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su estructura y funcin
Palabras clave: Gentica, Leyes de Mendel, ADN, Difraccin de Rayos-X, Biologa Molecular.
Key words: Genetics, Mendels Laws, DNA, X-ray Diffraction, Molecular Biology.
During 2012 two related scientific breakthroughs were celebrated. One of them was the Centennial of a cardinal discovery in
Physics, namely the X-ray diffraction by crystals, by Walter Friedrich, Paul Knipping and Max von Laue. The instrumentation
and interpretation of this phenomenon by the pioneer work of William Henry Bragg and his son William Lawrence Bragg paved
the way for the development of the today powerful methods of structural analysis. These X-ray diffraction methods would
play a key role in the other discovery celebrated in 2012: the fifty years of the Nobel Prize in Physiology or Medicine awarded
to Francis Crick, James Watson and Maurice Wilkins for their work of 1953 on the molecular structure of deoxyribonucleic
acid (DNA), the substance of the heredity, a fundamental finding for the understanding of the most extraordinary natural
phenomena: Life. In the sixtieth anniversary of the culmination of those works, we succinctly describe here the events that
lead to one of the major scientific discoveries of the twentieth century.
In the field of the observations, luck only favors the prepared minds.
Louis Pasteur.
proporciones iguales.
Figura 6: Comparacin esquemtica de los procesos de mitosis y meiosis en clulas eucariotas. Por simplicidad
se ha considerado una clula madre diploide (2n) con slo dos pares de cromosomas (n=2). Los colores azul
y rojo distinguen los cromosomas aportados a la clula madre por ambos progenitores. El ejemplo de meiosis
indicado corresponde al caso de la espermatognesis animal donde por cada clula madre se producen cuatro
espermatozoides. En el caso equivalente de la ovognesis femenina slo se forma un vulo con capacidad re-
productiva por clula madre. Figura adaptada de Pierce (Pierce, 2007).
caracterizan al nucletido. Dos de uno de 20 posibles aminocidos le- Grupo de los Fagos.
ellas son pirimdicas: citosina (C) y vgiros (L), tal como muestra la Fig.
timina (T), las otras dos purnicas: 8. De esta forma, en un polmero de En 1928, Frederick Griffith (m-
adenina (A) y guanina (G). dimensin N dichos aminocidos dico y genetista britnico, 1879-
pueden arreglarse en principio de 1941) mostr que la virulencia de
Sin embargo, Levene formula 20N maneras diferentes, un nmero la cepa Tipo III (S) de la bacteria
la hiptesis incorrecta que el ADN muy grande an para las protenas neumococo puede transferirse des-
consiste en tetra-nucletidos CATG ms pequeas (para slo N=4 ya se de clulas muertas de esta cepa a la
repetidos (CATGCATGCATG- tienen tericamente 160.000 com- cepa atenuada Tipo II (R) de bacte-
CATG), que en su momento des- binaciones diferentes!). rias vivas (Griffith, 1928). Basados
vo la consideracin de los cidos en este resultado, Oswald Theodore
nucleicos como sustrato para la in- Por sus comparativamente senci- Avery (mdico e investigados cana-
formacin gentica (formaran pol- llos sistemas genticos y rpida re- diense, 18771955), Colin Munro
meros repetitivos poco inteligentes) produccin, los genetistas comien- MacLeod (genetista canadiense-es-
hacia las protenas, otro importante zan en la dcada de 1940 a usar tadounidense, 1909-1972) y Maclyn
componente de todos los organis- virus capaces de infectar bacterias, McCarty (genetista estadounidense,
mos. Como el ADN (y por profun- llamados bacterifagos (que co- 19112005) en un experimento cla-
das razones de biologa molecular!) men bacterias) o, simplemente, fa- ve identifican en 1944 al ADN como
las protenas biolgicas son polme- gos, para estudiar la organizacin y el material gentico transferido (por
ros lineales (no ramificados) cuyas estructura de los genes. Algunos ge- aqul entonces llamado principio
unidades monomricas consisten en netistas se organizan en el llamado transformador), responsable por la
Figura 8: Vista de un polmero integrado por aminocidos. R indica uno de 20 posibles grupos qumicos late-
rales. Los aminocidos se conectan entre s va un enlace peptdico C-N que (por ser parcialmente doble) no
puede rotar, lo que determina la planaridad molecular indicada. Los enlaces simples N-C y C-C, en cambio,
pueden rotar (ngulos de torsin y ) libremente, sujetos a impedimentos estricos. Los valores de y a
lo largo de la cadena determinan la conformacin espacial de la protena. Por referencia, se incluyen algunas
distancias de enlace (1=10-8 cm). Figura adaptada de Lehninger, Nelson & Cox, 2005.
