Sebuah Target-Spesifik Oral Perumusan Doxorubicin-Protein Nanopartikel: Khasiat dan

Keamanan di Kanker hepatoseluler

Abstrak
Latar Belakang / Tujuan: karsinoma hepatoselular (HCC) juga dikenal sebagai hepatoma ganas
adalah
yang paling umum kanker hati. Doxorubicin (Doxo) adalah memiliki aktivitas obat anti-kanker
terhadap
spektrum yang luas dari jenis kanker. Utilitas klinis doxo telah terbatas karena bioa- miskin
vailability dan toksisitas hati dan limpa. Selanjutnya, kemoterapi kanker terbatas
penyerapan oral. Transferin protein keluarga sangat berlimpah dan memainkan peran penting
dalam
transportasi dan penyimpanan besi dalam sel dan jaringan. Karena reseptor apotransferrin dan
laktoferin yang
sangat diekspresikan pada permukaan sel kanker aktif secara metabolik, tujuan utama dari
penelitian ini adalah untuk mengevaluasi efikasi doxorubicin dimuat apotransferrin dan
laktoferin nano
partikel (apodoxonano atau lactodoxonano) dalam pengobatan oral HCC pada tikus.
Desain studi: HCC diinduksi pada tikus dengan menambah 100 mg / L dari diethylnitrosamine
(DENA) dalam air minum selama 8 minggu. Seminggu setelah hari terakhir administrasi DENA,
tikus
dibagi menjadi empat kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari lima hewan. Setiap
kelompok diberikan
dengan salah satu yaitu obat., garam, doxorubicin (doxo), apodoxonano dan lactodoxonano (4
mg / kg
setara dengan obat). Dalam setiap kasus, mereka menerima 8 dosis obat oral dengan enam selang
sehari. Satu
minggu setelah dosis terakhir, aktivitas antikanker dievaluasi dengan menghitung nodul hati, H
&E
analisis bagian jaringan dan tingkat ekspresi angiogenik dan antitumor spidol.
Hasil: Pada tikus diobati dengan apodoxonano dan lactodoxonano, jumlah nodul neoplastik
secara signifikan lebih rendah dari tikus diberikan dengan garam atau dengan doxo.
Apodoxonano dan
lactodoxonano tidak menunjukkan penurunan berat badan rata-rata, yang nyata berkurang
sebesar 22%
dalam kasus doxo diberikan tikus. Pada tikus diobati dengan nanoformulations, jumlah liver
nodul ditemukan berkurang> 93%. Kedua nanoformulations menunjukkan lokalisasi cukup
tinggi
dalam hati dibandingkan dengan doxo.
Kesimpulan: Apodoxonano dan lactodoxonano menunjukkan peningkatan efikasi,
bioavailabilitas dan
keselamatan dibandingkan dengan doxo untuk pengobatan HCC pada tikus bila diberikan secara
oral.
Kata kunci: karsinoma hepatoselular, Oral kemoterapi, doxo, apotransferrin nanopartikel,
nanopartikel laktoferin.
pengantar
Oral obat yang paling konvensional
Metode recipient pemberian obat karena kesederhanaan,
non-invasif dan efektivitas biaya.
1
Terutama
infus intravena berbagai obat antikanker sering

