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QUMICA ANALTICA:
MATEMTICAS:
PRCTICA 1
REGLAMENTO DE HIGIENE Y SEGURIDAD
1. Qu es un microorganismo?
2. Escribe el nombre de 5 microorganismos patgenos que conozcas y la
enfermedad producen.
3. Escribe el nombre de 5 microorganismos que no sean patgenos y donde se
encuentran.
4. Qu es y que se hace en un laboratorio de Microbiologa?
5. Cules son las consideraciones que hacen a este laboratorio diferente a otros
que hayas cursados durante la carrera (Qumica General, Analtica, Orgnica,
etc.)?
6. Cules son las principales reglas de higiene y seguridad que deben observarse
en el laboratorio?
7. Indica la importancia de cada una de ellas.
8. Definicin de asepsia, desinfeccin y esterilizacin
9. Qu entiende por tcnica asptica?
10. Cules son los desinfectantes que se emplean comnmente en el laboratorio de
microbiologa?
11. Qu se debe hacer cuando se derrama un cultivo microbiano sobre:
- La mesa de trabajo
- La bata
- El piso
- Las manos
12. Qu haras si te encontraras que las cajas petri con hongos que guardaste en tu
gaveta s quedaron destapadas el fin de semana?
PRCTICA 2
MANEJO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO
1. Describe el fundamento y la utilidad del microscopio ptico y del microscopio
electrnico.
2. De que tipo es el microcopio que utilizars en el laboratorio de Microbiologa?.
Esquematiza sus partes y menciona cual es la funcin de cada una de ellas.
3. Describe los tipos de iluminacin que se emplean con el microscopio ptico y su
aplicacin.
4. Qu es poder de resolucin y de que depende?
5. Explica con tus propias palabras los siguientes trminos:
- Apertura numrica
- Propiedad parafocal
- Aumento total
- Distancia focal
6. Ilustra de manera comparativa el dimetro de las lentes de los objetivos 10X, 40X
y 100X
7. Cul es la repercusin del diferente dimetro de las lentes?
8. Qu es un aumento vaco?
9. Cmo se calcula el aumento total de un microscopio?
10. Con base en la longitud de onda de la luz, cmo se puede mejorar el poder de
resolucin de un microscopio?
11. Qu es, de donde proviene, cual es su funcin y en que objetivos se usa el aceite
de inmersin?
12. Enlista los pasos para realizar el adecuado enfoque con el microscopio
13. Cmo se calibra el microscopio para realizar la medicin de microorganismos?
14. Qu microorganismos se pueden observar con cada uno de los objetivos?
PRCTICA 3
ESTUDIO MICROSCPICO DE LOS MICROORGANISMOS
Preparaciones
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Tinciones
1. Por qu es necesario teir a los microorganismos o bien el fondo de la
preparacin?
2. Qu es un colorante? Cmo est constituido? Qu factores intervienen para
que los colorantes se combinen con los componentes celulares?
3. Para que se emplean los mordentes? Describe algunos ejemplos.
4. Qu es una tincin? Cuntos tipos existen?
5. Describe las diferencias entre una tincin positiva y una negativa
Tinciones simples
1. En que consiste una tincin simple?
2. Qu es y cules son las principales caractersticas de un colorante vital y para
que se emplean?
3. Qu informacin proporcionan
- Una preparacin en fresco con tincin simple?
- Una preparacin fija con tincin simple?
5 Compara la forma y tamao de los microorganismos observados.
Tinciones diferenciales
1.
2.
3.
4.
5.
5. Al concluir la prctica llenar los siguientes cuadros con los resultados de las de las
preparaciones observadas
5.1 De bacterias
Nombre cientfico o clave de
muestra
O tipo de muestra
Morfologa
Movilidad (+ o -)
Tamao
Tipo de agrupacin
Gram (+ o -)
Acido resistencia (+ o -)
Endosporas (+ o -)
Tamao
Posicin dentro de la clula
Cpsulas (+ o --)
Grosor con respecto al dimetro de
la bacteria
Presencia de una o mas bacterias
dentro de la csula
Hifas cenocticas o
septadas
Dimetro de las hifas
Esporas dentro o fuera
del cuerpo fructfero
PRCTICA 4
ESTERILIZACIN Y PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Esterilizacin
1. Esquematice una autoclave, indicando cuales son las partes que la conforman, as
como la funcin de cada una de ellas.
