Cultivo Tejidos Vegetales

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN
Cultivo de tejidos vegetales

(Manual de prcticas)
Ingeniera Agrcola
M. en C. Francisco Cruz Pizarro

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRCOLAS
SECCIN DE PRODUCCIN AGRCOLA
Cultivo de tejidos vegetales

(Manual de prcticas)
Asignatura: Cultivo de tejidos vegetales

Clave: 171
Carrera: Ingeniera Agrcola

Clave: 11825
Autores:
M. C. Francisco Cruz Pizarro
Revisin: 25 de marzo de 2012

ndice
pg.
Introduccin. . . . . ................................... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
Objetivo general de la asignatura.............. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Objetivo del curso experimental.............. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Vinculacin teora-prctica....................... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Reglamento de laboratorio..................... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
PRCTICA 1
Organizacin, equipamiento y funcionalidad del laboratorio
de cultivo de tejidos vegetales................. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0
PRCTICA 2
Elaboracin de soluciones concentradas y medios de cultivo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4
PRCTICA 3
Desinfectacin y establecimiento de dos tejidos in vitro. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0
PRCTICA 4
Efecto de tipo y niveles de citocininas en la proliferacin de brotes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 4
PRCTICA 5
Cultivo de callos - induccin..................... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 8
PRCTICA 6
Cultivo de races. ................................... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2
PRCTICA 7
Organognesis a partir de tejido de hoja y pecolo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 6
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Cultivo de tejidos vegetales (Manual de prcticas)
Introduccin
El cultivo de tejidos en su acepcin amplia puede ser definido como un conjunto muy heterogneo de
tcnicas que presentan en comn el hecho de que un explante (una parte separada del vegetal que
pueden ser protoplastos clulas desprovistas de pared celular clulas, tejidos u rganos), se cultiva
aspticamente en un medio artificial de composicin qumica definida y se incuba en condiciones ambien-
tales controladas.
El presente manual tiene como objetivo mostrar la informacin recopilada relativa a los conocimientos de
la infraestructura bsica para el cultivo de tejidos y rganos, as como la descripcin de las metodologas
para promover la regeneracin de plantas.
La vinculacin entre los profesionales de la Agronoma como es el caso del Ingeniero Agrcola y las aplica-
ciones Biotecnolgicas como es lo relativo al cultivo de tejidos vegetales.
En el caso especfico de la asignatura Cultivo de Tejidos Vegetales es nica en su tipo a nivel licenciatura
dentro la carrera de Ingeniero Agrcola. Forma parte de las cuatro asignaturas que corresponden a un
paquete terminal en Biotecnologa, debido a que en algunas otras instituciones slo se imparte a nivel de
posgrado. En nuestra institucin, especficamente dentro del Departamento Ciencias Agrcolas, se cuenta
con laboratorio para la imparticin de la enseanza experimental para tal fin.
El laboratorio cuenta con los espacios adecuados que permiten aislar y cultivar tejidos y rganos vegetales
bajo condiciones aspticas, adems de que se ha planeado para el manejo de los diferentes elementos y
factores involucrados en los diversos procedimientos y metodologas que permitan promover la respuesta
morfognica in vitro.
Una de las limitantes para el desarrollo de la mayora de las respuestas in vitro es la contaminacin provo-
cada por hongos y bacterias. Otro factor de sumo inters es contar con un adecuado funcionamiento de
los equipos que son de vital importancia en las actividades del laboratorio (autoclaves, destiladores,
potencimetro).
Para llevar a cabo las tcnicas del cultivo in vitro en los laboratorios de enseanza, tanto en los comerciales
como los de investigacin, se tienen que seguir una serie de procedimientos a fin de hacer uso eficiente de
equipo, instrumental y reactivos, en particular los reguladores del crecimiento vegetal.
En general se estima que el establecimiento, equipamiento y funcionalidad de un laboratorio de cultivo de

tejidos vegetales se considera como costoso, por lo que se deber poner atencin en este sentido, a fin de
no deteriorar el equipo y reactivos contenidos en el mismo.
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Ingeniera Agrcola
Objetivo general de la asignatura
Ofrecer una visin general del cultivo de tejidos, sus mtodos, aplicaciones y problemtica actual. Conocer
las etapas de desarrollo del cultivo in vitro, desde la inoculacin hasta la obtencin de plantas completas
para invernadero. Manejar las diferentes tcnicas que se emplean en el cultivo de tejidos. Tener una visin
general de la problemtica que enfrenta la biotecnologa, sus beneficios y consecuencias socioeconmi-
cas.
Objetivo del curso experimental

Desarrollar habilidades y competencias en el mbito de la enseanza experimental de la asignatura de
cultivo de tejidos.
Vinculacin Teora-Prctica
Nmero Titulo de la Prctica Nmero y nombre de la unidad

de Prctica de laboratorio temtica en el programa de la asignatura
Organizacin, equipamiento
1 y funcionalidad del laboratorio I Introduccin
de cultivo de tejidos vegetales
Elaboracin de soluciones
2 II Medio de cultivo
concentradas y medio de cultivo
3 Desinfestacin y establecimiento
III Desarrollo
de tejidos in vitro
Efecto de tipo y niveles de

4 citocininas en la proliferacin IV Morfognesis
de brotes
IX Cultivo celular y
5 Cultivo de callos-induccin
X mejoramiento gentico
6 Cultivo de races V Propagacin vegetativa
Organognesis a partir
7 VIII Cultivo de protoplastos
de tejido de hoja y pecolo
Reglamento de Laboratorio
Existe un reglamento general aplicable a todos los laboratorios de enseanza experimental del Departa-
mento de Ciencias Agrcolas.
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Ingeniera Agrcola
REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIOS DEL DEPARTAMENTO DE

CIENCIAS AGRCOLAS
CAPTULO PRIMERO. DISPOSICIONES GENERALES
Artculo 1. El presente reglamento tiene por objeto establecer las normas relativas a la organizacin y
funcionamiento de los laboratorios pertenecientes al Departamento de Ciencias Agrcolas.
Artculo 2. Para los efectos del presente reglamento, se entender por usuarios:
I. Los alumnos de la carrera de Ingeniera Agrcola que oficialmente se encuentren inscritos y

cursando alguna asignatura que requiera la realizacin de prcticas en los laboratorios, algn
trabajo de investigacin o servicio social.
II. Los acadmicos de la facultad que estn impartiendo alguna de las asignaturas adscritas a
alguno de los laboratorios o que requieran el uso de ese espacio, previa autorizacin del
responsable del laboratorio.
III. Los estudiantes que al haber concluido con sus estudios y que se encuentren desarrollando
alguna de las opciones sealadas en el Reglamento de Evaluaciones de la Facultad de
Estudios Superiores Cuautitln para obtener su titulacin, previa solicitud al responsable del
rea en la que se est desarrollando la opcin por titulacin y que demuestre que se necesita
el laboratorio para su trabajo.
IV. Personal administrativo adscrito al laboratorio.
Artculo 3. Las disposiciones de este reglamento son de orden general y se aplicarn sin perjuicio de las
particularidades que cada laboratorio tenga, de acuerdo a las actividades propias de cada asignatura prc-
tica que se imparta en ellos.
CAPTULO SEGUNDO. DE LA ESTRUCTURA
Artculo 4. La administracin, vigilancia y operacin de equipo especializado depende directamente del

departamento de Ciencias Agrcolas a travs del responsable del laboratorio, el cual se auxiliar, para ejer-
cer sus funciones, del personal administrativo adscrito al laboratorio.
Artculo 5. El responsable de laboratorio tiene como funciones las siguientes:
I. Dirigir el laboratorio de acuerdo a su reglamento.

II. Velar por el buen funcionamiento del equipo a su cargo.
III. Coordinar las actividades acadmicas del laboratorio.
IV. Coordinar las actividades del laboratorista y del auxiliar de laboratorio.
V. Las dems funciones que le sean asignadas por el Jefe de Departamento de Ciencias Agrco-
las.
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Ingeniera Agrcola
Artculo 6. El jefe de laboratorio tiene como funciones las siguientes:
I. Supervisar y controlar el funcionamiento del laboratorio.

II. Elaborar y presentar informes peridicos del laboratorio.
III. Realizar todas aquellas actividades inherentes al puesto que apruebe la comisin mixta de
tabuladores.
Artculo 7. Son funciones del laboratorista:
I. Mantener el material y equipo en condiciones de higiene y limpieza.

II. Llevar el inventario de material, equipo y reactivos del laboratorio, reportando al responsa-
ble de laboratorio cualquier inexistencia.
III. Reportar fallas en equipo y en el suministro elctrico, de agua, gas y vaco.
IV. Suministrar el material a los usuarios del laboratorio.
V. Cumplir el horario que se le asigne para atender las necesidades que se tengan en el labora-
torio.
VI. Realizar todas aquellas actividades inherentes al puesto que apruebe la comisin mixta de
tabuladores.
Artculo 8. Son funciones del auxiliar de laboratorio:
I. Asear, lavar, esterilizar, secar y guardar el material, instrumental, equipo y mobiliario.

