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ANALISIS

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA INSTRUMENTAL DE


FACULTAD DE INGENIERIA PRODUCTOS
EAP. INGENIERIA AGROINDUSTRIAL AGROINDUSTRIALES

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANA


FACULTAD DE INGENIERIA
E.A.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
TEMA: DETERMINACIN DE AZUCARES REDUCTORES
POR EL MTODO DE DNS.
CURSO: ANLISIS INSTRUMENTAL DE PRODUCTOS
AGROINDUSTRIALES.
DOCENTES: GILBERT RODRGUEZ PAUCAR.
ALUMNOS:
FELIPE RODRGUEZ MITZY.
ISIQUE VALVERDE DAVID.
SILVA NATIVIDAD JUAN JOS

CICLO: Vl
NVO CHIMBOTE - PER
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PRACTICA N 03:
DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES
POR ESPECTROFOTOMETRIA (METODO DNS)

I. INTRODUCCION

Hoy en da la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de


mtodos analticos para la determinacin azcar y alcohol en los
licores y/o bebidas a utilizar como medio de venta. Uno de los
mtodos ms acordes y con mejor resultados en la determinacin de
los azucares con carcter reductor, es el mtodo (DNS), mtodo que
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ha sufrido varias modificaciones a travs de los aos para adecuarse


al anlisis de diferentes materiales y su principal ventaja radica en su
alta sensibilidad y productividad debido a que es un mtodo
espectrofotomtrico; el procedimiento se basa en una reaccin rdox
que ocurre entre el DNS y los azcares reductores presentes en la
muestra, sin embargo a nivel industrial no es recomendable utilizarlo
cuando dicha trata sustancias tales como mieles y caldos de
fermentacin que lo contengan, esto debido a segn estudios
realizados en la materia, a los altos niveles de dispersin. El presente
practica desarrollara el procedimiento respectivo para la
determinacin de azucares reductores a partir de una solucin patrn
de glucosa de concentracin 5g/L, que permitir realizar y ajustar una
curva de calibracin, y una solucin desconocida; por el mtodo del
cido 3,5 dinitro saliclico (DNS).

II. FUNDAMENTO TEORICO

Qu es la glucosa?

La glucosa es un carbohidrato simple, y es la unidad de energa ms


bsica para las plantas y los animales. Estructuralmente, la glucosa es
un azcar de seis carbonos que tiene un aldehdo en un extremo en su
forma lineal (no cclica). Todos los alimentos que comemos
eventualmente se convierten, o son sintetizados, a travs de una serie
de reacciones metablicas, en glucosa, la cual es usada o almacenada
como energa. Las plantas aprovechan la energa del sol y sintetizan
glucosa a travs del proceso de fotosntesis.

Azcares reductores
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La glucosa no es el nico azcar reductor. Cualquier azcar que sea


estructuralmente capaz de donar electrones a una solucin de Benedict
(o un reactivo similar) cae dentro de esta categora. Los azcares
basados en aldehdos que estn en su forma lineal, no cclica, son
capaces de donar electrones y reducir otras molculas. Algunos
azcares estn encerrados en su forma cclica y son estructuralmente
incapaces de abrirse a una forma lineal. Estos son ms comnmente
azcares no reductores. Otros ejemplos de azcares reductores son la
ribosa.

III. OBJETIVOS

Establecer la longitud de onda de mxima absorcin para las


diferentes soluciones coloreadas.
Cuantificar los azucares reductores presentes en alimentos.
Desarrollar el procedimiento respectivo para la determinacin de
azucares reductores a partir de una solucin patrn de glucosa,
que permitir realizar y ajustar una curva de absorbancia, por el
mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico (DNS).

IV. MATERIALES Y METODOS

A) Materiales

Espectrofotmetro UV-Vis NIR JASCO MODELO v-670


Centrifuga digital SIGMA
Materiales de vidrio :Fiolas , pipetas, vasos de precipitados

B) Reactivo DNS :

Tartrato de sodio y potasio


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Hidrxido de sodio
Metabisulfito de sodio
Reactivo DNS

Preparacin del reactivo DNS:

Se mezcla y disuelve en 250 ml de agua destilada 8 gr de NaOH


y 15 gr de tartrato de sodio y potasio.

Posteriormente se agregan 5 gr de cido 3,5 dinotrasalicilico


bajo calentamiento, se afora a 500 ml de agua destilaa y se
almacena a temperatura ambiente protegindolo de la luz .