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 33
virulencia del neumococo Tipo III aquellos que contienen citosina (C) Sin embargo, Chargaff no advir-
(Avery, MacLeod & Mccarty, 1944). (Chargaff et alt., 1949; Vischer, Za- ti en su momento la relevancia del
menhof & Chargaff, 1949). segundo de sus descubrimientos,
Erwin Chargaff (bioqumico aus- esto es las igualdades A=T y G=C.
traco-estadounidense, 1905-2002) El primero de estos descubri- Escribira: Una comparacin de las
descubre en 1950 que los cuatro mientos cardinales mostr que la proporciones molares revela ciertas
nucletidos no estn presentes en teora de los tetra-nucletidos de Le- sorprendentes, pero tal vez sin sen-
los cidos nucleicos de diversos or- vene era incorrecta y que la secuen- tido, regularidades (Vischer, Za-
ganismos en la misma proporcin, cia de bases del ADN era suficien- menhof & Chargaff, 1949). Dichas
como propona Levene. Tambin temente rica en arreglos como para enigmticas igualdades jugaran un
descubre que parecen valer cier- almacenar la informacin gentica papel clave en la determinacin por
tas reglas generales (ahora llamada usando algn tipo de codificacin. Watson y Crick a inicios de 1953 de
reglas de Chargaff): por un lado el En efecto, una cadena de N nucle- la estructura molecular del ADN, la
nmero de nucletidos conteniendo tidos puede arreglarse en 4N formas que a su vez proveera una explica-
la base adenina (A) es igual a aque- distintas (para N=10, ya se tienen cin simple de las mismas.
llos que contienen la base timina (T); 1.048.576 combinaciones diferen-
por el otro el nmero de nucletidos tes!). En 1952, los estadounidenses
que tienen guanina (G) iguala el de Alfred Day Hershey (bacterilogo
y genetista, 19081997) y Martha
Cowles Chase (genetista, 1927
2003) realizan un experimento fun-
damental probando que la informa-
cin gentica de los bacterifagos (y
de todos los otros organismos) resi-
de en el ADN y no en las protenas
(Hershey & Chase, 1952).
La visualizacin de clulas y de
los procesos de divisin celular (mi-
tosis) y de sntesis de gametas (meio-
sis) a nivel macroscpico requiere
una magnificacin de unos 1000-
2000 aumentos (ver Fig. 9).
Figura 9: Micrografa ptica (unos 2000 aumentos) mostrando la dupli- Esto puede lograrse con un mi-
cacin de los 46 cromosomas humanos durante la profase de la mitosis croscpico ptico o electrnico
(Guttman et alt., 2004). cuyo principio de funcionamiento
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en trminos de la ptica geomtrica la luz invalida esta nocin y limita millonsimos de centmetros, esto
se esquematiza en la Fig. 11. la mxima resolucin de tal instru- es, 10-8 cm=1), se requiere luz de
mento a la longitud de onda de la ~1, esto es, rayos-X. Sin embargo,
A pesar de que la construccin luz. Esto es, no podemos ver deta- no es posible el disear un micros-
geomtrica parece indicar que el lles estructurales a escalas menores copio de rayos-X por una razn muy
aumento de un microscopio ptico que unos 5000 . De esta manera, simple: no existen lentes que des-
puede incrementarse indefinida- si queremos divisar procesos en la ven luz de alta frecuencia. En efec-
mente acercando el foco objeto F escala atmica y molecular (obje- to, el ndice de refraccin resulta de
a la red, el carcter ondulatorio de tos con una tamao de unos cien la polarizacin inducida en el me-
dio por el campo elctrico del haz
de luz. Para las altas frecuencias de
los rayos-X (unos 1018 ciclos por se-
gundo), an las partculas cargadas
ms livianas, esto es los electrones,
slo pueden seguir las oscilaciones
del campo excitatriz con una ampli-
tud extremadamente pequea. Esto
implica una polarizacin inducida
minscula en cualquier material y,
consecuentemente, un ndice de
refraccin que difiere del valor uno
Figura 10: Micrografa electrnica (unos 100.000 aumentos) mostrando para el vaco en unas pocas partes
ADN de clulas eucariotas en proceso de duplicacin durante la inter- en 106.
fase de la mitosis (Pierce, 2007).