II. Apoyar en el levantamiento del inventario del laboratorio.
III. Proporcionar, recuperar y controlar el material, substancias, equipo e instrumental del labo-
ratorio, reportando faltantes, desperfectos y anomalas al responsable del laboratorio.
IV. Asear, lavar y mantener ordenada el rea del laboratorio.
V. Trasladar mobiliario y equipo de laboratorio, instrumental y substancias a los lugares que le
sean indicados.
VI. Realizar todas aquellas actividades inherentes al puesto que apruebe la comisin mixta de
tabuladores.
CAPTULO TERCERO. DE LAS RESTRICCIONES
Artculo 9. Queda prohibido dentro de los laboratorios:
I. Ingresar y consumir cualquier tipo de alimento o bebida.

II. Fumar.
III. Usar telfono celular o localizador.
IV. Cometer desorden, bullicio o cualquier acto de indisciplina que vaya en contra de la Legis-
lacin Universitaria.
V. Realizar acciones que pongan en peligro la integridad fsica de los dems usuarios del
laboratorio.
VI. Utilizar y manipular cualquier instrumento, equipo o reactivo sin autorizacin del pro-
fesor responsable de la prctica o del responsable del laboratorio.
VII. El ingreso a toda persona ajena que interfiera con el desarrollo de las actividades que se
realizan en estos.
VIII. El almacenaje de cualquier material ajeno a las labores propias del laboratorio.
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Ingeniera Agrcola
Artculo 10. Se deber respetar el horario asignado para el desarrollo de cada prctica. Los usuarios que
estn desarrollando trabajos de investigacin, servicio social u otros, no podrn realizar trabajos durante
el horario asignado a las prcticas de las materias que se impartan en alguno de los laboratorios.
CAPTULO CUARTO. DEL USO Y LOS USUARIOS DEL LABORATORIO
Artculo 11. Todos los usuarios de los laboratorios tienen los mismos derechos y obligaciones.
Artculo 12. El usuario tiene la obligacin de conocer las normas del presente reglamento para ejercer sus
derechos y cumplir con las obligaciones y responsabilidades derivadas del uso del laboratorio.
Artculo 13. Los usuarios del laboratorio tendrn derecho a utilizar el material y equipo necesario para la
realizacin de sus prcticas curriculares.
Artculo 14. Los usuarios tienen el derecho de ser atendidos con eficiencia para el desarrollo de las prcti-
cas programadas.
Artculo 15. Los profesores que tengan programado realizar prcticas de laboratorio debern elaborar una
lista de los requerimientos al inicio del semestre para que el responsable o laboratorista proporcione el
material solicitado en tiempo y forma.
Artculo 16. Para el uso de los equipos de laboratorio debe revisarse el manual de uso de cada equipo y
registrar el tiempo de uso.
Artculo 17. Para el uso del equipo de laboratorio, el usuario deber llenar el formato correspondiente y
dejar credencial de la universidad. El formato deber ser autorizado por el responsable de la prctica o
responsable del laboratorio y quedar como garanta en caso de deterioro o descompostura del equipo.
Artculo 18. Los materiales y equipos debern ser entregados a los laboratoristas en las mismas condi-
ciones en que los recibieron. En los casos en que el manual indique algn procedimiento previo, ste
deber seguirse.
Artculo 19. El usuario conservar y mantendr el orden y limpieza de las instalaciones y equipo del labo-
ratorio.
Artculo 20. El usuario deber reportar cualquier falla del equipo ante el profesor titular del grupo o respon-
sable del laboratorio o laboratorista, inmediatamente para deslindar responsabilidades
Artculo 21. Est prohibido a los alumnos el paso al interior de los anexos.
Artculo 22. Cuando el manual de prcticas lo indique los usuarios debern usar: bata, lentes de proteccin,
guantes o ropa especial.
Artculo 23. El tiempo de tolerancia para llegar y entrar al laboratorio ser fijado por el responsable de la
prctica.
Artculo 24. Al trmino de la prctica, cerciorarse que las llaves de gas, vaco y agua queden cerradas; y que
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Ingeniera Agrcola
el equipo elctrico quede desconectado.
Artculo 25. A los residuos generados durante la realizacin del trabajo experimental, deber de drsele el
manejo indicado en el procedimiento especfico para el desarrollo de la enseanza experimental en el
nivel licenciatura de los laboratorios de Ciencias Agrcolas.
Artculo 26. En caso de accidente, se debe avisar inmediatamente al profesor o a los laboratoristas.
CAPTULO QUINTO. DE LAS SANCIONES
Artculo 27. Toda persona ajena que ingrese sin la autorizacin correspondiente se har responsable de los
daos que se ocasionen a los experimentos o prcticas que se realizan y se fincar responsabilidad de
acuerdo a la legislacin universitaria vigente.
Artculo 28. El material consumible que sea extraviado o deteriorado por el usuario deber se repuesto por
l.
Artculo 29. Cualquier uso indebido del laboratorio, equipo u otros recursos dar lugar, segn la gravedad
y circunstancias del caso, a cualquiera de las sanciones que aplican en la legislacin universitaria.
ARTCULOS TRANSITORIOS
Primero. Todo lo no previsto en el presente reglamento ser turnado para su solucin al H. Consejo Tcnico
de la Facultad de Estudios Superiores Cuautitln.
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 1
ORGANIZACIN, EQUPAMIENTO Y FUNCIONALIDAD DEL

LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES
Introduccin
En la planeacin y organizacin de un ltaboratorio de cultivo de tejidos vegetales se deben de tomar en

cuenta, principalmente, las condiciones de asepsia en las que se debe de trabajar, as como su funcionali-
dad.
En general, un laboratorio de cultivo de tejidos no es muy distinto de cualquier otro laboratorio, quiz la
diferencia principal es lo relativo a la cuestin de la asepsia ya sealada con antelacin.
En el laboratorio encontramos diferentes reas como las mencionadas a continuacin:
rea de lavado: se lleva a cabo el lavado de cristalera en general; tambin se puede emplear para el lavado
del material vegetativo (explantes).
rea de preparacin de medio y del material vegetativo: en esta zona se preparan los medios de cultivo
que sern utilizados en las diferentes fases de desarrollo de los explantes, al igual que el material vegetal
que ser el explante a utilizar, en ella se encuentra lo siguiente: mesas de trabajo, gabinetes para guardar
reactivos, cristalera, charolas de plstico para transportar soluciones concentradas, gradillas, tapones,
agitadores magnticos con control de temperatura, balanza granataria, balanza analtica, potencimetro,
dosificadores automtico de medio (jeringa de flujo continuo o repipeteo automtico), autoclave, destila-
dor de agua, horno de microondas.
rea de siembra y diseccin: en esta zona se deben de tener los mximos cuidados de asepsia, para lo cual
se emplea una campana de aire de flujo horizontal a filtracin sub-micrnica, instrumental (bistures,
pinzas y navajas), cristalera y agua en condiciones estriles; adems de microscopios estereoscpicos.
rea de incubacin: llamada tambin cuarto de cultivo, en el cual existe un control de luminosidad, tempe-
ratura. Deben tomarse en cuenta principalmente las conexiones elctricas, existen anaqueles para incuba-
cin con iluminacin individual para cada uno de ellos, se facilita su manejo con controles automticos
(Timers) para luz, pudiendo establecer fotoperiodos especficos, de preferencia el tipo de luz blanco fro,
adems de papel (kleen-pack o ega-pack) en cinta de tamao apropiado para el sellado de tubos o frascos
tipo gerber.
rea de invernadero: es muy importante contar con un rea donde se puedan transferir las plantas prove-
nientes del laboratorio buscando un buen control de temperatura y humedad, elementos crticos durante
la fase de aclimatacin del material generado. Es recomendable contar con nebulizacin.
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 1
Objetivos
Conocer la infraestructura del laboratorio, las instalaciones, reas, equipos, materiales y suministros nece-
sarios para la realizacin de actividades del cultivo in vitro de tejidos vegetales.
Ubicar dentro de cada una de las reas los procedimientos que permitan la elaboracin de medios de culti-
vo, el aislamiento y cultivo in vitro de tejidos y rganos vegetales, as como su incubacin.
Conocer las normas y procedimientos para utilizar adecuadamente los reactivos, materiales, instrumental
y equipos en cada una de las reas del laboratorio.
Actividades previas a la prctica
Realizar la revisin de la bibliografa sobre los tpicos relativos a la prctica.
Procedimiento experimental
El profesor responsable del grupo proporcionar informacin sobre el diseo de diferentes clases de labo-
ratorios de enseanza, investigacin y de tipo comercial.
Se proporcionarn los elementos necesarios para operar los equipos y suministros con las condiciones
mnimas que garanticen los procedimientos para aislar y cultivar tejidos y rganos vegetales in vitro.
Los alumnos identificarn los diferentes equipos, suministros, instrumental y reas del laboratorio de culti-
vo de tejidos vegetales, para lo cual el profesor explicar su manejo y precauciones, as como su manteni-
miento y las principales actividades y procedimientos que ah se desarrollan.
Se proporcionar toda la informacin necesaria e indispensable para el funcionamiento y operacin de
todo los equipos, al igual que el uso eficiente de cada uno de los insumos y reactivos.
Instrucciones para la entrega del reporte
Esta prctica se evaluar con la entrega de un glosario indicado por el profesor, actividades desarrolladas
en el laboratorio y entrega de un cuestionario sobre unidades de conversin lumnicas y de presin.
A partir de la siguiente prctica el reporte deber contener los siguientes aspectos:
I. Ttulo
II. Introduccin
III. Objetivos
IV. Revisin de la literatura
V. Materiales y Mtodos
VI. Resultados
VII. Discusin
VIII. Conclusiones
XI. Bibliografa
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Ingeniera Agrcola
Cultivo de tejidos vegetales (Manual de prcticas
Se deber utilizar letra arial 12 con interlineado 1.5 y se recomienda buscar contenido diferente al del
manual de prcticas entregado por el profesor en lo relativo a introduccin y revisin de la literatura.
Los nombres cientficos debern incluirse con letra cursiva.