C) Mtodos :

1. A muestras coloreadas realizarles el barrido de lecturas de


absorbancia desde 400 a 700 nm, luego determinar su mxima
absorbancia

2. Preparar un estndar de 1.0 mg/ml de glucosa realizar las


diluciones para obtener concentraciones de 0.2 , 0.4 , 0.6 , 0.8
y 1.0 mg/ml.

V. CALCULOS Y RESULTADOS

Absorbancia obtenida en dos diferentes equipos:

PRIMER GRUPO SEGUNDO GRUPO


Concentracin
JHON IITA JHON IITA
(mg/ml)
0 0 0 0 0
0,1 0,0342 0,0184 0,0291 0,0074
0,2 0,0707 0,0661 0,0942 0,1053
0,4 0,156 0,2137 0,2664 0,3923
0,6 0,2313 0,3604 0,2888 0,4358
0,8 0,259 0,3747 0,3997 0,6178
1,0 0,4013 0,6309 0,4787 0,7119
1,2 0,492 0,7466 0,5918 0,9372
1,4 0,5405 0,9183 0,6789 1,1140
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Analizando PRIMER GRUPO:

Concentrac PRIMER
in GRUPO
(mg/ml) JHON IITA
0 0 0
0,1 0,034 0,018
2 4
0,2 0,070 0,066
7 1
0,4 0,156 0,213
7
0,6 0,231 0,360
3 4
0,8 0,259 0,374
7
1,0 0,401 0,630
3 9
1,2 0,492 0,746
GRAFICA N 01 6
1,4 0,540 0,918
5 3
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HALLANDO CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES:

NARANJA

Jugo Agua

0.5 ml 50 ml
1 ml DNS

1 ml
5 ml agua

Preparacin de muestra

BRIX = 12

Suponiendo:

100 ml 12000 mg

0.5 ml x

0.5 ml 12000 mg=100 ml x

x=1.2

Se encuentra en el rango requerido

JHON:
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Lectura de absorbancia: 0.2147


Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.3953 X 0.0075

A=0.3953C0.0075

C=0.5621
Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g
Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.5621
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.5621=10.506 x
ml ml
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x=5.35 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.3379
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.6603 X 0.0483

A=0.6603C0.0483

C=0. 5849

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.5849
ml
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mg
100 x
ml

mg mg
100 0.57=10.506 x
ml ml

x=5.57 de azucares reductores

PIA

Jugo Agua

0.5 ml 50 ml
1 ml DNS

1 ml
5 ml agua

Preparacin de muestra

BRIX = 12.2

Suponiendo:

100 ml 12200 mg

0.5 ml x
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0.5 ml 12200 mg=100 ml x

x=1.22

Se encuentra en el rango requerido

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.1396
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.3953 X 0.0075

A=0.3953C0.0075

C=0. 3721
Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g
Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:


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mg
10.484 0.3721
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.3721=10.484 x
ml ml

x=3.55 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.2269
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.6603 X 0.0483

A=0.6603C0.0483

C=0.4168

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:

0.5242 g 1000 mg

50 ml g
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mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.4168
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.416=10.484 x
ml ml

x=3.98 de azucares reductores

CARAMBOLA

Jugo Agua

1 ml 50 ml
1 ml DNS

1 ml
5 ml agua

Preparacin de muestra
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BRIX = 12.2

Suponiendo:

100 ml 12200 mg

0.5 ml x

0.5 ml 12200 mg=100 ml x

x=1.22

Se encuentra en el rango requerido

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2945
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.3953 X 0.0075

A=0.3953C0.0075

C=0.7640
Muestra: 1 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g
Concentracin de la fiola:
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1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 ml 0.7640

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.7640=20.4 x
ml ml

x=3.75 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.4785
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.6603 X 0.0483

A=0.6603C0.0483

C=0.7978

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml
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g
1 ml 1.020
ml

1.020 g
Concentracin de la fiola:

1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 0.7978
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.7840=20.4 x
ml ml

x=3.91 de azucares reductores

Datos corregidos: Concentrac PRIMER


in GRUPO
(mg/ml) JHON IITA
0,1 0,034 0,018
2 4
0,2 0,070 0,066
7 1
0,4 0,213
0,156 7
0,6 0,231 0,360
3 4
0,8 0,3 0,48
1,0 0,401 0,630
3 9
1,2 0,746
0,492 6
1,4 0,540 0,918
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Abs. VS. Concentracion


