MARCO TEORICO

1. FUNDAMENTO BIOQUMICO DE LA BIODEGRADACIN

El fundamento bioqumico de la biorremediacin se basa en que en la cadena

respiratoria,o transportadora de electrones de las clulas, se van a producir una serie
de reacciones dexido-reduccin cuyo fin es la obtencin de energa. La cadena la
inicia un sustrato orgnico (compuestos hidrocarburados) que es externo a la clula y
que acta como dador de electrones, de modo que la actividad metablica de la clula
acaba degradando y consumiendo dicha sustancia.

Los aceptores ms comnmente utilizados por los microorganismos son el oxgeno,

los nitratos, el hierro (III), los sulfatos y el dixido de carbono. Cuando el oxgeno es
utilizado como aceptor de electrones la respiracin microbiana se produce en
condiciones aerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo aerobio; sin
embargo, si utiliza los sulfatos o el dixido de carbono se produce en condiciones
reductoras o anaerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo anaerobio

1.1 APLICACIN DE SISTEMAS DE BIORREMEDIACIN DE SUELOS Y AGUAS

CONTAMINADAS POR HIDROCARBUROS
- Degradacin de hidrocarburos alifticos en presencia de oxigeno:

Los hidrocarburos alifticos los podemos clasificar en alcanos, alquenos y alquilos

dependiendo de lo saturados que estn sus enlaces. Como norma general decir que
como ms insaturado sea una cadena carbonatada ( ms dobles y triples enlaces)
ms difcil o lenta ser su degradacin. De igual manera los alcanos de cadena larga
son ms resistentes a la biodegradacin a medida que la longitud de su cadena
aumenta. Cuando alcanzan un peso molecular superior a 500 dejan de servir como
fuente de carbono para el crecimiento microbiano. En general tambin la presencia de
ramificaciones reduce la tasa de biodegradacin porque los tomos de carbono
terciarios y cuaternarios interfieren con los mecanismos de degradacin o lo bloquean
totalmente.
 Los microorganismos que utilizan hidrocarburos como sustrato deben de tener
enzimas denominada monooxigenasas que son dependientes de oxigeno. La mayora
de los microorganismos en teora si son capaces de sobrevivir en ese ambiente
pueden degradar sin mas problemas hidrocarburos de cadena larga.
Para que sea de fcil comprensin y sin entrar en demasiados detalles metablicos
podemos decir que para que los microorganismos puedan degradar alcanos primero
deben de oxidar con oxigeno el ltimo carbono de la molcula gracias al complejo
multienzimtico que no hacen mas que incorporar esta molcula de oxigeno. As se
obtiene un hidrocarburo con un grupo alcohol siendo as una molcula mas reactiva.
Mediante otras enzimas este grupo alcohol se oxida mas hasta grupo aldhedo y
finalmente carboxlico. As se obtiene una molcula similar a un cido graso y puede
ser degradado a acetil-CoA por b-oxidacin. Este proceso de oxidacin tambin puede
darse en carbonos no terminales dando lugar a dos cidos grasos que se procesarn
por b-oxidacin. Todo este proceso se puede ver representado esquematizado en la
imagen de la izquierda.

Pero como deca aunque la mayora de microorganismos en teora sean capaces de

utilizar este mecanismo pocos pueden vivir en esas condiciones. Para hacerlo deben
ser capaces de vivir en un medio muy hidrfobo como es el petrleo. Por lo tanto para
colonizar las interfases petrleo-agua tienen que variar sustentiblemente la membrana.
Adems para introducir los hidrocarburos en la clula lo hacen va vescula. Por lo
tanto si hablamos de requerimientos genticos no solo es necesario el sistema
monooxigenasa sino otros genes que permitan variar la envoltura y formacin de esas
vesculas. Por esta razn son pocos las especias que puedan realizar esta
biodegradacin. Sin duda la especie con mas posibilidades y la mas estudiada en el
campo es Pseudomonas.