En caso de existir alguna variacin en lo relativo a materiales y mtodos, sta deber indicarse en el reporte
(por ejemplo, tiempo de inmersin, agente esterilizante, especie a utilizar, entre otros).
En el apartado de resultados, deber considerar el utilizar tablas, grficas, esquemas, fotografas que
permitan definir con claridad los resultados obtenidos.
Se puede enviar en forma previa su contenido va electrnica para su revisin, una vez hecha la correccin
se deber entregar el mismo en forma impresa por equipo.
Las fechas indicadas para la entrega de cada prctica no necesariamente corresponden a la siguiente de su
realizacin: se maneja un modelo de prcticas secuenciadas, es decir, que no concluyen en una sola sesin.
Adems del tiempo de respuesta del material vegetal utilizado, las fechas sern fijadas por el profesor, sta
es improrrogable y fuera de la fecha indicada no se recibir ninguna prctica.
Para la bibliografa se utiliza el formato del temario del curso y manual de prcticas que consiste en lo
siguiente:
Autor(es) (apellido paterno, coma, inicial del segundo apellido, punto e inicial del nombre); punto y coma;
ao; ttulo del libro, artculo, etc.; editorial; lugar; pginas (p -pginas totales-, pp -pginas parciales-). En
sangra francesa o de primera lnea.
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 1
Bibliografa
Aug, G. R., Beauchesne, G. J., Boocon-Gibod L, Decurtye, B. et Vitalie H. 1990. La

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Fundamento terico-prcticos del cultivo de tejidos vegetales. Ed. Rosell,
C. H y Villalobos, A. V. Estudio FAO. Produccin y Proteccin vegetal 105: 9-14.
Merino, M. M. 1987. Consideraciones generales que deben tomarse en la

planeacinde un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales. In. Cultivo de
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Mroginsky, L., Sanberro, P. y E. Flashcland. 2010. Establecimiento de Cultivos de

Tejidos vegetales. In Biotecnologa Y Mejoramiento Vegetal II. Levitus, G., Echi-
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Olmos, S., Luciani, G. y E. galdeano. 2004. Micropropagacin. In Biotecnologa y

Mejoramiento Vegetal. Echenique, V., Rubistein, C y Mroginsky, L. Edts
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Pierik, R. L. M. 1990. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Ed. Mundi-Prensa

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Rodrguez, O. J., Garca, R. J. y N. Aguilar, D. 2007. Cultivo in vitro de clulas, tejidos

y rganos vegetales. Manual de prcticas. U. A. Chapingo pp 13-16.
San Martn-Hernndez, C., Rodrguez-De la O, Cano-Garca, G. y B. Martnez-

Castillo. 2005. Estudio Tcnico para el establecimiento de un laboratorio de
cultivo de tejidos vegetales. Revista Chapingo Serie Ingeniera Agropecuaria.
Vol. VIII (1,2) pp. 15-21.
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 2
ELABORACIN DE SOLUCIONES CONCENTRADAS

Y MEDIOS DE CULTIVO
Introduccin
Un medio de cultivo es definido como una formulacin de sales inorgnicas y compuestos orgnicos
requeridos para la nutricin y manipulacin de los cultivos in vitro. Existen numerosas formulaciones, cada
una de las cuales comprende entre seis y 40 compuestos. Existen en reportes cerca de dos mil medios de
cultivo, de los cuales los ms usados son 16, adems de considerar que algunos de ellos presentan particu-
laridades en la induccin de una va especfica en la morfognesis vegetal.
El medio de cultivo es una solucin acuosa que est formada por compuestos inorgnicos, compuestos
orgnicos, complejos naturales y agentes de soporte y gelificacin.
Los medios de cultivo se encuentran constituidos por los siguientes componentes:
I.- Sales inorgnicas
a) Macronutrimentos: los tejidos en cultivo requieren de una fuente continua de compuestos inorgni-
cos; adems de carbono, hidrgeno y oxgeno. Los elementos ms utilizados son principalmente N, P, K, Ca,
Mg y S.
El nitrgeno se adiciona en grandes cantidades y se encuentra en el medio en forma de nitrato o iones
de amonio, o la combinacin de ambos iones.
El fsforo se puede adicionar en cualquiera de las formas NaH2PO4.H2O o KH2PO4.
El potasio se encuentra en grandes cantidades en la naturaleza; es un catin que se agrega en forma
de KCl, KNO3, KH2PO4.
El calcio se adiciona con CaCl2.2H2O o Ca(NO3)2.4H2O o en la forma anhidra de cualquier sal.
El magnesio y azufre satisfacen sus requerimientos con MgSO4.7H2O.
El sodio no es requerido en grandes cantidades por las plantas superiores; sin embargo, puede ser un
elemento esencial para cultivos de halfitas y plantas C4.
El cloro est presente en forma de KCl o CaCl2.
b) Micronutrimentos: para una adecuada actividad metablica, las clulas vegetales requieren de micro-
nutrimentos, los ms esenciales son Fe, Mn, Zn, B, Cu, Co y Mo. Los ltimos cinco elementos son fundamen-
tales para la sntesis de clorofila y la funcin de cloroplastos.
El Fe es requerido para la formacin de precursores de la clorofila.

El Mn es necesario para el mantenimiento de la ultraestructura y el proceso fotosinttico (la actividad
del fotosistema II es proporcional al contenido de este catin).
El Cu y Zn son requeridos para la oxidacin e hidroxilacin de compuestos fenlicos.
El Mo y Fe forman parte de las enzimas nitrato-reductasa y nitrogenasa.
El boro es necesario para el mantenimiento de la actividad meristemtica, est involucrado en la snte-
sis de bases nitrogenadas, en particular de uracilo.
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 2
Agentes quelatos: son compuestos cuyas molculas son capaces de detener un in de un metal con
varias uniones qumicas formando un anillo complejo (quelato-EDTA cido etilendinitrotetracetato) en
bajas concentraciones estimulan el crecimiento haciendo que el Fe est disponible en bajas concentracio-
nes.
Las concentraciones tradicionalmente se expresaban en mg.l-1, es preferente en mM, meq.l-1 y mol.l-1
II.- Vitaminas
Son necesarias para llevar a cabo una serie de reacciones catalticas del metabolismo y son requeridas
en pequeas cantidades.
Las ms empleadas son las siguientes:
Tiamina (Vit. B1): se aade como tiamina-HCl. Es considerada como la nica, imprescindible o esencial
para el crecimiento de las clulas vegetales.
cido nicotnico (Niacina).
Piridoxina (Vit. B6): se aada como piridixina-HCl.
Mio-inositol: no es propiamente una vitamina, es una azcar-alcohol que tiene un efecto estimulante
sobre la morfognesis, participando quiz en la va biosinttica del cido galacturnico.
cido pantotnico: ayuda al crecimiento de ciertos tejidos.
III.- Hormonas del desarrollo vegetal
Existen tres grupos principales:
a) Auxinas: vinculadas al alargamiento celular, induccin de callo, neoformacin de meristemos radicales.

(AIA, AIB, 2,4D y ANA).
b) Citocininas: promueven la divisin celular y organizacin y diferenciacin de callos, estimulan la prolife
racin. Las mas utilizadas con BA, Kin, 2ip, Zeatina, Thidiazurn).
c) Giberelinas: promueven el alargamiento celular, adems de utilizar cido abscsico, poliaminas, entre
otros.
IV.- Aminocidos
Son una fuente adicional e inmediata de nitrgeno, su asimilacin puede ser ms rpida que el nitrge-
no inorgnico aportado el medio, pueden actuar como agentes quelantes. La L-glutamina y la L-asparagi-
na son transportadores de nitrgen o, L-arginina estimula las races y L-cistena es un agente reductor.
V.- Carbohidratos
Son utilizados como fuente de energa y osmo-reguladores. La sacarosa es el azcar empleado univer-
salmente, la siguen en importancia la glucosa, fructosa, maltosa, rafinosa, galactosa, manosa, lactosa. La
concentracin a la que se emplea la sacarosa es de 20 a 45 g.l-1.
VI.- Agua
El agua para preparar medios de cultivo deber ser destilada, bidestilada, tridestilada, desionizada o
desminarizada, el agua potable contiene sales en solucin que pueden modificar la respuesta de los
tejidos en cultivo.
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Ingeniera Agrcola
VII.- Agentes gelificantes o solidificantes
Se emplean en el caso de medios semislidos, se ha utilizado el agar como un sistema de soporte para
la preparacin de medios slidos o semislidos. Las ventajas que representa el agar es que con el agua
forma geles que se derriten a 100 C, se solidifican a 45 C, por lo que es estable a las temperaturas de incu-
bacin, adems no es alterado por enzimas vegetales, ni reacciona con los constituyentes del medio y no
interfiere con la movilizacin de los componentes del medio de cultivo.
VIII.- Otros compuestos
Muchos compuestos o suplementos no definidos de composicin qumica variable como albumen de

