UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE

MXICO
ESCUELA NACIONAL PREPARATORIA

NMERO 2

ERASMO CASTELLANOS QUINTO

TEMAS SELECTOS DE BIOLOGA

GRUPO 600C

PRACTICA DE LABORATORIO 2

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

AYALA BUTANDA CITLALLI ROXANA.

MERZ ACEVEDO ADRIN SEBASTIN.

RIVAS MEZQUITA LUISA ANDREA.

SNCHEZ GARCA KARLA EDITH.

URIBE MEJA MNICA PAMELA.

Planteamiento del problema
Qu efecto tienen los antibiticos, tanto los antibiticos naturales como los
artificiales frente a los microorganismos que encontramos en todos lados?

Introduccin

En el siguiente trabajo se da una breve explicacin de la historia y de los tipos

de medios de cultivo existentes que son de gran importancia para mantener,
separar, y poder seleccionar a los microorganismos para poder estudiarlos
detalladamente.
Tambin se dar una explicacin acerca de los antibiticos sintticos y
naturales y de forma ms especfica de la miel que es un antibitico natural y
de la penicilina que es un antibitico sinttico. Ya que en la prctica que se
llevar acabo se pondrn a prueba estos dos antibiticos sobre el medio de
cultivo en este caso el caldo de pollo para identificar cual es su efecto en los
microorganismos que se encuentran en l.
Tambin a travs del microscopio podremos observar stos microorganismos
Y conocer un poco ms sobre su estructura.
Finalmente viene implcito lo que es un antibiograma que es una prueba
microbiolgica que se realiza para conocer la sensibilidad de una colonia
bacteriana ante el efecto de un antibitico.

Medios de cultivo
Gran parte de la microbiologa depende de la capacidad de cultivar y mantener
microorganismos en un laboratorio, y esto slo es posible si se dispone de
medios de cultivos adecuados. Adems los medios especiales son
imprescindibles para aislar e identificar los microorganismos, evaluar la
sensibilidad de antibiticos, analizar agua y alimentos Un medio se utiliza
frecuentemente para seleccionar y cultivar microorganismos especficos o para
facilitar la identificacin de una especie en particular. En estos casos, la funcin
de un medio estar tambin determinada por su composicin. MEDIOS
SINTTICOS O DEFINIDOS.- Algunos microorganismos, particularmente los
auttrofos, pueden crecer en medios relativamente sencillos, que contienen
CO2 como fuente de carbono, nitratos o amonio como fuente de nitrgeno,
sulfatos, fosfatos, y diversos minerales . Esta clase de medios en que se
conocen todos los componentes se denomina medios definidos o medios
sintticos. No todos los medios definidos son tan sencillos, sino que pueden
elaborarse a partir de docenas de componentes. Los medios definidos se
emplean ampliamente en investigacin. MEDIOS COMPLEJOS Losa medios
que contienen algunos ingredientes se desconocen se denominan medios
complejos. Estos se necesitan porque a menudos se desconocen los
requerimientos nutricionales de un microorganismo en particular. Los medios
complejos contienen componentes como peptonas, extracto de carne y de
levadura. Se necesita un medio slido para cultivar microorganismos en
superficie, se puede solidificar un medio lquido aadiendo agar o cartagenina
que son agentes solidificantes por que una vez que se funde en agua fra
hirviendo, puede enfriarse hasta una temperatura de 40 a 42C sin
endurecerse, no fundir de nuevo hasta que alcance una temperatura de 80 a
90C. Otros tipos de agentes solidificantes son el gel de slice utilizado para
cultivar bacterias auttrofas en medios slidos en ausencia de sustancias
orgnicas. (Harley, J.P, et al, 1999)