2. Qu es y como se lleva a cabo la esterilizacin por calor hmedo?
3. Qu es y como se lleva a cabo la esterilizacin por calor seco?
4. Describe los siguientes mtodos de esterilizacin: tindalizacin, pasteurizacin,
filtracin, radiaciones, gases.
5. Qu es una sustancia termolbil? y Cmo se esteriliza?
6. Qu significa termorresistencia en Microbiologa?
7. Qu tipo de indicadores se utilizan para verificar el proceso de esterilizacin?
8. Qu es una espora bacteriana?
9. Qu es un indicador de pH? Menciona 5 ejemplos, indicando el intervalo de pH
de cada uno.
10. Con la informacin anterior llenar el siguiente cuadro
PROCESO
O MTODO
EQUIPO
Y CONDICIONES
TIPO
DE MATERIAL
MECANISMO DE
MUERTE CELULAR
Medios de cultivo
1. A que se le llama medio de cultivo? y Para que se utiliza?
2. Qu es el agar?. Menciona la forma de obtencin, as como su uso.
3. Indica la clasificacin de los medios de cultivo de acuerdo a su estado fsico y la
utilidad de cada uno de ellos
4. Qu en un medio de cultivo natural o complejo?
5. Qu en un medio de cultivo sinttico?
6. Define los medios de cultivo de acuerdo a su utilidad: enriquecido,
enriquecimiento, selectivo, diferencial, prueba bioqumica, de transporte y de
conservacin. Menciona un ejemplo de cada uno de ellos.
7. Qu es un factor de crecimiento?
8. Indica los cuidados que se deben tener al preparar los medios de cultivo
9. Escribe el nombre y frmula de 3 ejemplos de sustancias que son utilizadas en los
medios de cultivo como fuente de: Carbono, Nitrgeno, Fsforo y Azufre.
10. Qu factores fsicos y qumicos afectan la estabilidad de los medios de cultivo?
TIPO DE
MEDIO DE
CULTIVO
(Selectivo,
diferencial etc)
COMPUESTO
(S) QUE LO
HACEN
SELECTIVO O
DIFERENCIAL
TIPO DE
CARACTERSTICAS
MICROORGANISMOS
COLONIALES DE
QUE CRECEN EN EL
LOS
MICROORGANISMOS
MEDIO
QUE CRECEN
Agar CASOY o
casena soya
Caldo CASOY
o casena soya
Agar
Sabouraud
Agar
eosina
azul
de
metileno
(EMB)
Manitol
sal
Agar (MSA)
Agar
Vogel
Jonson
Agar cetrimida
Gelosa
Nutritiva
Agar sangre
Tripticasa soya
agar
PRCTICA 5
TCNICAS BSICAS PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
5.1 Siembra, cultivo y estudio de bacterias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Qu es un cultivo microbiolgico?
Qu es una colonia bacteriana?
A que se le denomina cepa en microbiologa?
Qu es una cepa pura? Investiga el nombre de tres instituciones que se
encarguen de vender cepas puras.
Para cultivar un microorganismo, cules son los cuidados que debes tener en el
medio de cultivo y durante la incubacin?
Qu es un cultivo axnico?
Mencione los cuidados para eliminar los riesgos de contaminacin.
Qu entiendes por tcnica asptica?
De acuerdo a la informacin del siguiente cuadro, indique el dispositivo (s) y
tcnica (s) de siembra que se emplea en cada caso
TCNICA DE SIEMBRA
f) Estructuras especiales
5.2 Siembra, cultivo y estudio de hongos.
1.
2.
3.
4.
PRCTICA 6
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Explica los mtodos que se utilizan para el aislamiento de microorganismos.
2. Que tipo de microorganismos se pueden aislar en los siguientes medios de cultivo.
a) Agar cetrimida
b) Agar Eosina azul de metileno (EMB)
c) Agar Mc Conkey
d) Agar Lipman libre de nitrgeno
e) Agar sal manitol
f) Agar Sabourau-Rosa de Bengala-Estreptomicina
g) Agar Vogel Johnson
3. De cada uno de los medios anteriores, indica cul es el componente que lo hace
selectivo y a que tipo de microorganismos inhibe.
4. Indica algunas de las caractersticas fisiolgicas de los microorganismos que se
aprovechan para efectuar su aislamiento.
5. Explica las diferentes tcnicas que existen para crear condiciones de anaerobiosis
y microaerofilia
6. Investiga que gneros de bacterias pueden crecer bajo estas condiciones y cual es
su importancia
7. Investiga la composicin qumica y usos de los siguientes medios de cultivo: Caldo
tioglicolato y agar anaerbico de Brewer.