menyebabkan peningkatan pesat awal, diikuti oleh de- tajam

kemerosotan konsentrasi di bawah tingkat terapeutik mereka
mengarah ke resistensi obat meningkat. Sebuah berkepanjangan
paparan obat pada konsentrasi yang sederhana akan
lebih menguntungkan daripada cepat meledak awal.
2
Hal ini dapat
dicapai dengan kemoterapi oral yang dapat mempertahankan
tingkat konsentrasi optimal obat dan memberikan
kontak yang terlalu lama dari organ yang ditargetkan untuk obat
yang pada gilirannya akan meningkatkan khasiat.
3, 4
Tetapi
Hambatan utama untuk modalitas ini adalah bioa- miskin
vailability karena penyerapan terbatas obat ke dalam
sirkulasi melalui epitel usus dan
transporter penghabisan.
5
Jadi untuk mencapai keuntungan terbaik
kemoterapi oral, enkapsulasi obat di
molekul pembawa diperlukan untuk menjamin perlindungan
terhadap degradasi in vivo, pengurangan samping toksik
efek, penurunan suntikan bolus berulang, favour-
farmakokinetik mampu dan rilis berkelanjutan. Natu-
biopolimer ral adalah kendaraan terbaik untuk pengembangan
molekul pembawa seperti dalam pemberian obat berkelanjutan
sistem.
6
Doxo, antibiotik anthracyclin, meskipun yang
efek samping, dikenal karena khasiat dan telah menjadi
molekul yang sangat diperlukan.
7, 8
Sejak doxo menunjukkan sangat
bioavailabilitas oral yang rendah (5%) karena perme- rendah
kemampuan, hidrolisis asam dalam perut dan kerentanan
untuk sitokrom P450,
9, 10
itu tersedia di pasar sebagai
suntik yaitu Adriamycin, Rubex dan Doksorubisin dll
dan formulasi intravena sering penuh
dengan cardiotoxicity. Telah ada yang luar biasa
kemajuan dalam penggunaan nanocarriers baru untuk lisan
aplikasi antara mana yang biodegradable adalah
paling banyak digunakan untuk pengiriman antikanker
obat karena mereka menghasilkan keberhasilan terapi yang lebih tinggi dengan
efek samping yang kurang.
11
Hasil investigasi kami sebelumnya
gation
12
menggunakan nanoformulations dari doxo dengan dua
protein alami yaitu, apotransferrin dan lactofer-
rin dalam pengobatan karsinoma hepatoseluler oleh
pemberian intravena menunjukkan efikasi yang lebih tinggi
dan profil farmakokinetik nanoformula- ini
tions dengan setidaknya cardiotoxicity.
12
Baru-baru ini kami memiliki
dievaluasi biokompatibilitas dan penyerapan profil
formulasi yang sama ketika disampaikan secara lisan.
13
Di
penelitian ini kami melaporkan khasiat
nanoformulations terhadap HCC bila diberikan
secara lisan pada tikus. Hasil penelitian menunjukkan kinerja yang lebih baik dari
apodoxonano dan lactodoxonano dibandingkan dengan doxo
dalam hal kemanjuran, lokalisasi jaringan dan keamanan.
Bahan dan metode
bahan
Darah manusia dikumpulkan dari vol- sehat
unteers sesuai persetujuan Kelembagaan Etika Com-
mittee, University of Hyderabad. Apotransferrin adalah

dimurnikan dari darah manusia mengikuti metode

Cohn et al.
14
Doxo adalah sediaan farmasi
oleh Biochem Pharmaceutical Industries, Pune, India.
Laktoferin dimurnikan dari susu sapi seperti yang dilaporkan
sebelumnya.
15
Semua reagen lainnya, analisis biokimia
kit dan biokimia yang analitis dan molecu-
kelas biologi lar.
hewan
Semua percobaan hewan dilakukan sebagai
per persetujuan etik Kelembagaan Animal komitmen
atee, University of Hyderabad. Tikus Wistar (Umur: 6-8
bulan, Berat: 0,155-0,175 kg) dipertahankan di
rumah hewan Universitas dan menyesuaikan diri selama 7
hari sebelum dimulainya percobaan. tikus yang
acak dibagi menjadi empat kelompok, masing-masing kelompok com-
prising lima hewan.
metode
Pemurnian Laktoferin
Secara singkat, lemak di susu sapi telah dihapus
melalui sentrifugasi pada 8000 rpm / 10 menit / 4 C dan
diencerkan dengan 0,05 M Tris-HCl (pH 8,0). CM-Sephadex
ditambahkan untuk itu (7 g / l) dan diaduk perlahan menggunakan
pengaduk mekanik selama satu jam. Ketika gel mendapat set-
tled, susu didekantasi. Gel dikemas ke dalam
kolom dan dicuci dengan kelebihan 0,05 M Tris-HCl
dan buffer mengandung 0,1 M NaCl. Laktoferin itu
dielusi dengan 0.25M NaCl penyangga. Akhirnya protein
dilewatkan melalui kolom Sephadex G-100 (2 x
100 cm) di 0,05 M Tris-HCl (pH 8,0) dan dimuat ke
SDS-PAGE gel.
Persiapan protein nanopartikel
Apotransferrin nanopartikel disusun oleh
kimia sol-minyak seperti yang dijelaskan
17
(Indian paten #
1572 / CHE / 2006).
17
Nanopartikel laktoferin yang
siap
12
dengan beberapa modifikasi (India paten #
4657 / CHE / 2011 tanggal 2011/12/30; US / 13729214/2012
dt 28 Desember 2012).
12
Persiapan nanopartikel Protein
Doxorubicin dimuat apotransferrin nanopartikel
(Apodoxonano): Apotransferrin nanopartikel
disiapkan oleh kimia sol-minyak dalam protokol de-
Scribed [India paten # 1572 / CHE / 2006;
17
].
Doxorubicin dimuat nanopartikel laktoferin
(Lactodoxonano): nanopartikel Laktoferin adalah
disusun berdasarkan metode Krishna et al., 2009
17
dengan beberapa modifikasi [paten India appln #
4657 / CHE / 2011 tanggal 2011/12/30; Appln paten AS.
# 13729214]. 10 mg laktoferin dilarutkan dalam 100
ml phosphate-buffered saline (pH 7,4) (PBS) dan
perlahan dicampur dengan 4 mg doxo di 100 ml ganda
air suling dan campuran diinkubasi pada es

