La Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC) o Resolucin es una tcnica de

permite separar, aislar e identificar los analitos de una mezcla de compuestos

qumicos (basada en la transferencia de masa entre la fase estacionaria y la fase
mvil), por lo que es utilizada frecuentemente en Bioqumica y Qumica Analtica para
la separacin de componentes de una sustancia determinada, basndose en
diferentes tipos de interacciones qumicas. Recientemente es una de las tcnicas
ms utilizada en la industria Qumica y de alimentos, ya que ofrece la posibilidad de
identificar y cuantificar sus componentes mediante el uso de sustancias patrn. La
cromatografa de lquidos abarca un grupo muy amplio entre los mtodos
cromatogrficos, puesto que el sistema ternario fase estacionaria/fase mvil/analito
ofrece muchas y muy distintas posibilidades para separar compuestos qumicos muy
diferentes.
La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente de
vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte
superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad.
Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las
partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao delos micrones, lo cual
gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil. De
esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC),
que requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones
requeridas. La descripcin de la HPLC no se puede basar solo en la instrumentacin
sino que tambin hay que ofrecer una aproximacin sistemtica para lograr
separaciones adecuadas.
En la actualidad HPLC ha llegado a ser una de las Tcnicas del laboratorio
moderno ms importantes como herramienta analtica para separar y detectar
compuestos qumicos. Como en todas las tcnicas analticas, los pequeos
problemas a la larga pueden llegar a tener un mayor impacto en la exactitud y
durabilidad del sistema. Aun con la evolucin de los cromatgrafos lquidos en la era
de la computadora, hay an problemas que sta no puede resolver.
Hasta los Solventes para HPLC, todos filtrados cuidadosamente en la fbrica,
pueden acumular partculas en suspensin que pueden ser perjudicial a los
componentes del sistema HPLC. Estas partculas en suspensin pueden venir de
varias fuentes, incluso de la exposicin al polvo en el aire durante el trasegado de
solvente en el depsito para solvente, la exposicin a particulares del aire durante el
almacenamiento del solvente en el depsito del solvente, la degradacin lenta del
recipiente solvente, o de condensacin y polimerizacin del solvente. Las partculas
pueden ocasionar costosos daos a la bomba HPLC, al guarda columnas, y en
general causar desgaste del sistema de HPLC. Los fabricantes de los instrumentos
tienen en cuenta este problema y recomiendan que se filtre y desgasifique los
solventes HPLC antes de usarlos.
La HPLC utiliza una fase mvil lquida para separar los componentes de la muestra.
Los componentes se disuelven en un disolvente y a continuacin se hacen pasar por
la columna a una gran presin. A continuacin, interactan con la fase estacionaria y
salen en momentos distintos, igual que ocurre con la cromatografa de gases. Si una
cantidad excesiva de gas permanece disuelta en la fase mvil lquida a la presin de
la columna, el gas puede salir del detector y provocar grandes picos no deseados.
Estos pueden eliminarse mediante el burbujeo de helio de gran pureza a travs del
lquido cuando el sistema HPLC no disponga de un desgasificador integrado. El helio