coco, endospermo de maz, extracto de levadura, jugos y extractos de frutas (pltano, tomate, papaya),
casena hidrolizada (como fuente protenica), antioxidantes (cido ascrbico, ctrico) y adsorventes como
el carbn activado.
Objetivos
Conocer la secuencia y los procedimientos necesarios para preparar las soluciones concentradas a partir
de las cuales se tomarn alcuotas para elaborar un medio de cultivo.
Que el estudiante identifique los factores asociados a la solubilidad de hormonas del desarrollo vegetal.
Determinar el peso atmico de cada uno de los reactivos que componen el medio de cultivo a utilizar.
Revisar lo relativo a la forma de expresar la concentracin de los mismos mg.L-1, milimoles (mM) y micro-
moles (M).
Equipo, reactivos y materiales
Balanza digital
Balanza granataria
Esptulas
Agitador magntico con control de temperatura
Reactivos (tipo y cantidad) para elaboracin del medio de cultivo Cruz-Pizarro, 2000
Tabla peridica
Potencimetro
Hidrxido de Sodio 0.1 N
cido clorhdrico 0.1 N
Agar Bacteriolgico
Horno de Microondas
Jeringa de Flujo continuo o de repipeteo automtico
Tubos de ensaye (25x145 mm)
Frascos de vidrio tipo gerber
Tapones para tubo de ensaye
Tapones para frasco tipo gerber
Autoclave
Gradillas
Ligas de hule gruesas (No. 45)
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 2
MEDIO DE CULTIVO CRUZ-PIZARRO 2000
ml de
Cantidad- ml de solucin solucin
Nm Compuesto Solucin MS-50% para MS-100% para
concentrada preparar 1 litro preparar 1
litro
1 NH4NO3-Nitrato de amonio 9.5 g 2.5 5.0
2 KNO3-Nitrato de potasio 13.0 g 2.5 5.0
Ca (NO3)2.4H2O-Nitrato de calcio
3 6.0 g 2.5 5.0
tetrahidratado
MgSO4.7H2O- Sulfato de magnesio
4 3.7 g 2.5 5.0
heptahidratado
5 KH2PO4-Fosfato dicido de potasio 1.7 g 2.5 5.0
KI-Yoduro de potasio 8.3 mg
H3BO3- cido brico 62 mg
MnSO4.4H2O Sulfato de manganeso
6 223 mg
tetrahidratado
Zn SO4.7H2O Sulfato de zinc
M 86 mg
heptahidratado
I
Na2MoO4.2H2O Molibdato de sodio
C 2.5 mg 2.5 5.0
dihidratado
R
O CuSO4.5H2O Sulfato de cobre
0.25 mg
pentahidratado
S
CoCl2.6H2O Cloruro de cobalto
0.25 mg
hexahidratado
FeSO4.7H2O Sulfato de fierro 278 mg
heptahidratado
Na2-EDTA.2H20 Edta-sodio
7 373 mg 2.5 5.0
dihidratado
8 Mio-inositol 1g-100 ml 10 10
9 cido nicotnico 10 mg- 50 ml 2.5 2.5
10 Piridoxina HCl 10 mg-50 ml 2.5 2.5
11 Tiamina HCl 2 mg 50 ml 2.5 2.5
12 Agar 6-8 g / litro 8 g / litro 8 g / litro
13 Azcar 30 g / litro 30 g / litro 30 g / litro
14 BA-Bencil adenina 10 mg/ 50 ml 5.0 5.0
15 AIB-Acido indolbutirco 2 mg/50 ml 5.0 5.0
pH: 5.7 0.1
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Ingeniera Agrcola
Por lo general, la preparacin del medio de cultivo se realiza elaborando soluciones madre o concentradas,
a partir de la dilucin o extraccin de alcuotas se desarrollan medios de cultivo. Recientemente existen en
el mercado medios de cultivo preparados en forma individual (los ingredientes necesarios para una formu-
lacin de un litro), son costosos, la elaboracin por dilucin es ms econmica.
Para reducir pasos en la preparacin de un medio de cultivo se combinan varias sustancias en una solucin
concentrada, siendo importante la calidad de los reactivos qumicos (generalmente de grado analtico) Se
debe considerar que algunos compuestos son incompatibles con otros a ciertas concentraciones: el calcio
no puede mezclarse con fosfato o sulfato, ni el magnesio con el fosfato, para fines prcticos la solucin
puede ser 25, 50 o 100 veces la concentracin final del medio. Las soluciones de sales orgnicas se pueden
conservar a temperatura ambiente, se recomienda en refrigeracin igual que las hormonas.
Se utilizarn soluciones madre o concentradas, extrayendo de ellas las alcuotas sealadas por el profesor
responsable.
La solubilidad de los componentes como el agar y sacarosa se realiza por separado en ese orden con ayuda
de esptulas, agitacin y calentamiento en horno de microondas, con cuidado con el hervor.
El pH se ajustar con ayuda del potencimetro a 5.7 0.1, este ajuste es importante, puesto que afecta el
tejido. Con la consistencia del medio en pH < 4.8, el gel pierde firmeza, se hace blando y pH > 6.0 adquiere
una consistencia ms dura, el pH se ajusta con NaOH o HCl 0.1 N.
Con la jeringa de flujo continuo se depositan 10 ml de medio en cada tubo o frasco gerber esterilizado con
antelacin.
Con amarres de 10-12 tubos bajo la ayuda de ligas de hule, los frascos gerber se manejan en forma indivi-
dual.
El proceso de esterilizacin inicia una vez llenado y tapado el tubo o el frasco en la autoclave a una tempe-
ratura de 120 C (20 lb.in2) durante 30 minutos, verificando el nivel de agua en condiciones de seguridad
del mismo.
Instrucciones para la elaboracin del reporte
Aparte de las consideradas previas, en esta prctica se deber entregar el balance inico del medio elabo-
rado, expresado en milimoles (mM) por cada in especfico, indicando el total de aniones y cationes en el
mismo, expresado en forma de tabla o cuadro.
18
Ingeniera Agrcola
Agrcola
PRCTICA 2
Bibliografa
Aug, R., Beachesne,G., Bocn-Gibod et Vitalie H. 1990. La culture in vitro et ses

applications horticoles. Ed. J.B: Bailliere. Paris pp. 41-46.
Cruz-Pizarro, F. 1983. Propagacin in vitro de manzano (Malus pumilla Mill) Tesis

Prof. Ingeniera Agrcola FES-C. UNAM. 68 p.
Cruz-Pizarro, F. 2000. Niveles de sacarosa y relacin NO3- : NH4+ en el cultivo in

vitro de vid (Vitis vinfera) Mlaga Roja Tesis Maestra en Ciencias, Colegio de
Postgraduados, Montecillo, Texcoco, Edo. de Mx. 78p.
Gamborg, O. L., Murashige, T., Thorpe, T. A. and Vasil, I. K. 1976. Plant tissue culture
media. In Vitro, 12: 473-478.
Lpez, P. C. 1990. Medios de Cultivo. In: Fundamentos terico-prcticos del cultivo

de tejidos vegetales. Ed. Rosell, H. C. y Villalobos, A. V. Estudio FAO. Produccin
y proteccin vegetal. 105: 15-20.
Margara, J. 1990. Multiplicacin vegetativa y cultivo in vitro. Ed. Mundi-prensa pp.