Tipos de medios
Medios para fines generales.- Porque mantienen el crecimiento de muchos
microorganismos. Ej. Caldo y agar. (Harley, J.P, et al, 1999)
Medios enriquecidos.- La sangre y otros nutrientes especiales se pueden
incorporar a los medios para fines generales para favorecer el crecimiento de
hetertrofos existentes. Ej. Agar mas sangre (Harley, J.P, et al, 1999)
Medios selectivos.- Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares.
Las sales biliares o colorantes favorecen el crecimiento de bacterias
gamnegativas, al inhibir el crecimiento de las grampositivas sin afectar a las
primeras. Las pasibilidades de seleccin son infinitas y existen docenas de
medios selectivos especiales disponibles. (Safont, N, 2004)
Medios diferenciales.- Son medios que diferencian entre grupos distintos de
bacterias e incluso permiten una identificacin tentativa de los
microorganismos, segn sus caractersticas biolgicas. Ej. El agar sangre y el
agar MacConkey. (Harley, J.P, et al, 1999)
Aislamiento de cultivos puros.
En los hbitats naturales, los microorganismos crecen en poblaciones mixtas o
complejas que contienen varias especies. Esto representa un problema para el
microbilogo porque no se puede estudiar adecuadamente un nico tipo de
microorganismo en un medio mixto. Se ne4csita un cultivo puro, poblacin de
clulas que procede de una nica clula, para caracterizar una especie
individual. Los cultivos puros son tan importantes que el desarrollo de las
tcnicas de cultivos puros por el bacterilogo alemn Robert Koch trasform
la microbiologa. Existen varias formas de preparar cultivos puros. Las ms
comunes son:
SIEMBRA EN PLACAS POR EXTENSIN: Si se extiende una mezcla de
clulas en una superficie de agar, de manera de que cada clula cree formando
una colonia independiente cada colonia representa un cultivo puro. La siembra
por extensin es una forma directa y fcil de conseguir este resultado. Se pasa
un volumen pequeo de una clula microbiana di8luida conteniendo entre 100
y 200 clulas, o menos, al centro de una placa de agar y se extiende
uniformemente sobre la superficie con una varilla doblada de vidrio estril. Las
clulas dispersas desarrollan colonias aisladas. Este tipo de siembra puede
usarse para contar una poblacin microbiana.
Las colonias puras se pueden obtener tambin mediante siembra de estras.
Se pasa la mezcla microbiana a un extremo de la placa de agar con un asa de
inoculacin o un hisopo y se extiende formando estras sobre la superficie
siguiendo uno de los posibles patrones recomendados. En algunos puntos de
este proceso algunas clulas individuales se desprenden del asa al frotarla
sobre la superficie y desarrollan colonias separadas. En ambas tcnicas un
buen aislamiento depende de la separacin adecuada de las clulas
individuales. (Harley, J.P, et al, 1999)
SIEMBRA EN PROFUNDIDAD: Se emplea ampliamente con bacterias y
hongos puede generar tambin colonias aisladas. La muestra original se diluye
varias veces para reducir la poblacin microbiana la suficiente con el fin de
obtener colonias separadas cuando se siembren. La mayora de las bacterias y
hongos no se destruye con la exposicin breve al agar calentado. Despus de
endurecerse el agar cada clula se fija a un lugar y forma una colonia
individual. Las colonias que crecen sobre la superficie se pueden utilizar
tambin para inocular un medio fresco y preparar cultivos puros.
Las tcnicas anteriores precisan de placas especiales de cultivo denominadas
placas de Petri. Las placas de Petri son muy fciles de usar pueden aplicarse
para ahorrar espacio y constituyen unos de los materiales ms comunes de los
laboratorios de microbiologa.
Los mtodos de siembra descritos anteriormente son incluso ms eficaces para
producir cultivos puros cuando se emplean con medios selectivos o
diferenciales.
Los microorganismos que crecen en superficies slidas tienden a formar
colonias con una morfologa caracterstica. Las colonias crecen normalmente
con mayor rapidez en los extremos donde la cantidad de recursos disponibles
es mayor. (Harley, J.P, et al, 1999)

Antibiticos
Se denomina antibitico a cualquier antibitico utilizado para eliminar o inhibir
el crecimiento de organismos infecciosos tanto en seres humanos como en
animales.
Los antibiticos son elaborados en su metabolismo propio por seres vivos:
plantas, animales, bacterias, hongos. Un antibitico puede definirse como una
sustancia derivada de un organismo vivo, generalmente un microorganismo, o
una modificacin qumica de la misma que inhibe la produccin, el crecimiento
e incluso destruye otros microorganismos y clulas anormales.
En un principio el trmino antibitico se utilizaba para referirse a los
compuestos orgnicos producidos por bacterias u hongos que resultaban
txicos para otros microorganismos. (Cruz, A, 2001).