debe presentar unos niveles bajos de hidrocarburos, ya que estos pueden disolverse
en el disolvente y generar ruido de lnea base.
Cabe destacar que se tienen dos fases cromatografas:
Fase mvil: que fluye a travs de una fase estacionaria, arrastrando con ella a los
compuestos de la mezcla.
La fase estacionaria: en la cual estn retenidos los componentes de la muestra, y
a travs de la cual fluye la fase mvil arrastrando a los mismos.
Tipos de cromatografa liquida:
Cromatografa de reparto: Consiste en la separacin de los componentes de
una mezcla sobre una fase estacionaria constituida por un soporte slido inerte
cubierto por una pelcula lquida que es fuertemente retenida por dicha fase. La
separacin se efecta por medio de una fase fluida mvil que es el solvente de
desarrollo que es inmiscible con el lquido del soporte estacionario y que transporta
los componentes a lo largo de la F. E. Los componentes se van separando segn
sean sus solubilidades relativas en el lquido de la fase estacionaria y la fase mvil.
La cromatografa de reparto ha llegado a ser el tipo de cromatografa ms utilizado
de las cuatro modalidades de cromatografa de lquidos. En el pasado la mayora de
a las aplicaciones se han referido a compuestos polares, no inicos, de baja a
moderada masa molecular (habitualmente < 3000). Sin embargo, recientemente se
han desarrollado algunos mtodos (derivitalizacin y formacin de pares inicos) que
han extendido las separaciones de reparto a los compuestos inicos.
La cromatografa de reparto se puede subdividir en cromatografa liquido-lquido y
cromatografa de fase unida qumicamente. La diferencia entre estas tcnicas radica
en la forma que se retiene la fase estacionaria sobre la partcula soporte del relleno.
En liquido-liquido, la fase estacionaria lquida se retiene sobre la superficie del
soporte por adsorcin fsica. En fase unida qumicamente, la fase estacionaria se
une qumicamente a la superficie del soporte. En la actualidad los mtodos de fase
unida qumicamente son los que predominan debido a la desventaja de los sistemas
lquido-lquido. Una de esas desventajas es la perdida de la fae estacionaria por
disolucin en fase mvil, lo que hace necesario un peridico recubrimiento de las
partculas del soporte. Por otra parte el problema de la solubilidad, de la fase
estacionaria impide el uso de los rellenos de la fase lquida en la elucin con
gradiente.
La cromatografa de reparto es hoy en da el mtodo ms utilizado. La
cromatografa de reparto se divide en fase normal, y fase reversa, cuyas
principales diferencias radican en las distintas polaridades de sus fases estacionarias
y mviles.
Inicialmente, la cromatografa de lquidos utilizaba fases estacionarias de elevada
polaridad tales como el agua o el trietilenglicol soportadas sobre paraticulas de slice
o almina; y como fase mvil se emplea un disolvente relativamente apolar con el
hexano o el iso-propileter. Por razones histricas, a este tipo de cromatografa se le
conoce ahora como cromatografa de fase normal.
En esta cromatografa a diferencia de en fase reversa, la fase estacionaria es polar y
la mvil apolar. Las fases estacionarias se obtienen haciendo reaccionar
qumicamente los centros silanoles activos de la slice con un trialquilclorosilano.
La retencin tambin (como la de fase reversa) tiene lugar en esa especie de capa
lquida depositada qumicamente, como consecuencia de la distinta solubilidad
relativa en la fase estacionaria (polar) y la fase mvil (apolar). Donde el analito
menos polar ser el primero que se eluye y el ms polar el ltimo en eluir.

