QUIMICA ORGNICA

DEDICATORIA

A DIOS
Por la sabidura e inteligencia que me da da a da.
Por iluminarme durante este trabajo y por
permitirme finalizarlo con xito.
A NUESTROS PADRES
Por su apoyo incondicional que me brindan y por
estar siempre a nuestro lado. A todas aquellas
personas que leen hoy stas pginas y premian el
esfuerzo de este trabajo.
AL RONALD A. GUTIRREZ MORENO
Por el apoyo que nos brinda y por su oportuna,
precisa e instruida orientacin para el logro del
presente trabajo.

AGRADECIMIENTO

Agradecemos en primer lugar, al ser Supremo, nico

dueo de todo saber y verdad, por iluminarnos
durante este trabajo y por permitirnos finalizarlo con
xito; y, en segundo lugar, pero no menos
importante, a nuestros queridos padres, por su
apoyo incondicional y el esfuerzo diario que realizan
por brindarnos una buena educacin.
A todas aquellas personas con sed de conocimiento
y deseos de superacin, que leen hoy estas pginas.

INDICE

Contenido
RESUMEN...................................................................................................... 6
ABSTRACT.................................................................................................... 7
INTRODUCCIN............................................................................................ 8
CAPITULO I................................................................................................... 9
DEFINICION................................................................................................ 11
CAPITULO II................................................................................................ 12
ESTRUCTURA............................................................................................. 12
CAPITULO III............................................................................................... 22
NOMENCLATURA DE NUCLESIDOS Y NUCLETIDOS..........................22
CAPITULO III............................................................................................... 26
PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS..........26
CAPITULO IV............................................................................................... 35
OBTENCION DE LOS ACIDOS NUCLEICOS...............................................35
MTODO DE EXTRACCIN DE ADN CASERO......................................38
OBJETIVOS:................................................................................................ 38
MATERIALES:............................................................................................. 38
PROCEDIMIENTO....................................................................................... 39
RESULTADOS................................................................................................ 41
CONCLUSIONES......................................................................................... 42
RECOMENDACIONES................................................................................. 43
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS..............................................................43

RESUMEN
El presente trabajo tiene por objetivo estudiar los cidos nucleicos. Los
cidos nucleicos constituyen una familia de biomolculas relacionadas
funcionalmente con los mecanismos de conservacin, transmisin y
expresin de la informacin gentica. Existen dos tipos de cidos nucleicos,
los cidos ribonucleicos (ARN) y los cidos desoxiribonucleicos (ADN).
Los ARN estn formados por una cadena de ribonucletidos que contiene
como bases nitrogenadas principales: la adenina, la guanina, la citosina y el
uracilo. La cadena se pliega sobre s misma originando una estructura
estabilizada por puentes de hidrgeno entre las bases nitrogenadas que es
su estructura secundaria, y por interacciones entre las bases y el eje
covalente ribosa fosfato adquieren la estructura tridimensional conocida
como estructura secundaria. Los tres tipos principales de ARN, el ribosomal,
de transferencia y mensajero, participan en la sntesis de protenas o en los
mecanismos de expresin de la informacin gentica.
Los ADN estn formados por dos hebras de desoxinucletidos cuyas bases
principales son la adenina, guanina, citosina y timina. Estas hebras se
enfrentan una a la otra en forma antiparalela y esta estructura se estabiliza
por la formacin de puentes de hidrgeno entre las bases nitrogenadas.
Segn el modelo de Watson y Crick solo existen dos pares de bases, el que
forma la adenina con la timina unidas por dos puentes de hidrgeno y el de
la guanina con la citosina unidas por tres puentes. La secuencia de bases de
una hebra es complementaria a la de la otra hebra y en ella se conserva la
informacin gentica.
La replicacin del ADN es el fundamento molecular de la transmisin de
informacin gentica. Es un proceso complejo que se desarrolla en varias
etapas del ciclo celular. Durante la etapa S el complejo prereplicativo se
activa, las hebras del ADN se separan y las polimerasas copian las dos
hebras produciendo dos molculas idnticas a aquella que les dio origen.
La expresin de la informacin gentica consta de dos etapas: la
transcripcin y la traduccin. En la transcripcin la informacin contenida en
un segmento del ADN (un gen) es copiada en una molcula de ARNm por
accin de la ARN polimerasa II. El ARNm es transportado del ncleo al
citoplasma donde se une a los ribosomas y dirige la sntesis de protenas. El
uso del cdigo gentico permite traducir la secuencia de bases del ARNm en
la secuencia de aminocidos de las protenas. Este proceso de expresin de
la informacin gentica tiene varios niveles de regulacin que van desde la
seleccin de la zona de cromatina que debe transcribirse, hasta la
traduccin.
Existen varios mecanismos que conservan la informacin gentica: la
estructura del ADN, su asociacin con protenas, su localizacin nuclear, etc.
Cuando los daos al ADN no son reparados se originan mutaciones y estas
pueden ser causa de las denominadas enfermedades moleculares. La

drepanocitosis constituye un modelo valioso para el estudio de estas

enfermedades pues en ella se puede seguir el mecanismo patognico desde
la mutacin del gen hasta los sntomas y signos clnicos.
La gentica molecular ha aportado y puede seguir aportando aplicaciones
que contribuyen al mejoramiento de la salud del hombre y la calidad de su
ambiente.

ABSTRACT
Nucleic acids are a family of functionally related biomolecules
conservation mechanisms, transmission and expression of genetic
information. There are two types of nucleic acids, ribonucleic acids
(RNA) and deoxyribonucleic acid the (DNA). RNAs are formed by a
chain of ribonucleotides containing as main nitrogenous bases:
adenine guanine, cytosine and uracil. The chain folds upon itself
resulting in a stabilized by hydrogen bonds between the nitrogenous
bases is their secondary structure, and interactions between the
bases and the axis ribose phosphate covalent acquire the threedimensional structure known as secondary structure structure. The
three main types of RNA, ribosomal, messenger and transfer, involved
in protein synthesis or expression mechanisms of genetic information.
DNAs are formed by two strands of deoxynucleotides whose main
bases are adenine, guanine, cytosine and thymine. These strands
each other face in antiparallel and this structure is stabilized by the
formation of hydrogen bonds between nucleobases. According to the
Watson-Crick model there are only two base pairs, which form
adenine with thymine linked by two hydrogen bonds and guanine with
cytosine linked by three bridges. The base sequence of one strand is
complementary to the other strand and the genetic information in it is
preserved.
DNA replication is the molecular basis for the transmission of genetic
information. It is a complex process that takes place in several stages
of the cell cycle. During step S the prereplicativo complex is activated,
the DNA strands are separated and polymerases copy the two strands
producing two identical to that which gave rise molecules.
The expression of genetic information consists of two stages:
transcription and translation. Transcription information in a segment
of DNA (gene) is copied into an mRNA molecule by the action of RNA
polymerase II. MRNA is transported from the nucleus to the cytoplasm
where it binds to ribosomes and directs protein synthesis. Using the
genetic code for translating the base sequence of the mRNA in the
amino acid sequence of proteins. This process of expression of

genetic information has several levels of regulation ranging from the

selection of the area to be transcribed chromatin, to the translation.
There are several mechanisms that preserve genetic information:
DNA structure, its association with proteins, its nuclear localization,
etc.
When DNA damage are not repaired mutations originate and these
can cause the so-called molecular diseases. Sickle cell disease is a
valuable model for the study of these diseases because it can follow
the pathogenic mechanism from gene mutation to the clinical
symptoms and signs.
Molecular genetics has made and can continue to provide applications
that contribute to improving human health and quality of their
environment.

INTRODUCCIN
Los seres vivos realizan una serie de actividades que les permiten
vivir y adaptarse al medio. Se reproduce, mediante procedimientos
diferentes, nuevos seres parecidos a ellos se alimentan para
conseguir la energa suficiente para crecer, moverse y vivir y
reaccionan ante las informaciones que reciben del entorno que les
rodea.
Las partculas subatmicas que constituyen un tomo (protn,
neutrn y electrn) se unen y forman, por ejemplo: hidrogeno, platino,
C, H, O, N, etc. Al unirse los tomos dan origen a las molculas,
existen molculas orgnicas e inorgnicas. Las molculas orgnicas
contienen carbono y las inorgnicas el agua o el oxgeno.
Despus de esto tenemos el nivel macromolecular la cual est
constituida por varias molculas que pueden ser similares entre s o
no. Como:
POLISACRIDOS estn constituidos por monosacridos unidos en
cadenas largas.
LPIDOS son molculas orgnicas hidrfobas. Incluyen las grasas y los
aceites, los fosfolpidos, los glucolpidos, las ceras y el colesterol y
otros esteroides.
FOSFOLPIDOS son los principales componentes estructurales de las
membranas celulares.
PROTENAS son molculas muy grandes compuestas de cadenas
largas de aminocidos (poli peptdica). Las cadenas poli peptdicas se
ordenan en un nuevo nivel: la estructura terciaria o cuaternaria de la
molcula de protena completa.