1
0.9
f(x) = 0.69x - 0.06
0.8
R = 1
0.7
John
0.6
Linear (John)
ABSORBANCIA 0.5 f(x) = 0.4x - 0.01
IITA
0.4 R = 1
Linear (IITA)
0.3
0.2
0.1
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6

CONCENTRACION

GRAFICA N 02

HALLANDO CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES:

NARANJA

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2147
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.401 X 0.0075
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A=0.401C0.0075

C=0 .5541

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.5541
ml

mg
100 x
ml
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mg mg
100 0.5541=10.506 x
ml ml

x=5.27 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.3379
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.6884 X0.0612

A=0.6884 C0.0612

C=0. 5798

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g
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mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.5798
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.5798=10.506 x
ml ml

x=5.52 de azucares reductores

PIA

JHON:
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Lectura de absorbancia: 0.1396


Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.401 X 0.0075

A=0.401C0.0075

C=0. 3668

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.3668
ml
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mg
100 x
ml

mg mg
100 0.3721=10.484 x
ml ml

x=3.50 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.2269

Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.6884 x 0.0612

A=0.6884 C0.0612

C=0.4185

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:
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0.5242 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.4185
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.4185=10.484 x
ml ml

x=3.99 de azucares reductores

CARAMBOLA
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JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2945
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.401 X 0.0075

A=0.401C0.0075

C=0.7531

Muestra: 1 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g

Concentracin de la fiola:

1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:


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mg
20.4 ml 0.7531

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.7531=20.4 x
ml ml

x=3.69 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.4785

Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.6884 x 0.0612

A=0.6884 C0.0612

C=0.7840

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g
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Concentracin de la fiola:

1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 0.7840
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.7840=20.4 x
ml ml

x=3.84 de azucares reductores


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Analizando SEGUNDO GRUPO:

SEGUNDO
Concentracin GRUPO
(mg/ml) JHON IITA
0 0 0
0,1 0,0291 0,0074
0,2 0,0942 0,1053
0,4 0,2664 0,3923
0,6 0,2888 0,4358
0,8 0,3997 0,6178
1,0 0,4787 0,7119
1,2 0,5918 0,9372
1,4 0,6789 1,1140
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Abs. Vs. Concentracion


1.2

1.0 f(x) = 0.8x - 0.02


R = 0.99
0.8

JHON f(x)(JHON)
Linear = 0.48x + 0.01INSTITUTO Linear (INSTITUTO)
ABSORBANCIA 0.6
R = 0.99
0.4

0.2

0.0
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6

CONCENTRACION

GRAFICA N 03

HALLANDO CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES:

NARANJA

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2147
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.4849 X + 0.0071

A=0.4849C +0.0071

C=0 .4281

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:
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0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.4281
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.4281=10.506 x
ml ml

x=4.08 de azucares reductores

IITA:
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Lectura de absorbancia: 0.3379


Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.7968 X 0.0244

A=0.7968C0.0244

C=0. 4547

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.4547
ml
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mg
100 x
ml

mg mg
100 0.4547=10.506 x
ml ml

x=4.33 de azucares reductores

PIA

JHON:

Lectura de absorbancia: 0.1396


Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.4849 X + 0.0071

A=0.4849C +0.0071
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C=0. 2733

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.3668
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.2733=10.484 x
ml ml
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x=2.61 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.2269

Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.7968 X 0.0244

A=0.79680.0244

C=0.3154

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:

0.5242 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml
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ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.3154
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.3154=10.484 x
ml ml

x=3.01 de azucares reductores

CARAMBOLA

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2945
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.4849 X + 0.0071
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A=0.4849C +0.0071

C=0.5927

Muestra: 1 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g

Concentracin de la fiola:

1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 ml 0.5927

mg
100 x
ml
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mg mg
100 0.5927=20.4 x
ml ml

x=2.91 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.4785

Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.7968 X 0.0244

A=0.7968C0.0244

C=0.6311

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g

Concentracin de la fiola:

1.020 g 1000 mg

50 ml g
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mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 0.6311
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.6311=20.4 x
ml ml

x=3.09 de azucares reduct ores

Datos corregidos:
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Concentrac PRIMER
in GRUPO
(mg/ml) JHON IITA
0,1 0,029 0,007
1 4
0,2 0,094 0,105
2 3
0,4 0,200 0,300
0 0
0,6 0,288 0,435
8 8
0,8 0,400 0,617
0 8
1,0 0,478 0,760
7 0
1,2 0,591 0,937
8 2
1,4 0,678 1,114
9 0