Se deduce que los analitos A, B, C tardan ms tiempo en eluirse si se usa una fase
mvil poco polar. Es decir, cuanto ms polar sea el analito, ms tardar en eluir.
Cromatografa de adsorcin: Es la propiedad que tienen ciertos solidos de
aumentar la concentracin en su superficie de otras sustancias. La separacin se
debe a las diferencias de adsorcin de los componentes de una mezcla sobre la fase
estacionaria. Esta fase estacionaria ha de ser un slido polar de gran superficie
(adsorbente). En este mtodo la fase mvil puede ser un gas o un lquido dando
lugar a la cromatografa gas-solido o liquido-solido.
 El grado de adsorcin va a variar segn la naturaleza y superficie especifica de los
adsorbentes y naturaleza de los solutos.
Para que la separacin de los componentes de la mezcla sea efectiva, su velocidad
de migracin a lo largo de la columna debe ser suficientemente diferente y la longitud
de la columna adecuada.
Algunos adsorbentes comnmente utilizados son: gel de slice, almina, sacarosa y
almidn.
La fase mvil consiste en un disolvente o mezcla de disolventes, seleccionado en
base a su polaridad con el fin de optimizar la separacin de los componentes de la
muestra en la columna. La fase mvil se desplaza a lo largo de la fase estacionaria
debido a la fuerza de la gravedad.
Con respecto a la forma en que sucede el fenmeno; bsicamente se llena la
columna hasta un tercio de su altura con eluyente. A continuacin se prepara una
suspensin del adsorbente (fase estacionaria) en el eluyente (fase mvil) y se vierte
lentamente (para evitar la formacin de burbujas) en el interior de la columna. Esta
operacin se puede realizar en varias adiciones, aadiendo ms eluyente a la
suspensin a medida que sea necesario. Con el fin de favorecer una distribucin ms
uniforme del adsorbente en la columna, as como eliminar las pequeas burbujas que
se puedan haber formado, se puede golpear suavemente la pared externa de la
columna comn tubo de goma. La columna se llena hasta aproximadamente la mitad
de su altura, reservndose la parte superior para la fase mvil. Se abre la llave de la
columna y se deja fluir el eluyente hasta que la altura de ste en la columna quede
aproximadamente un milmetro por encima del adsorbente. La superficie de la fase
estacionaria debe presentar un aspecto uniforme, liso y perpendicular al eje
longitudinal de la columna. A lo largo del proceso cromatogrfico la columna nunca
debe secarse, esto es,la fase estacionaria debe encontrarse en todo momento
cubierta por la fase mvil, yaque de lo contrario la fase estacionaria se contraera y
agrietara.
La muestra se deposita (siembra) en la superficie superior del adsorbente
contenido en la columna con la ayuda de una pipeta. Si la muestra es lquida se
puede sembrar directamente, si es slida se siembra una solucin concentrada de la
misma en un disolvente adecuado (de baja polaridad). Para evitar que se deforme la
superficie del adsorbente durante la adicin, se puede depositar la muestra en la
pared interior de la columna permitiendo que resbale hasta la superficie del
adsorbente. Finalizada la adicin de la muestra se abre la llave de la columna y se
eluye hasta que la muestra sea adsorbida y el nivel del lquido quede
aproximadamente 1 mmpor encima de la superficie del adsorbente. Se lavan las
paredes internas de la columna (por las que se ha dejado resbalar la muestra) con un
poco de eluyente y se eluye de nuevo hasta que el nivel del lquido vuelva a quedar 1
mm por encima de la superficie del adsorbente.
Cromatografa inica: La cromatografa de intercambio inico es un mtodo
que permite la separacin de molculas basada en sus propiedades de carga
elctrica. Se compone de dos fases: la fase estacionaria o intercambiador inico, y la
fase mvil. La fase estacionaria insoluble lleva en la superficie cargas electrostticas
fijas, que retienen contra iones mviles que pueden intercambiarse por iones de la
fase mvil, la cual suele ser una disolucin acuosa con cantidades moderadas de
metanol u otro disolvente orgnico miscible con agua que contiene especies inicas
generalmente en forma de buffer. Los iones de sta compiten con los analitos por los
sitios activos de la fase estacionaria.
El principio bsico de la cromatografa de intercambio inico es que las molculas
cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que
dichas molculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el ambiente inico.
La separacin mediante intercambiadores inicos se realiza por lo general, en dos
fases: en la primera las sustancias a separar se unen al intercambiador utilizando
condiciones que originan una unin fuerte y estable; a continuacin, se eluye de la
columna con buffers de diferentes pH o diferente fuerza inica, compitiendo los
componentes del buffer con el material por los sitios de unin.
Cuando una muestra inica atraviesa estas columnas, los iones presentes sufren
una separacin debido a las diferentes reacciones que sufren al interactuar con la
fase estacionaria de las columnas analticas: aquellos componentes que son
retenidos con ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo
de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se unen ms dbilmente a la
fase estacionaria, se mueven con ms rapidez. Al salir de la columna, la muestra
pasa a travs de un detector (conductimtrico, amperomtrico, etc.) donde se
registra la seal obtenida respecto al tiempo de retencin. El resultado son unos
cromatogramas donde la posicin de los mximos nos indica el in presente y su
rea nos indican la cantidad existente de dicho in.

