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Respuesta de variedades mejoradas de papa

(Solanum tuberosum L.) al estres hdrico por
sequa

Article November 2013

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Julio Gabriel Ada Angulo

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 Respuesta de variedades mejoradas de papa (Solanum tuberosum L.) al estres hdrico
por sequa
Response of potato varieties improved (Solanum tuberosum L.) to water stress by drought
Gabriel Julio1*, Veramendi Silene1, Angulo Ada1, Magne Jury1

Datos del Articulo Resumen

1
Fundacin PROINPA, Regional
Valles Norte, Casilla 4285, Cocha Con el objetivo de evaluar la respuesta antioxidante al estrs hdrico por sequa en siete variedades mejoradas de
bamba, Bolivia.
papa, se evalu la actividad enzimtica de la Catalasa (CAT), el Ascorbato peroxidasa (ASPX) y la guayacol
peroxidasa (POX). Los resultados mostraron que las variedades Aurora, Victoria y Jaspe fueron resistentes al
*Direccin de contacto: Julio estrs hdrico por sequa y mostraron valores superiores en la actividad enzimtica de la CAT, ASPX y POX,
Gabriel
que sus propios controles. Esto confirm que estas variedades fueron las ms resistentes al estrs hdrico por
Fundacin PROINPA, Casilla 4285,
Cochabamba, Bolivia. Tel: (591) 4 sequa. En cambio, los clones 00-216-3, 00-207-6 a y las variedades Desire y Salom, mostraron los valores ms
4319595, Fax: (591) 4 4319500. bajos que sus controles. Indicando esto, que estas variedades fueron susceptibles al estrs hdrico por sequa. Sin
E-mail address: embargo, la variedad Salom con 20 das de estrs hdrico por sequa contrariamente a lo que se esperaba, mostr
j.gabriel@proinpa.org
altos valores de actividad enzimtica, respecto a sus controles. Esto sugiri que sta variedad probablemente
tuvo otros mecanismos de resistencia al estrs hdrico por sequa que le permitieron reaccionar a estreses ms
drsticos de sequa. Por ltimo, la permeabilidad cuticular mostr que las variedades Aurora y Victoria tuvieron
Palabras clave:
bajos contenidos de clorofila en referencia a sus controles que mostraron altos contenidos de clorofila.
Enzimas antioxidantes,
actividad enzimtica,
clorofila,
resistencia,
severidad. 2013. Journal of the Selva Andina Biosphere. Bolivia. Todos los derechos reservados.

Abstract

J Selva Andina Biosph.

2013; 1(1):25-36. In order to evaluate the antioxidant response to water stress by drought in seven improved varieties, we assessed
the enzymatic activity of catalase (CAT), ascorbate peroxidase (ASPX) and guayacol peroxidase (POX). The
Historial del results showed that the Aurora, Victoria and Jaspe varieties were resistance to water stress by drought and
artculo. showed higher values in the enzymatic activity of CAT, ASPX and POX, that their own controls. This confirmed
Recibido Agosto, 2012. that these varieties were more resistant to water stress by drought. In contrast, clones 00-216-3, 00-207-6 and
Devuelto Enero 2013
Aceptado Agosto, 2013.
Desire and Salome varieties, showed resistance and lower values than their controls. However, the Salome
Disponible en lnea, Noviembre variety with 20 days of drought water stress contrary to what was expected showed high levels of enzyme activity
2013
compared to controls. This suggested that this variety probably had other mechanisms of resistance to water
Editado por: stress by drought that allowed more dramatic reaction to drought stress. Finally, cuticular permeability showed
Selva Andina that Aurora and Victoria varieties had low chlorophyll content in reference to its controls that showed high
Research Society
chlorophyll content.
Key words:
Antioxidant enzymes,
enzyme activity,
chlorophyll,
resistance,
severity.
2013. Journal of the Selva Andina Biosphere. Bolivian. All rights reserved.