178-193.
Mroginski, L., Sansberro, P. y Flaschland, E. 2004. Establecimiento de cultivos de

tejidos vegetales. In. Biotecnologa y Mejoramiento Vegetal. Edt. Echenique,
V., Rubinstein C. y Mroginski, L. Buenos Aires, Argentina. Ed. INTA pp. 35-42.
19
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 3
DESINFESTACIN Y ESTABLECIMIENTO DE TEJIDOS IN VITRO
Introduccin
La primera condicin para la realizacin de cultivo de tejidos vegetales es lo relativo a la asepsia, debido a
que los medios de cultivo ofrecen condiciones favorables tambin para el desarrollo de patgenos (hon-
gos y bacterias). Las causas de contaminacin de los cultivos establecidos in vitro son las siguientes: 1) El
aire o ambiente, el cual puede contener en suspensin diversos microorganismos (esporas). 2) Los tejidos
vegetales, en su exterior o interior (tejido vascular) pueden contener microorganismos que pueden o no
ser patgenos, bajo condiciones normales; sin embargo, cuando el tejido o el rgano es cultivado in vitro,
el crecimiento de los microorganismos limita el desarrollo de las clulas. 3) El medio de cultivo con un
proceso de esterilizacin poco efectivo (desde el lavado de la cristalera, condicin de los reactivos, esterili-
zacin en el autoclave). 4) El cuerpo humano, limpieza de manos, en el pelo, respiracin, trabajo de poca
precisin durante la exposicin al fuego de bistures, pinzas, cajas etc.
Quiz la causa ms importante de contaminacin es lo relativo a la planta misma, el material vegetal

deber ser bien esterilizado antes de su aislamiento in vitro.
Es importante considerar el origen del material a esterilizar, aqullos que provienen de campo, con porcio-
nes de suelo (races o tallo), pueden presentar ms problema durante este proceso que los que provienen
de invernadero y condiciones controladas.
Uno de los principales problemas que se presentan cuando se trata de establecer los cultivos in vitro, es la
contaminacin de los mismos con diversos microorganismos (hongos, levaduras, bacterias, fitoplasmas,
entre otros). El ambiente generado por explante-medio de cultivo-condiciones fsicas de incubacin es
altamente propicio para la proliferacin de muchos de estos microorganismos, pueden provocar la
destruccin de los explantes. Es difcil cuantificar el impacto de estas prdidas, laboratorios dedicados a la
micropropagacin lo estiman en alrededor del 10%
El primer paso para la desinfestacin del tejido es su lavado con agua potable y en algunos casos un poco
de detergente, de preferencia anti-bacterial, esto se realiza con la finalidad de eliminar algunos contami-
nantes localizados en la superficie del mismo. Enseguida se emplea una inmersin en algn fungicida
(Benomil o Captan 0.1-0.2%), despus un enjuague con etanol al 70% en tiempos variables de uno a tres
minutos, ms tarde el tejido se pasa por una solucin de hipoclorito de sodio, hipoclorito de calcio o clora-
lex en concentraciones que van del 3 hasta el 30% y en diferentes tiempos de exposicin (desde uno a 30
minutos), esto depende del tejido utilizado.
En algunos casos, desde el etanol se le pueden agregar unas gotas de un agente humectante o surfactante,
para romper la tensin superficial y que los agentes esterilizantes tengan mayor contacto con la superficie
del tejido. Los ms utilizados son Tween 20, Tween 89, Triton, Teepol a una concentracin de 0.01%.
Como se mencion con antelacin, los tiempos de esterilizacin del tejido varan de acuerdo a la especie,
edad, consistencia, etc. Para esto, la revisin de literatura hecha antes de iniciar el cultivo de tejidos nos
20
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 3
sirve para darnos una idea de los tiempos y concentraciones de los agentes esterilizantes. Debemos tomar
en cuenta que los tiempos de exposicin prolongados daan al tejido, en algunos casos en forma irreversi-
ble y, por el contrario, tiempos de exposicin breves no destruyen a los microorganismos presentes en
tejido.
Desde luego es importante que el material vegetal seleccionado para el establecimiento del tejido tenga
un buen control fitosanitario previo a su corte.
ltimamente han aparecido soluciones biosidas que eliminan bacterias y hongos, previenen la germina-
cin de esporas y en altas concentraciones pueden eliminar la contaminacin de microorganismos endfi-
tos. Uno de estos compuestos es el PPM (Plant Preservative Mixture); otro ejemplo es el G-1, un compuesto
derivado de furfurales de caa de azcar (qumicamente es 1-(5bromofur-2-il)-2-bromo-2-nitroeteno,
desarrollado en la Universidad de las Villas, Cuba).
En algunos materiales es aconsejable la preincubacin de los explantes mediante lo cual estos son desin-
fectados en forma ligera y precultivados durante 24 horas en un medio conteniendo sacarosa y, por ltimo,
son desinfectados de nueva cuenta y cultivados.
Objetivo
Que el estudiante aprenda las metodologas para establecer tejidos vegetales en condiciones aspticas,
adems de determinar el efecto de soluciones desinfectantes y tiempos de exposicin a las que son some-
tidos los tejidos.
Que el alumno aprenda a localizar, disectar y sembrar in vitro diferentes tipos de explantes.
Se debe tener disponible previamente un medio de cultivo fresco (esta condicin por lo general una
semana despus de elaborado), asptico (libre de contaminantes) para poder establecer los explantes.
Equipos, reactivos y materiales
Material vegetal (varetas) de diversas especies frutales, ornamentales y/o forestales.

Medio de cultivo
Jabn anti-bacterial
Cepillo dental de cerdas medianas
Cloro comercial (cloralex)
Fungicidas (benomil, captan)
Bistur
Navajas para bistures estriles del nmero 11 y 22
Campana de aire de flujo laminar (limpia y funcional)
Lmpara de alcohol
Pinzas de diseccin
Cinta de papel klen-pack de 1 de ancho
Alcohol contenido en frasco de boca ancha para flamear bistures y pinzas.
21
Ingeniera Agrcola
Cajas de Petri estriles
Se tomarn varetas de vid proveniente de campo e invernadero del crecimiento de la estacin; adems de
otras especies como suculentas, forestales y ornamentales, sern lavados con agua corriente con ayuda del
cepillo y detergente anti-bacterial, se cortarn en secciones de tallo con una yema, en seguida de sumer-
gen en benomil (1-2 g.l-1) y despus se colocarn en soluciones de cloralex a diferentes concentraciones, de
acuerdo a los siguientes tratamientos:
1.- Testigo
2.- Cloralex 10 %+ tween 20
Los tiempos de exposicin sern de 5, 10, 15, 20 minutos (sujeto al nmero de equipos presentes). Con un
total de 13 tratamientos incluyendo el testigo.
Al trmino de este tiempo, el material se enjuaga cuatro veces con agua destilada-esterilizada dentro de la
campana de flujo laminar. Una vez realizado este proceso, se procede a separar el tejido de inters con
bistur (explante) y en su caso con microscopio estereoscpico, para su establecimiento en el medio de
cultivo. Se tapa y se sella con klen-pack. Se utilizarn 10 tubos por tratamiento.
El material ser evaluado en porcentaje de contaminacin y tipo de contaminacin (hongos, bacterias) a

los 3, 8 y 12 das despus de establecidos. Es importante la integracin de resultados entre todos los equi-
pos del grupo.
El tiempo de entrega ser de siete das despus de concluida la ltima toma de resultados.
22
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 3
Bibliografa


Mroginski, L., Sansberro, P. y Flaschland, E. 2004. Establecimiento de cultivos de

tejidos vegetales. In. Biotecnologa y Mejoramiento Vegetal. Edt. Echenique,
V., Rubinstein C. y Mroginski, L. Buenos Aires, Argentina. Ed. INTA pp. 37-39.
Mroginski, L. y Roca, W. M. 1991. Establecimiento de cultivos de tejidos vegetales

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Roca, W.M. y Mroginski, L. (Eds.) CIAT (Centro internacional de agricultura
tropical). Publicacin No. 151. Colombia. pp. 19-40.
Margara, J. 1990. Multiplicacin vegetativa y cultivo in vitro. Ed. Mundi-Prensa,

Madrid, Espaa. pp. 173-181.
Pierik, R. L.M. 1990. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Ed. Mundi-Prensa.
Villegas, M. A. 1990. Mtodos aspticos. In: Fundamentos terico-prcticos del

cultivo de tejidos vegetales. Ed. Rosell, C. H y Villalobos A. V. Estudio FAO
Produccin y Proteccin vegetal. 105: 21-24.
23
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 4
EFECTO DE TIPO Y NIVELES DE CITOCININAS EN LA

PROLIFERACIN DE BROTES
Introduccin
La regeneracin de plantas in vitro presenta cuatro fases o etapas principales: 1) establecimiento del culti-
vo, 2) desarrollo y multiplicacin de vstagos o brotes (proliferacin), 3) enraizamiento, 4) aclimatacin de
las plntulas. Generalmente las etapas de enraizamiento y aclimatacin pueden combinarse en condicio-
nes ex vitro. En algunos casos tiene importancia considerar una etapa previa (Etapa 0), que es la de prepa-
racin y acondicionamiento de los explantes para el establecimiento.
El objetivo de la proliferacin es el de mantener y aumentar la cantidad de brotes para los nuevos ciclos de
multiplicacin sucesivos (subcultivos) y poder destinar parte de ellos a la siguiente etapa de produccin
(enraizamiento, tuberizacin, bulbificacin, entre otros). En este proceso de organognesis estn involu-
crados una serie de factor tales como los compuestos que forman parte del medio de cultivo, compuestos
hormonales endgenos (umbral de concentracin de los mismos) y sustancias propias de planta. Algunos
progresos se han obtenido en la comprensin de la organognesis mediante la regulacin en las concen-
traciones de hormonas exgenas adicionadas al medio de cultivo. Se ha observado que a concentraciones
altas de auxinas con respecto a las citocininas se induce la formacin de races, mientras que el desarrollo
de yemas en varias especies depende de la concentracin de citocininas en el medio de cultivo.
La induccin de yemas in vitro se ha logrado con base en una proporcin mayor de citocininas con respec-
to a auxinas, la llamada relacin citocinina-auxina. En el cultivo estas yemas no se inhiben de manera
recproca en su desarrollo, debido a que la dominancia apical puede ser limitada, las citocininas aplicadas
en forma exgena en general activan el crecimiento de yemas laterales.
Es importante sealar que en esta etapa (cualquiera que sea la va de regeneracin empleada), es conve-
niente evitar la formacin de callo como forma indirecta de produccin de brotes, para disminuir el riesgo
de variacin somaclonal. En esta etapa, los medios de cultivo, los reguladores del crecimiento (citocininas,
auxinas) y las condiciones de cultivo tienen un papel crtico sobre la multiplicacin clonal de los explantes.
Entre los efectos de las citocininas estn la formacin de rganos en los tejidos cultivados in vitro, a travs
de la induccin de yemas axilares o adventicias, la divisin y el alargamiento celular.
Es importante sealar que la organognesis depende de dos tipos bsicos de reguladores del crecimiento:
citocininas y auxinas, parecen actuar no slo por su concentracin en valor absoluto, sino principalmente
por la relacin que se establece entre sus concentraciones, generalizando el desarrollo de vstagos o
caulognesis depender de una relacin ptima entre las concentraciones totales de auxinas y citocininas,
de naturaleza exgenas y endgenas.
24
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 4
Objetivo
Observar y determinar el efecto que tienen el tipo y concentracin de las citocininas sobre la proliferacin
de brotes de especies vegetales.
Determinar el potencial en proliferacin mediante el desarrollo de rganos y el tipo de brote (axilar o
adventicios).
Se deber contar con medio de cultivo fresco y asptico, adems de tener disponibles brotes cultivados in
vitro con antelacin, ya sean los procedentes de la prctica 3 (Desinfestacin y establecimiento de tejidos
in vitro), o bien de aquellos provenientes del Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales de la FES-Cuautit-
ln.
Equipo, reactivos y materiales
Medio de cultivo fresco contenido en tubos o frascos gerber