2-Degradacin de hidrocarburos aromticos en presencia de oxigeno:

En el caso de los hidrocarburos aromticos, el principal problema para degradarlos

es romper este anillo aromtico que pueden ser muy variados. Los microorganismos
que utilizan estos compuestos aromticos como fuente de carbono ,lo que hacen es
que en lugar de utilizar una enzima monooxigenasa especfica para cada molcula
diferente, utilizan unas vas bioqumicas llamadas vias altas o perifricas que consisten
en modificar los diferentes anillos aromticos absorbidos en protocatechuate y
catechol. Es decir, la gran variedad de compuestos aromticos que se pueden
encontrar son modificados y convertidos a estas dos molculas. A partir de estas dos
molculas que convergen todos los compuestos, ya se puede llevar a cabo el
rompimiento del anillo mediante enzimas especficas. Esta segunda fase en la
degradacin seria lo que se conocera como vas bajas. La imagen de la derecha
ilustra la ruta metablica de estas vas bajas.
3-Degradacin anaerbica:

El hecho que en todos los ambientes donde los hidrocarburos naturales se forman el
oxigeno no esta presente, ha hecho pensar a la comunidad cientfica que los
hidrocarburos no podran ser degradados anaerbicamente. Pero a finales de 1980s
se descubrieron algunos microorganismos que si tenan cierta actividad degradadora
bajo condiciones totalmente extrictas.
Este conocimiento es tan reciente que an no se comentan ni en los libros de textos
mas especializados en el tema ni siquiera la posibilidad. Actualmente se est
trabajando mucho en este inslito campo por la importancia que tiene y las
aplicaciones potenciales que pueda tener en la biorremediacin. Hay que tener en
cuenta que en la mayora de los lugares contaminados donde se quiere aplicar estas
tcnicas de biorremediacin hay condiciones anoxignicas o de seguida se consume
el oxigeno. Lo que se hacia hasta ahora en estas situaciones es insuflar aire en estos
ambientes mediante una bomba para favorecer la degradacin aerbica.
Evidentemente esta tcnica hace encarecer el proceso aparte que a veces la difusin
de oxigeno no puede ser posible.
Los pocos estudios realizados hasta ahora han desvelado que los mecanismos de
degradacin en estas condiciones son totalmente diferentes a los utilizados en
presencia de oxigeno excepto la b-oxidacin que tambin se da en condiciones
anxicas. En general se dan procesos de reduccin o condensacin con otras
molculas para activar primero los compuestos.

Como en esta pagina se quiere dar una idea general sobre el campo de la
biorremediacin si se desea saber mas sobre mecanismos de degradacin de
diferentes compuestos aromaticos en condiciones anaerbias se recomienda la lectura
del siguiente review. y para los mecanismos que se utilizan para degradar compuestos
recalitrantes se recomienda este otro review.

Degradacin aerobia:

Sustrato + O2 biomasa + CO2 + H2O

Degradacin anaerobia:

Sustrato + (NO3-, SO42-, Fe3+, Mn4+, CO2) Biomasa + CO2 +(N2, Mn2+, S2+,
Fe2+, CH4)

La concentracin y composicin de la comunidad microbiana y la tasa de

transformacin
de contaminantes est influenciada por diversos factores:

Necesidad de nutrientes:

El metabolismo microbiano est orientado a la reproduccin de los organismos y stos

requieren que los constituyentes qumicos se encuentren disponibles para su
asimilacin y sintetizaran.
Los nutrientes principalmente requeridos son el fsforo y el nitrgeno. Por lo general
suele haber en el suelo una concentracin de nutrientes suficiente, sin embargo, si
estos no se encontrasen en el rango normal se puede adicionar mayor cantidad al
medio. El rango normal de C:N:P depende del sistema de tratamiento a emplear,
siendo de modo habitual 100:10:1.

pH del suelo: afecta significativamente en la actividad microbiana. El crecimiento de la

mayor parte de los microorganismos es mximo dentro de un intervalo de pH situado
entre 6 y 8. As mismo el pH tambin afecta directamente en la solubilidad del fsforo y
en el transporte de metales pesados en el suelo. La acidificacin o la reduccin del pH
en el suelo se puede realizar adicionando azufre o compuestos del azufre.