selama 5 menit. Campuran laktoferin dan doxo adalah

perlahan ditambahkan ke 15 ml minyak zaitun pada 4 C dengan con-
tinuous dispersi oleh vortexing panduan lembut. Itu
pembentukan nanopartikel dari laktoferin-doxorubicin
hidroklorida (doxo) di fasa minyak yang digagas
sonikasi pada rentang daya 50-80% dan probe digunakan
adalah titanium tip solid diameter 0,375 inci (Cat ada
0-120-0009). A 2 pulsa kedua disahkan dengan celah
dari 2 detik antara pulsa berturut-turut untuk jangka waktu
15 menit menggunakan homogenizer ultrasonik (Model 300V / T
dari Bioloics Inc, USA). Setelah sonikasi, campuran
minyak zaitun yang mengandung hidrokarbon laktoferin-doxorubicin
drochloride segera dibekukan di nitro- cair
gen pada -196
Hai
C selama 10 menit. Kemudian terus es selama 4
jam. Partikel yang terbentuk dipisahkan oleh-pusat
trifugation pada 6000 rpm selama 10 menit. superna- yang
tant didekantasi dan pelet yang mengandung na- yang
noparticles dari doxorubicin dimuat laktoferin adalah
dicuci dua kali menggunakan 15 ml es dingin dietil eter.
Pelet segera tersebar secara menyeluruh
oleh vortexing manual dalam 1 ml phosphate buffered
garam dan digunakan untuk eksperimen. Partikel yang char-
acterized menggunakan mikroskop elektron scanning (SEM),
mikroskop elektron transmisi (TEM) dan atom
mikroskop (AFM) sesuai mandat produsen
ual.
rhodamine
123
Konjugasi apotransferrin dan lac-
toferrin
Apotransferrin dan laktoferin yang terkonjugasi
dengan Rhodamine
123
menggunakan protokol berikut
18
.
Secara singkat, 2 mg / ml Apotransferrin dan laktoferin
dilarutkan dalam 0,1 M natrium karbonat buffer pH
9 secara terpisah. rhodamine
123
ditambahkan ke anhidrat
DMSO pada konsentrasi / ml 1 mg. Untuk 1ml protein
solusi, 50l dari Rhodamin
123
solusi ditambahkan
perlahan di aliquots 5l dengan terus menerus dan lembut
aduk. Setelah penambahan Rhodamin
123
larutan,
inkubasi dilakukan dalam gelap selama 8 jam di 4C.
50mm Amonium klorida ditambahkan dan inkubasi
tion dilanjutkan selama 2 jam di 4C. 0,1% Xylene cya-
nol dan 5% gliserol ditambahkan ke dalam campuran dan
pemisahan apotranferrin terkonjugasi dan lac-
toferrin dilakukan dengan filtrasi gel menggunakan pengecualian
batas 20.000 - 50.000. Konjugat yang dielusi yang
disimpan
di
cahaya
bukti
wadah.
Rhoda-
ranjau
123
apotransferrin -conjugated dan laktoferin
nanopartikel langsung digunakan untuk percobaan.
Persaingan antibodi reseptor laktoferin
dengan Nanopartikel laktoferin-obat
Sel sup T1 (sel limfoma T) digunakan sebagai
sel kanker perwakilan. Satu juta sel yang
diinkubasi di media yang bebas serum selama 30 menit dalam 12 baik
piring. rhodamine
123
berlabel apodoxonano atau lac-