25
Vol 4 No 1 2013 Validacin de marcadores moleculares para resistencia a sequa en trigo harinero
___________________________________________________________________________________________________________
Introduccin
El cultivo de papa es conocido por su sensibilidad
a la sequa y su efecto en la productividad
depende de la intensidad, duracin y etapa feno
lgica en la que se presenta as como de la
estrategia inherente del genotipo (Mamani 2000,
Gabriel et al. 2011a).
La resistencia a la sequa de un cultivo hace
referencia a su capacidad para crecer satisfac
toriamente en zonas con dficit hdrico. Las modi
ficaciones que tienen lugar en la estructura y
funcin de las plantas para aumentar la proba
bilidad de sobrevivir y reproducirse en un ambi
ente determinado se llama adaptacin (Charco
2002). Las respuestas adaptativas al estrs pueden
clasificarse en: a) El control de la homeostasis,
que incluye homeostasis inica y la osmtica. b)
El control del dao y la reparacin o detoxifi
cacin. c) El control del crecimiento. Estos meca
nismos actan conjuntamente ya que la seal de
homeostasis regula negativamente la respuesta de
detoxificacin, entonces ambas respuestas inducen
la tolerancia al estrs, el cual regula negativamente
la inhibicin del crecimiento provocada por la
aparicin de las condiciones ambientales adversas.
El segundo mecanismo repara la alteracin del
equilibrio entre las especies peroxidantes y los anti
oxidantes, a favor de las primeras (Sies 1991).
Esta alteracin bioqumica se manifiesta como un
incremento en la tasa de produccin de ERO.
Las especies reactivas de oxgeno (ERO), tambin
llamadas especies activas de oxgeno (EAO) son
resultado de la reduccin parcial del O2
atmosfrico. Existen bsicamente cuatro formas de
ERO celular, oxgeno molecular singlete (1O2),
26
radical superxido (O2), perxido de hidrgeno
(H2O2) y el radical hidroxilo (HO), cada uno con
la caracterstica vida media. Las ERO pueden ser
extremadamente reactivas, especialmente el ox
geno molecular singlete y el radical hidroxilo y a
diferencia del oxgeno atmosfrico pueden oxidar
mltiples componentes celulares como protenas y
lpidos, ADN y ARN. Las ERO se producen conti
nuamente en el cloroplasto, mitocondria y
peroxisomas.
En condiciones normales, la produccin y remo
cin de las ERO est estrictamente controlada. Sin
embargo, el equilibrio entre la produccin y la
depuracin de stas puede ser perturbado por diver
sos factores fisicoqumicos, como son el dficit
hdrico, la salinidad, las temperaturas extremas, la
excesiva o insuficiente radiacin luminosa, la
anaerobiosis por encharcamiento o inundacin, los
factores mecnicos como el viento o la compac
tacin del suelo, viento fuerte y las lesiones (Cabre
ra 2006, Mano 2002). Cuando, tanto por un aumen
to de produccin cuanto por una disminucin en
los mecanismos de defensa, se pierde el balance en
tre la aparicin de especies nocivas y la capacidad
de la clula de evitar su acumulacin, ocurre una
situacin conocida como estrs oxidativo. En estas
condiciones las especies activas del oxgeno rea
ccionan con las macromolculas de las clulas mo
dificando su estructura y su funcin y dando lugar
a alteraciones que pueden conducir a la muerte ce
lular.
En el caso de dficit hdrico, si este es prolongado
en el tiempo, este ocasionara inevitablemente dao
oxidativo debido a la sobreproduccin de especies
reactivas de oxgeno.
Gabriel Julio et al
___________________________________________________________________________________________________________
Por lo tanto el incremento en la capacidad de
eliminacin de estas ERO por parte de la planta es
considerada como sntoma de tolerancia, mientras
que la ausencia de respuesta o una disminucin res
pecto de los valores control se considera sntoma
de sensibilidad (Hernndez & Jimnez 2000, Tou
mi et al. 2010).
El mantenimiento de las ERO a un nivel com
patible con el funcionamiento celular normal se
lleva a cabo por diversas actividades con capa
cidad antioxidante y que se clasifican en enzim
ticas y no enzimticas (Foyer et al. 1994, Perl-
Treves & Perl 2002).
Un antioxidante es cualquier substancia que a ba
jas concentraciones comparadas con las del sustra
to oxidable, inhibe o disminuye significativamente
la oxidacin de este sustrato. Las ERO que se lle
gan a producir en las clulas son eliminadas por va
rios sistemas antioxidantes que se clasifican como
sistema antioxidante enzimtico y no enzimtico
(Perl-Treves & Perl 2002).
Entre los antioxidantes enzimticos se tiene a la
Catalasa (CAT) que elimina H202 en los peroxi
somas, superxido dismutasa (SOD) que elimina
el anion-radical superxido, Ascorbato peroxidasa
(ASPX) que elimina H202 en diversos comprar
timentos, guaiacol peroxidasa (POX) (Moller et al.
2007).
Otras enzimas de este grupo que desempean un
papel importante en la detoxificacin celular son:
la monodehydroascorbate reductasa (MDHAR),
dehidroascorbato reductasa (DHAR) y la glutatin
