IV IBEROLAB
ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE EN UN MTODO DE DETERMINACIN MULTIELEMENTAL EN
PRODUCTOS AGROALIMENTARIOS POR ESPECTROMETRA DE MASAS CON PLASMA ACOPLADO
INDUCTIVAMENTE (ICP-MS)
M. Mirat1, M. Cerezo2
1
Laboratorio Arbitral Agroalimentario, Crta. Corua Km. 10.700 28023 Madrid (Espaa), mmiratte@mapya.es.
2
Laboratorio Arbitral Agroalimentario, Crta. Corua Km. 10.700 28023 Madrid (Espaa), jcerezo@mapya.es.
1. Resumen
La Norma UNE/ISO/IEC17025 de Requisitos generales
relativos a la competencia de los laboratorios de ensayo y
calibracin (1), pone especial nfasis en la necesidad de
estimar la incertidumbre del ensayo, as como en el clculo
de las incertidumbres asociadas con calibraciones internas.
En el presente trabajo se describe un procedimiento para
la estimacin de la incertidumbre de la medicin, aplicado a
un mtodo de determinacin multielemental (Al, As, Ba,
Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Se, Sn, V y Zn), en
productos agroalimentarios por Espectrometra de Masas
con Plasma de Acoplamiento Inductivo (ICP-MS).
El clculo de la incertidumbre est basado en el modelo
bottom-up, que es una aproximacin terica de expresin
de la incertidumbre en la medicin, recomendado por la
Gua EURACHEM (2). Este modelo consiste en la
identificacin y cuantificacin de las distintas fuentes de
incertidumbres, tanto internas como externas, que
posteriormente se sumarn cuadrticamente para obtener la
incertidumbre combinada. El resultado final se compara
con el criterio de funcionamiento aplicado a la
incertidumbre uf (incertidumbre estndar mxima), del
Reglamento 333/2007/CE de la Comisin (3).
2. Introduccin
Segn el documento CEA-ENAC-LC/02 (4) La
incertidumbre de una medicin es una estimacin de la
parte del resultado completo que caracteriza el intervalo de
valores dentro del cual se encuentra el valor verdadero de
las cantidades medidas o mesurando.
La incertidumbre siempre va a estar asociada a una
desviacin tpica.
La estimacin de la incertidumbre de un procedimiento de
ensayo es necesaria por las siguientes razones:
Para la acreditacin segn la Norma ISO 17025 (1).
Para mejorar el conocimiento del procedimiento de
medida.
Demostrar la calidad de los resultados de las
mediciones.
Documentar de forma transparente el
procedimiento de medida.
Permitir la comparacin de resultados entre
distintos laboratorios.
Existen diversos modelos para la estimacin de la
incertidumbre propuestos por organismos internacionales.
Seguidamente se describen brevemente algunos de ellos:
1. Clculo del equivalente del intervalo de confianza a
partir del factor t de student aplicado a la
desviacin estndar de los resultados.
2. La aproximacin terica denominada bottom-up,
recomendada por la Gua EURACHEM (2), para la
Expresin de Incertidumbre en la Medida.
3. La aproximacin prctica Top-down a partir de la
desviacin estndar relativa obtenida de estudios
interlaboratorio segn el protocolo armonizado
IUPAC/AOAC o ISO 5725 (5).
4. Aplicacin de la frmula de Horwith, que relaciona la
desviacin estndar relativa con la concentracin
expresada como una fraccin de masa, basada en una
revisin de los resultados de ms de 200 ensayos
colaborativos independientes, Horwith, (1982) (6).
RSDR=2 (1-0.5 LogC)
5. A partir de la informacin obtenida durante el
proceso de validacin del mtodo analtico se han
descrito dos procedimientos distintos:
5.1 Identificacin de las fuentes generales de
incertidumbre:
Falta de exactitud (Sesgo)
Precisin (Proceso)
Falta de trazabilidad
Modelo caja negra
Es un procedimiento global que consiste en emplear
un material de referencia certificado, que debe ser de
concentracin parecida a la de las muestras
analizadas.
Hemos seleccionado la aproximacin terica Bottom-
up como sistema ms adecuado para la estimacin de la
incertidumbre del procedimiento de determinacin
1
 M. Mirat, M. Cerezo. Estimacin de la incertidumbre en un mtodo de determinacin multielemental por ICP-MS.
multielemental en productos agroalimentarios por ICP-MS,
debido a que: se analizan distintos elementos, en gran
nmero de matrices y con un amplio rango de
concentraciones.
3. Desarrollo
En la aplicacin del modelo bottom-up se deben seguir
los siguientes pasos:
3.1. Especificacin del mesurando.
3.2. Especificacin de la expresin matemtica para el
clculo del mesurando.
3.3. Identificacin de las fuentes de incertidumbre,
tanto las asociadas a la expresin matemtica del
mesurando como las que no aparecen
explcitamente en ella.
3.4. Cuantificacin de los componentes.
3.5. Calculo de la incertidumbre combinada.
3.6. Calculo de la incertidumbre expandida.
3.1. Especificacin del mesurando
Se selecciona el elemento a cuantificar describiendo el
proceso de medicin y estableciendo las variables de
entrada para su obtencin.
La muestra se prepara por digestin en microondas y
posteriormente se cuantifica mediante una curva de
calibracin que relaciona la respuesta del equipo frente a la
concentracin.
La curva de calibracin se obtiene a partir de una solucin
patrn certificada comercial. Se prepara un patrn
intermedio que se diluye para obtener los restantes patrones
de la curva de calibracin.
3.2. Especificacin de la expresin matemtica para el
clculo del mesurando
Para obtener la expresin matemtica necesaria para el
clculo de la concentracin final de los elementos en la
muestra, aplicando el procedimiento normalizado de
trabajo, se debe tener en cuenta el peso de la muestra, las
diluciones efectuadas y la concentracin de los elementos
estimada a partir de la interpolacin en la curva de
calibracin.
(C l x Pf )
1
Cf = x F1 x F2 x (Ec.1)
Pi R mtodo se debe comprobar la exactitud, estudiando si
Siendo:
Cf: concentracin del elemento en la muestra.
Cl: concentracin del elemento estimada a partir de la
interpolacin en la curva de calibracin.
Pf: peso del volumen final de dilucin (la dilucin se
realiza gravimtricamente).
Pi: peso de la muestra analizada.
R: valor medio de la recuperacin en tanto por 1.
2
F1: coeficiente de incertidumbre de la solucin patrn
certificada comercial (1000 ppm/ 1000 ppm = 1).
F2: coeficiente de incertidumbre en el patrn intermedio
([(1000 x 1) /100] /10 =1).
3.3. Identificacin de las fuentes de incertidumbre
La incertidumbre de una medida est afectada por dos
tipos de componentes:
3.3.1. Componentes tipo A (Fuentes internas del anlisis).
Son aquellos que pueden obtenerse a partir de la
distribucin estadstica de distintas mediciones de un
mismo elemento en una muestra y se pueden caracterizar a
travs de la desviacin estndar experimental en
condiciones de reproducibilidad (uR).
Estn relacionados con los errores aleatorios, las causas
son desconocidas y su valor decrece al aumentar el
nmero de medidas.
3.3.2. Componentes tipo B (Fuentes externas del anlisis).
Se caracterizan por tener un valor definido, un signo y
una magnitud exactamente de la misma forma, estn
relacionados con los errores sistemticos y su valor es
independiente del nmero de medidas realizadas.
Se evalan identificando de forma individual las posibles
causas de errores sistemticos que afectan al resultado.
Segn la expresin matemtica del mesurando (Ec.1), se
deben tener en cuenta las siguientes contribuciones a la
incertidumbre:
- Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
determinacin de masas. Error de la balanza utilizada
al obtener el peso inicial y final (ubal).
- Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
calibracin del equipo. Error de la concentracin
estimada a partir de la interpolacin de la intensidad
de la muestra en la curva de calibracin (ucal).
- Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
solucin patrn certificada comercial (uF1). Error
aportado por dicha solucin.
- Fuentes de incertidumbre directas asociadas al patrn
intermedio (uF2). Error debido a la preparacin de
esta solucin.
- Fuentes de incertidumbre asociadas al efecto matriz
(um). Se cuantifica en funcin de la recuperacin
obtenida.
Por otra parte, en el procedimiento de validacin del
existen diferencias significativas entre el valor de un
material certificado de referencia (MCR) y el valor
obtenido en el laboratorio, mediante una prueba t de
student.
Adems, segn el documento del CODEX CX/MAS
05/26/4 (7) y El Reglamento 333/2007/CE de la Comisin
(3), para las muestras cuyo rango de concentracin se
encuentra cerca del lmite de deteccin, hay que tener en
cuenta la influencia del mismo en el clculo de la