todoxonano (setara dengan protein 50 mg) ditambahkan

ke sel-sel di hadapan dan tidak adanya an-
ti-usus reseptor laktoferin poliklonal antibodi (2
ug / jutaan sel) dan diinkubasi selama satu jam. af-
ter inkubasi, sel dicuci tiga kali dengan PBS
dan diamati di bawah Leica Laser confocal mikroskop
dan sel fluorescently berlabel dihitung menggunakan
Partec aliran cytometer.
Aktivitas antikanker dari nanodoxo dan doxo di DENA
tikus diperlakukan
Tikus jantan Wistar (4 - 6 bulan; Berat:
0,155-0,175 kg) bertempat di kandang dan disimpan pada 12
h cahaya / siklus gelap. Setelah aklimatisasi, Hepatocel-
karsinoma lular (HCC) diinduksi pada tikus dengan dukungan
plementation dari 100 mg / L dari diethylnitrosamine
(DENA) dalam air minum selama 8 minggu
19
. Tikus (6 - 8
bulan) secara acak dibagi menjadi 4 kelompok (5
hewan per kelompok) dan dipelihara selama satu minggu.
Setelah satu minggu dari DENA induksi, dosis 4
mg / kg doxo atau doxo setara nano protein
partikel diberikan secara oral dengan canula lisan pada
1, 7, 14, 21, 28, 35,42 dan 49 hari. Selama memperlakukan para
ment, berat hewan dipantau dan hewan yang yang
mals dikorbankan pada akhir studi di bawah natrium
anestesi pentabarbitrate. Jaringan (hati, ginjal,
hati dan limpa) dikumpulkan dan darah adalah
ditarik oleh menusuk jantung. Tumor nodul> 3
mm (diukur dengan caliper digital)
dihitung pada permukaan setiap lobus hati
dan variasi dalam jumlah nodul di antara empat
kelompok secara statistik dievaluasi. Untuk membuat neoplastik
nodul lebih jelas, evaluasi lebih lanjut tumor
Pertumbuhan dilakukan dengan memperbaiki lobus di 10%
formalin. Permukaan atas dan bawah masing-masing tetap
lobus, bersama-sama dengan milimeter dinilai bar yang
difoto. Untuk menghindari ketidakpastian dalam hasilnya,
benjolan kecil dari 2 mm dikeluarkan. anti The
pengaruh tumor dari formulasi diperkirakan dengan
membandingkan jumlah hewan dengan lebih dari 40
massa tumor di masing-masing empat percobaan
kelompok. Formalin lobus tetap tertanam di par-
Affin dan rutin diwarnai dengan hematoxylin dan eo-
sin (H & E).
Isolasi RNA dan semi-kuantitatif RT-PCR untuk
gen tumor terkait
20
RNA total diisolasi dari hati beku
jaringan menggunakan Trizol Reagent (Invitrogen, USA) dan
cDNA disintesis dari RNA total dengan menggunakan oli-
go (dT)
12-18
sesuai protokol pabrik (Su-
perscript III Pertama sintesis untai kit, Invitrogen).
Sekarang semi-kuantitatif polymerase chain reaction
dioptimalkan menggunakan set primer tumor asso-
gen diasosiasikan. Data dinormalisasi untuk ekspresi