Material vegetal (brotes cultivados de manera previa in vitro en forma asptica)
Campana de aire de flujo laminar horizontal limpia y funcional
Cajas de Petri limpias y estriles
Bistures
Pinzas de diseccin
Navajas del nmero 11 y 22
Frasco de boca ancha para flamear bistures y pinzas
Papel Klen-pack
El desarrollo de esta prctica es en forma secuencial, es decir, en una sesin se elaborar el medio y en otra
se desarrollar el establecimiento o siembra del material vegetal.
Se utilizarn brotes establecidos previamente de cactceas (Mammillaria spp., Wilcoxia spp.), como papa,
vid, violeta africana, crisantemo, entre otros.
Se utilizar el medio base Cruz-Pizarro al 100% y se utilizarn la benciladenina (BA) y kinetina (Kin) con
cuatro diferentes concentraciones:
Tratamientos Concentracin (BA) mg.l-1 Concentracin (kin) mg.L-1

1 0.0 ( testigo ) 0.0 ( testigo )
2 1.0 1.0
3 2.0 2.0
4 3.0 3.0
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Ingeniera Agrcola
La auxina se establecer en un nivel constante de 0.1 mg.l-1 de cido indol butrico (AIB).
La transferencia de los brotes se realizar en la campana de aire de flujo laminar horizontal, bajo condicio-
nes aspticas.
El material vegetal se saca de los tubos de ensaye, colocndolos en una caja de Petri donde se proceder a
separar o seccionar los brotes (los de mayor longitud), eliminando si existe callo y/o porciones oxidadas.
Los brotes sern colocados en frascos gerber o tubos de ensaye que contengan el medio especfico para la
proliferacin, pudiendo colocar de uno a tres brotes por tubo o frasco, los mismos se tapan y sellan en el
cuarto de cultivo.
Instrucciones para la elaboracin de reporte
La toma de datos ser secuencialmente a partir del tercer da a intervalos del mismo tiempo, llegando al
final de 30 das, evalundose el nmero de brotes producidos por tratamiento, origen de los mismos (axilar
o adventicio), longitud de los mismos, presencia de races, porcentaje de oxidacin y contaminacin.
Se debern elaborar grficas de barras en las que se establezcan la relacin entre la concentracin y las
variables a evaluar.
26
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 4
Bibliografa


vitro de vid (Vitis vinfera) Mlaga Roja. Tesis Maestra en Ciencias, Colegio de
Postgraduados, Montecillo, Texcoco, Edo. de Mx. 78 p.
Margara, J-. 1990. Multiplicacin vegetativa y cultivo in vitro. Ed. Mundi-Prensa.

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Mejoramiento Vegetal. Edt. Echenique, V., Rubinstein C. y Mroginski, L. Buenos
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Rodrguez, O. J., Garca, R. J. y N. Aguilar, M. 2007. Propagacin in vitro de neem

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de tejidos vegetales. Ed. Rosell, C. H y Villalobos A. V. Estudio FAO Produccin
y Proteccin vegetal 105: 29-32.
27
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 5
CULTIVO DE CALLOS-INDUCCIN
Introduccin
Se puede definir el callo como un tejido obtenido por medio del aislamiento de rganos o tejidos diferen-
ciados, los cuales posteriormente son llevados a una desdiferenciacin celular, presentado estas clulas
una proliferacin continua, acelerada y de apariencia desorganizada, queda origen a una masa amorfa de
tejido. Esta masa celular puede presentar diferentes tipos morfolgicos, los cuales varan segn su aparien-
cia externa, textura y composicin celular.
Algunos callos son masas celulares compactas y slidas, con clulas con espacios intercelulares limitados,
mientras otras forman tejidos esponjosos y con una gran cantidad de espacios intercelulares.
La coloracin del tejido tambin vara, aun derivado de la misma especie (se pueden presentar callos que
carecen de pigmentacin, mientras que otros pueden ser de diferentes tonos de verde, amarillo, caf o
rojo). El tipo y grado de pigmentacin estn influenciados por factores nutrimentales, ambientales y se
manifiesta por la presencia de clorofila, carotenos, antocianinas, etc.
Algunos estudios microscpicos han demostrado que los tejidos de callo por lo general son heterogneos
en su composicin celular; es decir, un mismo callo puede presentar varios tipos de celulares, la diversidad
celular depende de varios factores como el origen del tejido, edad, composicin de los medios.
El callo est constituido por una alta proporcin de clulas en las que las vacuolas son predominantes,
similares a las clulas de parnquima. Su caracterstica ms importante es el carcter de totipotencia de las
clulas, pues mediante un proceso particular de diferenciacin se puede inducir la organognesis (caulo y
rizognesis) y la embriognesis somtica para el desarrollo de plantas completas.
Un problema asociado con este tipo de tejido es el dao o modificacin de la citologa nuclear de las clu-
las durante su cultivo, se pueden presentar alteraciones cromosmicas, mutaciones y diferentes tipos de
ploidas, as como irregularidades cariocinticas.
El cultivo in vitro per puede ser estresante para las clulas vegetales e involucra procesos mutagnicos,
durante la induccin de callo y la regeneracin de las plantas. Por esta va es posible obtener variacin de
origen nuclear y/o citoplsmica que podra ser utilizada para el mejoramiento vegetal; este proceso deno-
minado variacin somaclonal involucra cambios en las plantas regeneradas que son trasmitidos a la proge-
nie.
As mismo, cabe citar la ocurrencia in vitro de alteraciones no especficas que no generan variacin estable
y transmisible, pero conducen a cambios en la expresin gnica. Dichos cambios denominados <<epige-
nticos>> son tambin considerados por algunos autores como variacin somaclonal, mientras que otros
slo incluyen en la misma a los cambios estables.
28
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 5
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologa para la obtencin de callo como una va indirecta en la morfogne-
sis vegetal.
Contar con medio fresco y asptico. El medio utilizado ser el Cruz-Pizarro (2000) variando la adicin de
hormonas con 0.5 mg.l-1 de cido 2,4 diclorofenoxiactico y 0.1 mg.l-1 de kinetina.
La colecta de material reviste particular importancia, el conseguir zanahorias de calidad aceptable para su
establecimiento.
Equipos, reactivos y materiales
Material vegetal (zanahorias) y callos provenientes de cactceas cultivados in vitro previamente

Medio de cultivo fresco y asptico contenido en tubos o frascos gerber
Bistur
Navajas para bistures del nmero 11 y 22 estriles
Jabn antibacterial
Agua destilada
Cloro comercial (Cloralex)
Vasos de precipitados
Cajas de Petri
Campana de aire de flujo laminar horizontal, limpia y funcional
Se utilizarn como fuente de explante zanahorias con una longitud de 10 a 20 cm: seleccionadas, que sean
jvenes, turgentes no deshidratadas, de preferencia recin cosechadas, sin daos fsicos (roturas entre
otras), tampoco se deben usar aqullas que se sospeche tengan algn patgeno o insectos, no se deben
utilizar zanahorias provenientes de centros comerciales que han sido peladas con antelacin.
Otra fuente de explante puede ser tejido de cactceas previamente establecidos.
Las zanahorias son lavadas con jabn y agua potable, se cortan segmentos de 6 a 7 cm de longitud y se
descartan los extremos.
Se colocan los segmentos en una solucin de cloro comercial (cloralex) al 10% durante 10 minutos en
agitacin constante.
Despus se lavan y enjuagan de dos a tres veces con agua destilada estril, en la campana de aire de flujo
laminar.
En una caja de Petri estril es transferido un segmento de la zanahoria esterilizada con anterioridad, con
ayuda de pinzas y un bistur previamente flameados, se cortan los extremos por la penetracin del agente
esterilizante y se cortan discos de 0.5 a 1.0 cm. de grosor.
A estos discos se deben extraer los fragmentos de cambium (0.5 cm aproximadamente), los cuales se colo-
carn en medio contenido en el tubo de ensaye o frasco gerber.
Se tapan y se sellan los frascos o tubos y se colocan el cuarto de cultivo.
29
Ingeniera Agrcola
Aproximadamente a las tres semanas despus de iniciado el cultivo se puede observar el desarrollo de
callo, se recomienda su observacin a travs del tubo con ayuda del microscopio estereoscpico sin la
apertura del tubo. Se debe cuantificar el volumen respecto al inicial, adems de observar las coloraciones
presentes en el tejido durante este proceso, despus es necesario subcultivar el tejido en un medio nuevo
pasados 25 das para estimular el proceso de organognesis. El reporte se entregar una semana ms tarde
de concluida la prctica.
30
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 5
Bibliografa
Barba, A. A. 1990. Cultivo de callos. In: Cultivo de Tejidos Vegetales. Edt. Hurtado,
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Margara, J-. 1990. Multiplicacin vegetativa y cultivo in vitro. Ed. Mundi-Prensa.