NUCLETIDOS son molculas complejas formadas por un grupo

fosfato, un azcar de 5 carbonos y una base nitrogenada.
Son los bloques estructurales de los cidos desoxirribonucleico (ADN)
y ribonucleico (ARN), que transmiten y traducen la informacin
gentica.
Al unirse todas las macromolculas se forma el nivel supramolecular o
subcelular, el cual est formado por estructuras dentro de una clula
que desempea una funcin especfica llamados organelos como
mitocondrias, ribosomas, lisosomas, aparato de Golgi, etc.
Y esto da origen a la clula, la cual es la ms pequea unidad
estructural de los seres vivos capaz de funcionar
independientemente.
OBJETIVO GENERAL:
Estudiar los cidos nucleicos mediante la investigacin de los mismos
para conocer a profundidad su estructura e importancia en nuestro
cuerpo.
OBJETIVOS ESPECFICOS:
Recocer e identificar los tipos de cidos nucleicos y conocer
principales diferencias existentes entre estas molculas. Conocer
principales funciones de los cidos nucleicos y su importancia
organismos eucariotas y procariotas haciendo nfasis en
diferencias entre los cidos nucleicos de ambos organismos.

las
las
en
las

CAPITULO I
HISTORIA
En 1869 el qumico suizo Johann Friedrich Miescher (1844-1895) asla
del ncleo celular de los leucocitos una sustancia nitrogenada, rica
en fosfatos y soluble en lcalis, pero no en cidos, a la que llama
Nuclena.
Hasta donde sabemos, Miescher crea que la funcin de la nuclena
era almacenar fosfato.
Treinta aos despus, en 1899, el qumico alemn Richard Altmann
(1852-1901) desarrolla mtodos para obtener la nuclena libre de
protenas y propone el cambio del nombre Nuclena por cido
Nucleico.
Durante la dcada de 1920, el qumico Phoebus Aaron Theodor
Levene (1869-1940) analiza los componentes de la molcula de cido
desoxirribonucleico; encuentra que contienen cuatro bases
nitrogenadas Adenina, Guanina, Citosina y Timina; el azcar
Desoxirribosa y Fosfato.

Correctamente, dedujo que los nucletidos eran las unidades

estructurales del DNA y que a su vez estaban formados por una base
y fosfato, ambos unidos al azcar. Desafortunadamente, en forma
equivocada, concluy que los cuatro nucletidos se encontraban en
cantidades iguales y postul la Teora del Tetra-Nucletido como
unidad bsica del DNA, considerndolo una molcula repetitiva, sin
capacidad para ser el material gentico.
En 1928, el microbilogo ingls Frederick Griffith (? -1940) descubre
la transformacin de las cepas no patgenas de Streptococcus
pneumoniae usando restos de cepas patgenas muertas, y propone la
existencia de un Principio Transformador, responsable del cambio,
pero no hace ninguna sugerencia respecto de la naturaleza qumica
del mismo.
En 1944, los investigadores Oswald Theodore Avery (1877-1955) Colin
M. MacLeod y Maclyn McCarty (1912-2003) mediante la destruccin
secuencial de las macromolculas de las clulas de la cepa patgene
de S. neumonie, aportan pruebas de que el DNA es el Principio
Transformador de Griffith. A pesar de lo cual, para muchos
investigadores, an permaneca la duda sobre la naturaleza qumica
del material gentico.
Entre 1950 y 1953 el bioqumico austriaco Erwin Chargaff (19051997) y sus colaboradores descubren la equivalencia de bases en el
DNA. [A] = [T], [G] = [C], [Purina]/[Pirimidina] = 1 y [A+T]/[G+C]
caracterstico de especie. Sus descubrimientos destruyen la teora del
tetra nucletido y aportan informacin importante sobre la
estructura del DNA, en especial la variacin de composicin entre
especies, que apoya el papel del DNA como material gentico,
aunque no constituye evidencia definitiva.
1951. Rosalind Elsie Franklin (1920-1958) descubre las estructuras
helicoidales del DNA conocidas como DNA-A y DNA-B, mediante
difracciones de rayos X de fibras hidratadas.
1952. Alfred Day Hersey (1908-1997) y Martha Chase demuestran
que la infeccin viral se realiza con DNA. Los resulados de este
experimento, junto con los datos de Chargaff, convencen a la mayora
de los investigadores de que el DNA es el material gentico.
1953. James Dewey Watson (1928-) y
Francis Harrry Compton Crick (1916-)
proponen la complementariedad de
bases y usando mtodos de modelado
molecular, los datos de Chargaff y
Franklin, postulan el modelo de la
Doble Hlice del DNA.

1958. Matthew Meselson y Franklin W. Stahl aportan pruebas de la

Replicacin Semiconservativa del DNA segn el modelo de Watson y
Crick
1961. Jacques Monod (1910-1976) y Francis Jacob (1920-) publican el
modelo del Opern para la regulacin de la sntesis de protenas.
Entre 1961 y 1965, Marshall W. Nirenberg, Heinrich Matthaei, Har
Gobind Khorana, Severo Ochoa y otros, decifran el Cdigo Gentico
completo.
1974. Sung-Hou Kim y Alexander Rich determinan la Estructura
Tridimensional del tRNA.
1977. Frederick Sanger y colaboradores secuencian el DNA de cadena
simple del virus 174.
1977. Phil Sharp del MIT y Rich Roberts del Cold Sprig Harbor,
descubren las secuencias internas no codificantes de los genes
eucariticos o Intrones.
1981. Thomas R. Cech y colaboradores, descubren la autohidrlisis
del Intron I del RNA en el protozoario Tetrahymena thermophila.
1983. Sidney Altman y su grupo reportan la Actividad Cataltica del
RNA de la Ribonucleasa P de Escherichia coli y Bacillus subtilis.
1987. Se inicia el proyecto del Genoma Humano, que produce sus
primeros resultados en 1999 cuando se publica la secuencia completa
del cromosoma humano 22.
A finales del ao 2000 se publica el primer borrador completo del
genoma humano y en abril de 2003, la secuencia completa final.
1997. Se define el mecanismo del fenmeno de Represin Gentica
Postranscripcional o Interferencia del RNA

DEFINICION
Los cidos Nucleicos son las biomolculas portadoras de la
informacin gentica. Son biopolmeros, de elevado peso molecular,
formados por otras subunidades estructurales o monmeros,
denominados Nucletidos.
Desde el punto de vista qumico, los cidos nucleicos son
macromolculas formadas por polmeros lineales de nucletidos,

unidos por enlaces ster de fosfato, sin periodicidad aparente. De

acuerdo a la composicin qumica, los cidos nucleicos se clasifican
en cidos Desoxirribonucleicos (ADN) que se encuentran residiendo
en el ncleo celular y algunos organelos, y en cidos Ribonucleicos
(ARN) que actan en el citoplasma. Los cidos nucleicos estn
formados por largas cadenas de nucletidos, enlazados entre s por el
grupo fosfato.
El grado de polimerizacin puede llegar a ser altsimo, siendo las
molculas ms grandes que se conocen, con molculas constitudas
por centenares de millones de nucletidos en una sola estructura
covalente. De la misma manera que las protenas son polmeros
lineales aperidicos de aminocidos, los cidos nucleicos lo son de
nucletidos.
La aperiodicidad de la secuencia de nucletidos implica la existencia
de informacin. De hecho, sabemos que los cidos nucleicos
constituyen el depsito de informacin de todas las secuencias de
aminocidos de todas las protenas de la clula. Existe una
correlacin entre ambas secuencias, lo que se expresa diciendo que
cidos nucleicos y protenas son colineares; la descripcin de esta
correlacin es lo que llamamos Cdigo Gentico, establecido de forma
que a una secuencia de tres nucletidos en un cido nucleico
corresponde un aminocido en una protena.
Son las molculas que tienen la informacin gentica de los
organismos y son las responsables de su transmisin hereditaria. El
conocimiento de la estructura de los cidos nucleicos permiti la
elucidacin del cdigo gentico, la determinacin del mecanismo y
control de la sntesis de las protenas y el mecanismo de transmisin
de la informacin gentica de la clula madre a las clulas hijas.
Existen dos tipos de cidos nucleicos, ADN y ARN, que se diferencian
por el azcar (Pentosa) que llevan: desoxirribosa y ribosa,
respectivamente. Adems, se diferencian por las bases nitrogenadas
que contienen, Adenina, Guanina, Citosina y Timina, en el ADN; y
Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo en el ARN. Una ltima diferencia
est en la estructura de las cadenas, en el ADN ser una cadena
doble y en el ARN es una cadena sencilla.