dari GAPDH yang digunakan sebagai kontrol internal. Itu

berikut
primer
telah dipakai:
p53:
merasakan
CCATGAGCGTTGCTCTGATG,
antisense
TTATCCGGGTGGAAGGAAATC;
p21:
merasakan
CCTGTTCCACACAGGAGCAA,
antisense
GATTGCGATGCGCTCATG;
VEGFR1:
merasakan:
CGTACCCGCAACGGAGAA,
antisense:
GCGTCCTCGGCAGTTACATC. RNA diisolasi dari
hati tikus yang sehat digunakan sebagai kontrol.
Analisis keselamatan nanoformulations
Analisis keselamatan dilakukan untuk menguji toksisitas
diinduksi pada organ yang sesuai dengan biokimia
cal analisis kit yang diproduksi oleh Qualigens (India)
untuk SGOT, SGPT, BUN (Blood Urea Nitrogen) dan
kreatinin (untuk hati dan ginjal). cardiotoxicity adalah
diukur dengan laktat dehidrogenase (LDH) menggunakan
berikut protokol.
Laktat assay dehidrogenase
21
Laju reaksi ditentukan oleh penurunan
absorbansi pada 340 nm yang dihasilkan dari oksidasi
NADH (Adams et al., 1973). Satu unit LDH
menyebabkan oksidasi satu mikromol NADH per
menit pada 25
0
C dan pH 7,3, di bawah-kondisi tertentu
tions. Setelah Inisialisasi dan imbang, tingkat kosong
didirikan. 300 ml serum ditambahkan ke 2,5 ml
dari 0,2 M Tris_HCl (pH 7,3), 0,1 ml 6.6mM NADH
dan 0,1 ml 30mm natrium piruvat untuk merekam
SEBUAH
340
/ menit dari bagian linier awal.
Analisis statistik
Semua studi in vitro dilakukan dalam rangkap tiga
untuk masing-masing kelompok eksperimental. Hasil yang pra
sented dalam hal mean dan deviasi standar. Itu
signifikansi perbedaan antara perawatan adalah
dianalisis dengan ANOVA satu arah dengan usia dan memperlakukan
ment sebagai faktor menggunakan Sigma Stat. Tingkat statisti-
cal signifikansi (P) ditetapkan pada P <0,05.
hasil
Reseptor dimediasi masuknya nanopar- protein
ticles
Masuknya doxo dimuat nanopartikel melalui
reseptor dimediasi endositosis dianalisis. pertama
Sel-sel pra-perawatan dengan apotransferrin dan lac-
antibodi reseptor toferrin. Kemudian sel-sel yang
dicampur dengan nanoformulations dari kedua protein mana
apotransferrin dan laktoferin ditandai dengan rho-
Damine
123
yang memancarkan fluoresensi hijau, kontras
untuk doxo yang memancarkan fluoresensi merah intrinsik. Mengalir
Cytometry analisis menunjukkan peningkatan jumlah
sel neon ketika diobati dengan nanoformula-
tions saja, sementara itu bisa berkurang ketika sel-sel yang
preincubated dengan antibodi reseptor. Hasilnya adalah