Sin embargo, como ocurre en el electrones a partir de la figura de di- la Fig. 12. All, el problema consis-
rango ptico, aun tenemos el patrn fraccin de rayos-X producida por la te en derivar la estructura de la red
de difraccin que no requiere de dispersin de los mismos. (regiones transparentes y opacas a la
lentes y el obtener aumentos de x108 luz) a travs de su figura de difrac-
se reduce a resolver el problema in- Ejemplifiquemos el problema in- cin. La amplitud F de la luz disper-
verso de reconstruir la densidad de verso mediante el anlogo ptico de sada por toda la red consiste en un
Figura 13: Izquierda. Placa 1: difraccin de rayos-X en fibras (orientadas verticalmente) de la sal sdica de ADN
extrado de timo de cabra (NaADN). Placas 2a,b: comparaciones de los patrones de difraccin de ADN de cabra
con ADN de arenque. El haz incidente es perpendicular a las fibras y al plano de las placas. Placa 3: difraccin
en polvos de ADN de levadura. Derecha: William Thomas Astbury (1898-1961).
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Figura 14: Izquierda: primeras figuras de difraccin de rayos-X en fibras de ADN obtenidas en el Kings College
de Londres. Derecha: Maurice Hugh Frederick Wilkins (1916-2004).
patrn de difraccin proporcional al res caractersticas del ADN (ver Fig. mienza a mejorar substancialmente.
de una sola ranura muestreado uni- 13)
formemente a intervalos 1/a, donde Vista la relevancia de los estu-
ocurren los mximos de interferen- 2.3. Difraccin de rayos-X en dios por difraccin de rayos-X, a
cia. Cambios de signo en la ampli- ADN por Wilkins y Franklin mediados de 1950 Randall contra-
tud de difraccin F indican oscila- del Kings College de Lon- ta por tres aos a Rosalind Franklin
ciones de la luz en contra-fase. En dres (Foto en Fig. 15), una fisicoqumica
la regin de rayos-X no se pueden con formacin en Cristalografa, con
determinar experimentalmente estos En el Kings College de Londres, un doctorado de la Universidad de
cambios de signos, slo la intensi- Inglaterra, y bajo la direccin de su Cambridge obtenido en 1945.
dad F2 indicada en la figura (Proble- ex-supervisor de tesis John Randall,
ma de las fases). Maurice Wilkins comienza en 1946 Franklin haba trabajado en la
un proyecto sobre estudios de ADN estructura del carbn mineral y del
Si la separacin entre ranuras por microscopa UV, visible e infra- grafito, primero en Inglaterra y lue-
idnticas est distribuida al azar, los rroja polarizada, espectroscopia de go en Pars, desde donde arrib a
mximos de interferencia desapare- absorcin infrarroja y difraccin de Londres hacia fines de 1950. A pe-
cen y slo queda una figura propor- rayos-X (Wilkins, Gosling & Seeds, sar de que inicialmente se le haba
cional a la difraccin continua de 1951; Wilkins, 2003). En colabora- asignado el estudio de protenas en
una sola ranura. cin con el doctorando Raymond solucin, a ltimo momento y con
Gosling obtiene las primeras fotos el acuerdo de Wilkins y la misma
2.2. Difraccin de rayos-X en de difraccin de ADN extrado de Franklin, Randall cambia su plan de
ADN. Primeros estudios esperma de arenque (ver Fig. 14). trabajo a difraccin de rayos-X en
Las fotos resultan de una calidad fibras de ADN. Tambin acuerdan
Los primeros estudios de difrac- informativa tan pobre como las de que el trabajo del tesista Gosling
cin de rayos-X en ADN fueron rea- Astbury. pasara a ser supervisado por ella. En
lizados por W. T. Astbury en la Uni- una reunin con Randall y Gosling
versidad de Leeds, Inglaterra, duran- Durante un congreso en Londres, cuando Wilkins estaba de vacacio-
te el perodo 1937-1947 (Astbury, Wilkins obtiene muestras extrema- nes, Franklin recibe las excelentes
1947). Los patrones de difraccin damente puras de ADN (extrado del muestras de Signer y el mejor equi-
fotogrficos resultaron demasiado timo de cabra) provistas por el bio- pamiento de rayos-X del laboratorio,
difusos como para extraer ms que qumico suizo Rudolph Signer y la esto es, el liderazgo de los estudios
unas pocas dimensiones molecula- calidad de las fotos de difraccin co- sobre difraccin en ADN. Esto no es
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Figura 15: Rosalind Elsie Franklin Figura 16: Francis Harry Compton Crick (19162004) y James Dewey
(19201958). Watson (1928).