Abs. VS. Concentracion


1.2

f(x) = 0.84x - 0.06


1.0
R = 1

0.8 JHON
Linear (JHON)
0.6 f(x) = 0.5x - 0.01
ABSORBANCIA INSTITUTO
R = 1
Linear (INSTITUTO)
0.4

0.2

0.0
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6

CONCENTRACION
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GRAFICA N 04

HALLANDO CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES:

NARANJA

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2147
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.4951 X 0.0076

A=0.4951C0.0076

C=0 .4490

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml
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ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.4490
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.4490=10.506 x
ml ml

x=4.27 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.3379
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.8355 X 0.0606

A=0.8355C0.0606

C=0. 4770

Muestra: 0.5 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml
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g
0.5 ml 1.0506
ml

0.5253 g

Concentracin de la fiola:

0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.506
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.506 0.4770
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.4770=10.506 x
ml ml

x=4.54 de azucares reductores


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PIA

JHON:

Lectura de absorbancia: 0.1396


Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.4951 X 0.0076

A=0.4951C0.0076

C=0. 2973

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:
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0.5253 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.2973
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.2973=10.484 x
ml ml

x=2.84 de azucares reduct ores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.2269

Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.8355 X 0.0606

A=0.8355C0.0606

C=0.3441
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Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

0.5 ml

g
0.5 ml 1.0484
ml

0.5242 g

Concentracin de la fiola:

0.5242 g 1000 mg

50 ml g

mg
10.484
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
10.484 0.3441
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.3441=10.484 x
ml ml

x=3.28 de azucares reductores


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CARAMBOLA

JHON:
Lectura de absorbancia: 0.2945
Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.4951 X 0.0076

A=0.4951C0.0076

C=0.6101

Muestra: 1 ml
Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g

Concentracin de la fiola:
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1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 ml 0.6101

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.6101=20.4 x
ml ml

x=2.99 de azucares reductores

IITA:
Lectura de absorbancia: 0.4785

Para hallar la concentracin reemplazamos en la frmula:

Y =0.8355 X 0.0606
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A=0.8355C0.0606

C=0.6452

Muestra: 0.5 ml

Para saber cunto equivale en gramos:

1 ml

g
1 ml 1.020
ml

1.020 g

Concentracin de la fiola:

1.020 g 1000 mg

50 ml g

mg
20.4
ml

ENTONCES LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SERA:

mg
20.4 0.6452
ml

mg
100 x
ml

mg mg
100 0.6452=20.4 x
ml ml

x=3.16 de azucares reductores


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COMPARANDO RESULTADOS:
PORCENTAJE DE AZUCARES REDUCTORES
PRIMER GRUPO SEGUNDO GRUPO
MUESTRA DATOS DATOS DATOS DATOS
OBTENIDOS CORREGIDO OBTENIDOS CORREGIDO
S S
JHON IITA JHON IITA JHON IITA JHON IITA
NARANJA 5,35 5,57 5,27 5,52 4,08 4,33 4,27 4,54
PIA 3,55 3,98 3,5 3,99 2,61 3,01 2,84 3,28
CARAMBOL 3,75 3,91 3,69 3,84 2,91 3,09 2,99 3,16
A

VI. DISCUSIONES

Cuantificacin de azcares totales

El contenido de azcares totales se determin aplicando el mtodo


DNS utilizando glucosa como estndar (10-70 mg/mL). En la
graficas puede verse la curva patrn construida para cuantificar
los azcares totales y en la Tablas ah los resultados para cada
muestra. Estos resultados indican que la menor concentracin de
azcares totales se encuentra en la carambola, la pia tiene una
concentracin ms elevada y la mayor concentracin se presenta
en la naranja.

En la misma tabla se presentan las concentraciones de los


azcares no reductores. Los resultados para azcares no
reductores coinciden en que el mayor contenido se encuentra en
naranja y el menor en la carambola, esto resulta lgico, puesto
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que la mayor concentracin de azcares reductores se encuentra


en la naranja (5.2-16%) y la menor en las carambola (3,3 a 16,1%)
.El mayor contenido para la naranja posiblemente se deba a la
hidrlisis cida de los polisacridos ocurrida durante la coccin la
cual libera otros azcares ms simples .Los cuales contienen
carbohidratos complejos que se degradan por la accin de la
acidez del jugo y del calor en el cocimiento En esta etapa es
importante controlar la temperatura, si es ms baja que la
necesaria, el polisacrido no se degradar y si es muy alta ocurrir
la caramelizaran de los azcares, en todo caso se tendr menor
cantidad de azcares .