peroxidasa (GPX) (Arora et al. 2002). Entre los
Antioxidantes no enzimticos, se tiene a los antio
xidantes liposoluble como los carotenoides y alfa
tocoferol y a los hidrosolubles como el cido as
crbico y glutatin.
27
J Selva Andina Biosph
Desde el punto de vista agrcola, las posibles solu
ciones frente al estrs hdrico pasan por la moder
nizacin de los sistemas de regado y por la utili
zacin de cultivos con pocas necesidades hdricas.
Por ello, numerosos proyectos de investigacin a
nivel mundial estn orientados a la obtencin de
variedades que sean capaces de resistir mejor las
condiciones adversas de falta de agua (Parry et al.
2005).
SOD es la enzima que encabeza en el ataque a las
ERO debido a que remueve rpidamente uno de
las primeras ERO en ser producidas: el super
xido. La SOD dismutasa, el superxido en oxgeno
y H2O2. Sin embargo, esta reaccin solo convierte
una ERO en otra y el H2O2 tambin debe ser
destruido. Es aqu donde intervienen enzimas
como la CAT y la ASPX. La CAT es una enzima
que contiene hierro en su estructura y cataliza la
dismutacin del H2O2 en agua y oxgeno mole
cular (Arora et al. 2002). Esta enzima se encuentra
en todos los organismos eucariota aerbicos y
constituye un mecanismo esencial para la elimi
nacin del H2O2 generado en los peroxisomas por
oxidasas que participan en la -oxidacin de ci
dos grasos, la fotorespiracin y el catabolismo de
las purinas. La CAT fue una de las primeras enzi
mas en ser aislada y obtenida con un alto grado de
pureza. Todas las formas enzimticas de la CAT
son tetramricas con pesos moleculares de aproxi
madamente 220 KDa. Mltiples formas de la CAT
han sido descritas en numerosas plantas. Estas
formas han sido clonadas principalmente de maz
(Tern & Singh 2002).
El ASPX es un sistema eficiente en las plantas y
est formado por el sistema cido ascrbico y la
enzima ASPX. El ASPX es una enzima que con
tiene un grupo hemo y requiere de la presencia de
ascorbato en cantidades considerables para su esta
Vol 1 No 1 2013 Respuesta de variedades mejoradas de papa al estrs hdrico por sequa
__________________________________________________________________________________________________________
balidad y funcionalidad. Reduce el H2O2 a agua hidroxilo, a travs de la reaccin de Fenton
utilizando el ascorbato como co-factor. La acti (Vogiatzi et al. 2009).
vidad ASPX ha sido reportada principalmente en Por otra parte, se han encontrado evidencias de
cloroplasto y citosol (Arora et al. 2002). En los que las ERO tambin funcionan como seales mo
cloroplastos, la SOD y la enzima ASPX se pre leculares que median respuestas a varios estmulos
sentan en forma soluble y unida a los tilacoides. (Desikan et al. 2004).
Entre las especies reactivas del oxgeno, el H2O2
El Ascorbato es el antioxidante cuantitativamente
parece ser que desempaa el papel ms importante
predominante en las clulas vegetales, se encuen
en la sealizacin de los cambios estresantes, debi
tra en todos los compartimentos subcelulares, in
do a su elevada estabilidad y largo tiempo de vida
cluido el apoplasto, en concentraciones que osci
media (Hung et al. 2005). Si el H2O2 sirve como
lan entre 2-25 mM. El ascorbato es oxidado por el
seal al estrs, las fluctuaciones de H2O2 en
oxgeno, el anin superxido, el oxgeno singlete y
plantas podran reflejar cambios espaciales y
el perxido de hidrgeno para dar lugar al radical
temporales en el ambiente (Hung et al. 2005). En
monodeshidroascorbato, el cual se desproporciona
apoyo a esta idea, un aumento brusco del estado
en ascorbato o dehidroascorbato (Smirnoff 2000).
oxidativo es una respuesta comn a estreses avi
Desempea un papel fundamental en la fotopro
ticos y biticos (Desikan et al. 2003). Estos estre
teccin y la regulacin de la fotosntesis, y preser
ses incluyen patgenos, elicitores, daos
va las actividades de enzimas que tienen iones
mecnicos en el vegetal, calor, bajas temperaturas,
metlicos de transicin (Cu2+, Fe2+) como grupo
luz UV y ozono. Por ejemplo, en invierno el
prosttico. El ascorbato es tambin un poderoso
descenso hasta 4C caus en las hojas de Triticum
antioxidante secundario, ya que reduce la forma
aestivum un aumento en los niveles de H2O2 de
oxidada del -tocoferol. Adicionalmente, es el re
tres veces en comparacin con el control durante
ductor utilizado para la hidroxilacin de residuos
un minuto de ensayo (Desikan et al. 2003).
de prolina de la extensina, una protena de la pared
Sobre la base de lo anteriormente mencionado, la
celular. Tambin est implicado en la elongacin
presente investigacin tuvo el objetivo de evaluar
de la raz, el funcionamiento de los estomas, y de
la respuesta antioxidante al estrs hdrico por se
sempea una funcin crtica asociada a los meca
qua en variedades mejoradas de papa.
nismos a travs de los cuales las plantas perciben
los cambios medio ambientales y responden a
ellos (Noctor & Foyer 2005). Materiales y mtodos

