Universidad Autnoma de Ciudad Jurez.
Instituto de Ciencias
Biomdicas. Microbiologa I.
Prctica 2. Aislamiento de Bacterias y medios de cultivo.
Jess Alfredo Delmar Franco 155447. Docente: Victoria Eugenia Silva
Acosta.
Introduccin.
Para aislar e identificar una
especie bacteriana del medio y
de otra especie que pueda
confundirse morfolgicamente es
necesario usar medios de
cultivos, ya que nos permiten
diferenciar las caractersticas del
crecimiento de las bacterias y
establecer su identidad segn el
medio de cultivo que se use.
Los microorganismos se
encuentran en muchos
ambientes naturales como el
agua, el suelo, aire, el hombre y
otros seres vivos, alimentos,
entre otros. Haciendo parte de
los diferentes ecosistemas. Por
esto se deben usar los medios de
cultivo adecuados que se
asemejen al ambiente si
queremos posibilitar el
crecimiento de la bacteria.1
Un medio de cultivo est
disenado para posibilitar el
desarrollo y nutricin de las
bacterias por esto cuenta con
una cantidad de sustancias
como: carbono, agua, azufre,
fosforo, nitrgeno, potasio, sodio,
magnesio, entre otros. Tambin
su crecimiento depende de
muchos factores entre ellos: un
pH preferiblemente neutro,
humedad, oxigeno, temperatura,
presin osmtica, todo esto en
condiciones adecuadas.
Los medios de cultivo se
clasifican dependiendo de las
caractersticas que se necesiten
para su ptimo desarrollo los
cuales segn su consistencia
pueden ser:
Lquidos: no contienen agar
y favorecen el crecimiento
bacteriano ya que las
bacterias poseen una gran
libertad de movimiento y al
difundirse por todo el
medio encuentran su
componente nutritivo y
requerimiento de oxigeno
ms ptimo con gran
facilidad, por ejemplo: las
aerobias estrictas crecen
en los primeros 10-15mm
de la superficie del medio,
las microaerofilas
ligeramente por la
superficie del medio, las
anaerobias estrictas en los
10-20mm del fondo y las
facultativas por todo el
medio.
Solidos: su concentracin
de agar es de 1.5% a 2%,
en estos las bacterias
crecen con mayor
dificultad, ya que los
nutrientes pueden
agotarse fcilmente, se
utilizan para ver colonias,
aislar microorganismos,
caractersticas de
crecimiento, color, tamano,
taxonoma, entre otros.
semi-solido: su
concentracin de agar es
de 0.5% y se utiliza para
estudiar el movimiento y
 algunas propiedades
bioqumicas.2
Tambin segn su
aplicacin se usa:
Simples: son apropiados
para la mayora de
microorganismos ya que
poseen requisitos
nutricionales mnimos para
desarrollarse.
Enriquecidos: permiten el
crecimiento de bacterias
difciles de cultivar, puesto
que se anade ciertos
componentes muy ricos en
nutrientes.
Selectivos: estos medios
contienen componentes
que inhiben el crecimiento
de algunas bacterias cuyo
crecimiento no interesa,
permitiendo as aislar una
determinada especie.
Diferenciales: en este se
les adiciona sustancias
para el crecimiento de
determinadas bacterias y
al actuar sobre dichas
sustancias adquieren un
color que las diferencia de
otras colonias.
Enriquecimiento: son
medios lquidos que
favorecen la multiplicacin
de bacterias cuando la
muestra obtenida es pobre.
De acuerdo con su aplicacin los
componentes usuales de los
medios de cultivo son extracto
de carne, peptonas, cloruro de
sodio, y tampones
estabilizadores del pH. Tambin
pueden incluir nutrientes para
medios de enriquecimiento,
como exctracto de levadura,
extracto de glbulos rojos, e
infusin de hgado, corazn o
cerebro.
El medio de cultivo utilizado en la
prctica fue el agar nutritivo, que
est compuesto de extracto de
carne, peptona, NaCl, agar y
agua destilada. Se usa como
medio de cultivo general para la
mayor parte de los
microorganismos y como base
para la preparacin de medios
selectivos y enriquecidos.
Metodologa.

I. TCNICA PARA QUEMAR EL ASA BACTERIOLGICA, EN LA FLAMA.

1. Antes de iniciar la siembra de bacterias, se debe aprender a quemar el asa
bacteriolgica con el fin de no contaminarse con las bacterias.
2. Para ello, introduzca el anillo del asa en el centro de la flama del mechero, donde
hay el mnimo calor, manteniendo el mango inclinado, para que se caliente el anillo
pero sin quemarse, mientras que se pone al rojo vivo solo el resto del alambre;
enseguida lentamente retire el anillo hacia la superficie de la flama, y queme,
esperando que se ponga al rojo vivo. En ese momento retire el anillo fuera de la
flama, pero manteniendo el asa dentro del crculo de esterilidad, creado durante la
combustin del aire; sienta el aire caliente con la mano, dentro de la zona estril. No
agite el asa para no romper el rea de esterilidad y espere un minuto para que se
enfre el alambre.
3. Entre cada siembra de los diferentes medios, y las diferentes bacterias se debe
quemar el asa en la misma forma que se describi anteriormente, para prevenir el
chisporroteo a la cara, de las bacterias que an quedaron en el asa, de la siembra
anterior. Esta tcnica para quemar el asa, servir de proteccin para evitar
contaminarse y debe hacerse un hbito antes y despus de cada siembra.
4. Los recipientes que contienen las bacterias, solo deben abrirse dentro del rea de
esterilidad, para evitar que se contaminen con las bacterias del ambiente