dikonfirmasi menggunakan confocal microscopy (Tambahan

Gambar 1).
Pengobatan karsinoma hepatoseluler
HCC diinduksi dengan pemberian oral
DENA dan ditemukan dibuktikan melalui pembentukan
nodul pada jaringan hati dan juga dari kanker
profil pertumbuhan sel di hati bagian histokimia
(Gambar 1A). Dalam kasus tikus diobati dengan doxo, yang
pembentukan nodul ditemukan relatif berkurang
meskipun beberapa pertumbuhan kanker masih jelas dalam
bagian hati (Gambar 1B, 2B). Sebaliknya, dalam kelompok
diperlakukan dengan apodoxonano atau lactodoxonano yang
nodul di hati secara signifikan berkurang nyarankan-
gesting penghambatan tertinggi HCC ketika doxo dimuat
nanoformulations dipekerjakan (Gambar 2B). Ini adalah
dikonfirmasi lebih lanjut dengan analisis histokimia, di mana
hati bagian jaringan menunjukkan yang normal seluler
morfologi (Gambar 1C, 1D). Pengamatan di atas
menunjukkan bahwa formulasi protein nanopartikel dari
apotransferrin dan laktoferin sangat efektif
bila dibandingkan dengan doxo larut.
Khasiat nanoformulations
HCC bearing tikus menunjukkan peningkatan rata-rata
berat badan (MBW), yang akan berkurang secara drastis
ketika diobati dengan doxo menunjukkan sisi yang parah
Efek yang diberikan oleh obat (Gambar 2A). Sedangkan di
kasus pengobatan dengan apodoxonano dan lactodox-
Onano, MBW hewan secara signifikan dipulihkan
(Gambar 2A) dengan sedikit penurunan berat badan karena kanker
inhibisi. Dengan demikian enkapsulasi nanopartikel memiliki
mengurangi doxo-pengobatan terkait penurunan berat badan
mendemonstrasikan penurunan efek samping
Konsentrasi doxo selama pengobatan itu
Diperkirakan dalam homogenat jaringan dibuat dari
hati, ginjal, jantung, limpa tikus diobati. Hasil
ditunjukkan pada Gambar 2C menunjukkan bahwa tingkat tinggi doxo yang
hadir dalam hati, sementara tingkat yang signifikan
lebih rendah pada ginjal, hati dan limpa bila diberikan
melalui apodoxonano dan lactodoxonano. karena
hati adalah lokasi aksi, kehadiran obat yang lebih tinggi
tingkat di dalamnya bila diberikan melalui apodoxonano
dan lactodoxonano akan membantu dalam meningkatkan terdistribusikan dengan
keampuhan pengobatan.
Analisis semi-kuantitatif RT-PCR dari Tumor
gen terkait
Protein utama yang memainkan peran penting dalam con-
trolling kanker yaitu p53 dan p21 lebih mantan
ditekan di bawah kondisi tumor menekan. Itu
tingkat p53 dan p21 dianalisis pada tikus diperlakukan
dan hasil yang ditunjukkan pada Gambar 3 menunjukkan bahwa meskipun
tingkat secara signifikan meningkat pada tikus diobati dengan
doxo, tikus diobati dengan apodoxonano dan lac-
todoxonano menunjukkan tertinggi up regulasi. untuk con-

mengencangkan hasil, pengembangan pembuluh darah di sekitar

jaringan kanker dianalisis dengan memantau VEGFR
ekspresi. Tingkat VEGFR ditingkatkan dengan kemajuan
kanker dan dengan demikian berfungsi indikator kuat dari penyakit
perkembangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa tingkat VEGFR mendapat sig-
nificantly bawah diatur dalam apodoxonano dan lac-
todoxonano diperlakukan tikus dan pengurangan ini lebih tinggi
bila dibandingkan dengan doxo pengobatan (Gambar 3). ulang ini
Hasil pengujian menunjukkan bahwa apodoxonano dan lactodoxonano
meningkatkan tumor menekan lingkungan dan efisien
blok pembuluh darah di sekitar jaringan kanker efisien
melalui lokalisasi ditargetkan obat.
Profil ekspresi tumor terkait dan
penanda apoptosis
Tingkat protein p53 dan VEGFR dipamerkan
profil yang sangat mirip dengan tingkat RNA mereka, sehingga
menguatkan khasiat nanoformulations digunakan.
Hal ini selanjutnya dikonfirmasikan melalui pengamatan
peningkatan ekspresi penanda apoptosis,
dibelah caspase-3 selama pengobatan dengan nano
partikel yang menunjukkan tingkat tertinggi apoptosis ketika
pengobatan dilakukan dengan nanoformulations (Fig
4).

profil keamanan
Toksisitas non-spesifik nanoformulations yang
dianalisis dalam homogenat jaringan tikus diobati dengan menggunakan
spesifik-spidol. Setelah penyerapan dari saluran GI
molekul pembawa memasuki hati dan akan diekskresikan
melalui ginjal. Berikut analisis keselamatan untuk kid- yang
ney dilakukan dengan memperkirakan parmeters Kreatinin
dan Urea Darah Nitrogen (BUN). peningkatan yang signifikan
di tingkat kreatinin dan penghapusan miskin BUN di-
dicates kerusakan ginjal yang dalam penelitian ini
jelas dalam doxo diperlakukan tikus (Gambar 5A). Tapi dalam kasus ini
dari tikus yang diobati dengan nanoformulations keselamatan
parameter jelas menunjukkan penurunan yang signifikan dalam
tingkat kerusakan. Kerusakan hati dianalisis dengan
memperkirakan tingkat SGOT dan SGPT yang
menemukan peningkatan dalam hal pengobatan doxo dan re-
yang diinduksi secara substansial, ketika diobati dengan nanoformula-
tions (Gambar 5B). Toksisitas hati yang merupakan com- utama
lipatan dalam pengobatan doxo diukur dengan LDH
tingkat. Tingkat LDH ditemukan secara signifikan meningkat pada
doxo kelompok perlakuan, sedangkan kadar ini tetap
minimal pada hewan diperlakukan dengan nanoformulations
mirip dengan kelompok perlakuan dengan garam (Fig
5C).

