 118.2 128.3 172
110 111.8 120 130.6 176.3
120 113.6 121.5 132.5 180.2
Tabla 2.- conductividad=f(t)

Grafico 5: Rapidez de catalisis enzimatica en funcion de la temperatura

1.2

0.8

Velocidad Inicial (r) 0.6

0.4 f(x) = - 0.01x + 0.82

R = 0.13
0.2

0
20 25 30 35 40 45 50 55

Temperatura C
Con base en el grafico 5 al graficar ro vs temperatura pudimos determinar la
velocidad mxima de la reaccin, obteniendo un valor de 0.096.

Grficos de variacin de la conductividad Vs tiempo, a diferentes concentraciones.

Grafico 6: Variacion de la conductividad vs. tiempo 0.004M

120

115
f(x) = 0.15x + 97.25
110 R = 0.97

105
Conductividad
100

95

90

85
0 20 40 60 80 100 120 140

TIEMPO (s)
G rafi co 7: Variacion de la conduct ividad vs. Tiempo 0.008M
125

120 f(x) = 0.15x + 102.94

R = 1
115

Conductividad 110

105

100

95
0 20 40 60 80 100 120 140

Tiempo (s)

Grafico 8: Variacion de la conductividad vs. tiempo 0.012M

12

10

Conductividad 6

0
0 20=
f(x) 40 60 80 100 120 140
R = 0
Tiempo (s)

Grafico 9: Variacion de la conductividad vs. tiempo 0.016M

200
180
f(x) = 0.48x + 124.31
160
R = 1
140
120

Conductividad 100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100 120 140

Tiempo (s)
Con los datos de conductividad a diferentes concentraciones obtenidos
experimentalmente se realizaron los grficos anteriormente presentados (6-9), con
los cuales se pudo obtener la velocidad inicial (r ) a cada concentracin.
Con lo cual se pudo observar en la siguiente tabla (tabla 2) que la velocidad inicial
(r) de la reaccin aumenta conforme ms concentrada esta la solucin.
Tabla 2: Concentracin de Urea y velocidad inicial (r ).
Concentracin de Urea (M) Rapidez Inicial (r)
0.004 0.1454
0.008 0.1549
0.012 0.2826
0.016 0.4763

Energa de activacin de la reaccin:

Ea=R T 2 ln ( K ) / dt

303.15 K


cal
Ea=1.987
k mol

Anlisis de resultados.
En el grfico de ro vs. Temperatura se ha graficado la conductividad en funcin del
tiempo. Claramente se puede apreciar un aumento casi lineal antes de aadirse el
sulfato de cobre y una seccin casi horizontal despus de la disolucin completa del
mismo. Esto muestra la accin de un metal pesado como veneno enzimtico.
La reaccin se lleva a cabo bajo catlisis de la enzima ureasas. El mecanismo puede
ser descrito de la siguiente manera (E: Enzima ureasas, S: Sustrato urea, ES:
Complejo enzima-sustrato, P: Productos):

La velocidad de reaccin de la descomposicin de la urea se rige de acuerdo a la ley

de velocidad:

La reaccin es pues de primer orden respecto a [ES].

Como la enzima E acta como catalizador, su concentracin total permanece igual
en el curso de la reaccin. Cuando la concentracin del sustrato es suficiente se
establece un estado estacionario, en el cual la velocidad de formacin y la velocidad
de descomposicin del complejo enzima-sustrato tienen el mismo valor:

Por esta razn la concentracin [ES] es constante durante la reaccin, en donde su

valor absoluto se orienta segn cuan grandes sean las constantes de velocidad. Tal
caso es denominado equilibrio dinmico. En la formacin de los productos de la
reaccin P esto se traduce en la constancia de la velocidad de reaccin y por ello, la
curva de la concentracin de urea tiene un curso lineal. De esta manera, la
 descomposicin de la urea mediante ureasas sigue la ley de velocidad de orden
cero:

Debido a que la velocidad de la reaccin depende realmente de [ES] y esta

dependencia no sale a la luz por la constancia de [ES], se habla de una reaccin de
seudo-orden cero.
Para determinar la constante de velocidad de tal reaccin se debe determinar la
pendiente de la recta en el diagrama de concentracin de la urea en funcin del
tiempo.
Que las ureasas se descomponen a temperatura ambiente se muestra en la
reduccin de la velocidad de la reaccin cuanto mayor es el tiempo que dura el
ensayo. La linealidad de la curva para la concentracin de la urea slo se da al inicio
de la reaccin.