II. AISLAMIENTO DE BACTERIAS POR ESTRA CRUZADA EN MEDIO SLIDO.

1. Para sembrar la bacterias, en el rea de esterilidad del mechero destape el
recipiente que contiene las bacterias y con el asa previemente quemada, obtenga
una asada. Siembre placas por separado, de medio tripticasa-agar-soya y de agar-
nutritivo con cultivos puros de las siguientes bacterias: Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Streptococcus
pyogenes. Para lograrlo, desarrolle el mtodo de siembra de la estra cruzada en
placa, girando la caja al ir rayando hasta formar un pentgono, siguiendo las
indicaciones del profesor, con el fin de ir diluyendo el inculo. Al final de la siembra
las bacterias quedarn separadas unas de otras. Invierta todas las placas, con la
tapa hacia abajo gurdelas en la incubadora a 37C, durante 24 hs, con el fin de
permitir la formacin de colonias.
2. Saque las placas de la incubadora y observe el crecimiento bacteriano.
3. Determine y anote los errores efectuados en la siembra, cuando no se obtuvo la
separacin de las colonias.
4. Note las diferencias entre las colonias, segn la especie bacteriana. Haga una
tabla de caractersticas morfolgicas con los datos observados, para cada bacteria,
tomando en cuenta dimetro aproximado, color, transparencia, brillo, elevacin
pigmentos, bordes regulares o irregulares.

III. CULTIVO EN MEDIO LQUIDO.

1. Siembre las mismas especies de bacterias bacterias, en tubos con medio
lquido de caldo-tripticasa-soya, inoculando una asada de la bacteria. Deje un tubo
control sin inocular.
2. Incube todos los tubos sembrados a 37 oC por 24 hs.
3. Sin agitar los tubos, con cuidado squelos de la incubadora. En cada uno, note
la aparicin de turbidez, de sedimento, de una pelcula superficial, o combinados.
4. Deduzca la causa por la que no se forman colonias en medio lquido y por qu
no se aslan las bacterias. Anote detalladamente sus resultados en todos los
experimentos. Compare sus resultados personales con los de los otros equipos.

IV. CULTIVO EN AGAR INCLINADO

1. Siembre una asada de una bacteria en la superficie del agar inclinado en un
tubo, mediante rayado, iniciando en el fondo, siguiendo las indicaciones del
profesor.

Resultados y discusiones.
 CULTIVO EN CAJA PETRI DE AGAR NUTRITIVO

METODO: Francs
BACTERIA: Staphylococcus aureus
CONSITENCIA: Solido
El agar nutritivo es un medio de cultivo simple utilizado para propsitos
generales como para el aislamiento y recuento de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales.
Se aconseja como medio de cultivo general para la mayor parte de los
microorganismos y como base para la preparacin de otros medios
enriquecidos y selectivos.
El mtodo utilizado fue el francs. En la imagen 1 se pueden observar
algunas colonias separadas.
El crecimiento del Staphylococcus aureus, se puede decir fue porque
este cultivo no es selectivo por tanto la mayora de las bacterias crecen
en l.

Las colonias de la bacteria cultivada presentaron las siguientes

caractersticas:

Forma Circular
Color Blanco
Margen Entero
Elevacin Convexa
Tamano aproximado 1mm
Consistencia Viscosa - Seca
Transmite luz No
Refleja luz No
Olor Humedad

Bibliografa.
1. Garca Gustavo, Gmez Guillermo, Velsquez Luis, Pineda Fabio,
Saldarriaga
Yamill; Manual de Laboratorio de Microbiologa General; Medelln
2. Garca Martos P, Fernndez del Barrio M. T, Paredes Salido F;
Microbiologa Clnica Practica; 2 ed; Universidad Cadiz; 1994.
3. Koneman. Diagnostico Microbiologico/ Microbiological diagnosis:
Texto y Atlas en color; 6 ed; Medica Panamericana; 2006.
4. Rodrguez Cavallini E, Gamboa Coronado M, Hernndez Chavarra
F, Garca Hidalgo J; Bacteriologa General: Principios y Prcticas de
Laboratorio; Universidad de Costa Rica; 1856-2006.
5. Guillem Prats; Microbiologa Clnica; 1 ed; [Internet]; Mdica
Panamericana; 2005.