El en otro lado el contenido promedio de azcares reductores


presentes en la pia, vara entre (20 - 30) %. Por ejemplo cuando
una pia tiene un contenido menor a 20% es considerado de baja
calidad y si presenta entre el 25 y 30% es de buena calidad.

Las curvas de calibracin mostraron coeficientes de correlacin


muy cercanos a la unidad para eso prepararon soluciones patrones
individuales con los azcares para as determinar el tiempo de
retencin de cada azcar, utilizando las mismas condiciones
utilizadas en la mezcla e inyectando dos veces para ver la
reproducibilidad del mtodo.
DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES POR
LATCNICA DE MILLER (DNS). Bibin L. M. E., Rojas R. M. A.

El DNS (cido dinitrosaliclico), es un reactivo que tiene la


capacidad de oxidar a los azcares reductores dando resultados
colorimtricos que se pueden medir con una longitud de onda de
540nm. Para nuestra prctica determinamos la curva de
calibracin con una longitud de onda de 540, y contrastando con
la bibliografa decimos que el rango de longitud de onda fue la
adecuada.

Los azcares reductores poseen un grupo carbonilo libre formando


un grupo hemiacetal que le confiere la caracterstica de poder
reaccionar con otros compuestos. En este caso, reaccion con el
reactivo DNS, quien hidroliza los polisacridos presentes en la
muestra de naraja.
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Nos damos cuenta que el porcentaje de Hidratos de Carbono o


Carbohidratos en la naranja es de 8.6g de 100g de producto
comestible; pero, en el caso de glucosa es 2.4g de 100g de
producto comestible.

Notamos ahora, que en la prctica nosotros hemos determinado


Azcares Reductores en este caso de la naranja, pero recordemos
que azcares reductores encierra grupos de glucosa, fructosa; por
ende no solo determinamos glucosa sino tambin fructosa, y este
resultado se expres en conjunto.

SENSIBILIDAD:

Un mtodo analtico ser ms sensible cuanto mayor sea la


variacin de la seal analtica y para una variacin de la
concentracin del analito x dada.
La sensibilidad (S) de un mtodo viene dada por la pendiente de la
curva de calibrado. En este caso tomando las dos muestras
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Datos reales I grupo Datos corregidos I grupo
y = 0.6603x - 0.0483 y = 0.6884x - 0.0612
R = 0.982 R = 0.9987
y = 0.3953x - 0.0075 y = 0.401x - 0.0075
R = 0.9892 R = 0.9969

Datos reales II grupo Datos corregidos II grupo


y = 0.7968x - 0.0244 y = 0.8355x - 0.0606
R = 0.9861 R = 0.9988
y = 0.4849x + 0.0071
R = 0.9885 y = 0.4951x - 0.0076
R = 0.9986

Como observamos en las ecuaciones q tenemos de los dos


grupos en los datos reales y corregidos observamos que no hay
tanta diferencia en el R pero si nos damos cuenta en las
ecuaciones encontramos que los datos reales del primer grupo
tienden a tener una sensibilidad mayor por la diferencia y con x
y existira una variacin de concentracin del analito adems los
ms sensible seran los datos analizados por el instituto (son los
q estn remarcados)

VII. CONCLUSIONES
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En nuestra formacin como ingenieros agroindustriales


irremediablemente llegaremos a enfrentarnos con el montaje de
tcnicas que nos permiten analizar las muestras resultantes de
los experimentos que realizaremos y as generar las conclusiones
adecuadas con respecto a una de las tcnicas analticas que
estamos estudiando como por ejemplo ahora la tcnica
desarrollada por Miller (1959) o tambin conocido como el mtodo
de DNS.

Al final de la prctica podemos decir que esta tcnica sirve para


cuantificar los azucares reductores que se dan en un proceso de
fermentacin o para cuantificar los productos de una reaccin
enzimtica.