CAPITULO II

ESTRUCTURA
Como se explic, los
cidos nucleicos son el
material gentico de
todos los seres vivos,
esta
funcin
es
compartida por dos
tipos
de
cidos
nucleicos que difieren
entre s en pequeos
detalles
de
su
estructura, propiedades
y composicin qumica
y gran parte de su
funcin:
el
cido
Ribonucleico (RNA o
ARN)
y
el
cido
Desoxirribonucleico
(DNA o ADN).
Una propiedad qumica diferente entre DNA y RNA, debida a la
diferencia en composicin qumica, es la sensibilidad al hidrlisis, el
DNA es estable en medio alcalino y slo se hidroliza en medio cido
mientras que el RNA puede hidrolizar tanto en medio cido como
alcalino.
La distribucin de los cidos nucleicos en las clulas eucariticas es
caracterstica, el 95% del DNA se encuentra en el ncleo, y el
remanente en mitocondrias y cloroplastos, mientras que slo el 20%
del RNA se encuentra en el ncleo y el resto en el citoplasma.
Tambin hay diferencia en
cidos Nucleicos cantidad, en las clulas existe de 2 a 8 veces ms
RNA que DNA. Por otro lado, mientras que hay un solo tipo de DNA,
encargado de almacenar y transmitir la informacin gentica, existen
al menos tres tipos de RNA con funciones distintas en la sntesis de
protenas y otros procesos. El RNA mensajero (mRNA o ARNm), que
transporta el mensaje gentico del DNA a los ribosomas, para dirigir
la sntesis de protenas; representa el 5% del RNA total. El RNA
ribosomal (rRNA o ARNr), formando parte de la estructura de los
ribosomas. Este tipo de RNA est formados por un grupo de
molculas que se clasifican en base a sus coeficientes de

sedimentacin como 23s, 16s y 5s en procariontes y 28s, 17s, 7s y 5s

en eucariontes. Este es el RNA que se encuentra en mayor proporcin
pues constituye el 80% del total. El RNA de transferencia (tRNA o
ARNt), est constituido por una familia de molculas, las ms
pequeas de los cidos nucleicos, cuya funcin es acoplar la
informacin del mRNA con los aminocidos. Constituye el 15%
restante. Adems, en el ncleo existe un grupo heterogneo de
molculas de RNA (hnRNA) que cumplen funciones catalticas en
diversos procesos.
La mayor parte de las formas de vida, incluyendo organismos
unicelulares, multicelulares y muchos virus, utilizan DNA como
material gentico. En otros virus, el RNA es el material gentico;
algunos de ellos lo usan para transmitir directamente la informacin
mediante el proceso de Replicacin de RNA, mientras que otros,
llamados retrovirus, usan RNA pero, para poder expresar su
informacin gentica, primero la convierten a DNA.

NUCLETIDOS
Los nucletidos son las unidades estructurales de los cidos
nucleicos, se liberan mediante hidrlisis controlada y estn formados
de tres molculas, una base nitrogenada, un monosacrido y un
grupo fosfato.
a) Bases Nitrogenadas. Son compuestos aromticos heterocclicos
derivados de las bases orgnicas Purina y Pirimidina.

Las bases derivadas de Pirimidina se denomina Pirimdicas; las

ms abundantes en los cidos nucleicos son Citosina, Uracilo y
Timina. Las bases derivadas de Purina se llaman Pricas y las
ms abundantes son Adenina y Guanina.

La primera diferencia en composicin qumica entre los dos

tipos de cidos nucleicos es la distribucin de las bases.
Adenina, Guanina y Citosina se encuentran tanto en DNA como
RNA mientras que la Timina se encuentra casi exclusivamente
en DNA y el Uracilo slo en RNA. Adems de las anteriores, es
frecuente encontrar bases modificadas, tanto Pricas como
Pirimdicas, entre las ms abundantes estn la 5-metilcitosina,
la 5-hidroximetilcitosina y la 6-Metiladenina que se han
relacionado con la regulacin de la expresin del DNA, la 7metilguanina y el dihidrouracilo que forman parte de la
estructura de los RNA, e hipoxantina y xantina como
intermediarios metablicos y productos de reaccin del DNA
con sustancias mutagnicas.

Como son aromticas, tanto las bases pricas como las

pirimdicas son planas, lo cual es importante en la estructura de
los cidos nucleicos. Tambin son insolubles en agua y pueden
establecer interacciones hidrfobas entre ellas; estas
interacciones sirven para estabilizar la estructura tridimensional
de los cidos nucleicos. Las bases nitrogenadas absorben luz en
el rango ultravioleta (250280 nm), propiedad que se usa para su estudio y cuantificacin.
A pesar de su nombre, su carcter bsico es muy dbil, as
tenemos que los valores de pKa para los grupos amino en las
posiciones 4 de Citosina, 6 de Adenina y 2 de Guanina son 4.5,
4.2 y 3.2 respectivamente, mientras que para los nitrgenos del
anillo las constantes son de 9.5 y 9.9 para el
Nitrgeno 1 de Uracilo y Timina respectivamente, y 9.5 para el
Nitrgeno 6 de Guanina.
Todas las bases nitrogenadas pueden presentar tautomera; la
forma enlica es favorecida a pH alcalino.
b) Monosacridos. La segunda diferencia en composicin entre los
cidos nucleicos es la aldopentosa que forma parte de los
nucletidos, y adems da nombre a los cidos, la ribosa en el
RNA y desoxirribosa en el DNA. Ambos monosacridos son
solubles en agua y se encuentran en la forma cclica de

furanosa por lo que tambin son casi planas y en los

nucletidos, presentan anomera.

c) Fosfato. Este componente

deriva del cido fosfrico,
en
los
nucletidos
es
responsable de su carcter
cido y gran parte de la
solubilidad. Participa en la
formacin de los enlaces
ster que mantienen unidos
los nucletidos.
d) Nuclesidos. La unin entre un monosacrido y una base, se
denomina nuclesido. La unin base-azcar se efecta a travs
de un enlace glicosdico, con configuracin beta ( ) entre el
carbono uno de ribosa o desoxirribosa, y un nitrgeno de las
base, el 1 en las pirimidinas, y el 9 en las purinas. Para evitar
confusiones en la nomenclatura de nuclesidos y nucletidos,
los tomos de la molcula de monosacrido se designan con
nmeros seguidos de un apstrofe (1, 2, etc.), para
distinguirlos de los de la base, por lo que los enlaces de los
nuclesidos se designan como (1-1) en las pirimidinas y (19) en las purinas.
Los nuclesidos son ms solubles que las bases libres y los
planos de la base y el azcar son perpendiculares entre si.
Como el enlace glicosidico es sencillo, las bases pueden
presentar dos conformaciones diferentes: anti cuando el plano
de la base est alejada del plano del azucar y syn, cuando las
bases estn sobre el plano del azucar. Los nuclesidos puricos
pueden presentar ambas conformaciones, aunque la anti es
ms estable; los pirimidicos slo pueden existir en anti, porque
el Oxgeno en el carbono 2 no permite que se forme la syn.
Nuclesidos Modificados.
caracerstica,
nuclesidos modificados
como la seudouridina,
formada por uracilo y
ribosa unidos a travs
de un enlace (1-5).
Tambin se encuentra
un nuclesido de timina
y ribosa, la ribotimidina.
Otro nuclesido presente

En

los

tRNA

existen

en

forma

en el tRNA es la Dihidrouridina, formado por ribosa y

dihidrouracilo unidos por enlace (1-1).
En el metabolismo de las bases pricas se forma un nuclesido
con Hipoxantina y Ribosa llamado Inosina. Los nuclesidos y los
nucletidos, se nombran segn la base que contienen.

e) Nucletidos. Los nucletidos se forman cuando se une cido

fosfrico a un nuclesido mediante un enlace ster, en alguno
de los grupos -OH del monosacrido. Aunque la ribosa tiene tres
posiciones en las que se puede unir el fosfato (2, 3 y 5), y en
la desoxirribosa dos (3 y 5), los nucletidos naturales ms
abundantes son los que tienen fosfato en la posicin 5.
Nucletidos con fosfato en 3 aparecen en la degradacin de los
cidos nucleicos.
Adems de formar la estructura de los cidos nucleicos los
nucletidos tienen otras funciones relevantes:
1. El nuclesido Adenosina tiene funcines de neurotransmisor.
2. ATP es la molcula universal para transferencia de energa;
3. UDP y el CDP sirven como transportadores en el metabolismo
de glcidos, lpidos y otras molculas;
4. AMPc, GMPc y el propio ATP cumplen funciones reguladoras;
5. AMP forma parte de la estructura de coenzimas como FAD,
NAD+, NADP+ y CoA.