Las muestras pueden entregarse en la Unidad de Cromatografa de los SCI, entre

las 8-15h, una vez registrada la solicitud en la Administracin.
Las muestras lquidas deben estar preparadas (filtradas a travs de un filtro de
0,45m), transportadas en viales adecuados, segn los requisitos de la muestra, y
conservadas a 4C.
Las muestras deben estar perfectamente identificadas, tanto en los viales como en
la solicitud de ensayo. Si el nmero de muestras es elevado, para evitar problemas
de almacenamiento, es posible entregar la orden de solicitud y no entregar las
muestras hasta el da en que los tcnicos comuniquen al usuario que van a
comenzar el anlisis.
El volumen mnimo de muestra depender del nmero y tipo de anlisis solicitados.
Consultar al coordinador tcnico antes de la entrega de muestras.
En el caso de muestras que se analizan por primera vez, es conveniente
proporcionar al coordinador de la unidad toda la informacin posible acerca de las
mismas para la optimizacin del mtodo (ej.: conductividad, pH, rango de
concentracin aproximado de analito si se conoce, etc.)
 Cromatografa de Exclusin: Es un mtodo de cromatografa en columna por
el cual los tomos se separan en solucin segn su peso molecular. En este mtodo
se separan las protenas segn su tamao. La fase solida consiste en pequeas
perlas que contienen unos poros o cavidades de tamao calibrado.
Algunas de sus ventajas es que trabaja con un peso molecular alto y tiene tiempos
de corrida cortos; se tienen tiempos de separacin y de orden de elucin fciles de
predecir. Adems, no existen prdidas o reacciones en las columnas y posee un
desarrollo del mtodo relativamente simple, sin gradientes.
En su contra se tiene que este proceso es limitado en cuanto a capacidad de pico
(baja resolucin); no puede resolver compuestos de tamao similar (ismeros); se
requieren diferentes estrategias para la optimizacin y este debe tener la capacidad
de poder disolver al polmero.
En este mtodo las protenas de mayor tamao no pueden entrar en las cavidades,
por ende las de menor tamao si poseen esa capacidad de penetrar dichas
cavidades.

Componentes de un cromatgrafo:
Los equipos de cromatografa de lquidos de alta eficacia (HPLC) trabajan a grandes
presiones, por lo que son complejos y caros. Sus componentes fundamentales se
aprecian en el siguiente esquema:
Esquema-HPLC
 Sistema de suministro y almacenamiento de fase mvil
Sistema de bombeo
Sistema de inyeccin de muestra
Columna cromatogrfica
Detector

Sistema de suministro y almacenamiento de fase mvil :

Garantiza la disponibilidad de fase mvil al sistema en condiciones apropiadas, de
modo que se evite la contaminacin y la degradacin de la misma.
La fase mvil en HPLC est formada por un disolvente o por una mezcla de ellos,
cada uno de los cuales est contenido en un recipiente, generalmente de vidrio,
aunque en ocasiones se emplean otros materiales, como el politetrafluoroetileno. Los
recipientes deben disponer de tapones que impidan la contaminacin por gases o
partculas en suspensin presentes en el aire del laboratorio.
Para evitar flujos inestables, la formacin de burbujas o la interferencia de
partculas extraas los disolventes deben estar filtrados y desgasificados. Esto puede
realizarse mediante un tratamiento previo que elimine los gases y la materia en
suspensin (filtros milipore) o bien integrando sistemas de filtrado y desgasificacin
en el equipo de HPLC.
La elucin se puede realizar de dos maneras:
Elucin isocrtica: Cuando se emplea un nico disolvente o una mezcla de
disolventes de composicin constante.
Elucin en gradiente: Cuando se emplea una mezcla de disolventes cuya
concentracin se hace variar a largo del proceso, con el fin de modificar la polaridad
de la fase mvil y disminuir el tiempo de separacin (es un efecto semejante al que
se produce cuando modificamos la temperatura en cromatografa de gases).
Los instrumentos modernos estn equipados con vlvulas de alimentacin que
permiten controlar de manera programada la velocidad de flujo de cada disolvente en
cada instante.
Sistema de bombeo:
Todos los sistemas HPLC incorporan un sistema de bombeo, con las siguientes
caractersticas:
Debe ser capaz de gestionar altas presiones, de hasta 400 atm.
Mantener un flujo libre de pulsos.
Proporcionar caudales constantes y reproducibles.
Permitir cambios de disolvente de modo simple y rpido.
Ser qumicamente inerte y resistente a la corrosin.
Las ms empleadas son las bombas recprocas, que consisten en una pequea
cmara en la que el disolvente es impulsado por el movimiento de vaivn de un
pistn accionado por un motor. La entrada y la salida del disolvente se regulan
mediante dos vlvulas antiretorno que se abren y cierran alternativamente,
permitiendo el paso de fluido en un solo sentido.
Entre las ventajas que presentan se encuentran: pequeo volumen interno, altas
presiones de salida, caudales constantes y compatibilidad con la elucin en
gradiente. Sin embargo, generan un flujo pulsado, que se ha de amortiguar para
evitar la generacin de ruido.
Sistemas de inyeccin de muestra:
La inyeccin de un volumen de muestra preciso, y muy pequeo (5-500 L), debe
hacerse a la entrada de la columna en un breve periodo de tiempo para perturbar lo
menos posible el rgimen de circulacin de la fase mvil y evitar el ensanchamiento
de banda. La reproducibilidad de la inyeccin va a condicionar la precisin de las
medidas.
El sistema de inyeccin est formado por vlvulas rotatorias de alta presin de
varias vas manuales o automatizadas. Constan de un doble circuito, uno de los
cuales est conectado al exterior y el otro al propio sistema, pudiendo intercambiarse
de forma rpida y simple entre las dos posiciones:

Con la vlvula en la posicin de llenado de la izquierda la fase mvil pasa de la

bomba a la columna mientras que la muestra se inyecta en el otro circuito con forma
de bucle. Cuando la vlvula gira hacia la posicin de inyeccin de la derecha, la fase
mvil arrastra la muestra hacia la columna. El objetivo de utilizar este tipo de vlvulas
es de no interrumpir el flujo de fase mvil a travs de la columna e introducir en el
flujo de la misma un volumen de muestra que estar contenida en un tramo de
tubera de volumen fijo.

Columnas analticas en HPLC:

Son columnas rectas, fabricadas habitualmente de acero, aunque tambin se
emplean columnas construidas de vidrio y materiales polimricos. La mayora de
ellas tienen una longitud entre 5 y 30 cm, y su dimetro interno vara entre 3 y 10
mm. Los rellenos ms comunes son de 5 a 10 m y se mantienen en el interior del
tubo mediante cierres porosos de metal o de vidrio. Actualmente existen columnas de
mayor eficacia y dimensiones ms reducidas, que superan los 100.000 platos/metro
con un consumo mnimo de disolvente (lo cual abarata considerablemente el
proceso).
Precolumnas: Las columnas son delicadas y caras, por lo que se emplean
precolumnas, de composicin similar a la de la columna (aunque con un dimetro de
partcula de mayor tamao para minimizar la cada de presin). Las precolumnas
eliminan los contaminantes, la materia en suspensin y aquellos componentes que
se unen de manera irreversible a la fase estacionaria, de manera que cuando est
muy contaminada, se vaca y se rellena de nuevo o se reemplaza por otra nueva.
Columnas termostatizadas: En algunas ocasiones se obtienen mejores
resultados calentando la columna, ya que la viscosidad del disolvente disminuye (se
consigue un mayor caudal o se reduce la presin requerida) y se acortan los tiempos
de retencin. Sin embargo, un aumento de la temperatura tambin puede degradar la
fase estacionaria y reducir el tiempo de vida de la columna, por lo que se deben
emplear hornos que controlen la temperatura de una manera muy precisa (de
dcimas de grado).
Relleno de la columna: El relleno empleado en las columnas de HPLC debe ser
qumicamente inerte, mecnicamente resistente y poseer un tamao de partcula
bien definido. Habitualmente est formado por partculas esfricas microporosas de
slice muy puro, que son permeables al disolvente y presentan una elevada rea
superficial (no puede emplearse con fases mviles cuyo pH sea mayor que 8).
Tambin se emplean rellenos de almina (u otros xidos metlicos), grafito poroso o
materiales polimricos (como estireno-divinilbenceno).
El relleno puede actuar como mero soporte de una fase estacionaria lquida o,
convenientemente tratado, puede intervenir directamente en el proceso de
separacin.
Detectores
A diferencia de la cromatografa de gases, en la cromatografa de lquidos no hay
detectores universales tan fiables como lo son el detector FID o el TCD. Sus
caractersticas (sensibilidad, estabilidad, reproducibilidad, respuesta lineal, tiempo de
respuesta corto, fcil manejo) son similares a stos, aunque no es necesario que
sean sensibles en un intervalo de temperaturas tan elevado y deben tener un
volumen interno mnimo para reducir el ensanchamiento de banda extracolumna.
La eficiencia de un detector cromatogrfico depende de la relacin entre la cantidad
fsica medida y la composicin del efluente, as como tambin de las caractersticas
de las seal de transferida.
Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en
Detectores basados en una propiedad de la fase mvil . Ejemplo: Detector
de ndice de Refraccin
Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar . Ejemplo:
Detector de Fluorescencia, Detector Ultravioleta
Los detectores ms utilizados en HPLC son:
Detector UV: Hay bsicamente tres tipos:
Detector de Longitud de Onda Fija
Detector de Longitud de Onda Variable
Detector de Arreglo de Diodos