La POX utiliza como sustratos al guayacol y al

perxido de hidrogeno. Asimismo, desempea
una funcin cataltica importante al reducir los
niveles de H2O2 en los tejidos vegetales, evitando
con ello que este compuesto se difunda entre las
membranas biolgicas para reaccionar con iones
libres como el Fe2+ y generar el potente radical
Material vegetal, para la evaluacin de la acti
vidad enzimtica se utilizaron tres variedades
resistentes al estrs hdrico por sequa
(Gabriel et al. 2011a,b) y cuatro variedades
/clones susceptibles (Tabla 1).
28
Gabriel Julio et al
___________________________________________________________________________________________________________
Tabla 1 Lista de variedades/clones utilizados para
evaluar la actividad enzimtica para resistencia al estrs
hdrico por sequa. El Paso, Cochabamba, 2012.
Variedad/Clon Genealoga Reaccin
Hembra Macho
Aurora tbr x (tbr x sto) Adg
Victoria tbr x adg (ajh x phu) x tbr
Jaspe sto x pls tbr x phu
Salom tbr x (tbr x sto) phu + gon
00-207-6a Sto Tbr
00-216-3 Ajh Adg
Desire Tbr
tbr: Solanum tuberosum, adg: S. andigena, ajh: S. x ajanhuiri, sto: S.
stoloniferum, pls: S. palustre, gon: S. goniocalyx, R=resistente a
estrs hdrico por sequa, MR: Moderadamente resistente, S:
Susceptible. Gabriel et al (2011a, b)
Experimento en invernadero, se implement en un
invernadero de la Fundacin PROINPA en el ao
2012, ubicada a 13 km en la zona del Paso de la
provincia Quillacollo en Cochabamba, a 17 21
01.91de latitud sud y 66 15 44.34de longitud
Oeste, con una altura de 2.613 msnm, una precipi
tacin media anual de 512 mm y una temperatura
promedio de 17.4C.
Los tratamientos fueron la combinacin de dos fac
tores: 1) Siete variedades de papa y 2) Tres niveles
de estrs hdrico por sequias (Sin sequa, 10 y 20
das de sequa). Estos tratamientos se iniciaron a
los 79 das despus de la siembra (dds) (Mamani
2000). El experimento se implement en un diseo
de bloques completos al azar en arreglo de par
celas divididas con tres repeticiones (Martnez-Gar
za 1998). Cada unidad experimental tuvo cuatro
macetas con una planta/maceta. Las macetas
fueron de plstico de 1 kg de capacidad y se uso
sustrato estril con chala de arroz, arena lama y
tierra vegetal en una proporcin 1:1:1. Los riegos
fueron realizados con una probeta graduada, utili
zndose L de agua/maceta. La variable evaluada
fue la marchites o severidad (S), utilizando la esca
la de Blum (1993) modificada por Angulo et al.
(2009).
29
J Selva Andina Biosph
Experimento en laboratorio, se tom una muestra
de cada variedad y se hizo la lectura por triplicado
para cada cuantificacin enzimtica. La colecta se
R realiz en hojas de plantas sometidas a estrs
R
R hdrico por sequa a los 10 das y a los 20 das
MR
S
(tratamiento) y en hojas de plantas no estresadas
S (control). Posteriormente se conservaron a -80C
S
en un freezer Continental 260 hasta su anlisis.
Preparacin de los extractos enzimticos, el
material colectado fue triturado y congelado en ni
trgeno lquido, el buffer de extraccin enzim
tico se prepar segn la metodologa de Frary et
al. (2010). Donde se utiliz 0.1% de polivinil
polipirrolidona (PVPP), 100mM de tampn fosfa
to de potasio a pH 7.0, 1 mM de EDTA, 1 mM de
cido ascrbico. Los extractos se centrifugaron en
una microcentrfuga Legend Micro 21 marca Ther
mo Scientific, a 10000 rpm por 20 minutos a 4 C
y los sobrenadantes se retiraron a otro tubo para
las determinaciones de la CAT, ASPX y POX.
Determinacin la actividad de la enzima CAT, se
prepar una mezcla de reaccin conteniendo 100
mM tampn fosfato de potasio (pH 6.5), 1.0 mM
EDTA, 60.0 mM H2O2 (Aebi 1983). La actividad
se determin siguiendo la descomposicin de per
xido de hidrgeno (H2O2) a 240 nm en un espectro
fotmetro Marca Biorad.
La ASPX se cuantific utilizando el mtodo descri
to por Nakano & Asada (1987) y Asada (1992). La
mezcla contena 90 mM de tampn fosfato de pota
sio (pH 7.0), 0.1 mM EDTA, 0.65 mM ascorbato,
y 1.0 mM H2O2. La actividad se determin siguien
do la descomposicin de H2O2 dependiente de as
corbato a 290 nm. Las mediciones se realizaron en
un espectrofotmetro marca Biorad.
Vol 1 No 1 2013 Respuesta de variedades mejoradas de papa al estrs hdrico por sequa
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Para determinar el POX se prepar una mezcla de realiz un anlisis de varianza para probar hip
reaccin conteniendo 100 mM tampn fosfato de tesis de los efectos fijos y comparaciones de me
potasio (pH 6.5), 1.0 mM EDTA, guaiacol, y 50% dias mediante contrastes de un grado de libertad
H2O2, (Aebi 1983). La actividad se determin para determinar las variedades ms resistentes. El
siguiendo la descomposicin de H2O2, utilizando anlisis de varianza tambin sirvi para estimar
guaiacol como agente donador de hidrgeno a 470 los componentes de varianza para los efectos alea
nm. torios. Los anlisis indicados se realizaron
El clculo de la actividad de las enzimas antioxi utilizando el Proc GLM del SAS (SAS 2004).
dantes se utiliz la siguiente frmula (Frary et al. Para el anlisis estadstico de comparacin entre el
2010): CAT, ASPX, POX activity (Unit) = (abs tratamiento y el control de la actividad enzimtica
/min x reaction volumen)/0.001. se hizo una prueba de T-test (SAS 2004).