Actividades complementarias.

1. Investiga la diferencia entre conductividad equivalente y conductividad

molar
R=La conductividad equivalente de una solucin es la conductancia especfica de un
equivalente de soluto. La conductividad equivalente vara con la concentracin,
siendo mayor en soluciones ms diluidas, porque en las soluciones concentradas, las
interacciones ion-ion y ion-solvente reducen la movilidad de los iones que transportan
la corriente.

En una disolucin inica la conductividad especfica l medida, depende de la

concentracin (n de iones presentes) y es en definitiva, la conductancia de 1cm 3 de
disolucin y por tanto depender del n de iones (cationes y aniones), es decir, de la
concentracin.

2. Investiga por qu se utiliza corriente alterna en las mediciones de

conductividad de iones en solucin
R=EI paso de la corriente a travs de la solucin se efecta, como ya vimos, por el
movimiento de los iones. La capacidad de los iones para moverse en la disolucin y
la propiedad que tiene una solucin de conducir la corriente, debido a la carga
asociada a los iones, este desplazamiento constituye una corriente elctrica
(movimiento de carga), ya que finalmente se traducir, en el circuito externo, en una
intensidad i de corriente, lo cual es evidencia de la propiedad conductora del
electrolito.

3. Realiza una revisin hemerogrfica de las enzimas ms utilizadas en la

industria qumica.
R=
1. LA AMILASA DE HONGOS Y PLANTAS cataliza la degradacin del almidn en
azcares sencillos.
2. PROTEASAS: Los fabricantes de galletas las utilizan para reducir la cantidad de
protenas en la harina
3. TRIPSINA: Para pre-digerir el alimento digerido a bebs
4. CELULASAS, PECTINASAS: Aclarador de zumos de frutos
5. RENINA, derivado del estomago de animales rumiantes jvenes(terneros y ovejas):
Produccin de queso, usada para hidrolizar protenas.
6. ENZIMAS PRODUCIDAS POR BACTERIAS:Actualmente, cada vez ms usadas en
la industria lctea.
7. LIPASAS: Se introduce durante el proceso de produccin del queso roquefort para
favorecer la maduracin
8. LACTASAS: Rotura de la lactosa en glucosa y galactosa
9. PAPAINA: Ablandamiento de la carne utilizada para cocinar
10. AMILASAS, AMILOGLUCOSIDASAS Y GLUCOAMILASAS: Conversin del almidn
en glucosa y diversos azcares invertidos
11. GLUCOSAS ISOMERASA:Conversin de glucosa en fructosa durante la produccin
de jarabe de maz partiendo de sustancias ricas en almidn. Estos jarabes potencian
las propiedades edulcorantes y reducen las caloras mejor que la sacarosa y
manteniendo el mismo nivel de dulzor.
12. CELULASAS: Utilizadas para degradar la celulosas en azcares que pueden ser
fermentados
13. LIGNINASAS: Utilizada para eliminar residuos de lignina

4. Investiga Qu caractersticas presentan las enzimas termfilas?

R=Las bacterias termfilas son aquellas que se desarrollan a temperaturas
superiores a 45C, pudiendo superar incluso los 100C (hipertermfilos) siempre que
exista agua en estado lquido, lo que se consigue si la presin es elevada como
ocurre en las profundidades ocenicas

5. Investiga los diversos mecanismos de inhibicin enzimtica

R=Inhibicin competitiva:

Inhibicin no competitiva:

Inhibicin acompetitiva:
6. Investiga en qu consiste la cintica de relajacin y su aplicacin en enzimas
R=Cinticas de relajacin
Sea la reaccin elemental AB , en equilibrio. Introducimos una perturbacin que
cambia la constante de equilibrio, el sistema se relaja y alcanza una nueva posicin
de equilibrio. Dicha perturbacin puede consistir en un cambio brusco de presin o
temperatura.

