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Facultad de Ciencias
ESTIMACION DEL CRECIMIENTO CELULAR POR METODOS INDIRECTOS
Bsicas
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Estudiantes del Programa de Biologa, Facultad de Ciencias Bsicas, Universidad del Atlntico Km 7
Antigua va Puerto Colombia
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Resumen:
En la realizacin de la prctica de laboratorio se efectu la determinacin de la turbidez (turbidimetra)
mediante el uso del espectrofotmetro (Lector de ELISA), tomando como objeto de estudio: caldo ms
extracto y bacteria. Esto se realiz con el fin de controlar y estimar el crecimiento bacteriano frente
diversos agentes (flores 1, flores 2, macroalgas 1, macroalgas 2, neem biotec 1 y neem biotec 2). Los
resultados fueron graficados y comparados con literatura cientfica.
Palabras claves: Turbidimetra, espectrofotmetro, macroalgas, neem biotech.

Introduccin la placa del mismo cultivo esta correlacin se

Cuando un haz de luz paralelo golpea una
partcula en suspensin, parte de luz es
reflejada, parte es diseminada, parte es
absorbida y parte es trasmitida. La turbidimetra
es aquella que mide la luz dispersada como un
decrecimiento de la luz transmitida a travs de
la solucin, utilizando para ello un
espectrofotmetro [1]. Este equipo utiliza las
propiedades de la luz y su interaccin con otras
sustancias, para determinar la naturaleza de las
mismas y se usa en el laboratorio con el fin de
determinar la concentracin de una sustancia en
una solucin, permitiendo as la realizacin de
anlisis cuantitativos. Adems de ellos, tambin
se puede determinar como una medicin
logartmica del instrumento denominada
absorbancia, o como un valor derivado del
porcentaje de transmisin [2].
Los mtodos de dispersin de la luz son las
tcnicas ms utilizadas para monitorear el
crecimiento de los cultivos bacterianos. Para los
bilogos moleculares, bioqumicos y fisilogos
bacterianos una medida del crecimiento, es el
incremento de biomasa. La absorbancia es
aquella, que se utiliza para graficar el
crecimiento bacteriano o celular. Cuando las
bacterias estn en fase logartmica de
crecimiento o de declinacin la representacin
de la absorbancia frente al tiempo forma una
lnea casi recta. Si las lecturas de la
absorbancia son compatibles con el recuento en
puede utilizar en estimaciones futuras del
nmero de bacterias obtenidas directamente por
turbidimetra. En una suspensin microbiana la
cantidad de microorganismos est directamente
relacionada con la turbiedad o densidad ptica
[1].
Metodologa
En un microplato de 96 pocillos, enumerado en
forma horizontal del 1 al 12 y en forma vertical
de la letra A hasta la letra H, cada grupo
adiciono dos muestras de un mismo extracto.
Para ello a cada grupo el profesor le asigno dos
respectivos pocillos y una sustancia a evaluar.
El grupo 1 tuvo asignado los pocillos 1D, 2D y el
extracto Flores 1, el grupo 2 pocillos 4D, 5D y el
extracto Flores 2, grupo 3 pocillos 7D, 8D y
extracto Macroalgas 1, grupo 4 pocillos 10D,
11D y extracto Macroalgas 2, en nuestro caso
como grupo 5 los pocillos asignados fueron 1E,
2E y el extracto Neem biotec 1 y al grupo 6 se le
fue asignado los pocillos 4E, 5E y extracto
Neem biotec 2. Adems de ello se aplicaron los
controles C-, C+, H2O y BLK, ubicados en los
pocillos 1G, 2G; 5G, 5G; 7G, 8G y 2H.
Luego de esto se procedi por grupo a llenar en
los pocillos correspondientes, 170L de caldo
con ayuda de una micropipeta a la cual se le
cambia la punta para agregar 10L de extracto;
por ultimo realizando nuevamente el cambio de
la punta se agrega 20L de bacteria. Al terminar
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el procedimiento, el microplato se introdujo en el
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lector ELISA a las 8:30 para su respectivo
conteo, el cual se volvi a realizar en 5
intervalos de una hora, obteniendo los datos
desde el T0 (tiempo cero) hasta el T6 y siendo
estos promediados, calculado su desviacin
estndar, graficados y tabulados.