8. Qu compuesto(s) de estos medios de cultivo permiten el desarrollo de bacterias
anaerobias?
9. Investiga algunas aplicaciones de estas tcnicas en la industria y en la clnica.
PRCTICA 7
CUANTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
1. Para que se aplica la cuantificacin de microorganismos?
2. Qu tipo de mtodos se emplean para cuantificar los microorganismos totales?.
Da dos ejemplos.
3. Qu tipo de mtodos se emplean para cuantificar los microorganismos viables en
una muestra?. Da dos ejemplos.
4. Qu tipo de muestras deben ser diluidas antes de proceder a la cuantificacin?
5. Qu tipo de muestras deben ser concentradas antes de proceder a la
cuantificacin?
6. Qu mtodos emplea para concentrar los microorganismos de una muestra?
7. En las tcnicas de cuantificacin cules son los errores ms frecuentes?
8. Cules son las ventajas y desventajas de los mtodos de cuantificacin directos?
9. Para cuantificar hongos utilizaras el mtodo turbidimtrico?. Explique el por
que?
10. Cmo se determina la superficie que ocupa un campo microscpico?
11. Qu importancia tiene la determinacin anterior en el mtodo de Breed?
12. Cmo lograras cuantificar las clulas viables de todos los grupos microbianos
existentes en una muestra dada?
13. En el mtodo de dilucin y vaciado en placa por que se recomienda agitar cada
una de las diluciones un nmero constante de veces?
14. En la preparacin de diluciones emplearas agua destilada? Indique el por que.
15. Qu temperatura debe tener el medio de cultivo antes de vaciarlo a las cajas que
contienen la muestra
16. Qu entiendes por efecto de dilucin aparente?
17. Qu debe hacer cuando en las cajas inoculadas con diferentes diluciones no se
observa el efecto de dilucin aparente?
18. Cul es el significado de UFC y NMP?
19. Para que tipo de muestras se emplea el recuento por filtro de membrana?
20. Para qu se utilizan estas tcnicas en la industria o en la clnica?
PROBLEMAS
1. Comparar la calidad de 2 muestras de leche.
Con tal fin entregaste una muestra de cada leche a 2 de tus tcnicos, y les indicaste
aplicar el mtodo de Breed.
Los reportes a partir de los cuales hars la interpretacin se especifican a continuacin:
Tcnico 1
Dimetro de campo microscpico
rea en la que se coloc la muestra
Volumen de la muestra
Nmero de
1
campo
Nmero de
14
microorganismos
=70 m
= 2.0 cm2
= 0.01 mL
10
25
12
10
12
20
Tcnico 2
Dimetro de campo microscpico
rea en la que se coloc la muestra
Volumen de la muestra
Campos observados
Promedio de microorganismos/ campo microscpico
= 0.65 m
= 1.0 cm2
= 0.01 mL
= 10
=18
Repeticiones
10-4
I Agua sin
tratar
II Agua
tratada con
cloro
III Agua
tratada con
plata coloidal
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Incontables
Incontables
Incontables
920
880
950
300
400
350
Diluciones
10-5
10-6
Nmero de UFC por placa
900
250
750
150
820
200
120
30
Incontables
550
150
35
10
3
50
200
70
7
10-7
45
32
35
1
70
3
0
50
1
Cuadro 2 Resultados del mtodo de Dilucin y siembra en tubos que contienen caldo
lactosado
Lotes
Repeticiones
10-4
I Agua sin
tratar
II Agua
tratada con
cloro
III Agua
tratada con
plata coloidal
1
2
3
1
2
3
1
2
3
3
3
3
3
2
3
3
2
1
Diluciones
10-5
10-6
Nmero de tubos positivos
3
3
3
3
3
3
3
1
2
2
2
0
3
1
0
0
1
1
10-7
3
2
2
0
0
0
0
0
0
PRCTICA 8
NUTRICIN MICROBIANA
1. Cmo se clasifican los microorganismos de acuerdo a la fuente de carbono que
utilizan?
2. Cmo se clasifican los microorganismos de acuerdo a la fuente de energa que
utilizan?
3. Define microorganismo auxtrofo y da algunos ejemplos
4. Cules son los microorganismos prototrofos?
5. Indica como son utilizados por los microorganismos los siguientes compuestos
qumicos:
a) Peptona de carne,
b) Extracto de levadura,
c) NaCl, FeSO 4 ,
d) MgSO 4 ,
e) (NH 4 )2SO 4 ,
f) K 2 HPO 4 ,
g) KH 2 PO 4 ,
h) glucosa,
i) sacarosa
j) almidn.