ESTRUCTURA PRIMARIA
Los cidos nucleicos se forman cuando el grupos fosfato de un
nucletido se une al OH en 3 del azcar de otro nucletidos,
mediante un enlace ster. Como la unin entre nucletidos depende
de dos enlaces ster con una misma molcula de fosfato, se
acostumbra designarlo como enlace diester de fosfato
fosfodiester.
La cadena resultante recibe el nombre de polinucletido y pueden ser
de tamaos muy variados, desde los aproximadamente 70
nucletidos de los tRNA hasta cientos de millones de ellos en el DNA.

Las cadenas de polinucletidos, igual que las de protenas y

polisacridos, tienen dos extremos distintos. El extremo 5, en el cual
esta posicin del azcar no participa en enlace con ningn otro
nucletido, y el extremo 3 en el que dicho carbono del nucletido es
el que se encuentra libre. Por convencin, se acostumbra a
representar las cadenas de nucletidos, en direccin 5 a 3 de
izquierda a derecha., representar en forma desarrollada la estructura
de los cidos nucleicos, an los ms pequeos, resulta engorroso y no
es necesario pues la parte importante de ella, la secuencia de bases,
se puede representar en forma abreviada como una secuencia de
letras maysculas haciendo A=AMP, G=GMP, C=CMP, U=UMP y
T=TMP. Cuando se trata de desoxirribonucletidos, se antepone una
d como en dA= desoxi AMP, etc. Para interpretar este tipo de
representacin hay que recordar que las secuencias siempre se
escriben con en el extremo 5 a la izquierda y que los fragmentos de
DNA y RNA se pueden distinguir por la d que se antepone a los
desoxinucletidos, o por la presencia de uridina (U) en el RNA y
timidina (T) en el DNA.

A. DNA.
La estructura primaria del DNA est formada por desoxinucletidos de
Adenina, Guanina, Citosina y Timina. En los eucariotes tambin se
encuentra 6 Metiladenina, 5-metilcitosina, y en procariotes y virus 5hidroximetilcitosina. La principal caracterstica de la estructura
primaria del DNA es su gran tamao; los ms pequeos son cadenas
formadas por 4 a 5 mil de pares de bases o kilopares de bases (kb),
que forman el material gentico de los virus, pero las ms grandes
tienen cientos de millones de bases.
Los cromosomas de muchos virus y procariotes son molculas
circulares cerradas, mientras que en los Eucariotes son cadenas
abiertas. En los extremos de los cromosomas lineales de Eucariotes,
se encuentra como parte de la estructura primaria zonas con
secuencias repetitivas, llamadas Telomeros.
La secuencia de los telomeros es caracterstica de especie.

B. RNA.
La estructura primaria de los RNA est formada por
desoxinucletidos de Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo. La mayor
parte de los RNA tiene bases y nucletidos modificados, que
probablemente les permiten resistir la accin de las nucleasas del
citoplasma. La mayor abundancia se encuentra en los rRNA.

Los tRNA que son los cidos nucleicos ms pequeos (70 a 95

nucletidos) tienen ribotimidina, seudourudina (), dihidrouridina
(DHU), 5-metilcitosina y 7 metilguanina, en posiciones especficas.
Adems, en el extremo 3 terminal se encuentra una secuencia
constante CCA que es el sitio de unin del aminocido. Los mRNA
tienen tambin citosina y guanina metiladas, y adems una secuencia
de poliadenilato con 100 a 200 nucletidos, en el extremo 3 y en 5 el
nucletido 7-metilguanosina trifosfato, que se conoce como el Cap,
y que identificar al RNA como mensajero.
Por su parte los rRNA tienen muchas bases metiladas y la longitud de
sus cadenas depende del tipo, el rRNA 5s tiene alrededor de 120
nucletidos mientras el rRNA 28s tiene ms o menos 4000
nucletidos.

ESTRUCTURA SECUNDARIA
Se llama estructura secundaria de los cidos nucleicos, a la
asociacin que se forman entre zonas de una misma cadena o dos
cadenas distintas. Esta asociacin depende de la complementariedad
entre las bases pricas y pirimidicas.
La complementariedad de las bases est dada por el nmero y
posicin de los puentes de Hidrgeno que pueden formar, dos entre
ADENINA y TIMINA (A=T), y tres entre GUANINA y CITOSINA (GC). En
el RNA el URACILO toma el lugar de la timina. Estos apareamientos no
son los nicos posibles pero si los ms estables.

A. DNA.
El DNA es una molcula fibrosa de peso
molecular elevado (hasta 109). En todas las
clulas y la mayora de los virus, est formada
por dos cadenas de nuclotidos con secuencias
complementarias. Adems de complementarias,
las cadenas son antiparalelas; esto es, una
cadena corre en direccin 5 a 3 mientras la
otra lo hace de 3 a 5. Las cadenas giran
alrededor de un eje comn formando una
espiral doble conocida como Doble Hlice. Las
cadenas se mantienen unidas por interacciones
hidrfobas entre las bases que al ser planas se
apilan una sobre otra, en el interior de la hlice.
Aunque los puentes de hidrgeno tienen una
contribucin menor a la estabilidad de la doble
hlice, pues su funcin principal es asegurar la
complementariedad, la diferencia en el nmero
de puentes de hidrgeno de los pares AT y GC
influye en la llamada Desnaturalizacin del
DNA, que consiste en la separacin de las cadenas de la doble hlice
para quedar como hebras sencillas.
La Temperatura de Fusin del DNA, que es la temperatura a la cual
una molcula de DNA se ha desnaturalizado al 50%, aumenta
mientras mayor cantidad de pares GC hay en la molcula Doble
hlice del DNA-B
Existen varias estructuras secundarias del DNA, la primera fue
propuesta por Watson y Crick en
1953 y se conoce como forma B del DNA (DNA-B). En este modelo, la
doble hlice da un giro completo a la derecha (en el sentido de las
manecillas del reloj) cada 10 pares de base, recorriendo una distancia
de 3.4 nm y tiene un dimetro de 2 nm.

Otras estructuras secundarias de DNA (Tabla II), varan en el nmero

de bases por cada vuelta completa de la hlice, la distancia recorrida
por vuelta y hasta en el sentido de giro, el Z-DNA gira a la izquierda,
Sin embargo, todas las estructuras secundarias del DNA conservan las
caractersticas generales del modelo de Watson y Crick, son cadenas
dobles, antiparalelas, complementarias y con formas de hlice.

Estructuras secundarias del DNA. De izquierda a derecha A, B y Z

B. RNA.
Al contrario del DNA, la estructura secundaria del RNA siempre esta
formada por una sola cadena de nucletidos que puede presentar
zonas de doble hlice. La estructura secundaria de los mRNA, es difcil
de determinar, debido al elevado peso molecular y la baja
concentracin de estas molculas. Las fracciones 5s, 16s y 23s del
rRNA, tienen muchas regiones con secuencias complementarias, que
forman estructuras secundarias con asas de doble cadena (50% en
5s,) con pares A=U y GC
En el tallo se encuentran los dos extremos terminales, uno de los
cuales el 3 corresponde al sitio de unin del aminocido.
Los brazos o asas constantes se numeran del I a III, a partir del
extremo 5. El brazo II se conoce como el Asa del anticodon, porque
en l se encuentra la secuencia de nucletidos que forma el
anticodn, complementario del codn del mRNA. En los otros dos
brazos constantes I y III, se encuentran siempre en posiciones
equivalentes algunos nucletidos modificados como dihidrouridina
(DHU) en el brazo I o asa de la dihidrouridina, y ribotimidina y
seudouridina en el asa de la ribotimidina o brazo III. El brazo IV
tiene un nmero de nucletidos variable y algunos tRNA no lo
presentan.