lo que Wilkins entenda iba a ser la tiembre de 1950 Watson comienza formarse en el empleo de dichos
participacin de ella en el proyecto una estada por un ao como post- mtodos de cristalografa estructu-
y el conflicto que se suscit entorpe- doctorando en la Universidad de ral. Durante el verano de 1951, Lu-
ci el desarrollo del mismo. Copenhague, Dinamarca, inicial- ria contacta a John C. Kendrew de
mente en el Laboratorio del bioqu- Cambridge y arregla un nuevo pro-
2.4. Modelado de la estruc- mico Herman Kalckar. ste estaba yecto post-doctoral de investigacin
tura molecular del ADN por interesado en el metabolismo de los (sobre la estructura de la hemoglobi-
Watson y Crick en Cambrid- cidos nucleicos y quera usar fa- na) para Watson en Inglaterra.
ge. gos como sistema experimental. Sin
embargo, Watson quera explorar Watson arriba a Cambridge en el
Inicialmente interesado en or- la estructura del ADN y este inters otoo de 1951. Con una formacin
nitologa, James Watson ingresa en no coincida con el de Kalckar. Lue- en Zoologa, por aquel entonces un
1943 a la Universidad de Chicago a go de trabajar parte del ao con l, novicio en cristalografa estructural,
la edad de 15 aos. Influenciado por Watson invirti el resto del tiempo estableci una cordial y altamente
la lectura en 1946 del libro de Erwin en Copenhague realizando experi- complementaria colaboracin con
Schrdinger titulado What Is Life? mentos con el fisilogo microbiano el fsico Francis Crick (Foto de Fig.
(Schrdinger, 1946), Watson cambi Ole Maaloe, entonces tambin un 16), un brillante cristalgrafo teri-
su inters profesional de la ornitolo- miembro del Grupo de los Fagos. co. Crick estaba realizando su tra-
ga a la gentica. En 1947 obtiene el Durante los meses de Abril-Mayo de bajo doctoral sobre cristalografa
grado de BS en Zoologa de la Uni- 1951, Watson visita la Estacin Zoo- de protenas en el grupo de Max
versidad de Chicago. En 1950 (a la lgica de Npoles, Italia. Durante la Perutz y John Kendrew del laborato-
edad de 22 aos) completa su PhD ltima semana de su estada atiende rio Cavendish dirigido por William
en la Universidad de Indiana bajo la un congreso sobre la determinacin Lawrence Bragg. Watson y Crick
supervisin del genetista Salvador de la estructura 3-D de molculas deciden dilucidar la estructura mo-
Luria. Por ese entonces integraba el por mtodos de difraccin de rayos- lecular del ADN mediante mode-
llamado Grupo de los Fagos, lide- X. All llama su atencin una comu- lizacin consistente con los datos
rado por Luria y el fsico Max Del- nicacin de Wilkins sobre difraccin experimentales accesibles.
bruck, y ya tena conocimiento del de rayos-X en ADN que lo convence
experimento de Avery, MacLeod y que slo a travs de esta herramien- 2.5. Nuevos datos y descubri-
McCarty de 1944 que sugera que ta puede determinarse la estructura mientos de Franklin
el ADN y no las protenas codifica- molecular del cido nucleico. Wat-
ban la informacin gentica. En Sep- son transmite a Luria su inters en Hastalaincorporacinde
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Franklin al proyecto, se haba estado lina A con un nmero mayor y ms de la fibra (coincidente con el eje-c
trabajando esencialmente con fibras preciso de datos. cristalogrfico vertical en la Fig. 18)
de la sal sdica de ADN (NaADN) con una distribucin angular uni-
en una forma cristalina poco hidra- Para Wilkins y su colaborador el forme de micro-cristales alrededor
tada (obtenida con una humedad fsico Alec Stokes, sin embargo, el del eje. De esta manera, el patrn
relativa prxima al 75%) llamada patrn de difraccin de la forma B de difraccin de rayos-X distribuido
forma A. En Septiembre de 1951, era revelador, pues confirmaba una en capas obtenido con una muestra
Franklin realiza un importante des- presuncin de Stokes de un ao estacionaria de ADN es similar al de
cubrimiento. Controlando cuidado- atrs de que la molcula de ADN era una fotografa de rotacin en 360
samente la humedad de las muestras helicoidal. Durante un viaje en tren, de un nico mono-cristal (Warren,
de ADN encuentra, a partir de los Stokes haba derivado la forma ca- 1990). Seguramente, el uso de unas
patrones de difraccin colectados racterstica de la difraccin por una pocas fibras ultra delgadas (18-30
con humedades relativas del or- hlice aislada que indicaba la ca- m) irradiadas por un haz de rayos-
den del 92%, una nueva forma de rencia de reflexiones sobre o cerca X fuertemente colimado (100 m)
ADN que llam forma B. Ms toda- del meridiano del patrn de rayos-X contribuy a reducir sensiblemente
va, descubre que las formas A y B (a lo largo de la fibra). Este clculo el ancho acumulado en los picos de
se inter-convierten reversiblemente acordaba cualitativamente con la fi- difraccin y as mejorar la calidad
(ADN-A ADN-B) bajo cambio de gura en X del difractograma observa- de los datos fotogrficos.