Se prepar una curva patrn de glucosa con el 3,5-dinitrosalcilico


(3,5-DNS), pero se tuvo inconvenientes en los resultados, ya que
estos no concuerdan con bibliografa ya que Segn la ley de
Lambert y Beer la absorbancia directamente proporcional a la
concentracin del material que absorbe la luz, al que
generalmente conocemos como analito. Siempre que se utiliza un
mtodo espectrofotomtrico para cuantificar la concentracin de
analito presente en una muestra problema es necesario relacionar
la concentracin de dicho analito con la cantidad de luz que
absorbe del haz que le incide.
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VIII. CUESTIONARIO

1. Cules son los mtodos que determinan


cualitativamente los azucares reductores?
descrbalos.

Determinacin cuantitativa de azcares reductores y totales


(mtodo de Lane y Eynon).

Existen diversos mtodos de cuantificacin de carbohidratos basados en


la capacidad reductora de los azcares que tienen libre el grupo
carbonilo. Estos carbohidratos son capaces de reducir elementos como
el cobre (Cu+2), el hierro (Fe+3) o el yodo (I0). En el caso especfico del
cobre, este es reducido desde Cu+2 a Cu+1. En este sentido, en el
mtodo de Lane y Eynon (1923) se hace reaccionar sulfato cprico con
azcar reductor en medio alcalino, formndose oxido cuproso, el cual
forma un precipitado rojo ladrillo. Este mtodo utiliza azul de metileno
como indicador, el cual es decolorado una vez que todo el cobre ha sido
reducido, lo que indica el fin de la titulacin.

Mtodos espectrofotomtricos:

El trmino espectrofotometra se refiere al uso de la luz para medir las


concentraciones de sustancias qumicas.
Cuando una molcula absorbe un fotn, su energa se incrementa. Se
dice que pasa a un estado excitado. Si por el contrario emite un fotn, su
energa disminuye. El estado de menor energa de una molcula se
denomina estado basal o fundamental.
En la siguiente figura se describe un esquema bsico de un
espectrofotmetro:
Monocromador - Celda con el analito - Detector de luz Fuente de luz -
(Seleccin de longitud de onda)
Una fuente de luz se hace pasar por un monocromador. ste permite
seleccionar un haz de luz con una nica longitud de onda.
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1.1. Reacciones de determinacin de furfural e


hidroximetilfurfural
Las pentosas y hexosas (tanto aldosas como cetosas) en presencia
de cidos minerales (p.ej., cido sulfrico) y a temperaturas
elevadas sufren procesos de deshidratacin originando furfural
(derivados de pentosas) o hidroximetilfurfural (derivados de
hexosas), tal y como se indica en la Fig.1.

Fig. 1. Formacin de furfurales. Los


monosacridos en caliente y medio muy
cido, sufren una deshidratacin que
conduce a la formacin de un anillo
pentagonal de furfural o
hidroximetilfurfural, segn se parta de
pentosas o hexosas. Los oligo- y
polisacridos tambin sufren estas
reacciones, ya que el medio cido favorece
la hidrlisis previa del enlace glicosdico.
Los furfurales formados se combinan
fcilmente con diversos fenoles y aminas,
dando reacciones coloreadas.

Estos compuestos, furfural o hidroximetilfurfural, reaccionan con


compuestos aromticos (fenoles, aminas cclicas o heterociclos) dando
productos coloreados. Aunque son pruebas especficas de
monosacridos, los oligo y polisacridos tambin dan positivo, ya que en
medio cido se hidroliza el enlace glicosdico. Se disponen de diferentes
tcnicas, dependiendo del reactivo utilizado (ensayo de Molish, con -
naftol; ensayo de la antrona; ensayo de Bial, con orcinol; ensayo de
Seliwanoff, con resorcinol). En la presente prctica se llevar a cabo la
determinacin cualitativa de azcares mediante los siguientes ensayos:
Molish, Bial y Seliwanoff (Fig. 2)
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1.1.1.- Ensayo de Molish: Reaccin de furfural e hidroximetil-furfural


con -naftol (Fig. 2), dando lugar a derivados de color prpura. Es una
prueba general de azcares.

1.1.2.- Ensayo de
Bial: Reaccin del furfural e hidroximetil-furfural con orcinol (Fig. 2) en
medio con HCl, dando lugar a derivados de color azul. Es una prueba
especfica de pentosas.