Temperatura: generalmente las especies bacterianas crecen a intervalos de

temperatura bastante reducidos, entre 15 y 45 C (condiciones mesfilas),
la biodegradacin por desnaturalizacin de las enzimas a temperaturas superiores a
40 C e inhibindose a inferiores a 0 C.

Humedad: los microorganismos requieren unas condiciones mnimas de humedad

para su crecimiento. El agua forma parte del protoplasma bacteriano y sirve como
medio de transporte a travs del cual los compuestos orgnicos y nutrientes son
movilizados hasta el interior de las clulas. Un exceso de humedad inhibir el
crecimiento bacteriano al reducir la concentracin de oxgeno en el suelo. El rango
vara en funcin de la tcnica.

Estructura qumica del hidrocarburo: la inherente biodegradabilidad de un

hidrocarburo depende, en gran medida, de su estructura molecular. Siendo los
parmetros que ms van a afectar la halogenacin, la existencia de ramificaciones, la
baja solubilidad en el agua y la diferente carga atmica.

3. FACTORES QUE DETERMINAN LA EFICACIA DE LA TCNICA

3.1. Bioventing o inyeccin de aire

La tcnica del bioventing es un tratamiento de biorrecuperacin de tipo in situ,

consistente en la ventilacin forzada del suelo mediante la inyeccin a presin de
oxgeno (aire) en la zona no saturada del suelo a travs de pozos de inyeccin.
Debido a la aireacin del suelo se va a favorecer la degradacin de los hidrocarburos
por dos motivos: por volatilizacin, facilitando la migracin de la fase voltil de los
contaminantes, y por biodegradacin, ya que al incrementar la oxigenacin del suelo
se van a estimular la actividad bacteriana.

Los factores a tener en cuenta en la aplicacin del bioventing o inyeccin de aire

natural son:

Se degradarn ms fcilmente las molculas ms pequeas (hasta C20), siendo

ms fcilmente biodegradables los compuestos parafinados o de cadena lineal que los
compuestos aromticos. En general, son favorables los compuestos de alta volatilidad
(presin de vapor mayor de 10 mm de Hg a 20C).

Los suelos deben contener bajos contenidos en arcilla y ser lo ms

homogneamente posible, con un valor de permeabilidad al aire adecuado (> 10-10
cm2).
 El principal problema es la biodisponibilidad de los microorganismos. Cuanto menor
es la solubilidad de los contaminantes menor ser la biodisponibilidad.

Los aportes de oxgeno deben ser suficientes, as como la existencia de fuentes de

carbono, aceptores de electrones y energa suficientes.

No debe existir de producto libre en flotacin sobre el nivel fretico.

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 y 8), de humedad (12-30% en
peso), potencial redox mayor de -50 mV, temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes
del suelo en relacin N:P de 10:1.

Necesidad de tiempos de actuacin cortos (meses) y coste medio-alto.

3.2. BIOPILAS

La tcnica de biopilas es un tratamiento de biorrecuperacin de tipo ex situ en

condiciones no saturadas, consistente en la reduccin de la concentracin de
contaminantes derivados del petrleo en suelos excavados mediante el uso de la
biodegradacin.

La tcnica consiste en la formacin de pilas de material biodegradable de dimensiones

variables, formadas por suelo contaminado y materia orgnica (compost) en
condiciones favorables para el desarrollo de los procesos de biodegradacin de los
contaminantes.
Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la pila, o bien
de forma pasiva, mediante tubos perforados de aireacin.

En principio, las biopilas se pueden aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos,

siendo ms eficaz en los compuestos de carcter ms ligero.
Entre los factores que influyen en la aplicacin de las biopilas destacan:

Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el suelo en

concentraciones menores a 50.000 ppm.

Dada la necesidad de excavacin y posterior depsito del suelo contaminado, se

requiere una superficie de trabajo relativamente grande cuyas dimensiones dependen
del volumen de suelo a tratar.

Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.000 CFU/gramo de

suelo),condiciones de humedad (40-85% de capacidad de campo), temperatura (10 y
45C),300

APLICACIN DE SISTEMAS DE BIORREMEDIACIN DE SUELOS Y

AGUAS CONTAMINADAS POR HIDROCARBUROS

3.3. Atenuacin natural

La atenuacin natural, aunque no est considerada como una tcnica de

descontaminacin propiamente dicha, est englobada dentro de las tcnicas de
remediacin in situ de muy bajo coste. Su caracterstica principal es la utilizacin de
los procesos fisico-quimicos de interaccin contaminante-suelo y los procesos de
biodegradacin que tienen lugar de forma natural en el medio. Estos procesos se
conocen como procesos de biotransformacin natural.

Los procesos de biotransformacin natural son aquellos que van a reducir la

concentracin
de los contaminantes y entre los que se encuentran la dilucin, dispersin,
volatilizacin, adsorcin, biodegradacin y aquellas reacciones qumicas que se
producen en el suelo o en el agua y que contribuyen de alguna forma a la disminucin
de la contaminacin.

Esta tcnica se aplica en aquellos casos en los que exista contaminacin tanto en
suelos
como aguas subterrneas producida por hidrocarburos de tipo halogenado o no
halogenado .Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la atenuacin
natural destacan:

La exigencia de proteccin y el riesgo de los potenciales receptores durante el

tiempo que dura la atenuacin.

La existencia de unas condiciones geolgicas y geoqumicas favorables.

Las necesidades de reduccin de la masa contaminante en un intervalo razonable

de tiempo (meses a aos), tanto en la superficie del suelo como en la zona ms
subsuperficial del mismo, as como de la calidad de las aguas subterrneas.

Confirmacin de la existencia de los tipos y nmero de poblaciones de

microorganismos que puedan biodegradar los contaminantes.

Produccin y conservacin en el medio de subproductos de carcter persistente o

ms txicos que los iniciales, durante y despus de la atenuacin natural.

No existencia de producto libre en flotacin sobre el nivel fretico

Para condiciones aerobias la condicin ambiental ptima de concentracin de

oxgeno disuelto en el agua debe ser superior a 0,5 mg/l.

La concentracin de los compuestos utilizados como aceptores de electrones en

condiciones anaerobias debe ser superior a 0,21 mg/l para nitratos, la de Fe3+ para
que pueda ser reducido a Fe2+ debe ser superior a 21,8 mg/l y la de sulfatos mayor de
0,21 mg/l.301

El potencial redox debe estar situado entre un rango de -400 y 800 mV.

Existencia de un coeficiente de retardo favorable para que se produzcan los

fenmenos de sorcin con suficiente eficacia.

Que se produzca una dilucin suficiente para que la concentracin se vea disminuida
aguas abajo del foco contaminante.

La dispersin de los contaminantes aguas abajo del foco y en la direccin de flujo

debe ser adecuada para que exista una mayor disponibilidad proporcin entre los
contaminantes y los aceptores de electrones
Biotransformacin natural
 MATERIAL DE ESTUDIO

Analiisis y elccin de los sistemas de biotratamiento

UNIDAD DE ESTUDIO
CRITERIOS DE INCLUSION
De la fase de investigacin inicial, una vez identificadas las caractersticas del
emplazamiento, del suelo y del contaminante, se podr pasar al anlisis y eleccin
de las
medidas biocorrectivas ms adecuadas. Para ello ser necesario:

1. Identificar y cuantificar los contaminantes. Definiendo sus propiedades fsico-

qumicas ms importantes.
Identificacin y clasificacin de compuestos.
Concentracin en suelos y aguas subterrneas.
Caracterizacin de la presin de vapor, constante de Henry, densidad y grado de
solubilidad.

2. Conocer los factores que influyen en la transformacin biolgica de los

contaminantes
Factores ambientales: tales como humedad, oxgeno disuelto, temperatura, pH,
disponibilidad de nutrientes.
Factores microbiolgicos: presencia de microorganismos y aclimatacin de las
poblaciones microbianas.

3. Designar las medidas biocorrectivas. En funcin de los factores anteriormente

expuestos, se elegira el sistema de biotratamiento ms adecuado.