Diskusi
Untuk pengobatan dari spektrum yang luas dari kanker, lisan
pengiriman adalah rute yang paling disukai dari admin- obat
Administration tapi menjadi yang paling sulit karena berbagai
hambatan yang dihadapi oleh obat dalam mencapai target
organ. Kedua, karena doxo adalah substrat
P-gp pompa penghabisan, berbagai inhibitor seperti myricetin,
Quercetin dan Siklosporin A
22, 23
umumnya mempekerjakan tenaga
nganggur untuk melarikan diri dari jalur penghabisan obat di
usus, ginjal dan hati. Tapi faktor pembatas utama
dalam penggunaan inhibitor ini adalah efek samping
seperti penekanan sistem kekebalan tubuh yang mencegah
penggunaannya dalam kombinasi dengan anti-kanker
narkoba.
24
Jadi formulasi nanopartikel kini telah menjadi
strategi yang paling disukai untuk meningkatkan bioavaila- yang
bility obat ketika disampaikan secara lisan. Studi pada
polystyrene lateks telah menunjukkan bahwa serapan maksimum
partikel mungkin ketika diameter mereka di menjadi-
tween 50-100 nm.
25
Beberapa formulasi termasuk
hidrogel, dendrimers, liposom dll, yang
terdiri dari berbagai polimer biodegradable seperti PEG,
PLGA, PAMAM, PAA dll, yang mencoba untuk meningkatkan lisan
bioavailbility dari doxo.
26-29
Di antara polimer biodegradable, alami
yang adalah kandidat terbaik untuk telah dijalankan berkelanjutan
sistem ery.
30
Apotransferrin dan laktoferin yang
dilaporkan sebagai kendaraan pengiriman sejak reseptor untuk
protein ini dikenal menjadi lebih diekspresikan pada
berbagai jenis kanker.
19, 31
Di masa lalu, pro
teins telah menjadi sangat diperlukan untuk diagnosis dan
pengobatan banyak penyakit karena beracun mereka,
non-imunogenik, biokompatibel dan biodegradable
alam. Mereka menyediakan farmakokinetik yang baik dan
akumulasi jaringan kanker yang lebih baik. protein nanopar-
sistem ticulate semakin penting karena mereka
fungsi dimodifikasi dan potensi aplikasi-
tions.
32-40
Kami sebelumnya melaporkan khasiat, bioavaila-
bility dan farmakokinetik profil dari nanoformu- yang
lations dari doxo dengan di atas dua protein saat
disampaikan secara intravena.
12
Baru-baru ini juga ditunjukkan
yang nanoformulations tersebut diserap lebih ef-
ficiently melalui usus kecil ketika disampaikan
secara lisan dan stabilitas formulasi ini adalah re-
porting untuk menjadi lebih baik di hadapan flu- simulasi
ids.
13
Lebih dari formulasi ini tampak lebih aman
dan tidak menyebabkan efek samping beracun.
Dalam penelitian ini, efikasi dan keamanan dari
yang apodoxonano dan lactodoxonano ditunjukkan
mana 4mg / kg doxo digunakan melawan 2 mg / kg
formulasi intravena yang digunakan pra
viously.
12
Untuk menjaga efektivitas, jumlah
dosis yang meningkat menjadi delapan. Dengan demikian, efektivitas dari
formulasi oral dipertahankan setara dengan
formulasi intravena seperti terbukti dari num yang
ber nodul diamati pada sampel hati diperlakukan
dan juga berarti berat badan. Jumlah tertinggi
dari doxo ditemukan untuk hadir dalam hati saat
disampaikan melalui nanoformulations ini, yang
menunjukkan untuk pengiriman efisien obat untuk target
tisu. Profil keamanan dari formulasi dalam
tikus diperlakukan ditemukan mirip dengan un-
diperlakukan tikus. Kemanjuran obat di nanoformulation
dikonfirmasi oleh analisis semi-kuantitatif
penanda molekuler yang menunjukkan en- signifikan
hancement dalam ekspresi penekan tumor
gen p53 dan p21 menunjukkan tingkat tumor dukungan
pression. Hal ini lebih didukung oleh diamati
regulasi down dari ekspresi VEGFR yang merupakan
indikator penurunan pembuluh darah sekitar tumor.
Sedangkan hasil penelitian pada hewan kecil seperti
tikus yang menggembirakan, penelitian lebih lanjut perlu un-
dertaken terutama dalam menentukan dosis di hu-
studi manusia. Salah satu keprihatinan utama adalah lisan
penyerapan obat ketika disampaikan dengan nanopar-