Permeabilidad cuticular, fue medida en base a ex Resultados

traccin de clorofila, adaptado de acuerdo a mto
dologa descrita por Zhang et al. (2005) y Kosma Anlisis de la resistencia al estrs hdrico, el anli
et al. (2009). Las plantas fueron aclimatadas por sis de varianza de la severidad o marchitez, mostr
un periodo de 3 horas en oscuridad, cubrindolas que el efecto de sequa y variedad fueron signifi
con bolsas negras, antes de la medicin. Luego se cativos al Pr<0.01 de probabilidad (Tabla 2), indi
colect una hoja, de la misma posicin para todas cando esto que ambas variables tuvieron un valor
las plantas en estudio y se sumergi en tubos de diferente con un nivel de sequa y al menos en una
ensayo de 50 mL de capacidad con 15 mL de variedad. As mismo, la interaccin sequia *
etanol 80% (v/v a temperatura ambiente). Los genotipo fue significativo, sugiriendo que el efecto
tubos falcon de 50 mL, fueron agitados a 30 rpm de los niveles de sequa sobre la severidad fue
en un agitador orbital Labnet orbit 300 y en la diferente en al menos una variedad, por lo que
oscuridad. Fueron tomadas alcuotas de 200 L sera posible encontrar variedades/clones con un
con micropipetas marca Biohit de cada tubo para alto grado de resistencia a sequa.
medir la clorofila, a 647 y 664 nm, a intervalos de
1 hora durante 6 horas y posteriormente a las 24
Tabla 2 Anlisis de varianza para severidad o
horas. Los datos fueron expresados como porcen marchitez a estrs hdrico por sequa en siete variedades
taje del total de clorofila extrada a las 24 horas en de papa. El Paso, Cochabamba, 2012.
etanol 80% (v/v).
Fv gl SC CM F
Bloque (blo) 2 0.41 0.20 2.63ns
bloq * seq 4 0.37 0.09 1.20ns
Anlisis estadstico, los datos de la variable Sequa (seq) 2 149.46 74.73 464.00
**
severidad o marchitez que satisfizo o se aproxim Variedad (var) 6 10.49 1.75 22.56*
a los supuestos de distribucin normal y *
seq * var 12 6.40 0.53 6.88**
homogeneidad de varianzas, se analiz de acuerdo Error 35 2.71
Total 61 166.24
al modelo estadstico planteado (Martnez-Garza C.V. (%) 13.98
1998). Sobre la base del modelo definido se
30
Gabriel Julio et al
___________________________________________________________________________________________________________
La comparacin de medias de severidad (Figura
1), mostr diferencias significativas (Pr<0.01) en
tre los tres niveles de sequa, donde la sequa para
20 das registro mayor severidad, indicando esto
que las variedades/clones presentaron una mayor
severidad (marchitez) cuando las plantas sufrieron
una deficiencia de agua de 20 das.
4.0
3.5
3.0 b
Severidad(05)
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
a
0.0
testigo 10das 20das
sequia(dias)
Figura 1 Comparacin de medias de severidad en
tres niveles de sequa. Las medias con la misma
letra son estadsticamente iguales al nivel de
Pr<0.05 de probabilidad. El Paso, Cochabamba,
2012.
La comparacin de medias de severidad entre
variedades (Figura 2), mostr una amplia varia
cin frente a la sequa, donde las variedades con
menor severidad (marchitez) fueron Aurora, Victo
ria, Jaspe y Salom, sugiriendo que estas varie
dades presentaran una alta resistencia al estrs
hdrico por sequa, por lo que, adems de ser una
buena fuente de genes de resistencia, serian aptos
para zonas agrcolas o pocas con mnima disponi
bilidad de agua.
31
J Selva Andina Biosph
3.5
3.0 b
2.5
a
Severidad(05)
2.0
a a a a
1.5
1.0
0.5
0.0
Aurora Victoria Jaspe Salome 002076a 002163 Dsire
Variedades
Figura 2 Comparacin de medias de severidad por
sequa en siete variedades de papa. Las medias con la
misma letra son estadsticamente iguales al nivel de
Pr<0.05 de probabilidad. El Paso, Cochabamba,
2012.
c
Anlisis de la actividad enzimtica, El anlisis de
T-test realizado para cada variedad (T) y su testigo
(C) no mostr diferencias significativas al Pr<0.05
de probabilidad para ninguna de las variedades es
tudiadas (Tabla 3). Con excepcin de la variedad
Desire que mostr diferencias significativas para
el contenido de POX.
Sin embargo, se debe mencionar que aun cuando
no se detect diferencias significativas, el experi
mento es vlido porque se lograron observar dife
rencias marcadas entre las enzimas evaluadas en
plantas estresadas y su control respectivo. En este
sentido, en los siguientes prrafos se hace un
anlisis de las mismas, considerando tanto el
estrs hdrico por sequa a los 10 das como a los
20 das.
Evaluacin del estrs hdrico por sequa a los 10
das, se observ que las variedades Aurora, Victo
ria y Jaspe (Tabla 4) bajo sequia de 10 das mostra
ron valores superiores en la actividad enzimtica
de la CAT (188.63 U/g, 758.10 U/g y 251.00 U/g
respectivamente), ASPX (2130.38 U/g, 2487.24
U/g y 1300.18 U/g respectivamente) y POX
(148.79 U/g, 586.00 U/g y 383.68 U/g respec
Vol 1 No 1 2013 Respuesta de variedades mejoradas de papa al estrs hdrico por sequa
__________________________________________________________________________________________________________
tivamente) que sus propios controles. Esto indica Tabla 4 Actividad de Enzimas antioxidantes CAT,
que la resistencia de estas variedades podra estar ASPX y POX en variedades mejoradas sometidas a 10
relacionada con la remocin de las ERO mediante y 20 das de estrs hdrico por sequa. El Paso, Cocha
bamba, 2012.
estas tres enzimas. En cambio, la varie dad Salom
solo mostr un ligero incremento en la
Variedad 10 Das 20 Das
produccin de la enzima ASPX con respecto a su ASPX POX CAT ASPX POX
CAT (U/g) (U/g) (U/g) (U/g) (U/g) (U/g)
control
Aurora T 188.63 2130.38 148.79 239.35 1269.19 972.73

