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EXTRACCION DE ADN DE SANGRE PERIFERICA

Equipo 3, sptimo A
Gonzlez Silva Jorge Ivn, Mayorga Crdova Jonathan Jess, Mercado
Vargas Jos Luis, Prez Arechiga Kevin Alexis. Viernes a 1:00 pm
09/03/17, enero-junio del 2017
Laboratorio de Gentica, Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas,
Universidad Autnoma de Zacatecas.
33140486@uaz.edu.mx
Resumen:
Las tcnicas de extraccin de cidos nucleicos son sencillas, pero es
importante mantener una serie de precauciones para evitar la
degradacin por nucleasas durante la manipulacin. El objetivo es
obtener la mxima cantidad y la mayor calidad posible de ADN. Se han
desarrollado diversos procedimientos o protocolos de extraccin
teniendo en cuenta el origen o fuente del ADN. En los ltimos aos las
casas comerciales han desarrollado diversos kits de obtencin de ADN a
partir de sangre.
Las clulas nucleadas de sangre son una de las fuentes ms asequibles
y utilizadas para la obtencin de ADN genmico.

PALABRAS CLAVE
ADN genmico, Leucocitos, DNAzol.

INTRODUCCION Tras estas aportaciones iniciales, el


El conocimiento de la estructura de verdadero inicio de la biologa
los cidos nucleicos se inicia en el molecular moderna lo constituyo la
siglo XIX con el aislamiento en el propuesta de estructura de doble
ncleo celular de una nucleina hlice para el DNA, formulada, en
formada por una parte acida (hoy, 1953, por James D. Watson y Francis
DNA) y una parte bsica (protena), Crick. A partir de este momento,
as como con el estudio parcial de casi todo el esfuerzo realizado se
las propiedades de la nucleina y de centra en el estudio del DNA
su relacin con la herencia celular. genmico, desde el punto de vista
Sin embargo, la estructura solo se estructural y funcional, en
conoci a mediados del siglo XX, al procariontes y eucariontes, con una
mostrarse que el DNA era el atencin especial a mamferos en
componente cromosmico general y humanos en particular.
depositario de la informacin Los avances logrados, tanto tericos
gentica. Cabe destacar en este como tcnicos y aplicados, han sido
sentido, como antecedentes clave, enormes. A ello ha contribuido la
los experimentos de Oswald T. aparicin de la ingeniera gentica,
Avery, Colin MacLeod y Maclyn como principal rea derivada de la
McCarty en 1994 y de Alfred D. biologa molecular. Queda pendiente
Hershey y Martha Chase, en 1952, para un futuro prximo la conclusin
que constituyeron un hito en el del Proyecto del Genoma Humano
conocimiento del material gentico (genmica funcional), el anlisis de
a escala molecular. las funciones de cada gen y la
diseccin de la estructura y funcin agitacin suave con esto nuestro
de las protenas (protemica). ADN quedo listo para su anlisis
electrofortico.
MATERIALY METODOS
RESULTADOS
Para la obtencin de la muestra se
tomaron 5 mL de sangre perifrica Obtuvimos una cantidad suficiente
en un tubo con EDTA, se de ADN a partir de sangre perifrica
centrifugaron a 2500 rpm, 8 min. especficamente de leucocitos.
Despus se extrajo la capa de
leucocitos y se colocaron en tubo
cnico de 15 mL, se grego SLR
hasta completar 8 ml y se
homogenizo por inversin con la
finalidad de lisar los eritrocitos,
luego se incubo en hielo 15 min.
Luego se centrifugo a 3000 rpm 10
min, se desech el sobrenadante asi
obtuvimos el botn de Leucocitos
Ilustracin 1.2 tubos cnicos en hielo (lisis
nuevamente se lavo con SLR esto de eritrocitos)
para asegurarnos de eliminar la
mayor cantidad de eritrocitos que
posiblemente quedaron sobre dicho
botn de leucocitos al cual se
agregaron 500 L de DNAzol,
lisamos las clulas subiendo y
bajando la muestra varias veces con
una punta de micropipeta, a
continuacin, se transfiri el lisado
sin remanentes a un tubo para
microcentrifuga de 1.5. Agregamos
1 mL de etanol absoluto frio
invirtiendo el tubo repetidamente
hasta que las hebras de ADN fueron Ilustracin 2. tubo de microcentrifuga con
visibles, se desech el sobrenadante hebras de ADN de color blanquecino.
sin extraer el ADN. Agregamos 1 mL
de etanol al 75% e invirtiendo
vigorosamente el tubo para lavar el CONCLUSION
ADN, luego se desech el
sobrenadante sin extraer las hebras Se logr obtener de manera
de ADN esto se realiz dos veces, al satisfactoria ADN genmico humano
finalizar se dejamos evaporar los partir de leucocitos de una muestra
remanentes de etanol a sangunea de uno de nuestros
temperatura ambiente con los tubos compaeros utilizando el mtodo de
abiertos e invertidos sobre una DNAzol.
servilleta de papel. Finalmente, DISCUSION
resuspendimos el ADN en 250 L de
buffer TE 1X, se disolvi el ADN en
Durante el desarrollo de la prctica Benjamin A. pierce. Genetica un
se nos presentaron algunas enfoque conceptual. 3ra edicin.
dificultades como la extraccin de la Editorial Mdica Panamericana.
capa de leucocitos donde se nos 2009.
mesclaron con los eritrocitos, otra
dificultad que tuvimos fue cuando
se lav el ADN con etanol al 75% al Jose Luque, A. H. (2002). Biologia
desechar el sobrenadante . Molecular e Ingenieria
BIBLIOGRAFIA Genetica. Madrid, Espaa:
ELSEVIER.

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