Resultados

Tabla 1. Tiempos tomados a partir del lector

ELISA, en el crecimiento de las bacterias.
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Tabla 2. Tiempos promedios entre los tiempos
de cada extracto, desviacin estndar de cada
tiempo promedio y extracto y diferencia de los
tiempos (T0-T0, T0-T1, T0-T2 y as sucesivamente
hasta llegar al T0-T6)
Figura 1. Crecimiento de la bacteria.
0.2
C-
0.15 C+
Agua
0.1
Ext. 1
Ext. 2
0.05 Ext. 3
Ext 4
0 Ext 5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 Ext 6
-0.05
Anlisis
Los mtodos turbidimetricos (pticos), son
mayormente utilizados en las prcticas de
laboratorio. Estos consisten en la medicin de la
cantidad de la luz dispersada o transmitida a
travs de un cultivo bacteriano. Las
suspensiones bacterianas dispersan la luz al
igual que cualquier partcula pequea
suspendida en agua [1]. Lo cual se pudo
observar en los resultados obtenidos en este
laboratorio, adems de ello se resalta que una
medida del crecimiento bacteriano es el
incremento de biomasa.
Desde el punto de vista biosinttico, las
bacterias se pueden dividir en auttrofas, las
cuales crecen sintetizando sus materiales a
partir de sustancias inorgnicas sencillas y
hetertrofas, en estas su fuente de carbono es
orgnica. Sean las bacterias auttrofas o
hetertrofas, todas necesitan captar una serie
de elementos qumicos, que se pueden
clasificar en macronutrientes (C, H, O, N, P, S,
K, Mg) y micronutrientes (Co, Cu, Zn, Mo) [3].
Dichos nutrimientos, son los que las clulas o
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bacterias requieren para crecimiento. Los
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resultados obtenidos de la prctica de
laboratorio y evidenciados en las tablas y grafica
(D.O vs tiempo) nos muestran que los cultivos
que ms contribuyeron al crecimiento de la
bacteria E.Coli, fueron a los que se les adiciono
extracto de flores y macroalgas, esto se puede
deducir ya que las macroalgas en general,
cuentan con una presencia de macronutrientes
como: H, C, N, O, F, Na, K, Mg y
micronutrientes: Mn, Cu, Co, Zn, Mo y en el
caso de las Flores estas cuentan con la
presencia de macronutrientes: N, P, K, Ca, Mg,
S y micronutrientes: B, Co, Fe, Mn, Zn y las
bacterias necesitan nutrientes (H2O, CO2,
fosfor, azufre, nitrgeno), sales minerales (ion
potasio, ion magnesio, ion calcio, ion hierro y
cantidades minsculas de Mn, Co, Mo, Zn, Ni,
para su crecimiento. De igual manera en los
resultados obtenidos y evidenciados en la
grfica se observa que al cultivo que se le
agrego extracto de neem-biotec es el que
muestra un menor crecimiento en comparacin
a las Macroalgas 1, 2 y Flores 1, 2.
Este extracto presenta unas propiedades y
actividades antimicrobianas contra la E.Coli.
Esto se debe a que las sustancias
antibacterianas de origen microbiano
(antibitico) puede actuar como microbiostatico,
es decir que inhibe en el crecimiento de
microorganismos y se denominara
bacteriosttico [3].
Bibliografa
[1] Mara de los ngeles Aquiahualt Ramos
y Mara de Lourdes Prez Chabela. Manual
de prcticas del laboratorio de Microbiologa
general, primera edicin: 2002, Universidad
Autnoma Metropolitana, Iztapalapa.
[2] Ordonez Smith, Guias oracticas para
laboratorio de bacteriologa, editorial
Panamericana.
[3] Michael T Madigan, John M. Martinko Y Jack
Parker, Biologa de microorganismos, 10edicin,
editorial Pearson Pertice Hall.
 ANEXOS

1 Qu factores biticos y abiticos controlan el crecimiento celular?

Los factores abiticos que influyen en el crecimiento celular, son el pH, el oxgeno y la
temperatura. Los factores biticos, La disponibilidad de agua, La acides o alcalinidad de un
medio, la temperatura.
2 Cul fue el extracto que produjo la mayor inhibicin del crecimiento de E. coli?

Segn los resultados que arroj la grfica, el extracto que ms inhibi el crecimiento de la
bacteria fue el #3, es decir, el extracto de macroalgas 1.
3 A qu se puede atribuir el efecto inhibitorio del extracto seleccionado en la
pregunta anterior?

Si se dice que el extracto posee un efecto inhibitorio, se puede intuir que este tiene
actividad antimicrobiana. Segn estudios realizados por la UdeA (Universidad de Antioqua),
se le puede atribuir a los extractos metanolicos de algunas macroalgas que se encuentran
en el Caribe colombiano, ese efecto inhibitorio.
- (http://www.redalyc.org/pdf/1698/169818107005.pdf - Estudio de la actividad
antimicrobiana de los extractos alcohlicos de algunas macroalgas del Caribe Colombiano)