C 125.72 1988.56 110.77 215.93 1024.89 218.13

Tabla 3 Anlisis de T-test para reaccin de las variedades
Victoria T 758.10 2487.24 586.23 - - -
resistentes y susceptibles al estrs hdrico por sequa a la
actividad enzimtica de CAT, ASPX y POX en U/g. El Paso, C 260.49 2365.63 365.60 - - -

Cochabamba, 2012. Jaspe T 251.72 1300.18 383.68 - - -

Variedad C 133.19 1005.11 116.86 - - -

Reaccin Enzima T C Dif. Prob.
/clon
00-207-6 T 734.16 1456.23 462.00 - - -
Aurora R CAT 402.18 284.01 118.17 0.68
C 863.10 1466.08 477.00 - - -
ASPX 3022.90 2912.10 110.80 0.95
Desire T 426.30 1710.19 107.87 316.21 3040.80 482.09
POX 1572.90 294.36 1278.54 0.30
C 589.12 2764.67 156.20 408.80 3314.69 542.56
Victoria R CAT 4079.00 1348.90 2730.10 0.40
Salom T 54.55 1919.87 372.46 194.27 2246.86 742.68
ASPX 2881.70 3631,70 -750.00 0.38
C 98.00 1905.82 479.67 108.59 1765.63 583.44
POX 1668.40 872.30 796.10 0.55
00-216-3 T 557.81 1398.09 78.39 119.61 702.15 108.31
Jaspe R CAT 980.89 33.57 947.32 0.68
C 766.78 1708.56 87.23 289.15 996.43 248.23

ASPX 12627.00 10807.00 1820.00 0.90 CAT: Catalasa, ASPX: Ascorbato peroxidasa, POX: guaiacol
peroxidasa.
POX 2496.20 2131.90 364.30 0.97