ESTRUCTURA TERCIARIA
A.- DNA.
El DNA de cualquier clula tiene una longitud que excede con mucho
el tamao total de esta, resulta entonces indispensable plegar la
molcula, en una estructura compacta que pueda acomodarse dentro
de la clula o del ncleo. En las clulas eucariticas, este plegamiento
depende de la interaccin del DNA con protenas, para formar la
Cromatina. Las protenas de condensacin ms abundantes son las
Histonas, molculas pequeas con gran cantidad de lisina, Arginina,
aminocidos con carga positiva, que interactuan con las cargas
negativas del fosfato del
DNA. El grado de condensacin de la cromatina depende de la regin
del genoma, las partes que no se expresan estn ms compactas.
El primer paso en la compactacin del genoma consiste en la
formacin de los Nucleosomas. para ello la cadena de DNA da dos
vueltas, que ocupan aproximadamente 146 pares de bases, alrededor
de un ncleo formado por cuatro tipos de histonas (H2A, H2B, H3 y
H4), la integridad del nucleosoma se mantiene mediante la histona
H1.
Los nucleosomas estn separados entre si por 60 pares de bases del
DNA y se pueden compactar ms, formando un solenoide, con 6
nucleosomas por vuelta, de aproximadamente 30 nm de dimetro.
El tbulo formado por el solenoide se pliega formado asas ancladas
en una matriz de protenas no histnicas. El complejo resultante se
puede plegar an ms enrollndose, para formar una espiral con 18

asas en cada vuelta, estas estructuras forman las minibandas de los

cromosomas.

C. RNA.
De todos los tipos de RNA slo se conoce con detalle la estructura
terciaria de los rRNA y el tRNA. La estructura terciaria de los rRNA fue
resuelta recientemente por difraccin de RayosX;
La forma tridimensional de los tRNA resueltos por difraccin de Rayos
X hasta hoy se aproxima a una L. En el extremo de uno de los brazos
de la L se encuentra el sitio de unin del aminocido y en el extremo
del otro el anticodn. La bisagra de la L est formada por los brazos I
y III de la hoja de trbol, y tambin el IV cuando est presente.

Estructura terciaria del RNA. De izquierda a derecha rRNA 16s, rRNA 23s+5s y tRNA

CAPITULO III

NOMENCLATURA DE NUCLESIDOS Y

NUCLETIDOS

NOMENCLATURA DE NUCLESIDOS
Deriva su nombre del nuclesido precursor al que se aade el sufijo
-monofosfato.
La posicin del ster se especifica por el nmero de tomo de
carbono al que se une

NOMENCLATURA
NUMERACIN

BASE
NUCLESIDO
ADENINA
ADENOSINA
GUANINA

GUANOSINA

CITOSINA

CITIDINA

URACILO

URADINA

TIMINA

TIMIDINA

Pirimidinas enlace entre carbono anomrico (1) y N-1 de la base

Nuclesido
Una base y un azcar unidos por un enlace glicosidico.

Purinas: enlace entre carbono anomrico (1) y N-9 de la base

Diferencia

AZCAR

Bases de cidos Nucleicos

Dos
anillos
aromticos
Un solo anillo aromticos

Nucletido:

Para formar un nucletido:

El cido fosfrico se une al C-5 del azcar mediante un enlace
fosfoster y el azcar se une a la base nitrogenada mediante un
enlace N-glicosidico

Estructura y Componentes de los Nucletidos

Consta de tres partes:
Una base nitrogenada
covalentes
Un azcar
Un residuo de cido fosfrico

unidas por enlaces

CAPITULO III
PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LOS
CIDOS NUCLEICOS
Las principales propiedades fsico-qumicas de los cidos nucleicos
que vamos a considerar son las siguientes:
Densidad de los cidos nucleicos.
Desnaturalizacin de los cidos nucleicos: Temperatura de
fusin (Tm).
Absorbancia a 260 nm.
Cintica de Renaturalizacin: Curvas Cot.
Hibridacin de los cidos nucleicos

DENSIDAD DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Densidad: existe una relacin lineal entre el contenido en G+C y la
densidad del ADN
determinada en un gradiente de densidad. A mayor contenido en
G+C mayor densidad posee el ADN

Meselson y col. (1957)

desarrollaron
una
tcnica
de
centrifugacin en gradiente de densidad. Cuando se centrifuga a alta
velocidad un solucin densa (saturada) de un soluto de bajo peso
molecular (ClCs 7,7 M, sucrosa, etc.) se produce un equilibrio entre
dos fuerzas opuestas, la de difusin del soluto y la fuerza de
sedimentacin, como consecuencia se produce un gradiente de
densidad que aumenta en la direccin de la fuerza centrfuga
(aumenta a medida que avanzamos hacia el fondo del tubo de
centrifuga). Si aadimos al centrifugar una molcula de ADN, est
migrar hacia el fondo del tubo hasta llegar al punto en que la
densidad del soluto de bajo peso molecular (la densidad del ClCs)
coincide con la densidad del ADN centrifugado (densidad de
flotacin). Posteriormente, es posible aislar las molculas de ADN de
diferente densidad practicando un orificio en el fondo del tubo y
sacando varias fracciones diferentes. Tambin es posible pinchar el
tubo con una jeringa, justo en la posicin de la banda y extraer el
ADN contenido de esa zona del tubo.
Basndose en mltiples estudios de la densidad de los ADNs de
diferentes organismos y de su composicin en bases nitrogenadas, se
ha establecido una frmula emprica que relaciona la densidad de
flotacin () con el contenido en G+C expresado en moles por ciento.
Est frmula es la siguiente: = 1,660 + 0,00098(G+C).

DESNATURALIZACIN: TEMPERATURA DE FUSIN

Desnaturalizacin: la proporcin A+T/C+G est relacionada en
primer lugar con la estabilidad de la molcula de ADN de doble hlice.
Cuanto mayor es el contenido en G+C de una molcula, mayor

cantidad de pares G-C presentar, como consecuencia tendr una

mayor cantidad de triples enlaces y, por consiguiente, ser necesario
suministrar una mayor cantidad de energa a
esa doble hlice para separar sus dos hebras (desnaturalizacin o
fusin del ADN). Cuanto mayor es el contenido en G+C mayor
cantidad de calor que hay que suministrar a un ADN de doble hlice
para desnaturalizarlo. La temperatura de fusin (Tm) necesaria para
desnaturalizar la mitad del ADN de una mezcla (punto medio de la
reaccin ADN doble hlice ADN hlice sencilla) esta directamente
relacionada con el contenido en G+C, a mayor contenido en
G+Cmayor temperatura de fusin (Tm)
Relacin entre el contenido en (G+C) y Tm
desnaturalizacin de diferentes ADNs

Curvas de

ABSORBANCIA A 260 nm
Absorbancia a 2.600 : El estado fsico de los cidos nucleicos est
relacionado con su
capacidad de absorcin de la
luz ultravioleta (UV) a 2.600
. El menor grado de
absorcin se produce en
estado de doble hlice, la
absorcin aumenta cuando
se
produce
la
desnaturalizacin pasando a
estado de hlice sencilla
(efecto
hipercrmico,
aumento de la absorbancia)
y, por ltimo, si degradamos este ADN de hlice sencilla a nivel de
nucletidos libres, de nuevo aumenta la absorbancia.

Por tanto, la absorbancia a 2.600 se puede utilizar como una

medida del estado fsico de la molcula de ADN. Las curvas de fusin
tienen forma de S observndose un aumento brusco de la
absorbancia al llegar a una temperatura determinada, la temperatura
de fusin.

CINTICA DE RENATURALIZACIN: CURVAS CoT

Velocidad de re naturalizacin: la velocidad de Re naturalizacin
del ADN de un organismo est relacionada con su complejidad. La
complejidad se define como la suma del nmero de nucletidos que
tiene cada tipo de secuencia sin tener en cuenta el nmero de veces
que esta repetida. El ADN de los virus y las bacterias en su mayora
slo tiene secuencias que estn una sola vez en el genoma
(secuencias nicas). Sin embargo, el organismo ms complejo, como
los eucariontes, presentan distintos tipos de secuencias en su
genoma. Los eucariontes tienen secuencias nicas (SU), secuencias
de bajo nmero de copias (SBNC, 2-10 copias), secuencias repetidas
(SR, alrededor de 102 copias) y altamente repetidas (SAR, 103 a 106
copias).

