Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteica, gran eficiencia

cataltica, elevada especificidad y susceptibles de ser regulados en su accin.

Como protenas que son, su funcionamiento transcurre mediante el

reconocimiento molecular. De esta manera, las enzimas poseen un lugar de la
proteina enzimtica que se une ntimamente con el sustrato y al que se le
denomina sitio activo o centro activo. Todas las propiedades de la enzima
dependern entonces de la estructura del sitio activo.

Para el estudio de la estructura del sitio activo, ste se ha dividido

artificialmente en diferentes componentes:

El esqueleto covalente.

Los grupos de fijacin del sustrato.

Los grupos catalticos.

Los grupos ambientadores.

El esqueleto covalente del sitio activo estar formado por aquellos sectores de
la cadena peptdico, no necesariamente consecutivos, que le dan forma y que
frecuentemente se encuentran formando un dominio de la molcula proteica.
Por supuesto que de la conformacin del sitio activo depender en gran parte
el reconocimiento molecular pues es el que estar determinando la posibilidad
de la complementariedad estrica entre la enzima y el sustrato.

Los grupos de fijacin del sustrato son los otros elementos que participan en el
reconocimiento molecular, ya que son cadenas laterales de aminocidos
presentes en el centro activo y que se interrelacionan con el sustrato por medio
de atracciones electrostticas, puentes de hidrgeno u otras interacciones,
incluso enlaces covalentes, que garanticen la ms ntima unin con el sustrato
y que ste quede colocado con la orientacin ptima para el funcionamiento de
los grupos catalticos. En lo anteriormente expuesto queda implcito que del
estado de ionizacin de las cadenas laterales de estos aminocidos que
constituyen los grupos de fijacin del sustrato depender la
complementariedad elctrica entre la enzima y el sustrato. Por supuesto que
los grupos catalticos tambin sern cadenas laterales de los aminocidos
ubicados en el centro activo y a ellos corresponde la actividad cataltica de la
enzima.
Los grupos ambientadores del sitio activo son por regla general cadenas
laterales de aminocidos hidrofbicos que estn garantizando la exclusin del
agua del espacio interno del sitio activo de manera que esta no interfiera con
la reaccin y que slo pueda entrar a este espacio cuando no necesite como
sustrato y por lo tanto exista algn grupo fijador para ella.

De las caractersticas del centro activo dependern todas las funciones de la

protena enzimtica, en otras palabras: su accin, su eficiencia y su
especificidad.

Entre las propiedades ms importantes de las enzimas encontramos a la

especificidad, entendindose como tal a la caracterstica que tienen estos
compuestos de actuar sobre un sustrato o sobre un grupo estructuralmente
parecido de sustratos, catalizando una y slo una de las posibles
transformaciones que pueda experimentar dicho sustrato.

Entre los diferentes factores que modifican la velocidad de la reaccin

enzimtica tenemos:

Concentracin de la enzima.

Concentracin del sustrato.

Concentracin de coenzimas.

pH.

Temperatura.

Inhibicin enzimtica.

De stos, la concentracin de la enzima, la concentracin del sustrato y la

inhibicin enzimtica tienen gran repercusin en la regulacin del metabolismo
celular en tanto que los otros estarn directamente vinculados con el proceso
de salud y enfermedad

La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos

animales y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria
porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el
perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada).

Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se

soluciona el problema.

La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:

OBJETIVOS

Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos

animales y vegetales.

Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de las

enzimas.

MATERIALES

Gradilla

Pipetas

Trocitos de hgado

Tubos de ensayo

Agua oxigenada

Bao Mara

Mechero

PROCEDIMIENTO

Reconocimiento de la Enzima catalasa

Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado.

Aadir 5 mililitros de agua oxigenada.

Observar los resultados.

Repetir la experiencia con trozos de tomate.

Efecto de la temperatura sobre la catalasa

Colocar en un tubo de ensayo varios trocitos de hgado.

Aadir agua para hervir la muestra. Hervir durante unos minutos.

Despus de este tiempo, retirar el agua sobrante.

 Aadir el agua oxigenada.

Observar el resultado.

CUESTIONARIO

1. Dibujar los resultados obtenidos.

2. Cul es la funcin de la catalasa en el organismo?

3. Qu relacin existe entre la catalasa y la temperatura?

4. De qu factores dependen la actividad enzimtica?

Las protenas son macromolculas compuestas por unidades de L-

aminocidos que se unen entre s mediante enlaces peptdicos y que alcanzan
un peso molecular igual o superior a 5 000 D.

El enlace peptdico, caracterstico de estos compuestos, resulta de la reaccin

del grupo carboxilo de un aminocido con el grupo amino de otro aminocido,
lo cual da lugar a un enlace covalente de tipo carbamida y que tiene algunas
caractersticas peculiares como son:

El enlace C-N tiene cierto carcter de doble enlace, por lo cual le

confiere rigidez a la molcula.

El oxgeno y el nitrgeno quedan en posicin trans.

Todos los elementos que componen el enlace se encuentran ubicados en

el mismo plano.

La rotacin de la molcula formada queda restringida a los carbonos .

El gran nmero de aminocidos que componen a al molcula proteica

determina que su estructura sea extraordinariamente compleja, lo cual
determina 4 niveles de organizacin de la estructura proteica.

Toda organizacin estructural que implique determinado orden requiere de la

presencia de una fuerza estabilizadora, que en el caso de las protenas estara
constituida por diferentes tipos de enlaces o interacciones fsicas y qumicas
que se enuncian en el cuadro siguiente:
NIVEL DE ORGANIZACIN ENLACES QUE LO MANTIENEN

Primario Enlace peptdico

Secundario Puentes de hidrgeno entre los

enlaces peptdicos

Terciario Puentes de hidrgeno entre las

cadenas laterales de los
aminocidos, interaccin
hidrofbica, interaccin
electrosttica, puente disulfuro,
enlace ster

Cuaternario Los mismos que para el nivel

terciario

Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua
soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de
cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70C o al ser
tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la
desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria.

La determinacin de protenas se realiza por diversas reacciones de coloracin,

entre las cuales tenemos:

Reaccin Xantoproteica: Debida a la formacin de un compuesto

aromtico nitratado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas
con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en
aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Reaccin de Biuret: La producen los pptidos y las protenas, pero no los

aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (-CO-NH
-) que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se
pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia
compleja denominada biuret, de frmula:
Este complejo en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una
coloracin violeta caracterstica.

Reaccin de los aminocidos azufrados: Se pone de manifiesto por la

formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta
reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los
aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo,
forma el sulfuro de plomo.

OBJETIVOS

Determinar la presencia de protenas en diversas muestras biolgicas

mediante reaccin de Biuret.

MATERIAL Y EQUIPOS

Tubos de ensayo de 15 x 200

Clara de huevo.

Orina patolgica.

Mechero de alcohol.

Encendedor.

Bao mara.

NaOH al 40 %.

NaOH al 20 %.

Sulfato cprico al 1%.

Gradilla de metal.

Reaccin de Biuret

Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo.

Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.

A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%.

Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

CUESTIONARIO

1. Dibujar los resultados obtenidos.

2. Qu significa desnaturalizacin?
2 Explique los fundamentos de la reaccin de Biuret