Salom MR CAT 1012.10 170.57 841.53 0.09

Esto indica que la resistencia de esta variedad po
ASPX 4160.80 2726.40 1434.40 0.52
dra estar dada por la remocin de Ero mediante
POX 2909.60 1190.80 1718.80 0.35
esta nica enzima. En el caso del clon 00-207-6a
00-207-6a S CAT 3356.10 3985.70 -629.60 0.74
la resistencia que presenta podra involucrar otros
ASPX 11273.00 12253.00 -980.00 0.73
mecanismos diferentes a estas tres enzimas para la
POX 5040.40 7380.70 -2340.30 0.94
remocin de las ERO producidas. Por otra parte,
00-216-3 S CAT 876.11 1182.50 -306.39 0.68
la variedad Desire y el clon 00-216-3 mostraron
ASPX 2811.10 3689.20 -878.10 0.95
valores ms bajos que sus controles. Indicando
POX 1572.90 444.01 1128.89 0.30
esto, que la susceptibilidad de estas variedades
Desire S CAT 402.18 284.01 118.17 0.68
podra estar dada por un incremento en la
ASPX 3022.90 2912.10 110.80 0.95
produccin de ERO y una disminucin en la pro
POX 1572.90 294.36 1278.54 0.03
duccin de enzimas removedoras de ERO.
CAT: Catalasa, ASPX: Ascorbato peroxidasa, POX: guaiacol
peroxidasa, R: Resistente, MR: Moderadamente resistente, S:
Susceptible, T: Promedio planta estresada, C: Promedio planta Evaluacin del estrs hdrico por sequa a los 20
control, Dif.: Diferencia entre T y C, Prob.: Significativo al Pr < 0.05
de probabilidad. Nmeros en negrilla son significativos al Pr<0.05 de das, se observ (Tabla 4) que la variedad Aurora
probabilidad.
nuevamente mostr valores mayores de la activi
dad enzimtica de la CAT (239.35 U/g), ASPX
32
Gabriel Julio et al J Selva Andina Biosph
___________________________________________________________________________________________________________
(1269.19 U/g) y POX (972.73 U/g) con respecto 1.6