humedad (ver Fig. 17). La forma B do por Franklin para la forma B.
origina un patrn de difraccin de Empleando un ingenioso pro-
unos pocos picos difusos, corres- A mediados de Noviembre 1951 cedimiento basado en la funcin
pondientes a molculas de ADN re- Franklin dicta un seminario en el de Patterson (que fuera sugerido a
lativamente orientadas segn el eje Kings College donde describe sus Franklin en Pars a fines de 1951 por
de la fibra pero desordenadas entre nuevas fotos de difraccin en cris- su amigo y experimentado cristal-
s (Franklin & Gosling, 1953a). Este tales de NaADN (mejores que las grafo, Vittorio Luzzati), Franklin y
hallazgo permite explicar el carcter previas de Wilkins y Gosling) y sus Gosling determinaron a partir de pa-
poco informativo de los difractogra- medidas precisas del contenido de trones de difraccin similares al de
mas de rayos-X previos colectados agua, Watson asiste al seminario y la Fig. 18 la red de Bravais (mono-
por Astbury y por Wilkins y Gos- slo colecta informacin memorio- clnica centrada-C) y las correspon-
ling: probablemente trabajaron con sa. dientes constantes de celda del Na-
muestras que eran mezclas de las ADN. Luego procedieron a indexar
dos formas. Siguiendo su instinto de Probablemente, las fibras de diversas reflexiones (66) distribuidas
cristalgrafa, Franklin no se interesa ADN-A empleadas por Franklin en las nueve capas de red recproca
demasiado en la forma B y concen- consistan en poli-cristales fuerte- perpendicular al eje-c (ver Fig. 18).
tra sus esfuerzos en la forma crista- mente orientados a lo largo del eje Por aquella poca, los mtodos de
Figura 17: Izquierda: foto de difraccin de rayos-X de ADN-A (75% humedad). Centro: foto de ADN-B (92%
humedad). Derecha: comparacin de ambos patrones.
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 39
resolucin estructural a partir de da- las limitaciones en las facilidades nos requeridas en estos mtodos. A
tos de difraccin de rayos-X estaban computacionales para realizar las pesar de ello, valindose de un m-
en su infancia, por no mencionar sumas de Fourier de muchos trmi- todo diseado por H. Lipson y C. A.
Beveers en 1936 (Lipson & Beevers,
1936) y empleando una calculado-
ra de escritorio, Franklin y Gosling
realizaron la laboriosa sntesis de los
mapas de Patterson (Franklin & Gos-
ling, 1953b).
Figura 19: Esquema del modelo preliminar de ADN de Watson y Crick consistente en tres hlices (se muestran
slo dos) con las bases proyectndose hacia fuera y los grupos fosfatos hacia el eje helicoidal. La repulsin
electrosttica entre las cargas negativas de fosfatos prximos se vera compensada por iones Mg2+ coordinados.
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biolgico estara rodeado por una da son cinco: C2, Cm, C2/m, Cc y sicoqumico estadounidense y uno
coraza de molculas de agua; ii) El C2/c. Durante la primavera de 1952, de los cientficos ms importantes
ADN est fuertemente hidratado, Franklin viaja a Oxford donde mues- del siglo XX. l mismo se llamaba
contrariamente al modelo propues- tra sus fotos a la cristalgrafa Do- cristalgrafo, bilogo molecular e
to que contiene diez veces menos rothy Hodgkin y le manifiesta que investigador mdico. Fue uno de los
agua que el valor experimental!; haba reducido las posibilidades de primeros qumicos cunticos, reali-
iii) La gran afinidad del ADN por el grupos espaciales a tres (C2 y, posi- zando trabajos fundamentales des-
agua sugiere que los fosfatos (hidro- blemente, Cm y C2/m). Hodgkin le cribiendo la naturaleza de los enla-
flicos) deben estar en el exterior, no seala que dos de ellos (contenien- ces qumicos, por los que recibira el
en el interior de la molcula. do planos espejo) no pueden ser, Premio Nobel en Qumica en 1954.