7. Explica la utilidad de la ecuacin Eadie-Hofstee para la cintica enzimtica

R=El diagrama de Eadie-Hofstee, tambin llamado de Woolf-Eadie-Augustinsson-
Hofstee o de Eadie-Augustinsson, es una representacin grfica de la funcin
matemtica utilizada en bioqumica en el estudio de la cintica de las reacciones
enzimticas, por la que se relaciona la velocidad de una reaccin con la
concentracin del sustrato:

donde 'v' representa la velocidad de la reaccin, 'K m' es la constante de Michaelis-

Menten, [S] es la concentracin del sustrato y 'vmax' es el mximo de la velocidad de
la reaccin.

8. Investiga el concepto de nmero de recambio de una enzima

R=En enzimologa, el trmino nmero de recambio (tambin conocido como kcat o k2)
se define como el mximo nmero de molculas de un sustrato que una molcula
deenzima puede convertir en producto por unidad de tiempo. Se calcula del siguiente
modo:

Por ejemplo, la anhidrasa carbnica posee un nmero de recambio de entre 400 000
y 600 000 molculas de producto (iones bicarbonato) por molcula de enzima por
segundo.

9. Cules son las enzimas alostricas

R=Las enzimas alostricas son enzimas que cambian su conformacin al unirse un
efector, lo que conduce a un cambio aparente en la afinidad de unin de otro ligando
en un sitio distinto de la molcula. Esta "accin a distancia" de la unin de un ligando
que afecta a la unin de otro en un sitio claramente diferente es la esencia del
concepto de alostera o alosterismo.

10. Investigue el proceso de hidrlisis de urea para produccin de amonaco a

nivel industrial
R=Hay muchos tipos de bacterias. Algunas son dainas, algunas son beneficiosas y
otras no son ni lo uno ni lo otro. La capacidad de distinguir entre estas bacterias es
crucial para la prevencin y el tratamiento de enfermedades. A menudo, las bacterias
pueden ser identificadas por su capacidad para reaccionar con compuestos
qumicos. La urea es uno de tales compuestos y la prueba de hidrlisis de la urea se
utiliza para distinguir unos grupos de bacterias de los otros.
Muchas de las bacterias que se encuentran en el intestino contiene ureasa. Sin
embargo, pocas pueden descomponer la urea rpidamente. Por tanto, es posible
reducir la identidad de una bacteria basada en hidrlisis de la urea. Los grupos ms
comnmente analizados que son positivos son: Proteus, Morganella y Providencia.

Mientras que la prueba de hidrlisis de la urea proporciona informacin valiosa, no es

definitiva. Hay varias bacterias que pueden descomponer la urea y se necesitan
pruebas adicionales para distinguirlas. Estas pruebas proporcionan informacin
sobre la morfologa y la estructura de los organismos, los requerimientos de oxgeno
y su capacidad para reaccionar con perxido de hidrgeno, sacarosa y citrato. Toda
esta informacin tomada en su conjunto suele ser suficiente para clasificar y nombrar
a una bacteria desconocida.

Conclusiones.
Mediante la experimentacin cintica logramos observar la descomposicin de urea
por ureasa, donde utilizamos a la enzima ureasa que extrajimos de soya
experimentalmente.
Fue posible observar el efecto de la temperatura sobre la rapidez de reaccin en la
catlisis enzimtica, obteniendo de esta forma la temperatura de mxima actividad
sobre un biocatalizador siendo el caso de la ureasa, logrando determinar de esta
manera la energa de activacin de esta reaccin.