El mecanismo de accin de los antibiticos fue conocido cientficamente hasta

el Siglo XX. La primera observacin de lo que hoy en da se denominara
antibitico fue realizada en el siglo XIX por el qumico francs Louis Pasteur,
EL uso de los antibiticos se dio en 1928 con los trabajos de Fleming, Chain y
Florey al descubrir la penicilina. Una veintena de los antibiticos son extrados
industrialmente, stos son la penicilina, la tiratrasina, estreptomicina,
terramicina, etc. (Cruz, A, 2001).
Qu tipo de antibiticos existen?

Los antibiticos pueden clasificarse tomando en cuenta diferentes criterios:

Segn su mecanismo de accin, algunos antibiticos impiden la sntesis de la
pared celular de los microorganismos, otros alteran la membrana plasmtica, y
la mayor parte de ellos inhiben la sntesis de cidos nucleicos o protenas.
Segn la estructura qumica se diferencian las penicilinas, cefalosporinas,
aminoglucsidos, tetraciclinas, sulfamidas u otros.
Segn su espectro de accin, es posible dividirlos en agentes de amplio
espectro, que actan frente a multitud de bacterias, y agentes de espectro
restringido que solo actan frente a algunos tipos de bacterias. (Cruz, A, 2001).

Usos y Abusos
El uso excesivo de los antibiticos sin previa autorizacin mdica ha trado
como consecuencia la resistencia de los grmenes patgenos, mejor conocida
como resistencia bacteriana, causando efectos secundarios como anemia,
alucinaciones, alteraciones gastrointestinales etc.
Tambin la utilizacin de antibiticos antes de que aparezca la infeccin para
tratar prevenirla, ha agravado el problema de resistencias. (Cruz, A, 2001).

Actualmente en algunos pases el uso de antibiticos es cada vez menor,

permitiendo la utilizacin de medios alternativos como lo es el naturismo.
Con el desarrollo de la bioqumica en los ltimos aos se ha descubierto que
las frutas y las hortalizas contienen innumerables sustancias con poder
curativo. Con lo que tambin se logra calmar el dolor e incluso ayudar ala
pronta recuperacin del paciente. stos son verdaderos antibiticos naturales
que cumplen con la funcin nutritiva, preventiva, curativa, y depurativa en el
organismo ya que logran arrastrar la mayora de desechos que se han quedado
atascados en el cuerpo por el uso inadecuado de antibiticos sintticos. (Cruz,
A, 2001).
En increble la cantidad de enfermedades que son tratadas especficamente
con antibiticos sintticos como la penicilina, amoxicilina, v ancomicina, etc sin
embargo tambin estas pueden tratarse con antibiticos naturales, algunas
enfermedades son el acn, artritis, colitis, faringitis, neumona, varicela, etc.
(Cruz, A, 2001).

Antibiticos naturales
La tierra produce a travs de procesos naturales como el sol y la lluvia infinidad
de reinos vegetales que permiten la formacin de sustancias que procuran
inmunidad frente a bacterias y virus nocivos.
Algunas plantas desarrollan flavonoides que protegen contra la destruccin
interna de protenas, enzimas, tallos, hojas, de ciertas plantas. Hoy en da la
bioqumica y la biologa molecular han descubierto que l brcoli contiene
sulforano el cual puede ayudar a prevenir el cncer, que el ajo y la cebolla
tienen rganos sulfurados que ayudan a reducir el desarrollo de tumores. La
lista de sustancias presentes en los alimentos que pueden ayudar contra las
enfermedades es larga, los betacarotenos en las hortalizas y verduras
frondosas, de color anaranjado oscuro, los licopenos del tomate, la bromelina
de la pia, naranjita y nobiletina de los ctricos, toso pueden ayudar aprevenir el
cncer. (Cruz, A, 2001).

Son numerosas las plantas que poseen un intenso poder antibitico.

Crucferas: En este grupo cabe citar la mostaza, el rbano, la cocleria .

Liliceas: A esta familia pertenecen ajos, cebollas y puerros. Todos ellos

contienen cido tiocinico-HSCN, cuya estructura qumica presenta complejos
compuestos azufrados con gran poder bactericida especiales, el berro.