debido a la quiralidad (propiedad Ya en dos oportunidades anterio-
Enterado del fiasco, Bragg orde- estructural de una molcula que no res haba prevalecido compitiendo
na a Watson y Crick que vuelvan a coincide con su imagen especular) cientficamente con Bragg:
sus tareas especficas (la estructura de los azcares en ADN. Esto deja
de la hemoglobina) y dejen el estu- a C2 como nico grupo espacial. i) En 1929 con la estructura
dio estructural del ADN a los inves- Como veremos ms adelante, la de silicatos, tales como topacio, tal-
tigadores de Londres. presencia de ejes de simetra didi- co, mica, etc. (Pauling, 1929). Sus
cos en ADN-A result una pieza de conocimientos en qumica estructu-
2.7. Una leccin relevante de informacin clave para Crick en el ral le dieron a Pauling una ventaja
Cristaloqumica modelado del ADN-B. frente a Bragg en la resolucin del
problema. En efecto, Pauling mode-
En un informe de laboratorio 2.8. Modelo de tres hlices de l correctamente los silicatos como
fechado el 7 de Febrero de 1952, Linus Pauling integrados por unidades tetradricas
Franklin reporta el indexado tentati- covalentes de grupos SiO4 (ver Fig.
vo del patrn de la forma A del Na- Desde Caltech en Pasadena, Ca- 20). Bragg, por su parte, supona
ADN en trminos de una celda de lifornia, USA, surge un poderoso que la estructura podra derivarse
Bravais monoclnica C. Los grupos rival en la carrera por la estructura del empaquetamiento ptimo de
espaciales posibles para esta cel- del ADN: Linus Pauling. Era un fi- tomos considerados como esferas
Figura 20: Izquierda: notas de laboratorio de Pauling indicando su metodologa en el modelado de la estructura
cristalina de silicatos. Derecha: Linus Carl Pauling (1901-1994).
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 41
cargadas de diferentes radios, una 8). Adoptando de partida esta pro- lo proponiendo una estructura para
hiptesis que le fue til en la deter- piedad molecular, procedi a mo- el ADN en forma de triple hlice,
minacin de la estructura de crista- delar arreglos helicoidales que op- con los fosfatos en el interior y las
les inicos, tales como los haluros timizaran los enlaces de hidrgeno bases nitrogenadas proyectadas ha-
alcalinos (NaCl, KCl, etc.). N-HO intra-moleculares. Bragg y cia fuera, como muestra la Fig. 22
colaboradores (Bragg, Kendrew & (Pauling & Corey, 1953).
ii) En 1951 con la estructura Perutz, 1950), sin embargo, acep-
secundaria de hlice- en protenas taron la hiptesis errnea de que la El 28 de Enero de 1953, Peter
(Pauling, Corey & Branson, 1951). estructura helicoidal deba poseer Pauling (entonces doctorando de
Aqu Pauling posea mayor informa- un nmero entero de aminocidos John Kendrew en Cambridge), que
cin sobre cristaloqumica por di- por vuelta. Tambin se equivocaron comparta la oficina 103 con Watson
fraccin de rayos-X en aminocidos al relajar la condicin de planaridad y Crick, les alcanza un pre-print con
aislados y en cadenas poli-peptdi- de los enlaces peptdicos (Fig. 21). el artculo del padre (quien haba
cas cortas (dos y tres aminocidos). tambin enviado una copia a Bragg).
Estos datos confirmaban la naturale- Basndose en los difusos difrac- El desasosiego inicial de aquellos se
za plana del enlace peptdico pre- togramas de Atsbury y sin contar con disipa luego que una rpida lectura
dicho por la teora de enlaces reso- el acceso a los excelentes datos de del trabajo indicaba una propuesta
nantes que el mismo Pauling haba Franklin, en Febrero de 1953 Pauling de estructura para el ADN similar a
contribuido a desarrollar (ver Fig. publica con Robert Corey un artcu- su frustrado intento de fines de No-
Figura 21: Comparacin de las estructuras helicoidales de protenas propuesta por Pauling, Corey & Branson
(1951) (izquierda: 3.7 pptidos/vuelta) y por Bragg, Kendrew & Perutz (1950) (centro: 4 pptidos/vuelta). Dere-
cha: esquema molecular actual de la estructura secundaria de hlice- en protenas.
42 CIENCIA E INVESTIGACIN - TOMO 64 N 3 - 2014
Figura 22: Izquierda: modelo de ADN de tres hlices de Pauling & Corey (1953); los tetraedros esquematizan
grupos fosfatos en el esqueleto poli-nucletido. Centro: esquema detallando la estructura de una de las tres h-
lices. Derecha: foto de un modelo molecular 3-D mostrando las bases nitrogenadas proyectndose hacia fuera
de las hlices.
viembre pasado. El examen de la foto impact hlice y que los datos obtenidos de
a Watson con la fuerza de una re- Wilkins sobre las dimensiones crti-
2.9. Watson visita a Franklin velacin: En el instante que vi la cas pueden utilizarse en la construc-
y Wilkins en Londres foto qued boquiabierto y mi pulso cin del modelo helicoidal para la
se aceler, comentara ms tarde forma B.