incertidumbre.
 M. Mirat, M. Cerezo. Estimacin de la incertidumbre en un mtodo de determinacin multielemental por ICP-MS.
3.4. Cuantificacin de los componentes
3.4.1. Fuentes internas
Se evalan mediante el anlisis estadstico de una serie de
observaciones, calculando la desviacin tpica en
condiciones de reproducibilidad.
SR
uR = (Ec. 2)
n la desviacin estndar dividiendo dicho intervalo por el
Siendo:
SR: desviacin estndar obtenida en las muestras en
condiciones de reproducibilidad .
n: nmero de repeticiones que se realizan por cada serie.
3.4.2. Fuentes externas
3.4.2.1. Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
determinacin de masas, que evalan el error de la balanza
utilizada al obtener el peso inicial y final (ubal).
A partir del procedimiento de calibracin de la balanza en
el que se han tenido en cuenta la incertidumbre de la
calibracin, la linealidad, la resolucin, la deriva diaria, la
repetibilidad y los efectos de la densidad, obtenemos la
incertidumbre aportada por la balanza en el peso inicial y
final de la muestra.
3.4.2.2. Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
calibracin del equipo.
Es el error de la concentracin estimada a partir de la
interpolacin de la intensidad de la muestra en la curva de
calibracin (ucal).
Al obtener la recta de regresin mediante el mtodo de
mnimos cuadrados, se considera que la desviacin estndar
de una concentracin es la incertidumbre de la misma.
S y/x 1 1 (X pred - X cal )
2
Ucal = x + + (Ec.3)
b m n (X i - X cal )
2
Siendo:
S y/x : desviacin estndar de los residuos.
b: pendiente le la recta de calibracin.
m: nmero de repeticiones de lecturas de la muestra.
n: nmero de patrones utilizados para obtener la recta
de calibracin.
Xpred: concentracin del analito leda en la muestra.
Xcal : valor medio de la concentracin de los patrones de
la curva de calibracin.
Xi: cada una de las concentraciones de los patrones de
la curva de calibracin.
En la expresin anterior se observa que si la lectura de la
concentracin resultado de una observacin est en el
centro de la recta de calibracin, la incertidumbre ser
menor que cuando se encuentra en los extremos. Por eso
es importante conseguir que la dilucin aplicada a la
muestra nos proporcione concentraciones situadas en el
centro de la curva de calibracin.
3.4.2.3. Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
solucin patrn certificada comercial (uF1), utilizada para
la preparacin de los patrones de la curva de calibracin.
Cuando los datos se expresan asociados a un intervalo de
confianza del 95% (como habitualmente viene expresada
la incertidumbre en las soluciones certificadas), se obtiene
porcentaje adecuado de la curva normal o gaussiana (1,96
2).
UF1
uF1= (Ec. 4)
2
3.4.2.4. Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la
preparacin del patrn intermedio de la curva de
calibracin (uF2).
Para calcular la concentracin del patrn intermedio de
la curva de calibracin utilizaremos la siguiente expresin:
(Va x C sm )
Cp = (Ec. 5)
Pf
Siendo:
Cp: concentracin final del patrn.
Va: volumen de la alcuota tomada de la solucin patrn
certificada comercial.
Csm: concentracin de la solucin patrn certificada
comercial.
Pf: peso del volumen final de dilucin (la dilucin se
realiza gravimtricamente).
Identificamos los distintos componentes de
incertidumbre que contribuyen al error asociado a la
preparacin del patrn: la solucin patrn certificada
comercial, el volumen de la alcuota y la pesada de la
dilucin final.
3.4.2.5. Fuentes de incertidumbre directas asociadas al
efecto matriz (um).
Cuando el elemento analizado presenta una sensibilidad
diferente en presencia de concomitantes en la muestra en
comparacin con el elemento analizado en las soluciones
patrn, existe una diferencia en la seal debida a una
interferencia de matriz.
Estas interferencias pueden detectarse comprobando la
tasa de recuperacin media (R) del elemento aadido a la
matriz de la muestra, y se tendr en cuenta aplicando un
factor de correccin (1/R) en la (Ec.1).
La incertidumbre aportada por este factor de correccin
se obtiene aplicando la siguiente expresin:
3
 M. Mirat, M. Cerezo. Estimacin de la incertidumbre en un mtodo de determinacin multielemental por ICP-MS.