Otras plantas de reconocida accin antibitica frente a bacterias, virus y

hongos son:

rbol del t.
Equinaca.
Jengibre.
Organo.
Semillas de pomelo (extracto).
Tomillo.
Menta
Tila

Algunos alimentosos con propiedades antibiticas:

Propleo
Setas medicinales
Miel

(Safont, N, 2004)

La miel

La miel es un producto que ha utilizado el ser humano desde los albores de la

humanidad. De hecho, las pinturas rupestres de la Cueva de la Araa, en
Bicorp (Valencia), que datan de 10.000 aos a.C, muestran como un hombre
est recolectando miel. Esto demuestra que ya los primeros pobladores la tierra
descubrieron los beneficios de este alimento.

Hipcrates, el padre de la medicina, alab sus poderes teraputicos y la utiliz

para curar diversas afecciones de la piel, lceras y para aliviar el dolor en
general. Los egipcios, por su parte, la utilizaron para tratar las cataratas, llagas,
cortes o quemaduras.

Procede del nctar de las flores. Gracias a ello, la miel es rica en vitaminas
como la B6, tiamina, niacina, riboflavina y cido pantotnico. Asimismo,
contiene minerales esenciales como el calcio, cobre, hierro, magnesio,
manganeso, fsforo, potasio, sodio y cinc.

Las propiedades antibacterianas de la miel proceden principalmente de su

contenido en la enzima glucosa oxidasa. sta enzima produce perxido de
hidrgeno (agua oxigenada).

Sus propiedades nutritivas hacen de este alimento una poderosa arma contra
los resfriados, los dolores de garganta, bronquitis, sinusitis, asma y algunas
afecciones de la piel. De hecho, recientes estudios demuestran que la miel
pura contiene un efectivo agente antimicrobiano, muy til para el tratamiento de
las quemaduras menores, las heridas superficiales y como terapia adicional de
los dolores de garganta y otras afecciones bacterianas.

Puede neutralizar la bacteria Helicobacter pylori causante de la mayora de

lceras del estmago responsables de la acidez y dolor estomacal.

Su elevado contenido de azcar, que limita la cantidad de agua capaz de

permitir que los microorganismos se desarrollen, su acidez, su escaso pH y su
pobre contenido en protenas que privan del nitrgeno que necesitan las
bacterias para crecer, hacen de la miel una barrera contra las infecciones.
(Safont, N, 2004)

Un reciente estudio llevado a cabo por un grupo de investigadores de

msterdam, dirigido por Sebastin A.J. Zaat y publicado en la revista FASEB
Journal muestra que la miel cuenta con ingredientes bactericidas naturales .En
concreto, el estudio describe en su artculo que la miel acumula pequeas
partes de agua oxigenada y de metilglioxal, sustancias que poseen toxicidad
sobre las bacterias. Adems, en su composicin, se pudo identificar un nuevo
pptido, llamado defensina-1, con propiedades antimicrobianas. Los pptidos
antimicrobianos son pequeas molculas presentes en plantas y animales que
actan en mecanismos de defensa, eliminando a patgenos como bacterias,
virus y parsitos, adems de tener una funcin moduladora de la respuesta
inmunitaria innata o natural.

El estudio demostr que la defensina-1 de la miel es capaz de matar

Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Escherichia coli resistente a
beta-lactmicos, Pseudomonas aeruginosa resistente a ciprofloxacina y
Enterococcus faecium resistente a vancomicina, entre otros. ( J. Zaat. S,
2010)
Penicilina
En 1928 Alexander Fleming noto que la
contaminacin al de un placa de cultivo
bacteriano con el hongo Penicillium
notatum lisaba las bacterias cercanas.
Esto fue consecuencia de la presencia
Penicilina. Tomada de: Voet D. 2004
de penicilina, un antibitico secretado
por un hongo. No obstante, las dificultades para aislar y caracterizar a la
penicilina, debido a su inestabilidad, hicieron que pasaran ms de 15 aos para
que esta se encontrara disponible para el uso clnico de rutina. (Voet D. 2004)
La penicilina se une de manera especfica a las enzimas que funcionan para
unirse en forma cruzada con bandas de peptidoglucano de las paredes de la
clulas bacterianas e inactiva las enzimas. Dado que la expansin de la pared
celular tambin requiere la accin de enzimas que degradan las paredes
celulares, la exposicin de bacterias en proliferacin a la penicilina, enduce a
su lisis: esto es, la penicilina interrumpe el equilibrio normal entre la biosntesis
y la degradacin de la pared celular. Sin embargo dado que ninguna enzima
humana se une a la penicilina, tiene baja toxicidad para el hombre, lo que
contribuye una necesidad teraputica. (Voet D. 2004)

La mayora de las bacterias resistentes a la penicilina secretan penisilinasa que

inactiva a la penicilina al divar el enlace amida de su anillo betalactmico. Sin
embargo la observacin de que la actividad de penicilinasa varia con la
naturaleza del grupo R de la penicilina condujo a la semisntesis de penicilinas,
como la ampicilina, que son eficaces en la clnica contra cepas de bacterias
resistentes a la penicilina. (Voet D. 2004)

Antibiograma. Tomada de Tortora,G. 2007.