Si imaginamos un organismo eucarionte con los tipos de secuencias

indicados en la tabla anterior, su complejidad sera la suma del
nmero de nucletidos de cada tipo de secuencia (22.300) sin tener
en cuenta el nmero de veces que est repetida cada una de ellas.
No es difcil imaginar que la velocidad de renaturalizacin del ADN
(paso de dos hlices sencillas a una doble hlice) est relacionada

con el nmero de veces que esta repetida una determinada

secuencia.
Supongamos que tenemos dos organismos hipotticos distintos,
ambos con la misma cantidad de ADN (1.000.000 de pares de
nucletidos). El organismo A posee 1.000 secuencias nicas
diferentes, cada una con una longitud media de 1.000 nucletidos. El
organismo B tiene una secuencia de 100 nucletidos de longitud que
est repetida 10.000 veces. Si extraemos el ADN de estos dos
organismos por separado, lo desnaturalizamos y las piezas de ADN
desnaturalizado de cada organismo se ponen en condiciones de
renaturalizar (tamao uniforme de los fragmentos de ADN, entre 250
y 450 pb, temperatura, condiciones inicas, etc), es evidente que el
ADN del organismo B renaturalizar mucho antes, ms rpidamente,
que el del organismo A, ya que es mucho ms probable que la
secuencia que est repetida 10.000 veces encuentre otra
complementaria en el medio de reaccin para formar la doble hlice.

Las curvas de renaturalizacin o curvas Cot, de organismos que

carecen de secuencias repetidas como virus y bacterias, tienen
forma de S, tienen un slo punto de inflexin o punto medio de la
reaccin. Todas las secuencias son nicas y tienen la misma
probabilidad de encontrar a sub complementaria para formar la doble
hlice.

Curvas Cot de virus y bacterias

Curvas Cot de un eucarionte

Las curvas Cot de organismos eucariontes con diferentes tipos de
secuencias, poseen varios puntos de inflexin. Cada uno de ellos
correspondiente a un tipo de secuencias (nicas, moderadamente
repetidas, y altamente repetidas). Como en el caso de las curvas de
fusin, tambin se utiliza como medida el punto medio de la
reaccin de renaturalizacin, es decir, el Cot . o tiempo al que se ha
reasociado la mitad del ADN. El Cot . es directamente proporcional a
la complejidad del ADN del organismo. Valores de Cot . bajos (10 -4 a
10-1) corresponden a secuencias altamente repetidas, valores de Cot .
comprendidos entre 10 y 102 corresponden a secuencias
moderadamente repetidas y las secuencias nicas o de bajo nmero
de copias dan lugar a valores de Cot . altos (mayores de 10-3)

HIBRIDACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Las tcnicas de desnaturalizacin y posterior re naturalizacin se
utilizan para conseguir la hibridacin de cidos nucleicos, es decir,
una vez separadas las dos hebras del ADN doble hlice, es posible
volver a formar una doble hlice con una hebra de ADN que sea
complementaria (hibridacin de ADN con ADN) o volver a formar una
doble hlice con un segmento de ARN que contenga la secuencia
complementaria (hibridacin de ADN con ARN).
Endonucleasas de restriccin
Las tcnicas de hibridacin (desnaturalizacin y posterior
renaturalizacin) permiten, por ejemplo, identificar el gen que ha
dado lugar a un determinado ARN-mensajero. Si se asla un mensajero
determinado en una clula, es posible hibridar este ARN con el ADN
de la clula previamente fragmentado mediante el uso de
endonucleasas de restriccin. Las endonucleasas de restriccin de
tipo II son enzimas que reconocen secuencias cortas de ADN (de 4 a 6
pares de bases) de tipo palindrmico y cortan por el interior de la
secuencia diana a la misma altura en las dos hlices de ADN (corte
simtrico) o a distinto nivel en cada hlice (corte asimtrico).

Eco

RI
Hae III

Dichas endonucleasas de restriccin fueron descubiertas por Werner

Arber, Hamilton O. Smith y Daniel Nathans en la bacteria E.coli ,
trabajos por los que recibieron el premio Nobel. Estas enzimas
forman parte del sistema de defensa (sistema de modificacinrestriccin) de las bacterias frente a la entrada de ADN exgeno en su
interior. Existen cientos de endonucleasas diferentes que reconocen
distintas secuencias cortas de tipo palndrmico. En la siguiente tabla
se indican algunas de las endonucleasas ms frecuentes

La utilizacin de diferentes endonucleasas y la separacin por

tamaos de los fragmentos producidos mediante electroforesis
permite construir lo que se denomina Mapas de restriccin. Cuando
el ADN de un organismo eucarionte se fragmenta con una
endonucleasa de restriccin, se producen cientos de miles o incluso
hasta millones de fragmentos. Dichos fragmentos se separan por
tamaos mediante electroforesis en geles de agarosa, una vez se
parados por tamaos se transfieren los fragmentos a una membrana
de nylon en condiciones desnaturalizantes y de forma que
permanezcan en la misma posicin. Los fragmentos desnaturalizados
y pegados a la membrana se pueden renaturalizar o hibridar
utilizando un segmento de ADN o de ARN (habitualmente denominado

sonda) marcado radiactivamente. Dicha sonda, hibridar solamente

con aquellos fragmentos de ADN que contengan la secuencia
complementaria. La tcnica que permite transferir los fragmentos de
ADN desnaturalizados a una membrana de nylon y posteriormente
hibridar con una sonda de ADN marcada se denomina Tcnica
Southern (hibridacin ADN-ADN), cuando la hibridacin se realiza con
una sonda de ARN marcada se denomina Northern (hibridacin ADNARN). El empleo combinado de endonucleasas de restriccin y de
diferentes sondas de ADN de secuencia nica marcadas permite
obtener Polimorfismos para Longitudes de Fragmentos de Restriccin
(RFLPs), muy utilizados en la construccin de mapas de ligamiento.
Hibridacin "in situ"
Las tcnicas de hibridacin "in situ" permiten localizar un segmento
concreto de ADN (por ejemplo, un gen) en una posicin determinada
de un cromosoma eucaritico. Es posible obtener preparaciones
citolgicas de cromosomas en metafase mittica o en otras fases del
ciclo, desnaturalizar el ADN de los cromosomas en la propia
preparacin citolgica y posteriormente hibridar con la pieza de ADN
deseada marcada. Actualmente, el marcaje suele ser de tipo
fluorescente, denominndose dicha tcnica Hibridacin "in situ"
mediante fluorescencia (abreviadamente FISH). Tambin, es posible
marcar todo el ADN de un genomio o juego de cromosomas completo
y realizar una Hibridacin "in situ" Genmica (abreviadamente GISH)
que permite averiguar si los cromosomas de un determinado genomio
estn presentes. Otra
aplicacin, consiste en detectar determinados cromosomas o regiones
cromosmicas concretas utilizando sondas o piezas de ADN marcadas
mediante fluorescencia y procedentes solamente del cromosoma
deseado, de esta manera, se obtiene lo que se denomina Pintura
Cromosmica.
SECUENCIACIN DEL ADN: MTODO DIDESOXI Y MTODO
AUTOMTICO
El anlisis ms detallado de la estructura del ADN consiste en
averiguar la secuencia de
nucletidos. A lo largo del tiempo se han desarrollado diferentes
mtodos para obtener la secuencia de nucletidos del ADN, sin
embargo, actualmente los mtodos ms utilizados son el de
secuenciacin automtica y el mtodo enzimtico de terminacin de
cadena de Sanger tambin conocido por el mtodo didesoxi.
Mtodo enzimtico de terminacin de cadena o mtodo
didesoxi de Sanger

Para obtener la secuencia de bases nitrogenadas de un segmento de

ADN por el mtodo enzimtico de terminacin de cadena, se
necesitan los siguientes compuestos
El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. Para
poder secuenciar un segmento de ADN, previamente se necesita
tener gran cantidad de ese fragmento, y por tanto, hay que clonarlo
en un vector apropiado. Adems, debe estar en estado de hlice
sencilla.
Un enzima que replique el ADN, normalmente el ADN Polimerasa I del
bacterifago T4. La
ADN Polimerasa I del fago T4 emplea como
molde ADN de hlice sencilla y siguiendo las reglas de
complementariedad de las bases nitrogenadas va aadiendo
nucletidos a partir de un cebador o "primer".
Un cebador o "primer" que suele ser un oligonucletido corto de
alrededor de 20 bases de longitud necesario para que el ADN
polimerasa I comience a aadir nucletidos por el extremo 3' OH. Este
cebador debe poseer una secuencia de bases complementaria a la del
fragmento de ADN que se desea secuenciar. Debido a que la
secuencia
de
nucletidos
del
segmento que se quiere
secuenciar
es
desconocida, se emplea
un
"primer"
con
secuencia
complementaria
al
vector empleado para
clonar el fragmento de
ADN,
adems,
este
cebador procede de una
regin del vector muy cercana al punto de insercin del ADN
problema cuya secuencia se conoce. El "primer" utilizado suele
marcarse radiactivamente.
Los cuatro nucletidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP y dTTP). A veces
en vez de marcar radiactivamente el cebador, se marca
radiactivamente uno de los cuatro nucletidos trifosfato en cada
reaccin.
Por ltimo, se necesitan nucletidos didesoxi (ddATP, ddTTP, ddCTP y
ddGTP). Los nucletidos didesoxi son nucletidos modificados que han
perdido el grupo hidroxilo de la posicin 3' de la desoxirribosa. Estos
nucletidos pueden incorporarse a la cadena de ADN naciente, pero
no es posible que se una a ellos ningn otro nucletido por el extremo

