BIOLOGIA

DNA

(A) PROCARIOTI

3 mio di anni fa (cellule primordiali)

- archebatteri (anaerobi, ambiente acido o fortemente salino)
- eubatteri
dimensione/ 1-10 micron
metabolismo/ an- o aerobico
organuli/ assenti o pochi
DNA/ circolare a doppio filamento
RNA e proteine/ sintetizzati nello stesso posto
citoplasma/ citoscheletro assente
divisione/ scissione binaria
organizzazione/ unicellulare

(B) EUCARIOTI

funghi, piante, animali

dimensione/ 10-100 micron
metabolismo/ solo aerobico
organuli/ nucleo, mitocondri, cloroplasti, reticolo endoplasmatico, ...
DNA/ lungo, con geni non codificati, cromosomi (no. variabile a seconda della specie), racchiuso nel nucleo.
RNA/ sintetizzato nel nucleo, tradotto in proteine nel citoplasma
citoplasma/ filamenti proteici (citoscheletro)
divisione/ mitosi (cell somatiche) & meiosi (cell germinali)
organizzazione/ pluricellulare

1694 HOMUNCULUS (nello sperma delluomo)

Mendel -- particelle elementari (= geni). monastero di Brnn (A). Vienna (scienze naturali). Piselli.

Miescher (CH) - acido nucleico (si colora con coloranti acidi)

1928 Esperimento di Griffith:

a) fondo di agar
diplococcus pleumonie (polmonite) con due forme per mutazione: ceppo S e R
ceppo S - Smooth (liscio), virulento, capsulato. Formazione di colonie evidenziabili come macchie lucide.
ceppo R - non virulente, non capsulato. Rough (rugoso)

b) iniezione nel topo

ceppo S/ resistente agli Ac --> morte del topo
ceppo R/ eliminazione dal sistema immunitario

c) calore (fiamma Bunsen)

ceppo S inattivato

d)iniezione di miscela di S (trattato a c) e R

alcuni topi muoiono/ fattore trasformante --> R forma capsula.

e) 1944 Avery:
acido nucleico di S inserito nel ceppo R

1952 Esperimento di Hersney and Chase

fago: testa (capsula) proteica - interno cromosoma - corpo con guaina - fibre della coda. trasmette il cromosoma
(DNA) tramite una contrazione del corpo. replicazione dopo 10-20 min.

Marcare con:
S-35 le proteine della capsula
P-32 il cromosoma
frullatore/ teste dei faghi (fantasmi) - separazione

risultato: virus prodotti marcati con P-32

DIFFRAZIONE DEI R-X

cristallo - fascio a R-X posizione e intensit di fuoriuscenti su lastra fotografica --> ricostruzione della
posizione degli atomi.

Linus Pauling/ Struttura elicoidale

Sir Lawrence Bragg - Cavendish Lab (Cambridge)
Maurice Wilkins - relazione al congresso di genetica microbica a Napoli
Cambridge - Rosalinde Franklin (dottoressa) - cristallografia

Watson (zoologo) & Francis Crick: COSTRUZIONE MODELLO DNA 1953

filamenti complementari (duplicazione semiconservativa)
Watson: premio Nobel 1962; Crick +

PV-6-3-96
STRUTTURA DEL DNA

1941 Beadle and Tatum: Sequenza di basi -> gene --> 1 enzima

1957 La mutazione di un gene altera lenzima:

Hegan/ studio dellanemia falciforme (mediterranea)
1 base altera lAA

Scheletro: 2 filamenti

BASI

Complementariet delle basi allinterno

Basi cicliche azotate:

-- puriniche A, G
--pirimidiniche C, T, (U)

Basi rare: derivati metilati nel t-RNA. Da riarrangimenti dei legami dellanello
X ipoxantina (purin.)

ZUCCHERO:

pentosio: Desossiribosio (DNA) o Ribosio (RNA)

NUCLEOSIDE = zucchero + base lagata al C-5

ANP adenosina
GNP guanosina
CNP citidina
TNP timidina
UNP uridina

GRUPPI FOSFATI legati allossidrile C-5

mono- e trifosfati

NUCLEOTIDE = nucleoside + fosfato

X acido adenilico,...

DNA = Sequenza di nucleotidi

legami fosfo-diestere C-5 e C-1

COMPLEMENTARIET delle basi --> duplicazione semiconservativa

Ponti a idrogeno:
2 tra A & T
3 tra G & C

enzimi per riparo della cellula.

POLARIT
definita dal nucleotide terminale:
gruppo fosforico libero --> estremit 5 fosforilata
gruppo OH al C-3 --> estremit 3 ossidrilata

filamenti ANTIPARALLELI: estremit differenti.

enzimi: direzione 5 --> 3

LE PANINDROMI: (sequenze palindromiche)

come RADAR, ANNA
--> la stessa sequenza sui 2 filamenti.

X ...GAACGTCC...GGACGTTC...
...CTTGCAGG...CCTGCAAG...
forma a croce
riconoscimento per enzimi di restrizione
segnali per le proteine

t,r-RNA struttura a forcina -->info particolare per RNA

capacit di:
DENATURAZIONE
rottura di legami H a causa di stimoli fisici e chimici
riscaldamento a 75-80 gradi

RINATURAZIONE
raffreddamento --> ricomposizione

Ibridi: es. DNA-uomo & quello del topo

ibridazione in situ

Le 3 forme del DNA:

DNA-A ottenuto solo in laboratorio. DNA cristalizzato

DNA-Z ricco di C & G. scheletro a zig-zag

iniettato nei topi provoca Ac di anti-DNA-Z
ipotesi: causa di malattie autoimmuni? O artefatto tecnico?

DNA-B in natura

ENZIMI

NUCLEASI - tagliano legami fosfodiesterei

endonucleasi - leg interni
esonucleasi - nucleotidi terminali

REPLICAZIONE

rottura legami H

catene parentali fungono da stampo per le catene figlie

Esperimento dei microbiologi Meselson & Stahl 1958

Escherichia coli (batterio dellintestino): ciclo cellulare/ 20 min.

Terreno do coltura con N-15 aggiunto, poi con N-14

a)estrazione del DNA marcato con N-15 in soluzione di cloruro di cesio
centrifugazione/ DNA si deposita sul fondo.

b) marcazione con N-14:

30 min - depositato in posizione intermedia

c) N-14 a lungo (60 min) - 2a generazione - 2bande

d) 3a generazione - 90 minuti. aumenta la banda superiore

Prova della duplicazione semiconservativa!

45 mio di coppie di basi - cromosoma umano pi piccolo.

230 mio di coppie di basi - cromosoma pi grande.