El antibiograma

El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa

bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios
antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos
para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en
primer lugar, para orientar las decisiones teraputicas individuales.

El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las

resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala
de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como
puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los
espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias,
como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales. Hay
pues un doble inters: Teraputico y epidemiolgico. (Tortora,G. 2007).

Realizacin de un antibiograma

Siempre que una toma bacteriolgica de finalidad dagnstica haya permitido el

aislamiento de una bacteria considerada responsable de la infeccin.
(Tortora,G. 2007).

Establecer esta responsabilidad exige una colaboracin entre el bacterilogo y

el clnico. En efecto, en ciertas circunstancias, el microbilogo no podr
determinar con certeza que el aislamiento de una bacteria exige un
antibiograma, sin los datos clnicos que le aporta el mdico. Por ejemplo, una
bacteria no patgena puede ser responsable de la infeccin de un enfermo
inmunodeprimido o en un lugar determinado del organismo. La presencia de
signos clnicos puede ser tambin determinante para la realizacin de un
antibiograma (por ejemplo: la infeccin urinaria con un nmero reducido de
grmenes). (Tortora,G. 2007).

Sensibilidad bacteriana a los antibiticos

La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es la base de la
medida de la sensiblidad de una bacteria a un determinado antibitico. La CIM
se define como la menor concentracin de una gama de diluciones de
antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano
visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas.
(Tortora,G. 2007).

Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina,

y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y mtodos
automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes mtodos de rutina
permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en funcin de su sensibilidad
frente al antibitico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia
(I) o Resistente (R) al antibitco. (Tortora,G. 2007).

Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS:

Sensible, si existe una buena probabilidad de xito

teraputico en el caso de un tratamiento a la dosis habitual.
(Tortora,G. 2007).
Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o
muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico
sea cual fuere el tipo de tratamiento. (Tortora,G. 2007).
Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se
puede conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones
(fuertes concentraciones locales o aumento de la
posologa). (Tortora,G. 2007).

Ciertas molculas son representativas de un grupo de antibiticos. Los

resultados (S, I, R) obtenidos con estas molculas pueden ser ampliados a los
antibiticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo:
Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las restantes cefalosporinas
de 1 generacin que no es necesario probar, ya que el resultado puede
deducirse del obtenido en la cefalotina).Este hecho permite ensayar un nmero
reducido de antibiticos, sin limitar por ello las posibilidades teraputicas.
(Tortora,G. 2007).
Interpretacin de un Antibiograma

Ciertos mecanismos de resistencia se expresan dbilmente in vitro, cuando se

inscriben en el DNA bacteriano. Su expresin en el organismo, en donde las
condiciones en cuanto a medios son diferentes, expondra al riesgo de fracaso
teraputico. Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera
global a fin de descubrir, a travs de la comparacin de las respuestas para
cada antibitico, un mecanismo de resistencia incluso dbilmente expresado.
As, gracias a la interpretacin, una cepa que aparece como falsamente
sensible ser categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella
pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las
cefalospornas de 3" generacin. El resultado de Sensible debe ser corregido a
Intermedio o Resistente, ya que la utilizacin de estos antibiticos correra el
riesgo de provocar un fracaso teraputico). (Tortora,G. 2007).

Justificacin:
Se eligi trabajar con los antibiticos: miel (natural) y penicilina (artificial),
debido a la fcil obtencin de estos, ya que los podemos comprar en una tienda
o en una farmacia, respectivamente. Adems son fciles de diluir en agua para
poder probarlos en los medios de cultivo, su informacin esta a mayor alcance
de nosotros y como ya dijimos son de uso comn.
Hiptesis:
Nosotros consideramos que tanto los antibiticos naturales, como los
antibiticos sintticos tiene un nivel de fuerza muy similar para combatir a los
microorganismos, pero cabe destacar que los naturales ofrecen una mayor
ventaja al no provocar tantos efectos secundarios como a veces llegan a
hacerlo los sintticos.