1.1.3.- Ensayo de Seliwanoff: Reaccin del furfural e hidroximetil-


furfural con resorcinol (Fig. 2), dando lugar a derivados de color rosa-
rojo. Es una prueba especfica de hexosas. Las cetosas en medio cido
se deshidratan ms rpidamente que las aldosas, por lo que ambos
grupos pueden diferenciarse en funcin del tiempo que tarda en
aparecer el producto coloreado.
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Fig. 2. Reacciones coloreadas de los furfurales con -naftol


(prueba de Molish), resorcinol (prueba de Selliwanoff) y orcinol (prueba
de Bial).

1.2. Identificacin de azcares reductores por el ensayo de


Fehling

Los carbohidratos que presentan grupos aldehdios libres o en forma


hemiacetlica (grupos aldehdos potenciales) no bloqueados (por
ejemplo formando parte de un enlace glicosdico) pueden ser oxidados
por diferentes reactivos, por lo que se les denomina azcares
reductores.

Fig. 3. Reaccin de oxidacin de azcares por iones cpricos


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Negativo: Aldehidos aromticos y cetonas


Positivo Aldehdos alifticos y -hidroxialdehidos

Un ejemplo tpico de azcares reductores seran la glucosa y la maltosa,


y de azcares no reductores, el disacrido sacarosa (O--D-
fructofuranosil-(2-1)--D-glucopiransido). Las cetosas, que no son
azcares reductores, sufren, sin embargo, reacciones de oxidacin
tpicas de los aldehdos; para ello necesitan un medio bsico, ya que a
valores altos de pH se produce una isomerizacin a la correspondiente
aldosa. Hay diferentes mtodos de determinacin de azcares
reductores (Fehling, Benedict, Barfoed, Nelson-Somogyi, etc.). En todos
2+
ellos, el azcar reductor es oxidado por el catin cprico (Cu ) en
medio alcalino, con formacin de xido cuproso insoluble, lo que da la
2+
tpica coloracin rojizo-amarillenta (Fig. 3). Los iones Cu se pueden
mantener en solucin, formando complejos coloreados con tartratos y
citratos, lo que permite la determinacin cuantitativa de azcares
reductores.

Fuente: Reacciones coloreadas para la determinacin cualitativa


de azcares.

2. Explique por qu la sacarosa y el almidn no son


reductores

El caso del almidn es distinto si bien s posee carbonos


anomricos libres capaces de oxidarse, hay muy pocos en
comparacin a la cantidad de unidades de monosacridos que
componen el almidn. es decir, solo los de los extremos de la larga
cadena que compone al almidn, puede oxidarse y calcula que una
cadena de almidn (que a su vez tiene ramificaciones) tiene ms
de 10000 residuos de monosacridos, entonces, si bien el almidn
puede oxidarse, su poder reductor es prcticamente nulo, debido
al muy bajo rendimiento que posee
Aclaraciones: el carbono anomrico es el carbono nmero 2 en las
aldosas, es el carbono que tiene los sustituyentes (OHy H) aptos a
oxidarse la sacarosa est formada por la unin glicosidica entre los
carbonos anomricos de una unidad de glucosa y otra de fructosa
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3. Qu funcin cumple el blanco en la medicin de


absorbancia?

El blanco nos sirve para calibrar el equipo (espectrofotmetro). El


blanco utilizado es el agua destilada, con la cual calibramos el
equipo, reportndonos un valor muy prximo a cero, pero que en
la teora un valor de cero

4. Diferencie entre el patrn interno y patrn externo.

El patrn interno es aquel que se emplea tcnicas en las que la


seal depende de factores poco reproducibles y que pueden variar
en el curso de anlisis. La variable analtica es el cociente de
seales del analito y del patrn interno.

El patrn interno es una sustancia que no est presente en la


muestra a analizar, a diferencia del externo el cual si se encuentra
presente, cabe recalcar que el patrn interno tiene un
comportamiento similar al del analito y que no interfiere en la
determinacin de este.

IX. BIBLIOGRAFIA

http://es.scribd.com/doc/14424586/DNS-una-tecnica-para-la-
cuantificacion-de-azucares-reductores
http://www.academia.edu/4403544/DETERMINACION_DE_AZUCARE
S_REDUCTORES_METODO_DNS
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/31%20INVERTASA%20ENSAYO.pdf
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/6428/09CAPITULO4.pdf
;jsessionid=FF8EF7F9A4807B114B48C1A44D0FCCD2.tdx2?
sequence=9
ANALISIS
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA INSTRUMENTAL DE
FACULTAD DE INGENIERIA PRODUCTOS
EAP. INGENIERIA AGROINDUSTRIAL AGROINDUSTRIALES

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