El viernes 30 de Enero de 1953 (Watson, 1968, 1981).
Watson visita intempestivamente a Los acontecimientos comienzan
Franklin en su laboratorio londinen- Esa noche los dos hombres con- a desarrollarse rpidamente. Al da
se para recabarle opinin acerca del tinuaran discutiendo durante la siguiente, sbado 31 de Enero de
modelo de ADN propuesto en el art- cena sobre la posible estructura he- 1953, Bragg levanta la moratoria
culo de Pauling y Corey y establecer licoidal del ADN. Watson continu a la dupla de trabajar en el ADN y
una eventual colaboracin. Desalo- recabando de Wilkins informacin accede al pedido de Watson de que
jado de la sala por Franklin, Watson cuantitativa derivada de aquella foto el taller del Cavendish le provea re-
visita a Wilkins. En el transcurso del de la forma B, obteniendo algunos presentaciones moleculares en es-
encuentro Wilkins, desprevenida- nmeros: el paso de la hlice era de cala hechas de chapas y alambres.
mente y sin el consentimiento o co- 34.4 . El mircoles 4 de Febrero, Watson
nocimiento de Franklin, le muestra retoma el modelado de la estructura
la mejor foto de la forma B tomada En el tren de regreso a Cambrid- del ADN.
por ella y Gosling (ver Fig. 23) y que ge, Watson dibuja de memoria el
le alcanzara este ltimo ese mismo patrn de difraccin en forma de X Durante la siguiente semana (9-
da (Wilkins, 2003). en el margen de un peridico. Este 14 Febrero 1953), Crick and Watson
esquema de la Foto 51 de Franklin confirman la informacin memorio-
sugiere a Crick que se trata de una sa de ste ltimo cuando tienen ac-
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 43
Figura 24: Izquierda: arreglo experimental para difraccin de rayos-X en fibras de DNA-B. Derecha: relacin
recproca entre el paso de hlices y sus correspondientes patrones de difraccin.
44 CIENCIA E INVESTIGACIN - TOMO 64 N 3 - 2014
Watson y Crick tenan ahora va- Figura 26: Interpretacin de la Foto 51 de Franklin en trminos de la
liosas piezas de informacin expe- intensidad de difraccin calculada, correspondiente a una hlice aislada
rimental, cruciales para la elabora- de paso P y con una densidad lineal de electrones constante. La intensa
cin de su modelo para la forma B difraccin meridional que se observa a alto ngulo se debe a la fuerte re-
del ADN: flexin por parte de las bases nitrogenadas, apiladas con una separacin
uniforme p entre ellas.
a) El polmero ADN se encuentra
arreglado en forma de hlices.
exterior de la hlice a unos 10 c) Las bases se disponen hacia el in-
b) Los fosfatos se encuentran en el de su eje. terior de la hlice, son paralelas
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 45
y uniformemente separadas en mental para el ADN: debe tra- g) Para la conformacin 3-D de los
3.4 entre s (como una pila de tarse de dos hlices enrolladas nucletidos aislados, disponan
platos). alrededor de un eje comn con de la estructura cristalogrfi-
sus marcos de fosfato-ribosa po- ca determinada en 1949 por S.
d) El paso de la hlice es de unos limerizados aproximadamente Furberg del Birkbecks College
34 y, por lo tanto, comprende relacionados entre s por un eje de Londres (Furberg, 1950). Este
unos 10 nucletidos por vuelta. doble perpendicular al eje de la trabajo muestra la importante
molcula. Consecuentemente, el caracterstica molecular que las
e) Haciendo la suposicin razona- par de hlices tienen sus respec- bases son prcticamente perpen-
ble que la forma-A cristalina del tivos esqueletos moleculares co- diculares al plano medio del az-
ADN tenia la misma conforma- rriendo en direcciones opuestas, car ribosa, contrariamente a la
cin (topologa) bsica que la una en la direccin 35 de los conclusin derivada por Astbury,
forma-B ms hidratada, entonces carbonos del azcar, la otra en la a partir de difraccin de rayos-
el grupo espacial C2 determi- orientacin 53 (ver Fig. 7). X en fibras de ADN, que dichos
nado por Franklin para el cristal planos eran paralelos entre s.
sugiri claramente a Crick una f) Las dos hlices estn desplazadas
caracterstica estructural funda- entre s en 3/8 del paso comn P.