3'. Por tanto, una vez incorporado un nucletido didesoxi se termina

la sntesis de la cadena de ADN.
Breve descripcin del mtodo enzimtico de terminacin de
cadena
En primer lugar, deben realizarse en cuatro tubos diferentes, cuatro
mezclas de reaccin. Cada mezcla de reaccin contiene los cuatro
nucletidos trifosfato (dATP, dCTP, de dTTP y dGTP), ADN polimerasa
I, un cebador marcado radiactivamente y un nucletido dideoxi, por
ejemplo ddATP, a una concentracin baja. El nucletido didesoxi
utilizado (ddATP en este ejemplo) competir con su homlogo (dATP)
por incorporarse a la cadena de ADN que se est sintetizando,

produciendo la terminacin de la sntesis en el momento y lugar

donde se incorpora.
Los fragmentos de ADN de nueva sntesis obtenidos en cada mezcla
de reaccin se separan por tamaos
mediante electroforesis en geles
verticales de acrilamida muy finos
(0,5 mm de espesor) y de gran
longitud (cerca de 50 cm) que
permiten distinguir fragmentos de
ADN que se diferencian en un solo
nucletido. Los productos de cada
una de las cuatro mezclas de
reaccin se insertan en cuatro calles
o carriles diferentes del gel.
Una vez terminada la electroforesis,
el gel se pone en contacto con una pelcula fotogrfica de autor
radiografa. La aparicin de una banda en una posicin concreta de la
autor radiografa en una de las cuatro calles nos indica que en ese
punto de la secuencia del ADN de nueva sntesis (complementario al
ADN molde) est la base correspondiente al nucletido didesoxi
utilizado en la mezcla de reaccin correspondiente

CAPITULO IV

OBTENCION DE LOS ACIDOS NUCLEICOS

La extraccin y purificacin de cidos nucleicos constituye la primera
etapa de la mayora de los estudios de biologa molecular y de todas
las tcnicas de recombinacin de ADN. En este caso, los mtodos de
extraccin permiten obtener cidos nucleicos los cidos nucleicos
purificados a partir de diversas fuentes para despus realizar anlisis
especficos de modificaciones genticas mediante la reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR).
Dada la gran variedad de mtodos de extraccin y purificacin de
cidos nucleicos existentes, la eleccin de la tcnica ms adecuada
suele efectuarse conforme a los criterios siguientes:

cido nucleico diana;

Organismo fuente; material inicial (tejido, hoja, semilla, material
transformado, etc.)
Resultados deseados (rendimiento, pureza, tiempo que requiere
la purificacin)
Uso posterior (PCR, clonacin, etiquetado, transferencia, RTPCR, sntesis de ADNc, etc).

Mtodos de extraccin
Para extraer los cidos nucleicos del material biolgico es preciso
provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas celulares y separar
los cidos nucleicos de los restosde clulas. El procedimiento de lisis
idneo suele consistir en un equilibrio de tcnicas y ha de ser
suficientemente fuerte para romper el material inicial complejo (un
tejido, por ejemplo), pero suficientemente suave para preservar el
cido nucleico diana.
MTODOS DE PURIFICACIN

Los mtodos empleados para purificar los cidos nucleicos de

extractos celulares suelen ser combinaciones de dos o ms
tcnicas de las siguientes:
Extraccin/precipitacin
Cromatografa; centrifugacin
Separacin por afinidad.

EXTRACCIN/PRECIPITACIN
A menudo se efecta una extraccin con disolventes para eliminar los
contaminantes de los cidos nucleicos. Por ejemplo, suele emplearse
una combinacin de fenol y cloroformo con objeto de eliminar las
protenas. Para concentrar los cidos nucleicos suele realizarse una
precipitacin con isopropanol o etanol. Si la cantidad de cido
nucleico diana es escasa, puede aadirse a la mezcla un portador
inerte (como el glucgeno) para favorecer la precipitacin. Tambin
puede realizarse una precipitacin selectiva con concentraciones
salinas elevadas (precipitacin salina) o una precipitacin de
protenas mediante cambio de pH.

CROMATOGRAFA.
Pueden emplearse diversas tcnicas cromatogrficas de separacin:
permeacin sobre gel, intercambio inico, adsorcin selectiva o unin
por afinidad. La permeacin sobre gel aprovecha las propiedades de
las partculas porosas del gel para tamizar molculas. Se emplea una
matriz con poros de tamao definido, que dejan pasar las molculas
ms pequeas por difusin, pero no las ms grandes, que quedan
eluidas en el volumen vaco. As pues, las molculas quedan eluidas
por orden de tamao decreciente. La cromatogrfica de intercambio
inico es otra tcnica, que se basa en la interaccin electrosttica de
la molcula diana con un grupo funcional de la matriz en columna.
Los cidos nucleicos (polianiones lineales con fuerte carga negativa)
pueden e luirse de las columnas de intercambio inico con simples
Tampones salinos. En la cromatografa de adsorcin, los cidos
nucleicos se fijan selectivamente en slice o vidrio, en presencia de
determinadas sales (por ejemplo, sales caotrpicas), mientras que
otras molculas biolgicas no se fijan. A continuacin, los cidos
nucleicos pueden eluirse con agua o un tampn hiposalino y se
obtiene una muestra que puede emplearse directamente en las
aplicaciones posteriores.

CENTRIFUGACIN
La centrifugacin selectiva constituye un mtodo de purificacin
eficaz. As, por ejemplo, la ultra centrifugacin en gradientes
autogenerados de CsCl con fuerzas g elevadas se lleva empleando

mucho tiempo para purificar plsmidos. La centrifugacin suele

asociarse a otros mtodos, como la cromatografa de columna
centrifugada, en cuyo caso se combina la permeacin sobre gel y la
centrifugacin para separar el ADN o ARN de contaminantes ms
pequeos (sales, nucletidos, etc.), intercambiar tampones o
seleccionar segn el tamao. Algunos procedimientos combinan la
adsorcin selectiva en matriz

SEPARACIN POR AFINIDAD

En los ltimos aos, cada vez son ms los mtodos de purificacin
que combinan la inmovilizacin por afinidad de cidos nucleicos y la
separacin magntica. Por ejemplo, los ARNm poli A + pueden unirse
a partculas magnticas revestidas deestreptavidina mediante oligo
dT marcados con biotina, y el complejo de partculas puede
eliminarse de la solucin (y de los contaminantes libres) con un imn.
Esta tcnica en fase slida simplifica la purificacin de los cidos
nucleicos, pues permite sustituir las etapas de: centrifugacin,
extraccin orgnica y separacin de fases por una operacin de
separacin magntica, nica y rpida.

MTODO DE EXTRACCIN Y PURIFICACIN CON CTAB

El protocolo del mtodo del bromuro de cetil-trimetil amonio (CTAB)
fue elaborado por Murray y Thompson en 1980 (Murray y Thompson,
1980) y publicado posteriormente, en 1987, por Wagner y sus
colaboradores (Wagner et al., 1987). El mtodo es adecuado para
extraer y purificar ADN de vegetales y alimentos derivados de
vegetales y est especialmente indicado para eliminar los
polisacridosy los compuestos polifenlicos, que, de otro modo,
alteraran la pureza del ADN y, por tanto, su calidad. Este
procedimiento se ha aplicado con frecuencia en gentica molecular
de los vegetales y ha sido probado en ensayos de validacin para
detectar OGM. Se han elaborado algunas variantes adicionales para
adaptar el mtodo a una amplia gama de matrices de alimentos
transformados o sin transformar Principios del mtodo del CTAB:
lisis, extraccin y precipitacin Las clulas vegetales pueden lisarse
con el detergente
inico bromuro de cetiltrimeti amonio (CTAB), que forma un complejo
insoluble con los cidos nucleicos en medio hiposalino. De ese modo,
los polisacridos, los compuestos fenlicos y los dems
contaminantes permanecen en el sobrenadante y pueden eliminarse
por lavado. El complejo de ADN se solubiliza aumentando la
concentracin salina y se precipita con etanol o isopropanol