Objetivos: Aprender a preparar un medio de cultivo, observar con el

microscopio diferentes microorganismos y conocer el efecto de los antibiticos
naturales y sintticos en stos.

Metodologa.
Los materiales, sustancias y equipo que utilizaremos en la prctica sern los
siguientes:
 Las sustancias a utilizar sern: Carragenina 50g. Gel antibacterial y alcohol.
Caldo de pollo 300mL. Miel natural. Penicilina y Agua.

Los materiales y equipos a utilizar sern: Perforadora. Papel filtro. Autoclave.

Horno de medios. Asa de siembra. Cajas de petri esterilizadas en una bolsa
de plstico. Algodn, gasas y masking. Parrilla elctrica. Vaso de precipitado.
Matraz Helen Meyer. Balanza. Agitador. Reloj de vidrio. Bata de laboratorio y
cubre bocas. Lmpara de alcohol. Microscopio. Campana de flujo laminal.

Procedimiento:
Lo primero que tendremos que realizar para la prctica sern los medios de
cultivo en donde crecern los microorganismos para que despus partamos de
ah y entonces podamos comprobar la eficacia de los antibiticos naturales y
artificiales
1 Estos se harn primeramente midiendo las cantidades de caldo de pollo
que tendr que llevar metiendo esta en el matraz Helenmeyer, se calcularan
300mL con ayuda del vaso de precipitado. Ya despus estando esto se
llenara de agua para que quede la disolucin; tambin se medirn 90g de
carragenina en la balanza y aun no se le agregaran a la solucin.

Materiales utilizados en el paso 1.

2 Ya teniendo medido el caldo y la carragenina, se proseguir a calentar

este en la parrilla elctrica y mientras comienza a hervir, se le va agregando la
carragenina poco a poco y moviendo la mezcla con el agitador, para que no
queden grumos.
 Sustancia obtenida, despus del paso 2.

3 Ya disuelta la cantidad de carragenina medida en el caldo y que estos se

vean uniformemente distribuidos, se tapara el matraz con las gasas, haciendo
un tapn a la medida y luego sellando con el maskin.

Matraz con el caldo y tapado con maskin y gasas.

4 Esto se rotulara y se llevara a la autoclave en donde se esterilizara.

Autoclave utilizada en el experimento, perteneciente al laboratorio.

 5 Una vez ya estando esterilizado el caldo, tendremos que entrar a la
campana de flujo laminal en donde desinfectaremos nuestras cajas petri con
alcohol y entonces poder empezar el vaciado del medio.

Vaciado del caldo en las cajas petri dentro de la campana de flujo laminal.

6 Ya vaciado en todas las cajas estas se rotulara y juntaran sin salir de la

campana. Ya terminado esto se metern al refrigerador.

Cajas petri con caldo adentro (izquierda. Sellado de cajas petri con masking (derecha)

7 Una vez terminados los medios se elegirn 4 cajas petri que sern
abiertas en cuatro lugares diferentes, como el trasporte o debajo de la cama,
esto con el fin de que en ella comiencen a poblar microorganismos. Para esto
se abrir la caja ms o menos 30 min. Para que se pobl de
microorganismos, entonces esta se vuelve a sellar y se meter en el horno de
cultivos donde se dejara unos 5 das.

8 Entonces ya pasado este tiempo, se van a disolver previamente los

antibiticos, que en este caso el natural es la miel, se disolver con agua, y
penicilina tambin disuelta.
 Preparacin de antibitico natural (miel)

9 Con una perforadora se agujerara el papel filtro, creando crculos que

nos ayudaran en la elaboracin de nuestro antibiograma.

10 Se sacaran los medios del horno y con ayuda del microscopio

micromtrico se observaran las colonias y se elegir un cultivo.

Caja petri con crecimiento de bacterias y hongos.