Figura 27: Izquierda: apareamiento igual-con-igual de las bases. Derecha: modelo preliminar de Watson y Crick
(no muestra la consecuente variacin en el dimetro de la molcula).
46 CIENCIA E INVESTIGACIN - TOMO 64 N 3 - 2014
El aspecto ms importante de la
asociacin en pares de las bases es
que slo ciertos pares pueden for-
mar parte de una doble hlice de
dimetro uniforme. Un miembro
del par debe ser una base de ma-
yor tamao purina y, complemen-
tariamente, la otra la ms pequea
pirimidina. Si (como en el frustrado
modelo previo de Watson y Crick) el
par consistiera de dos purinas, la h-
lice mostrara all un ensanchamien-
to; si consistiera en dos pirimidinas,
la hlice tendra un estrechamiento.
La optimizacin de los enlaces de
hidrgeno llevara a una restriccin
adicional: los nicos pares de bases
posibles son
Figura 28: Relacin entre las formas enlicas y cetnicas de timina y Adenina (A) con Timina (T)
guanina.
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 47
Convencidos de la correccin
Guanina (G) con Citosina (C) nitrogenadas variaban ampliamente de tan atractivo modelo hipottico y
de una especie a otra, sin embargo, sin pruebas experimentales propias
Como un bono inesperado, esta las relaciones molares A/T y G/C que lo sustenten, Watson y Crick
propiedad estructural explicaba un eran siempre muy prximas a uno, escriben rpidamente el 2 de Abril
enigmtico resultado experimental, tal como lo sugiere la tabla siguiente de 1953 los resultados en un sucin-
la llamada regla de Chargaff. A pe- (adaptada de Chargaff et alt., 1949). to artculo titulado A Structure for
sar que el porcentaje de las bases Deoxyribose Nucleic Acid (Una
Estructura para el cido Deoxi Ri-
bonucleico) y lo envan para su
Fuente de ADN Adenina Timina Guanina Citosina
publicacin a la prestigiosa revista
(A) (T) (G) (C)
Nature (Watson & Crick, 1953a). No
Timo de cabra 1.7 1.6 1.2 1.0 reconocen el empleo de informa-
cin experimental clave producida
Bazo de vaca 1.6 1.5 1.3 1.0
por Franklin o Wilkins mas all de
Levadura 1.8 1.9 1.0 1.0 declarar el haber sido estimulados
Bacilo de la 1.1 1.0 2.6 2.4 por el conocimiento de la natura-
tuberculosis leza general de resultados experi-
48 CIENCIA E INVESTIGACIN - TOMO 64 N 3 - 2014
Figura 30: Izquierda: Modelo original en escala de Watson y Crick de la molcula de ADN-B (hecho de alambres
y chapas). La tira horizontal al pie del modelo indica la magnificacin del mismo y corresponde a una longitud
de 10 . El modelo se extiende verticalmente un paso de la hlice (unos 34 ). Derecha: esquema original del
ADN (adaptado de Watson & Crick, 1953).
mentales e ideas no-publicadas de La estructura de doble hlice con el apareamiento especfico postula-
Wilkins, Franklin y sus colegas del apareamiento especfico entre bases do sugiere inmediatamente un po-
Kings College de Londres. propuesta tendra una implicancia sible mecanismo de copiado de la
an ms extraordinaria en desen- informacin gentica. Los autores
Mediante un arreglo entre los di- traar el mecanismo molecular por dejaron rpidamente de lado esta
rectores del Cavendish (Bragg) y del el cual durante millones de aos los hesitacin y poco despus publica-
grupo del Kings College (Randall) organismos se desarrollaban y re- ron las importantes consecuencias
con el Editor de Nature, se acord producan. Tan extraordinaria que genticas implicadas por su modelo
en que los resultados de Wilkins Watson no se atrevi a explicitarlo (Watson & Crick, 1953b). La Fig. 31
(Wilkins, Stokes & Wilson, 1953) y en el primer artculo en Nature, a muestra (esquemticamente) el me-
Franklin (Franklin & Gosling, 1953c) pesar de la opinin en contrario de canismo propuesto de duplicacin
se publicaran separadamente en el Crick (Crick, 1974, 1989). Los au- del ADN.
mismo volumen (Nature, Vol. 171, tores alcanzaron una solucin de
April 1953), siguiendo el articulo de compromiso que reza: No ha es-
Watson y Crick. capado a nuestra consideracin que
Breve historia del ADN, su estructura y funcin 49
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NOTA PROVISTA POR EL CONICET