Operator-operator ticle pada manusia. Mouse, tikus, domba dll bisa

menyerap nanopartikel efisien tetapi relevansi
studi ini dan ekstrapolasi data ke manusia
tetap belum terselesaikan.
41
Kedua, dosis yang digunakan dalam
formulasi sekarang ini sangat kurang dibandingkan dengan
berbagai formulasi yang berkisar dari 7.5-
12.5mg / kg berat badan seperti yang dilaporkan dalam literatur.
Selanjutnya, ekstrapolasi dari dosis untuk manusia
tidak mungkin karena hewan-hewan kecil menghilangkan obat
jauh lebih cepat daripada mamalia besar.
42-44
kesimpulan
Data menunjukkan bahwa apodoxonano dan
lactodoxonano meningkatkan efikasi anti-neoplastik
dari doxo pada tikus HCC. Pengiriman doxo melalui apo-
transferin dan laktoferin memper- tinggi nanoformulation
khasiat dan bioavailabilitas doxo di tar- sebuah
mendapatkan spesifik cara, dan karena itu merupakan efektif dan
Pendekatan pengiriman obat oral lebih aman.
singkatan
HCC: karsinoma hepatoseluler; DENA: di-
ethylnitrosamine; apodoxonano: doxorubicin dimuat
apotransferrin
nanopartikel;
lactodoxon-
ano: doxorubicin nanopartikel laktoferin dimuat;
doxo: doxorubicin; Tris: trisaminomethane; HCl: hidrokarbon
drochloride; CM: karboksimetil; NaCl: Sodium
khlorida; SDS-PAGE: natrium dodecylsulphate -
polyacrylamide gel elektroforesis; RT-PCR: real time
polymerase chain reaction; GAPDH: Gliseraldehida
Dehidrogenase 3-fosfat; p53: supresor tumor
protein 53; p21: tergantung cyclin kinase inhibitor 1A;
VEGFR1: Vascular endothelial growth factor receptor
1; SGOT: Serum glutamic transaminase oksaloasetat;
SGPT: serum glutamic piruvat transaminase; SANGGUL:
urea nitrogen darah; LDH: dehidrogenase laktat;
NADH:
nicotinamide
adenin
dinukleotida;
ANOVA: Analisis varian; MBW: berarti tubuh
berat; GI: gastrointestinal; PEG: Polyethylene glycol;
PLGA: Poly (asam laktat-co-glikolat);
PAMAM:
Poli (amido amina); PAA: poli (asam akrilat).
Materi tambahan
Tambahan Gambar 1
[http://www.jcancer.org/v04p0644s1.pdf]
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada M. Nalini, confocal Mikroskop facil-
ity, UoH untuk melakukan confocal Microscopy.
dukungan keuangan
Karya ini didukung oleh proyek-proyek penelitian
pendanaan oleh Departemen Bioteknologi dan De-
partment Sains dan Teknologi, Pemerintah
India. GK adalah CSIR SRF.
bersaing Minat
Para penulis telah menyatakan bahwa tidak ada bersaing
bunga ada