11 A las cajas no contaminadas se les colocaran los circulitos resultantes

de la perforacin del papel filtro, remojados en los antibiticos. Por cada caja
petri se pondrn 6 circulitos siendo estos remojados con los antibiticos y
agua (esto es 2 sern remojados en miel, 2 con penicilina y 2 con agua,
siendo estos ltimos los testigos.) sealados al reverso de la caja con plumn
indeleble.
 Caja petri con sealizacin de los antibiticos

12 Una vez puestos los circulitos remojados, con el asa de siembra

(calentada la punta con la lmpara de alcohol) se tomar parte de una
colonia del cultivo previamente seleccionado y se pasara esta por toda la caja
petri, pasando por encima de los circulitos. Esto se repetir en todas las cajas
no infectadas.

Elaboracin de antibiograma.

13 Hecho esto se metern de nuevo al horno, por otros 5 das para

observar el efecto de los antibiticos y as comprobar la hiptesis.

RESULTADOS

Realizamos una tabla de los resultados obtenidos.

Muestra Antibitico Natural. Antibitico Artificial. Testigo.

(miel) (penicilina) (agua)
1 2 3 4 5 6
1 A A A A B B
2 A A A B B A
3 A A B B B A
4 B A B B B A
Simbologa y porcentaje de contaminacin en los crculos.

A. Contaminacin masiva. (80% al 100%).

B. Contaminacin regular. (50% al 75%).
C. Contaminacin menor. (0% al 45%).

Muestra Numero 1
En este antibiograma se puede observar que en el antibitico natural y artificial
se dio el crecimiento microbiano en gran cantidad (masivo) y en el testigo se
dio de manera mas moderada el crecimiento microbiano.
Vista desde arriba Vista desde abajo

Antibiograma 1 Antibiograma 1

Muestra Numero 2
En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de
microorganismos en los tres lotes, en el natural, artificial y el testigo.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Antibiograma 2 Antibiograma 2
 Muestra Numero 3
En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de
microorganismos en el lote con antibitico natural y en el testigo, y en el
antibitico artificial se dio un crecimiento microbiano moderado.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Antibiograma 3 Antibiograma 3

Muestra Numero 4
En este antibiograma podemos observar que el crecimiento masivo de
microorganismos se dio en el lote de antibitico natural y en el testigo, y en el
lote con antibitico artificial se dio un crecimiento moderado.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Antibiograma 4 Antibiograma 3

Discusin

Tras haber realizado la prctica y haber visto los resultados que obtuvimos, nos
hemos dado cuanta que tal vez hemos realizado un paso de manera errnea
puesto que la hiptesis no fue comprobada, y los resultados fueron negativos,
aunque logramos aislar de manera correcta nuestra bacteria. Los resultados no
apoyan a la hiptesis formulada con base en las referencias e investigaciones
que realizamos. Otra idea del porque del fallo de los antibiticos frente al
crecimiento microbiano, pudo ser el que dejamos mucho tiempo a las cajas
petri con el crecimiento de microorganismos. Creemos que probablemente los
antibiticos funcionaron en un principio del cultivo, pero con el paso del tiempo
se anulo su efectividad frente a los microorganismos

Conclusin

Como se aprecia en los resultados, nuestra hiptesis era errnea pues se

presentaron mayor cantidad de bacterias en la parte del antibitico natural
(miel) que en el artificial (penicilina). Aunque nuestros resultados no fueron los
que originalmente se esperaban, la realizacin de la prctica, as como la
culminacin de esta fue satisfactoria y nos hizo darnos cuenta de la cantidad de
microorganismos que se encuentran flotando a nuestro alrededor ya sea en
casa o en el trayecto de la casa a la escuela y viceversa, entre otros lugares.

Bibliografa
Harley, J.P, Klein D.A y Prescott J.M (1999) Microbiologa. 4 Edicin. Mxico:
McGraw-Hill, pp 1-16.
Cruz, A. (2001) Antibiticos Naturales. Mxico: Selector, pp 15-29.
Safont, N. (2004) La miel, antibitico natural. Recuperado el 10 de noviembre
del 2011 en
<http://www.dmedicina.com/vida-sana/nutricion/la-miel-antibiotico-natural>

J. Zaat. S. (2010) How honey kills bacteria. The FASEB Journal. Recuperado
el 10 de noviembre del 2011 en
<http://www.fasebj.org/content/24/7/2576.abstract>

Voet D., Voet J.G.(2004). Bioqumica 3 edicin: Mxico: medica

panamericana pp 389

Tortora,G. Funke,B y Case,L. (2007)Introduccin a la microbiologa, Mxico:

Medica Panamericana pp 229-231