(1 - R) x Vreal 2 2
um= (Ec. 6) u(p) u(q)
3 uc[y(p,q,)]= +
p q
Siendo:
R: recuperacin en tanto por 1. Una vez que hemos identificado y cuantificado los
Vreal: valor obtenido en el anlisis de la muestra. posibles componentes de la incertidumbre, aplicamos la
opcin 2 a la expresin matemtica para el clculo del
3.4.2.6. Fuentes de incertidumbre directas asociadas a la mesurando (Ec.1).
existencia de un posible sesgo en el resultado obtenido con
el mtodo analtico (ucorr). 2 2
u F1
2
u F2
2
2

uB= Cf x u cal u bal u bal um

2

Si en el procedimiento de validacin se observan + + + +

F1 F2
+

diferencias significativas entre el valor de un MCR y el Cl Pf Pi R

valor obtenido en el laboratorio, se debe aplicar un factor (Ec. 8)
de correccin al resultado final y se deber tener en cuenta
la incertidumbre aportada por este factor aplicando la Para el clculo de la incertidumbre asociada al patrn
siguiente ecuacin de correccin. intermedio (uF2), se aplica la opcin 2 (para obtener la
incertidumbre combinada) a la expresin matemtica para
E x Vreal el clculo de la concentracin del patrn (Ec.5),
ucorr = (Ec. 7) obtenindose la siguiente expresin:
100 x 3
2
Siendo: Va x Csm u F1 u v 2 u P 2
+ +
Csm V Pf
E: exactitud. uF2= x (Ec. 9)
Vreal: valor certificado del MCR. Pf
3.5 Clculo de la incertidumbre combinada
Siendo:
uF1: incertidumbre de la solucin patrn certificada
Segn el procedimiento para el clculo de incertidumbre
comercial.
de la Gua EURACHEM (2), una vez identificadas todas las
uV: la incertidumbre de la pipeta utilizada para tomar la
fuentes de incertidumbre y expresadas como desviaciones
alcuota.
estndar, es necesario combinarlas adecuadamente
utilizando el coeficiente de sensibilidad mediante la Tol.pip x V
uV =
siguiente expresin: 3