6. Disea un medio de cultivo para propagar bacterias quimiolittrofas y una
fotoauttrofa
7. Describe las condiciones de incubacin para los dos casos.
8. La glucosa puede ser considerada como fuente de carbono y energa. En caso
afirmativo o negativo indique el por qu?
9. Investiga las necesidades nutricionales de los siguientes microorganismos:
Escherichia coli
Micrococcus luteus
Azotobacter sp
Rhodotorula
Aspergillus Nger
Spirulina sp
E indica cules son auttrofos o hetertrofos
Cules son fottrofos, cules quimitrofos
Cules son protrofos o auxtrofos
Cules presentan alguna caracterstica adicional
PRCTICA 10
METABOLISMO MICROBIANO
1. Qu es una enzima?
2. Cmo actan las enzimas?
3. Investiga la composicin y utilidad de los siguientes medios de cultivo: Caldo
lactosado bilis verde brillante.
4. Investiga la composicin y utilidad de los siguientes medios de cultivo: Caldo rojo
de fenol manitol y RMVP
5. Cul es el fundamento de las Pruebas bioqumicas Caldo rojo de fenol manitol y
RMVP?
6. Escribe el nombre correcto de dos microorganismos que den reacciones positivas
para estas pruebas y dos microorganismos que den reacciones negativas
7. Cul es el fundamento de las Pruebas bioqumicas
a) Kligler
b) SIM?
8. Escribe el nombre correcto de dos microorganismos que den reacciones positivas
para estas pruebas y dos microorganismos que den reacciones negativas.
9. Investiga la composicin y utilidad de los siguientes medios de cultivo: Caldo
nitrato y Hugh-Leifson (Oxidacin - Fermentacin)
10. Cul es el fundamento de las Pruebas bioqumicas Caldo nitrato y OF?
11. Escribe el nombre correcto de dos microorganismos que den reacciones positivas
para estas pruebas y dos microorganismos que den reacciones negativas.
12. Investiga el fundamento de las siguientes pruebas bioqumicas:
a) citrato de Simmons,
b) catalasa,
c) oxidasa,
d) leche tornasol,
e) DNAsa,
f) urea,
g) fenilalanina,
h) descarboxilacin de aminocidos,
i) leche descremada,
j) agar almidn,
k) hidrlisis de la gelatina
13. Busca una tabla que contenga los resultados de las pruebas bioqumicas
utilizadas para la identificacin de enterobacterias.
14. Explica la reduccin asimilatoria de nitratos. En este caso los nitratos son
utilizados como fuente de nitrgeno o como fuente de energa
15. Explica el proceso de desnitrificacin, y analiza, si en este caso los nitratos son
utilizados como fuente de nitrgeno, o como fuente de energa.
16. Investiga que rutas del metabolismo se utilizan para el catabolismo de las fuentes
de carbono y nitrgeno.
PRCTICA 10
INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO Y MUERTE
DE LOS MICROORGANISMOS
1. De acuerdo a su temperatura ptima de crecimiento y necesidades de oxgeno,
Cmo se clasifican las bacterias?
2. Define los siguientes trminos:
a) Periodo trmico mortal
b) Punto trmico mortal
c) Psicrfilo
d) Mesfilo
e) Termfilo
f) Hipertermfilo
g) Halfilo
h) Xerfilo
i) Osmfilo
3. Qu efecto tiene el pH sobre el crecimiento de los microorganismos?
4. Cmo afecta la presin osmtica a los microorganismos?
5. Cmo pueden regular este efecto algunos microorganismos?.
6. Qu dao causa la luz ultravioleta a los microorganismos? Esquematiza
7. Qu mecanismos utiliza la bacteria para revertir el efecto de la luz UV?
8. Define los siguientes trminos y da un ejemplo de cada uno de ellos
a) Antibitico
b) Biocida
c) Bioesttico
d) Desinfectante
e) Antisptico
f) Agente qumioteraputico
9. Investiga 4 microorganismos productores de antibiticos, mencionando el
antibitico que producen y como acta
10. Qu es la resistencia a antibiticos? Y Cmo se transmite?
11. Qu es la concentracin mnima inhibitoria?
12. En que consiste la tcnica de difusin en placa?
13. De acuerdo con su mecanismo de accin, Cmo se clasifican los antibiticos?