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CROMATOGRAFIA EM COLUNA

RESUMO

Foi separado em laboratrio por meio de cromatografia em coluna uma soluo


etanlica de alaranjado de metila e azul de metileno utilizando-se slica como fase fixa e
etanol, gua e cido actico como solventes.

INTRODUO

A cromatografia uma tcnica utilizada para separao dos componentes de uma


mistura, na qual os componentes a serem separados distribuem-se em duas fases: estacionria
e mvel (Etre, 1993). Pode ser utilizada para a identificao de compostos por comparao
com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as
substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. (Deganni; Cass
e Vieira, 1998). A fase estacionria pode ser um slido ou um lquido disposto sobre um
suporte slido com grande rea superficial. A fase mvel, que pode ser gasosa, lquida ou
ainda um fluido supercrtico, passa sobre a fase estacionria, arrastando consigo os diversos
componentes da mistura. uma tcnica de separao especialmente adequada para ilustrar os
conceitos de interaes intermoleculares, polaridade e propriedades de funes orgnicas,
com uma abordagem ilustrativa e relevante (Silva et. al,2006).

A cromatografia em coluna uma tcnica muito utilizada para isolamento de produtos


naturais e purificao de produtos de reaes qumicas. A principal etapa ao se utilizar essa
tcnica o empacotamento, o qual, entre outros fatores, definir a eficincia da separao. A
gel de slica (Collins, 1997) a fase estacionria mais utilizada, sendo seguida pela alumina,
tanto na cromatografia em camada delgada quanto na cromatografia em coluna (Pavia et. al,
1998).

Uma coluna cromatogrfica de enchimento constituda de um modo geral por um


tubo de material quimicamente inerte (vidro, ao inoxidvel, resina epoxi, etc.), na qual foram
introduzidas partculas de um slido finamente dividido. Uma placa filtrante situada na
extremidade inferior da coluna, no deixa estas partculas sair e considera-se que estas
ocupam posies fixas na coluna. Dentro do possvel as partculas do enchimento esto
dispostas de uma maneira uniforme e deixando um mnimo de espaos vazios entre elas. Estas
partculas podem ser de forma esfrica ou irregular e podem ser porosas ou no. No caso da
cromatografia lquida, a fase mvel eluente um solvente (ou mistura de solventes),
que feito passar continuamente atravs da fase estacionria e que tem menor afinidade por
esta que qualquer dos componentes da amostra. A zona contendo a amostra ser assim
obrigada a deslocar-se ao mesmo tempo que se vai verificando um equilbrio de distribuio
dos vrios solutos entre a fase mvel e a fase estacionria. Os componentes da amostra
movem-se ao longo da coluna a uma velocidade que determinada pelas suas interaes com
a fase estacionria e fase mvel. Os componentes so eludos pela ordem da sua afinidade
pela fase estacionria, e a sua velocidade de migrao menor que a do eluente (PESSOA,
1993).

A prtica teve por objetivo a separao dos componentes de uma soluo etanlica de
alaranjado de metila e azul de metileno pela adio de solventes quimicamente ativos.

PARTE EXPERIMENTAL

MATERIAIS E REAGENTES

Foram utilizados os seguintes materiais presentes no laboratrio de Qumica do IFPI:

Algodo;
Balana analtica (marca: BEL);
3- Bquers (25 mL);
Bureta (25 mL);
Esptula;
Pipeta de Pasteur;
Tubos de ensaio;

Foram utilizados os seguintes reagentes presentes no laboratrio de Qumica do IFPI:

cido actico;
gua destilada;
Alaranjado de metila;
Azul de metileno;
Etanol;
Slica;

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

EMPACOTAMENTO DA COLUNA:

Preparou-se uma coluna para cromatografia utilizando slica como fase fixa, da
seguinte maneira: em um erlenmeyer, colocou-se 15 g de slica em diclorometano, at obter
uma pasta fluida, homognea e sem bolhas de ar includas. Encheu-se a tera parte da coluna
cromatogrfica com o mesmo solvente e derramou-se, ento, a pasta fluida de slica, de modo
que ela sedimentou-se aos poucos e de forma homognea. Golpeando-se suavemente, de
modo a expuls-las as bolhas. Controle o nvel do solvente abrindo ocasionalmente a torneira
da coluna. Terminada a preparao, o nvel de solvente (eluente) estava a aproximadamente 1
cm acima do topo da coluna de slica.

SEPARAO DOS COMPONENTES DE UMA MISTURA:

Distribuiu-se homogeneamente sobre o topo da coluna de alumina, com auxlio de


uma pipeta ou conta-gotas, 3 mL de uma soluo etanlica de alaranjado de metila
(aproximadamente 5 mg pesada) e azul de metileno (aproximadamente 5 mg pesada). Aps a
adsoro pela coluna, procedeu-se a eluio com etanol, vertendo cuidadosamente o solvente
pelas paredes internas da coluna, tomando cuidado para que no se causasse distrbios ou
agitao na coluna. Ao mesmo tempo, abriu-se a torneira para escoar o solvente. Eluiu-se todo
o alaranjado de metila com etanol. Eluiu-se, primeiro com gua, o azul de metileno retido na
coluna e em seguida com uma soluo aquosa de cido actico.

RESULTADOS E DISCUSSO

Os experimentos realizados no ocorreram de forma satisfatria pelo fato da coluna ter


secado (no foi adicionado eluente) ocorrendo formao de bolhas na slica comprometendo o
resultado do experimento.

De acordo com PESSOA, 1993 os componentes so eludos pela ordem da sua


afinidade pela fase estacionria, e a sua velocidade de migrao menor que a do eluente
logo, o primeiro componente a ser eludo observado foi o alaranjado de metila devido seu
carter cido que tem afinidade com a slica deixando mais retida a substncia de carter
bsico no caso o azul de metileno.