uc [y(x1,x2,)]= ci u(xi)
2 2 uP: incertidumbre de la balanza utilizada.
Csm: concentracin de la solucin patrn certificada
Ci=y/xi comercial.
V: volumen de la alcuota.
Siendo: Pf: peso final de la dilucin.
ci: coeficiente de sensibilidad.
y: deriva parcial de cada valor y con respecto a los dems Para el clculo de la incertidumbre combinada final,
xi. tambin debemos tener en cuenta los componentes de tipo
A (uR) y la posible existencia del sesgo en el mtodo
En general, se utilizan dos simplificaciones para no tener (ucorr).
que hacer derivadas parciales.
Opcin 1: cuando las medidas incluyan solamente 2 2 2
operaciones de sumas o diferencias de cantidades uc= u R + u B + u corr (Ec. 10)
y=(p+q+r+). En este caso todas las unidades son
similares y las incertidumbres se combinan directamente Para las concentraciones cercanas al lmite de deteccin,
(suma cuadrtica): adems, hay que evaluar la posible influencia del mismo
uc[y(p,q...)] =
2
u(p) + u(q)
2 en el clculo de la incertidumbre que se expresa mediante
la siguiente funcin caracterstica:
Opcin 2: las medidas incluyen operaciones de productos uc=A x C (Ec. 11)
o cocientes. En este caso, se suman cuadrticamente las
incertidumbres relativas: Siendo:
A: constante.
C: concentracin de la muestra.

4
 M. Mirat, M. Cerezo. Estimacin de la incertidumbre en un mtodo de determinacin multielemental por ICP-MS.

Tabla 1. Factor en funcin de la concentracin

En este caso, la incertidumbre final se calcula con la C (g/Kg)
50 0.2
siguiente expresin: 51-500 0.18
501-1000 0.15
2 1001-10000 0.12
C 2 >10000 0.1
u = L + (AC) (Ec. 12)