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dio FAO Produccin y Proteccin vegetal 105: 25-29.
Radice, S. 2010. Morfognesis.In. Biotecnologa y Mejoramiento Vegetal II. Levitus,

G. Echenique, V. Rubinstein, C., Hoop, E. y Mroginski L. (Edts) INTA-ArgenBio.
Argentina. pp. 24-33.
31
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 6
CULTIVO DE RACES
Introduccin
El cultivo de races fue una de las primeras y prolficas aplicaciones de los cultivos aspticos, puesto que se
lograron mantener con xito por largos periodos a travs de varios subcultivos.
Los primeros trabajos fueron desarrollados teniendo como explantes pices de races provenientes de
plntulas de trigo obtenidas mediante la germinacin asptica de semillas del mismo, creciendo los pices
de manera vertiginosa. Posteriormente se lograron cultivar pices de races de tomate por un periodo
indefinido.
Se ha determinado que en funcin de la respuesta que tienen las races en el cultivo in vitro, stas pueden
ser de tres tipos:
1) Aqullas que pueden desarrollarse de modo indefinido en cultivo (como tomate, clavo y el
gnero Datura).
2) Las que pueden crecer por periodos prolongados en el medio de cultivo, pero no de forma peren-
ne (chcharo, trigo) limitndose la velocidad de crecimiento, as como la formacin de races laterales
dbiles e insuficientes.
3) Las races que difcilmente crecen debido a que requieren condiciones hasta ahora poco estudia-
das (especies leosas).
Las aplicaciones del cultivo de raz han contribuido a descubrimientos y aplicaciones en la fisiologa vege-
tal, metabolismo de carbohidratos, nutricin, hormonas, induccin de ndulos por Rhizobium, induccin
de formacin de tejido vascular secundario (en ausencia de componentes de la parte area), adems de la
posibilidad del cultivo de nemtodos fitoparsitos, sobre lesiones especficas en el sistema radical.
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologa y aplicacin del cultivo in vitro de races como una tcnica de orga-
nognesis para la obtencin de plantas.
Se debern establecer almcigos de tomate y trigo en semilleros de unicel utilizando como sustrato cual-
quier material inerte (agrolita o vermiculita), con un intervalo de 15 das previos a la realizacin de la prcti
32
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 6
ca, a fin de contar con plntulas con un sistema radicular vigoroso que ser utilizado en el establecimiento
de explantes.
Para la obtencin de explantes de raz se utilizarn plntulas de tomate, las cuales se desarrollarn a partir
de semillas que se esterilizan y se puedan colocar en semilleros con sustrato inerte o bien establecer cajas
de Petri estril, con papel filtro hmedo en condiciones de oscuridad a 25 C. Cuando las races hayan
emergido y tengan entre 2 y 4 cm de longitud, se cortan pices de 1 cm y cada uno de ellos se establece en
el medio lquido de Cruz-Pizarro-2000 o de White sin reguladores del crecimiento. Se puede utilizar como
material de soporte, hule espuma o segmentos de estropajo vegetal lavado y esterilizado con anticipacin.
Los explantes por lo general flotan sobre la superficie del medio y al incubarlos a 27 C en oscuridad se
alargan y crecen las races laterales del eje principal, pudiendo as establecer un clon de races aisladas
repetitivamente por tiempo indefinido.
El nmero de semillas a germinar ser de 60 a 100 semillas, las cuales se esterilizarn con etanol al 80 % por
90 segundos, despus son sumergidas en la solucin de cloro comercial (cloralex) al 2% mantenindolas
en agitacin durante 10 minutos y se enjuagan de dos a tres veces en agua destilada esterilizada.
Una vez desinfectadas las semillas se siembran en las cajas de Petri (10 semillas en cada caja) y se mantie-
nen en oscuridad por siete das o hasta que las races alcancen 3 o 4 cm de longitud aproximadamente.
Cuando las races alcancen esta longitud, con ayuda de un bistur y en condiciones aspticas, se corta 1 cm
de pice de las races y se coloca en tubos de ensaye un pice por tubo en condiciones de incubacin, se
observa y se cuantifica el crecimiento de las races.
A partir del crecimiento posterior, se puede lograr la iniciacin de clones a partir de las races principales y
las laterales ya desarrolladas.
Compuesto Concentracin mg.l-1

MgSO4.7H2O 731
NaSO4.10H2O 453
Ca (NO3)2.4H2O 288
KNO3 80
KCl 65
NaH2PO4.2H2O 21.5
MnCl2.4H2O 6
ZnSO4.7H2O 2.65
H3BO3 1.5
KI 0.75
33
Ingeniera Agrcola
CuSO4.5H2O 0.13
H2MoO4 0.0017
FeCl3 3.1
Na2-EDTA 8.0
Tiamina-HCl 0.1
Piridoxina-HCl 0.1
cido nicotnico 0.5
Glicina 3
Sacarosa 20 000
pH: 4.8
Se determinar la longitud inicial al establecer la raz a travs del vidrio del tubo, se realizarn observacio-
nes cada tercer da con el objetivo de evaluar contaminacin, crecimiento o alargamiento de las races,
ramificacin y formacin de races de orden sucesivo. El reporte se entregar una semana despus de
concluir las observaciones a realizar.
34
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 6
Bibliografa
Butcher, D.N. 1980. The culture of issolated roots. In: Tissue cuture methods for
plant pathologist. Ed. Por Ingram, D. S. and Helgeson. Blackwell Sci. Pub.
Oxford. pp. 123-134.
Kyte, L. 1990. Plants from tes tubes. An Introduction to Micropropagation. Timber

Press. Prtland, Oregon USA. pp. 62-70.
Luna R. S. 1990. Cultivo de raz In: Cultivo de Tejidos Vegetales. Edt. Hurtado, M. D
y Merino, M. M. Ed. Trillas, Mx. pp. 86-92.
Margara, J-. 1990. Multiplicacin vegetativa y cultivo in vitro. Ed. Mundi-Prensa,

35
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 7
ORGANOGNESIS A PARTIR DE TEJIDO DE HOJA Y PECOLO
Introduccin
La morfognesis vegetal es el conjunto de fenmenos que estn involucrados, paso a paso, durante la
ontognesis, evolucin de la estructura y forma de un estado no diferenciado y diferenciado. A partir de la
morfognesis vegetal se puede explicar la regeneracin de las plantas de los tejidos cultivados in vitro. La
morfognesis de manera general comprende dos vas de regeneracin: 1) Organognesis, que comprende
la iniciacin en un tejido no diferenciado, de la estructura y funcin de un rgano, la produccin de una
plntula in vitro por una secuencia no organizada; sta puede ser directa o indirecta (por una fase interme-
dia o de transicin de callo), 2) Embriognesis asexual o somtica, que comprende la formacin de un
embrin a partir de clulas de tejido adulto, dando lugar a un embriode en una serie de pasos que aseme-
jan la formacin de un embrin cigtico, tambin ocurre de forma directa o indirecta.
La organgenesis conduce a la produccin de vstagos unipolares (brotes) que se pueden enraizar en

etapas sucesivas, mientras que en la embriognesis somtica se forman embriones con caractersticas
bipolares.
La organognesis puede darse por la induccin de yemas axilares o adventicias, la base de la multiplica-
cin in vitro es la totipotencia vegetal. La organognesis vegetal se ve afecta por cuatro factores principa-
les:
1) Estudios del desarrollo.