CONCLUSO

A cromatografia em coluna se mostrou uma tcnica satisfatria na separao de


substncias percebendo-se um cuidado especial no que diz respeito a escolha da fase fixa e do
eluente que sero utilizados.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Collins, C. H.; Braga, G. L.; Bonato, P. S.; Introduo a Mtodos Cromatogrficos, 6 ed.,
Ed. da Unicamp: Campinas, 1997.

Degani, A. L. G.; Cass, Q. B.; Vieira, P. C.; Cromatografia um breve ensaio. Qumica Nova
na Escola. 1998, n 7, 21.

Etre, L. S.; Pure Appl. Chem. 1993, 65, 81H72. 2.

Silva, da L. B.; Alles, I. M.; Morel, A. F.; Dalcol, I. I.; Anlise de Pigmentos de Pimentes
por Cromatografia em Papel. Qumica Nova na Escola 2006, n. 23, 52.

Pavia, D. L.; Lampmam, G. M.; Kriz, G. S.; Engel, R. G.; Introduction to Organic Laboratory
Techniques: a microscale approach, 3rd ed., Saunders College Publishing: Philadelphia, 1998.

Pessoa, C. J.; Tcnicas Experimentais. Sociedade Portuguesa de Qumica, 1993 n 50, p. 57-
62.
ANEXOS

Questionrio

1). Cite os principais tipos de foras que fazem com que os componentes de uma mistura
sejam adsorvidos pelas partculas do slido:

A interao entre os componentes de uma mistura e as partculas da fase estacionria (slido


insolvel) ocorre atravs de interaes intermoleculares entre seus grupos funcionais.
Geralmente essa interao varia na seguinte ordem (da interao mais forte para a mais fraca):
formao de sais >coordenao > pontes de hidrognio > dipolo-dipolo > London (dipolo
induzido). Desta maneira, substncias mais polares (ex. lcoois) interagem mais fortemente
com a fase estacionria do que substncias menos polares (ex: hidrocarbonetos).

2). Cite as caractersticas do solvente para lavar ou arrastar os compostos adsorvidos na


coluna cromatogrfica:

Para que o solvente, ou eluente (fase mvel) seja capaz de arrastar os compostos adsorvidos
na fase estacionria, este deve ter a capacidade de interagir com estes compostos
quimicamente (atravs de foras intermoleculares) de maneira mais eficiente que a interao
destes compostos com a fase estacionria.
3). Fale sobre o princpio bsico que envolve a tcnica de cromatografia:

O mtodo de cromatografia em coluna consiste na utilizao de uma coluna de vidro na qual


em seu interior fora preenchido por uma substncia adsorvente apropriada, sendo esta
especfica para cada tipo de anlise. Alguns adsorventes utilizados comumente so a slica em
gel, a alumina, carvo ativado e a sacarose. Os eluentes, ou seja, a fase mvel da
cromatografia, na qual os compostos a serem separados so diludos, em sua maioria so
orgnicos, como ter de petrleo, clorofrmio, acetona, etanol, e por vezes a gua tambm
pode ser utilizada como eluente. A metodologia consiste na adio da substncia a ser
separada na parte superior da coluna e o eluente em seguida, com quantidade suficiente para a
realizao da separao. Se as substncias apresentarem espectros de bandas na faixa do
visvel, poder-se- ver zonas de espaamento entre as substncias separadas. Com isso, pode-
se calcular o fator de reteno de determinada amostra, Rf.

4). Por qu se deve colocar papel filtro na parede da cuba cromatogrfica?


O papel filtro colocado nas paredes do frasco fica umedecido pelo solvente, o que ajuda a
manter a cmara saturada com vapores do mesmo, proporcionando assim, uma corrida
cromatogrfica mais rpida.

5). Se os componentes da mistura, aps a corrida cromatogrfica, apresentam manchas


incolores, qual o processo empregado para visualizar estas manchas na placa
cromatogrfica?

O mtodo mais comum o uso vapores do iodo, que reagem com compostos orgnicos
formando uma cor amarelada ou cor de caf. Pode ser usado, ainda, nitrato de prata, para
derivados halogenados, 2,4-dinitrofenilhidrazina, para cetonas e aldedos, verde de
bromocresol, para cidos, ninhidrida para aminocidos. Pode-se utilizar ainda lmpada de UV.
6). O que e como calculado o Rf?

O Rf, o ndice de reteno de um composto. calculado pela razo entre a distncia


percorrida pela mancha do componente e a distncia percorrida pelo eluente. Rf = dc/ds

7). Quais os usos mais importantes da cromatografia de camada delgada?

Os usos mais importantes para a cromatografia em camada delgada so para a separao


rpida e anlise qualitativa de pequenas quantidades de material. Usada tambm para
determinar a pureza de um composto, identificar componentes de uma mistura e acompanhar
o curso de uma reao atravs do desaparecimento do (s) reagente(s) limitante(s) e
aparecimento do(s) produto(s).

8). A alumina, ou xido de alumnio, tem ao bsica e interage fortemente com espcies
cidas; por sua vez, a slica gel interage com espcies bsicas devido natureza cida do
xido de silcio. Baseado nessas informaes, explique o comportamento distinto dos dois
corantes empregados quando se usa alumina ou slica como fase fixa. A estrutura dos
dois produtos est apresentada abaixo:

Quando se usa slica gel a espcie mais retida na coluna vai ser o azul de metileno, pois h
interao forte (inica) desse composto bsico com a slica cida. Quando se usa alumina, o
composto retido na coluna vai ser o alaranjado de metila, pois ele uma espcie cida e a
alumina uma espcie bsica, havendo assim interaes fortes (interaes inicas) entre este
componente e a fase estacionria.

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