Pasos generales de la extraccin

Todos los mtodos de preparacin de las muestras pueden dividirse

en una serie de pasos generales, de tal forma que las necesidades de
cada paso dependen del microorganismo y de la muestra:
Liberacin de los cidos nucleicos de las bacterias, hongos o virus.
Puede ser un paso muy sencillo en el caso de los virus y algunas
bacterias (Mycoplasma spp.) pero muy difcil en el caso de otras
bacterias (Mycobacterium tuberculosis) y hongos. Hay una gran
variedad de mtodos para la liberacin de los cidos nucleicos de
diferentes microorganismos, entre los que se encuentran el hervir en
agua destilada o tampn de PCR, el uso de detergentes con o sin
calor,
hidrxido
sdico
con
calor,
ciclos
de
congelacindescongelacin, SDS-proteinasa K, cido perclrico,
enzimas (lisozima), sonicacin, etc. aunque la utilizacin de enzimas
no es muy recomendable ya que la propia muestra puede contener
inhibidores de las mismas.
-

Proteccin y estabilizacin de los cidos nucleicos frente a la

degradacin. El RNA es mucho ms difcil de estabilizar que el
DNA.
Eliminacin de inhibidores de la amplificacin. Para algunas
muestras (esputo, sangre) pueden ser necesarios ms pasos
que para otras (orina, LCR.
Concentracin de la muestra y la diana en un pequeo
volumen.

MTODO DE EXTRACCIN DE ADN

CASERO
INTRODUCCIN:
La extraccin del ADN es un procedimiento importante de la biologa
molecular
El ADN: es el cido desoxirribonucleico donde se encuentra la
informacin gentica de la mayor parte de los seres vivos. El ADN es
un producto con una estructura y qumica idntica en todos los seres
vivos, pero que contiene la clave de la vida, o sea, los genes que nos
hacen ser nicos y diferentes
La extraccin de ADN se realiza como un paso previo para purificar el
material gentico o ADN para realizar posteriormente estudios de
anlisis molecular (pruebas forenses, diagnstico de paternidad,
diagnstico de enfermedades, caracterizacin molecular, etc.). El ADN
de las frutas o verduras que comemos lo utilizamos por ejemplo para
identificar inequvocamente la especie o la variedad de que se trata o
incluso los padres del individuo.

La extraccin de ADN se puede realizar de varios tejidos, en nuestro

caso lo haremos de la semilla de la arveja previamente pelada, pero
se puede repetir con otras frutas o verduras.

OBJETIVOS:
Utilizar una tcnica casera para poder extraer el ADN de un
producto natural.

Observar sin ayuda de ningn instrumento ptico, el ADN.

Aprender a utilizar materiales y reactivos caseros.
Mejorar la comprensin de conceptos relacionados con el ADN
y su aplicacin.

MATERIALES:

10 gamos de alverjas.

Detergente lquido.

Sal.

Papel filtros.

2 vaso de precipitacin de 200 ml.

Agua destilada.

Varilla de vidrio pequea.

Mortero estril.

Agua destilada.

PROCEDIMIENTO
Para la realizacin de esta prctica Extraccin de ADN casero,
se realizar una solucin; en este caso de arveja pelada;
utilizar sal, agua destilada, lavavajillas. En esta prctica
trabajaremos con Arvejas.
Ya que hemos trabajado con arvejas, Pelamos y pesamos 10 gr
de ellas.
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Las arvejas son colocadas en el mortero, hasta obtener una

buena trituracin.

Una vez obtenido un buen machacado, hemos colocado al

Beaker, agregndole 50 ml de agua destilada.

Ya obtenida una buena consistencia de esta mezcla, se agreg

50 ml de NaCl2

Seguido se pipeteo 2ml de una solucin de lavavajillas al 20%

Al realizar los dos pasos anteriores Mezclamos lentamente sin

producir espuma por unos 5 a 10 minutos.

Filtramos la solucin hasta obtener por lo menos 100 ml.

Obtenida la filtracin, se le agrego 50 ml de alcohol helado por

los bordes del vidrio.

Al realizar el paso anterior se forma dos capas, donde en la

interfase se puedo observar claramente la precipitacin del
ADN.

Dejamos reposar de 2 a 3 min, luego introducimos una varilla a

la solucin apreciando como las fibras blancas se adhiere
rpidamente a la varilla de vidrio

RESULTADOS
Para Poder Llegar Al Resultado Daremos Una Breve
Explicacin De Que Es Lo Que Pas Al Realizar El Anterior
Procedimiento:
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Al realizar la trituracin o machacado de las arvejas

estamos haciendo que las clulas de estas, se rompan.
Seguido, al agregar el NaCl2 hace que las clulas se
desestabilicen las membranas, posteriormente Al agregar
el detergente est haciendo que en la solucin se termine
de romper las membranas.

Al filtrar la solucin obtendremos ADN y ARN, al agregar el

alcohol helado el ADN, se precipita, formando una
interfase donde se puede observar claramente en el
centro.

Como pudimos apreciar al realizar el ltimo paso de la prctica, se

forma una interfase, ms consistente debida a que la arveja presenta
un numero de cromosomas diferentes por tal motivo nuestro
Resultado En nuestro caso que fue la arveja se nota una membrana
blanquecina, filamentosa mucho ms clara y notable que en el resto
de los materiales utilizados.

CONCLUSIONES
El ADN es el material gentico a travs del cual se transmite
la informacin contenida en los genes de generacin en
generacin
El ADN contiene la informacin hereditaria correspondiente
a la especie.
El ARN requiere para la sntesis de protenas la presencia de
los ribosomas en las clulas ya que en el momento de la
duplicacin de los cromosomas la molcula de ADN de abre
gradualmente por los puentes de hidrgeno. El papel de las
molculas de ADN en la transmisin del cdigo gentico
rompiendo clulas de Escherichia Coli, una bacteria de la
flora intestinal, separando sus componentes en varias
fracciones.
Pero si el ADN es el responsable de la transmisin de la
informacin gentica debe ser capaz, no solo de
reproducirse, con lo cual se consigue conservar esta
informacin de padre a hijos sino tambin debe poder
transmitirlo.
De la prctica podemos concluir que la extraccin de ADN
de forma casera es un procedimiento muy sencillo y que
adems se puede realizar con diferentes tipos de materiales
que pueden ayudar en la realizacin del objetivo de sta
prctica.
La extraccin de ADN requiere de una serie de etapas
bsicas, en primer lugar, tiene que romperse la pared
celular y la membrana plasmtica para poder acceder al
ncleo de la clula y esto se logra al triturar las alverjas.
Debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar
libre el ADN, esto se logra mediante el cloruro de sodio que
desestabiliza a la membrana y el detergente que termina de
romperla.

 Al filtrar la solucin se logra separar las dos fases y el

alcohol helado se utiliza para precipitar el ADN, que es
soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol
precipita en la interfase entre el alcohol y el agua., como
resultado el ADN se coloca al inicio de la solucin y en la
interfase se observan sustancias blanquecinas.
Adems de la extraccin de ADN en alverja se realiz
extracciones en pltano, cebolla, tomate y saliva empleando
el
mismo
procedimiento
anteriormente
descrito,
obtenindose como conclusin que el ADN es ms visible en
la alverja debido a que presenta un mayor nmero de
cromosomas
La cadena del ADN es algo tan complejo que tiene cada uno
de los genes que nos hacen lo quesomos, con nuestro
temperamento,
nuestras
enfermedades
hereditarias,
nuestros rasgos.
El ADN est presente en los indicios biolgicos como sangre,
semen saliva, tejido, hueso, pelo etc

RECOMENDACIONES
Como en todo procedimiento que pasa a travs de varias manos,
en una prueba de ADN es necesaria la supervisin de cada una de
las etapas, para que el resultado final sea confiable para todas las
partes involucradas y no pueda ser impugnado
La ciencia y la tecnologa han evolucionado mucho, hace
aproximadamente veinte aos existe la tecnologa que ayuda a
manejar el ADN, las mquinas que se especializan en comparar
ADN, y eso ha ayudado mucho, pero para un futuro estamos
dejando que la ciencia decida cmo queremos las cosas, lo ms
hermoso es saber que te espera, como ser tu hijo, que ahora
tambin a los futuros padres les robaran esa alegra porque ahora
ellos se les va a resultar ms fcil escoger a su hijo.
En la CONTAMINACION QUIMICA es la presencia de productos
qumicos que dificultan procesos del anlisis gentico, como PCR y
extraccin del ADN.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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