Detector de ndice de Refraccin : Existen muchos diseos de estos detectores,

pero solamente existen ahora dos tipos:
Tipo Deflexin
Tipo Fresnel

Detector de Fluorescencia: Este detector solamente puede detectar compuestos

que tengan fluorescencia nativa o inducida por derivatizacin.
Detector de Fluorescencia Inducida por Laser
Segn la Fuente de Excitacin
Segn el sistema ptico

Detectores Electroqumicos: Pueden ser clasificados en tres tipos:

Detector Amperomtrico
Detector Conductimtrico
Detector Potenciomtrico
 Introduccin:
Los procesos de separacin de protenas estn dominados principalmente por la
cromatografa de lquidos (CL). La resolucin de mezclas proteicas por CL se basa
en el principio de que bajo un conjunto dado de condiciones, los solutos disueltos en
una fase mvil interactan en grado diferente con la fase estacionaria contenida en la
columna. El tipo de interaccin depende de las propiedades fsicas y qumicas de la
fase estacionaria. De esta manera, la CL explota las diferencias inherentes entre las
protenas con el fin de lograr su separacin. En base a lo anterior, las tcnicas de
cromatografa de lquidos pueden estar clasificadas en cromatografa de: exclusin (o
filtracin en gel, intercambio inico, interaccin hidrofbica (y fase reversa).
Las tcnicas cromatogrficas han sido utilizadas en el anlisis y purificacin de
protenas; sin embargo, se han realizado diversos estudios en donde son usadas
para detectar cambios conformacionales en las protenas, ya sea por el proceso
cromatogrfico en s o por la naturaleza de la muestra. Debido a esto tambin es
posible determinar la estabilidad de una protena. Por otro lado, como consecuencia
de la expresin de protenas como cuerpos de inclusin en microorganismos
recombinantes, el replegamiento de protenas a travs de tcnicas cromatogrficas
ha cobrado relevancia en la ltima dcada, y actualmente se estn desarrollando
nuevos procesos con este propsito.
 Conclusin:
Es evidente que la cromatografa es un poderoso mtodo de separacin y anlisis
de protenas. Las tcnicas cromatogrficas pueden llevarse a cabo por diferentes
mecanismos como son: absorcin continua, adsorcin, particin e intercambio inico.
Son claras sus ventajas en la purificacin de protenas, particularmente las de inters
farmacutico. La cromatografa ha sido utilizada con xito para determinar cambios
conformacionales y estabilidad en protenas, que adems pueden ser
correlacionados con los mtodos tradicionales; como fluorescencia. Una de las
aplicaciones que ha cobrado relevancia en la ltima dcada es el replegamiento de
protenas, en donde se ha demostrado que el proceso puede ser mucho ms efectivo
que cuando se utilizan otros mtodos. Adems, es posible realizar el replegamiento y
el proceso de purificacin de manera simultnea. Sin embargo, es importante
considerar que la versatilidad de las tcnicas cromatogrficas genera un sinnmero
de condiciones experimentales, que pueden depender de las caractersticas de cada
protena. Es por ello que se identifica como un rea de oportunidad la posibilidad de
establecer procesos generales para el anlisis de los cambios conformacionales y
estabilidad de protenas.
Introduccin
I Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC) 1
II Tipos de cromatografa lquida 2

2.1 Cromatografa de reparto 2

2.1.1 Cromatografa en fase normal 3
2.1.2 Cromatografa en fase reversa 4
2.1.3. ndice de polaridad
2.2 Cromatografa de adsorcin
2.3 Cromatografa inica
2.4 Cromatografa de exclusin

III COMPONENTES de un cromatgrafo

3.1 Bomba de impulsin

3.2 Regulador de impulsos
3.3 Sistema de inyeccin
3.4 Columnas
3.4.1 Columnas analticas
3.4.2 Pre columnas
3.4.3 Termostatos
3.4.4 Tipos de rellenos de la columna
3.5 Detectores
3.5.1 Detectores de absorbancia
3.5.2 detectores de absorbancia ultravioleta con filtros
3.5.3 Detectores de absorbancia ultravioleta con monocromadores
3.5.4 Detectores de absorbancia en el infrarrojo
3.5.5 Detectores de fluorescencia
3.5.6 detectores de ndice de refraccin
3.5.7 Detector de dispersin de luz
3.5.8 Detectores electroqumicos
IV Conclusin
V Bibliografa