2
En la tabla 2 se muestran las concentraciones bajas,
medias y altas de cada elemento, dentro del rango de
Siendo: trabajo del mtodo, para las que se ha calculado la
CL= concentracin del lmite de deteccin. incertidumbre, y en la tabla 3 se compara la
incertidumbre obtenida para estas concentraciones con la
3.6. Clculo de la incertidumbre expandida (U) incertidumbre mxima permitida (uf), establecida por el
citado Reglamento (3).
El ltimo paso es obtener la incertidumbre expandida (U),
que se obtiene multiplicando la incertidumbre combinada Tabla 2. Concentraciones baja, media y alta estudiadas para cada
final (u) por un factor (2), de modo que el resultado se elemento
encuentre dentro del intervalo establecido con una Elemento C baja (ppb) C media (ppb) C alta (ppb)
probabilidad del 95%. Al 480 13590 60000
As 24 679 3000
Ba 48 11640 60000
U=2 x u (Ec. 13) Cd 12 339 1500
Co 12 2910 15000
4. Resultados y discusin Cr 24 679 3000
Cu 60 1698 7500
Fe 240 6780 30000
Para evaluar los componentes de tipo A que afectan a Mn 36 1018 4500
nuestro procedimiento de trabajo, se ha obtenido la Ni 96 2716 12000
desviacin estndar en condiciones de reproducibilidad Pb 45 201 900
Se 75 405 1500
(SR), aplicando la (Ec. 2) y realizando cinco series de Sn 600 2025 15000
medidas de cada muestra con dos repeticiones por serie. V 12 2910 15000
Para la caracterizacin de los componentes de tipo B Zn 300 406 6000
tendramos que tener en cuenta:
- ubal obtenida del certificado de calibracin de la balanza. Tabla 3. Incertidumbre obtenida (u) frente a las mxima permitidas (uf)
- ucal asociada a la calibracin del equipo y obtenida Elemento uf (ppb) u (ppb)
C baja C media C alta C baja C media C alta
aplicando la (Ec.3).
Al 87 1359 6000 85 838 3203
- uF1 obtenida mediante la (Ec. 4). As 4.8 136 360 2.4 50 190
- uF2 obtenida mediante la (Ec. 9). Una vez calculada esta Ba 9.6 1164 6000 33* 750 3864
componente, al encontrarse por debajo del lmite de Cd 2.4 61 180 0.48 26 117
deteccin terico del mtodo en todos los elementos Co 2.4 582 1500 39* 270 1385
Cr 4.8 102 360 11* 84 285
estudiados, no se tiene en cuenta su contribucin a la Cu 11 204 900 13.6* 99 298
incertidumbre final. Fe 43 442 3000 15 221 1441
- um obtenida mediante la (Ec. 6). Comprobando que la Mn 7.2 122 140 7.8 68.1 118
pendiente de la curva de adicin est incluida en el Ni 17.4 326 2400 5 219 32
Pb 9 36.2 135 2 21 85
intervalo de confianza del 95% de la pendiente de la Se 14 73 225 10 72 61
curva de calibracin y que la media del valor de la Sn 90 243 1500 26 15 561
recuperacin no es significativamente distinta del 100%, V 2.5 349 1500 36* 84 138
se demuestra la no existencia de interferencias de matriz, Zn 54 73 720 47 61 603
*Incertidumbres (u) en las que se supera la incertidumbre mxima (uf).
por lo que no se tendr en cuenta este componente. Se puede observar que corresponden siempre con las concentraciones
Adems, en el procedimiento de validacin, hemos ms bajas.
comprobado que no existen diferencias significativas entre
el valor obtenido en el laboratorio y el del MCR, para todos 5. Conclusiones
los elementos estudiados. Por lo tanto no ser necesario
tener en cuenta esta correccin (Ec.7). Como muestra la tabla 3, las incertidumbres calculadas
Segn el Reglamento 333/2007/CE de la Comisin (3), la para todos los elementos por el mtodo Bottom-up,
incertidumbre mxima permitida, uf, se debe calcular en cumplen con el criterio del Reglamento 333/2007/CE de
funcin del factor , que es un factor numrico dependiente la Comisin (3) (uf), tanto en las concentraciones altas
del valor de la concentracin de la muestra. Los valores como en las medias. Sin embargo, se puede observar que
que se utilizan se presentan en la tabla 1. para los elementos Ba, Co, Cr, Cu y V, en las
concentraciones bajas ms cercana al lmite de
cuantificacin, se sobrepasa este valor.

5
 M. Mirat, M. Cerezo. Estimacin de la incertidumbre en un mtodo de determinacin multielemental por ICP-MS.

6. Bibliografa

(1) Norma UNE-EN ISO/IEC 17025:2005 Requisitos generales para la

competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin.
(2) EURACHEM Guide. The fitness for purpose of analytical methods. A
laboratory guide to method validation and related topics.
(3) Reglamento (CE) N 333/2007 de la Comisin, de 28 de marzo de
2007, por el que se establecen los mtodos de muestreo y anlisis para el
control oficial de los niveles de plomo, cadmio, mercurio, estao
inorgnico, 3-MCPD y benzo(a)pireno en los productos alimenticios.
DOCE N L 88 de 29/03/2007.
(4) Documento CEA-ENAC-LC/02: Expresin de la Incertidumbre de
Medida en las Calibraciones, Entidad Nacional de Acreditacin
(ENAC), Madrid, 1998.
(5) Norma UNE ISO 5725-1. Exactitud (veracidad y precisin) de
resultados y mtodos de medicin, Septiembre de 1998.
(6) Horwith, W. (1982) Evaluation of Analytical Methods Used for
Regulation. J. Assoc. off Anal. Chem., Vol. 65, N 3, 525-530.
(7) Documento del CODEX CX/MAS 05/26/4. Proposed Draft
Recommendations on the Fitness-for-Purpose Approach to Evaluating
Methods of Analysis, Abril, 2005.