de sus controles, lo que indica que esta variedad

1.4

1.2

present la misma actividad enzimtica bajo un

Porcentajedeclorofila
1.0 002163C

nivel mayor de estrs hdrico. Esta actividad enzi 0.8

VICTORIAC
002163

mtica antioxidante aparentemente le confiere re 0.6 DESIREE

VICTORIA

sistencia a diferentes niveles de estrs hdrico a 0.4

AURORA

0.2
esta variedad.
0.0

La variedad Salom nuevamente mostr valores 1 2 3 4

Horas
5 6 7

mayores de la actividad enzimtica para ASPX

(2246.86) con respecto a su control. Por otra parte,
tambin mostr un incremento en las actividades
de la CAT (194.27 U/g) y POX (742.68 U/g) res
pecto a sus controles. Esto indic que la variedad
Salom necesita un estrs hdrico mayor para
inducir una actividad en estas enzimas.
En cambio, el clon 00-216-3 y la variedad Desire
volvieron a mostrar valores ms bajos de actividad
enzimtica de la CAT (119.61 y 316.21 U/g respec
tivamente), ASPX (702.15 y 3014.80 U/g respec
tivamente) y POX (108.31 y 482.09 U/g respecti
vamente) respecto a sus controles. Esto indica que
estos genotipos la susceptibilidad de estos geno
tipos podra deberse a la incapacidad de remover
ERO, lo cual ocasionara severo estrs oxidativo.
Permeabilidad cuticular, en referencia a la permea
bilidad cuticular (Figura 3), se observ que las va
riedades Aurora y Victoria tuvieron menores conte
nidos de clorofila en referencia a sus controles y a
las variedades susceptibles. Indicando esto que la
resistencia de estas variedades al estrs hdrico
estara relacionada con una reduccin en el conte
nido de clorofila durante el estrs hdrico.
33
Figura 3 Porcentaje de clorofila acumulado a
travs del tiempo (hr) de variedades extremas
analizadas por permeabilidad cuticular, El Paso,
Cochabamba, 2012.
Anlisis de correlacin, de Pearson entre
CAT, ASPX y POX (Tabla 5), mostr sola
mente una alta correlacin positiva y alta
mente significativa al Pr<0.01 de probabilidad
para POX y ASPX.
Tabla 5 Correlacin de Pearson de CAT, ASPX y POX
en variedades cn estrs hdrico por sequa. El Paso,
Cochabamba, 2012.
CAT ASPX POX
CAT 1.00
ASPX 0.099ns 1.00
POX 0.094ns 0.573** 1.00
CAT: Catalasa, ASPX: Ascorbato peroxidasa, POX: guaiacol
peroxidasa, **:Diferencias altamente significativas al Pr<0.01 de
probabilidad.
Discusin
Se observ a travs de la evaluacin en inverna
dero y laboratorio, que la resistencia a niveles de
estrs hdrico de 10 y 20 das de duracin en las
variedades de papa Aurora, Victoria y Jaspe apa
rentemente estara relacionada con la actividad de
las enzimas CAT, ASPX y POX. Estos antio
xidantes enzimticos estaran involucradas en la
remocin de las ERO. Por su parte, la variedad
Vol 1 No 1 2013 Respuesta de variedades mejoradas de papa al estrs hdrico por sequa
__________________________________________________________________________________________________________
Salom registr un incremento en la produccin de
la enzima ASPX, en ambos niveles de estrs (10
das y 20 das). En cambio, el incremento de las
enzimas CAT y POX solo se observ para el estrs
de 20 das de duracin.
El mecanismo antioxidante utilizado para explicar
los resultados indicados, se bas en la eliminacin
del exceso de especies reactivas del oxgeno,
formadas en las clulas de la planta, lo cual se
atribuye a la accin eficiente de enzimas como la
CAT, ASPX y POX en su conjunto. Existe la
hiptesis de que la ASPX, enzima ubicada en cada
compartimento celular donde se producen ERO
podra funcionar como un regulador preciso de
niveles intracelulares estables de ERO, posible
mente con propsitos de sealizacin, mientras la
enzima CAT, la cual se ubica exclusivamente en
los peroxisomas, podra funcionar como remove
dor principal del exceso de produccin de ERO
bajo condiciones de estrs.
En el caso de la variedad Salom el nivel de ERO
obtenido despus de 10 das de estrs hdrico
podra ser insuficiente para inducir la actividad de
la enzima CAT, la cual sera activada solamente
despus de un estrs de 20 das de duracin. En
cambio en las variedades Aurora, Victoria y Jaspe
se observ una actividad temprana de la CAT, lo
cual podra significar que el estrs hdrico por se
qua de 10 das en estas variedades genera canti
dades mayores de ERO o tambin podra significar
que el sistema de remocin de ERO en estas varie
dades es mucho ms complejo que en la variedad
Salom. Asimismo, estas variedades podran
presentar una resistencia constitutiva en lugar de
inducida.
En un estudio realizado en plantas de papa trans
gnica modificadas para la sobre-expresin de las
enzimas de ASPX y CuZnSOD se observ un in
cremento en la remocin de las ERO dentro los
cloroplastos. Este estudio mostr que la expresin
conjunta de las enzimas ASPX y CuZnSOD (bajo
el control de un promotor inducido por estrs
oxidativo) y el transporte simultneo a los cloro
plastos prueban ser altamente eficientes en incre
mentar la tolerancia al dao oxidativo inducido me
diante un estrs abitico. En este caso la enzima
CuZnSOD jug un papel similar al de la CAT en
nuestro ensayo. Entonces, se confirm que en la
papa estas dos enzimas juegan un papel importante
en la resistencia a estrs hdrico probablemente a
travs de la remocin de ERO. Ahora la actividad
antioxidante no solo se interpreta como el proceso
de atrapar ERO sino tambin como un mecanismo
que evita la formacin de estas especies reactivas
de oxgeno, junto a procesos de reparacin y elimi
nacin de los productos de oxidacin (Mano
2002), por ello podra ser que la actividad de las
enzimas CAT, ASPX y POX sera ms compleja
que la simple remocin de ERO.
Las variedades Aurora, Victoria, Jaspe y Salom
pueden ser utilizadas en ambientes donde hay esca
ses de lluvias y tambin como fuente valiosa de ge
nes para transferir a otras variedades.
Las variedades que mostraron actividad enzim
tica disminuida en relacin al control, no tuvieron
la capacidad de inducir la activacin de las enzi
mas CAT, ASPX y POX y probablemente por ello
no tuvieron la capacidad de eliminar o reducir el
efecto oxidante de las ERO formadas por el estrs
al que fueron sometidas, como es caso de la varie
dad Desire y el clon 00-216-3.
Sin embargo, es importante considerar que la acti
vidad enzimtica puede variar por distintas causas,
como el estadio fisiolgico de la planta u rgano
en el momento de la colecta y procesamiento de
las muestras y adems por los factores ambientales
34
Gabriel Julio et al
___________________________________________________________________________________________________________
como la temperatura, el pH y el estado hdrico de
la planta, a ello se debe aadir el mtodo emplea
do para la extraccin y cuantificacin enzimtica
(Shylesh & Padikkala 1999).
Conflictos de intereses
Esta investigacin y no presenta conflictos de inte
rs.
Agradecimientos
Se agradece el apoyo econmico del proyecto Fon
tagro - CLIPAPA (FTG/RF-1025-RG).
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