2) Niveles y relacin establecida en los reguladores del crecimiento.
3) Estudios metablicos y osmorregulacin.
4) Competencia y determinacin celular.
El utilizar hojas como estructuras donadoras de explantes se basa en el desarrollo de los meristemos
primarios situados en las lminas foliares, base de la hoja y pecolo de la misma como es el caso de la viole-
ta africana. As mismo, existen meristemos secundarios en el margen de la hoja como es el caso del Kalan-
choe que, al estimular su crecimiento, da origen a una brotacin denominada epifila.
Objetivo
Que el estudiante conozca la metodologa para la obtencin de plantas va organognesis, a partir del
cultivo de tejidos de hojas y pecolo.
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Ingeniera Agrcola
PRCTICA 7
Se deber contar con plantas madres o donadoras de hojas con pecolo de violeta africana y de Kalanchoe
que provengan de ambientes controlados, con regmenes adecuados de humedad y nutricin y libres de
patgenos.
Preparacin de medio de cultivo indicado (fresco y estril), dispuesto con una semana de antelacin.
Equipos, reactivo y materiales
Material vegetal (plantas de violeta africana y Kalancho)

Jabn antibacterial
Tijeras
Atomizador con alcohol etlico
Cloro comercial (cloralex)
Agua destilada-esterilizada
Vasos de precipitados previamente esterilizados
Bistures
Navajas para bistur nmero 11 y 22
Medio de cultivo indicado, fresco y estril
Se utilizarn como explantes hojas con pecolo de violeta africana Saintpaulia ionantha y hojas de Kalan-
cho bossfeldiana.
En el primer caso el explante es una hoja desprovista de puntos o estructuras vegetativas para la neofor-
macin de meristemos de raz y tallo, debido a que en su base se desarrollan meristemos adventicios cauli-
nares y radicales.
En el caso de Kalancho es a partir de brotaciones epfilas en la superficie del borde del limbo, la cual es
considerada una aptitud potencial amplia de las hojas en la neoformacin de yemas adventicias asociadas
a meristemos primarios.
Se lavan las hojas de violeta africana (con pecolo) y las de Kalancho con detergente y agua corriente
(potable), posteriormente hay que enjuagarlas.
Ya en la campana de aire de flojo laminar horizontal. Dentro de un vaso de precipitados estril se adiciona
cloro comercial (hipoclorito de sodio al 10 % v/v) durante 10 a 15 minutos y se enjuaga por cinco veces con
agua destilada estril.
Para la obtencin de explantes se eliminan la base y los mrgenes u orillas de la hoja y se segmenta de
ocho a 12 partes de la hoja a partir de cortes paralelos y perpendiculares a la vena principal de la hoja en
forma cuadrada, de preferencia.
Se siembran en el medio con el envs o regin abaxial en contacto con el medio.
Se pueden subcultivar a intervalos de un mes, en el primero con la concentracin del medio al 100 % y
despus puede reducirse al 50 % de su concentracin.
Para las hojas de violeta los pecolos son segmentados, el explante consistir en 1 cm2 aproximadamente,
pudindose emplear el pecolo y segmentos de hojas.
37
Ingeniera Agrcola
En el caso del Kalancho se utilizarn los bordes marginales del limbo de la hoja.
El medio de cultivo a utilizar para esta prctica se deber preparar de manera anticipada con las siguientes
caractersticas:
Sales minerales Concentracin hormonas Otros
Violeta africana:
Pecolo
0.1 mg.l-1 ANA
0.1 mg.l-1 BA Sacarosa 30 g.l-1
Cruz-Pizarro (2000) Hojas Agar 8 g.l-1
0.3 mg.l-1 AIA
0.6 a 0.8 mg.l-1 BA
Kalancho
1.0 mg.l-1 Kin Sacarosa 30 g.l-1
1.0 mg.l-1 AIA Agar 6 g.l-1
Medio de cultivo para el establecimiento de explantes de Saintpaulia sp. y Kalancho sp.
Una vez establecidos se determinar el porcentaje de cultivos aspticos a las 72 horas. A intervalos sema-
nales y con lmite de 4 a 6 semanas se observarn y cuantificarn los principales eventos organognicos
como el desarrollo de brotes, su nmero, crecimiento de los mismos y lugar de ocurrencia de eventos orga-
ngenicos.
La entrega de la prctica ser despus de una semana, concluidas las observaciones y toma de datos de la
misma.
38
Ingeniera Agrcola
PRCTICA 7
Bibliografa
Aug, R., Beachesne,G., Bocn-Gibod et Vitalie H. 1990. La culture in vitro et ses

applications horticoles. Ed. J.B: Bailliere. Paris pp. 81-90.


Postgraduados, Montecillo, Texcoco, Edo. de Mx. 78p.
Kyte, L. 1990. Plants from tes tubes. An Introduction to Micropropagation. Timber

Press. Prtland, Oregon USA. pp. 118-133.
Lpez, P. C. 1990. Medios de Cultivo. In: Fundamentos terico-prcticos del cultivo

de tejidos vegetales. Ed. Rosell, H. C. y Villalobos, A. V. Estudio FAO. Produccin
y proteccin vegetal. 105: 15-20.
Margara, J. 1990. Multiplicacin vegetativa y cultivo in vitro. Ed. Mundi-prensa pp.

36-41.
Mroginski, L., Sansberro, P. y Flaschland, E. 2004. Micropropagacin. In. Biotecnolo

ga y Mejoramiento Vegetal. Edt. Echenique, V., Rubinstein C. y Mroginski, L.
Buenos Aires, Argentina.. Ed. INTA pp. 161-172.
39
Ingeniera Agrcola

Cultivo Tejidos Vegetales

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN

Cultivo de tejidos vegetales

M. en C. Francisco Cruz Pizarro

Cultivo de tejidos vegetales

Asignatura: Cultivo de tejidos vegetales

Carrera: Ingeniera Agrcola

Revisin: 25 de marzo de 2012

Objetivo general de la asignatura.............. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

Objetivo del curso experimental.............. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

En general se estima que el establecimiento, equipamiento y funcionalidad de un laboratorio de cultivo de

Objetivo del curso experimental

Nmero Titulo de la Prctica Nmero y nombre de la unidad

Efecto de tipo y niveles de

6 Cultivo de races V Propagacin vegetativa

REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIOS DEL DEPARTAMENTO DE

CAPTULO PRIMERO. DISPOSICIONES GENERALES

I. Los alumnos de la carrera de Ingeniera Agrcola que oficialmente se encuentren inscritos y

CAPTULO SEGUNDO. DE LA ESTRUCTURA

Artculo 4. La administracin, vigilancia y operacin de equipo especializado depende directamente del

Artculo 5. El responsable de laboratorio tiene como funciones las siguientes:

I. Dirigir el laboratorio de acuerdo a su reglamento.

I. Supervisar y controlar el funcionamiento del laboratorio.

Artculo 7. Son funciones del laboratorista:

I. Mantener el material y equipo en condiciones de higiene y limpieza.

Artculo 8. Son funciones del auxiliar de laboratorio:

I. Asear, lavar, esterilizar, secar y guardar el material, instrumental, equipo y mobiliario.

CAPTULO TERCERO. DE LAS RESTRICCIONES

Artculo 9. Queda prohibido dentro de los laboratorios:

I. Ingresar y consumir cualquier tipo de alimento o bebida.

CAPTULO CUARTO. DEL USO Y LOS USUARIOS DEL LABORATORIO

CAPTULO QUINTO. DE LAS SANCIONES

ORGANIZACIN, EQUPAMIENTO Y FUNCIONALIDAD DEL

En la planeacin y organizacin de un ltaboratorio de cultivo de tejidos vegetales se deben de tomar en

En el laboratorio encontramos diferentes reas como las mencionadas a continuacin:

Actividades previas a la prctica

Realizar la revisin de la bibliografa sobre los tpicos relativos a la prctica.

Instrucciones para la entrega del reporte

A partir de la siguiente prctica el reporte deber contener los siguientes aspectos:

Los nombres cientficos debern incluirse con letra cursiva.

Aug, G. R., Beauchesne, G. J., Boocon-Gibod L, Decurtye, B. et Vitalie H. 1990. La

Lpez. P. C. 1990. Establecimiento de un laboratorio de cultivo de tejidos. In:

Merino, M. M. 1987. Consideraciones generales que deben tomarse en la

Mroginsky, L., Sanberro, P. y E. Flashcland. 2010. Establecimiento de Cultivos de

Olmos, S., Luciani, G. y E. galdeano. 2004. Micropropagacin. In Biotecnologa y

Pierik, R. L. M. 1990. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Ed. Mundi-Prensa

Rodrguez, O. J., Garca, R. J. y N. Aguilar, D. 2007. Cultivo in vitro de clulas, tejidos

San Martn-Hernndez, C., Rodrguez-De la O, Cano-Garca, G. y B. Martnez-

ELABORACIN DE SOLUCIONES CONCENTRADAS

Los medios de cultivo se encuentran constituidos por los siguientes componentes:

I.- Sales inorgnicas

El Fe es requerido para la formacin de precursores de la clorofila.

Las concentraciones tradicionalmente se expresaban en mg.l-1, es preferente en mM, meq.l-1 y mol.l-1

III.- Hormonas del desarrollo vegetal

Existen tres grupos principales:

a) Auxinas: vinculadas al alargamiento celular, induccin de callo, neoformacin de meristemos radicales.

VII.- Agentes gelificantes o solidificantes

VIII.- Otros compuestos

Muchos compuestos o suplementos no definidos de composicin qumica variable como albumen de

Actividades previas a la prctica

Equipo, reactivos y materiales

MEDIO DE CULTIVO CRUZ-PIZARRO 2000