UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

E.A.P. BIOLOGA Y BIOTECNOLOGA

TEMA:
Medios de Cultivo y Aislamiento de Microorganismo para Biotecnologa

ASIGNATURA:
Introduccin a la Biotecnologa

DOCENTE:
CARVAJAL CABALLERO, Nstor

ESTUDIANTE:
BRIONES RAMREZ, Sara Raquel

CICLO:
I
GRUPO:
A1

Cajamarca, Junio 201

MEDIOS DE CULTIVO
Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
PARA
BIOTECNOLOGA

I. INTRODUCCION
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una amplia
diversidad de nichos ecolgicos.
Entre los requerimientos ms importantes para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno,
nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del
aporte extra de factores de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de
levadura entre otros.
Adems, existen sistemas importantes para la identificacin de microorganismos, como el
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio
de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse
para dar colonias.
En presente informe se describe el proceso de preparacin de medios de cultivo y
aislamiento de microorganismos del suelo para biotecnologa.
Detallando el procedimiento que se sigue en cada fase, los materiales y tcnicas utilizadas
tanto por el profesor como por nosotros los estudiantes.

II.
MTODOS

MATERIALES

1.

MATERIALES
a) AGAR

NUTRITIVO

Agar Nutritivo 2% (2g)

NaCl 0,5% (0.5g)

Peptona 1% (1g)

Agua Destilada 100 ml

b) PDA
PDA 3,9% (3,9g)

c)

Agua Destilada 100ml

CALDO NUTRITIVO

NaCl 0,5% (0,5g)

Peptona 1% (1g)

Agua Destilada 100ml

d) CALDO GLUCOSADO

Glucosa

e)

4%

(4g)

Agua Destilada 100ml

OTROS MATERIALES
-Probeta

-Autoclave

-Matraz de Erlenmeyer

-Mechero

-Placas Petri

-Azas.

-Cabina de flujo.

-Tubos de ensayo.

-Papel
laboratorio.

-Balanza de laboratorio.

-Lminas portaobjetos.

de

aluminio.--

-Violeta de Genciana.

-Safranina.

-Esptula.

Estufa

de

-Lugol.

-Alcohol

acetona.

-Microscopio.

2. MTODOS
a) Preparacin de medios de cultivo.
-Agar Nutritivo
Para preparar el Agar Nutritivo se mide 100ml de agua destilada en la probeta, para luego
vaciar el contenido en el Matraz de Erlenmeyer, seguidamente se coloca en el mismo
matraz 2g de Agar Nutritivo, 0,5g de NaCl y 1g de Peptona, mezclamos bien y colocamos
a la estufa el matraz con el fin de disolver las partculas slidas que hayan quedado y as
obtener una solucin homognea.

-PDA.
Para la preparacin del PDA, se miden 100ml de agua destilada en la probeta, se la vaca
en el matraz y se pesa 3,9g de PDA para luego mezclarlos en el matraz y llevarlo a la
estufa y obtener la solucin homognea.

-Caldo Nutritivo.

Para preparar el caldo nutritivo se coloca en el matraz 100ml de agua destilada, y se pesa
0,5g de NaCl y 1g de Peptona para mezclar en el
matraz llevarlo a la estufa para disolver bien y tener
una solucin homognea.

-Caldo Glucosado.
Finalmente para preparar el Caldo Glucosado se
coloca en el matraz 100ml de agua destilada, y se
pesa 4g de Glucosa, mezclamos en el matraz y
llevamos a la estufa para homogenizar la mezcla.
Todos los medios de cultivo se colocan en el
autoclave a 121C y 15 PSI (Pounds=libra, Squerd= cuadrado, Inche=pulgada) durante un da
para su esterilizacin.

b) Aislamiento de microorganismos del suelo.

En esta fase, se sacan los medios del cultivo, en este caso solo utilizamos el Agar Nutritivo.
Colocamos todos los materiales necesarios en la Cabina de Flujo unos 15 minutos con luz
UV para esterilizar, luego apagar la luz y levantar la tapa para que el flujo laminar se
estabilice y procedemos a trabajar.

-SERVIDO
Se pesa 10g de tierra para diluirla con 100ml de agua
destilada en un recipiente esterilizado, trabajar siempre
junto al mechero.
Una vez realizada la mezcla procedemos al servido:
MUESTRA 1/10: se diluye en un tubo de
ensayo 9ml de la muestra original en 1ml de
agua destilada.
MUESTRA 1/100: en el segundo tubo de ensayo
se diluye 9ml de la muestra 1/10 en 1ml de agua
destilada.
MUESTRA 1/1000: para el tercer y ltimo tubo
de ensayo, se diluye 9ml de la muestra 1/100 en
1ml de agua destilada.

-SIEMBRA

Se trabaja en la Cabina de Flujo; y se utiliza 5

Placas Petri.

1ra Placa Petri: se coloca 1ml de la

muestra original, realizando el raspado
para dejar estras perpendiculares.
2ra Placa Petri: se carga el aza con
anillo, con la muestra de 1/10 y se
coloca la gota obtenida en la Placa
Petri realizando un raspado dejando
estras perpendiculares.
3ra Placa Petri: al igual que la anterior placa se carga
el aza con anillo, con la muestra 1/100 y se coloca la
gota obtenida en la Placa Petri, realizando el raspado
para dejar estras perpendiculares.
4ta Placa Petri: se carga el asa con anillo, con la
muestra 1/1000 la gota obtenida se coloca en la Placa
Petri realizando el raspado para dejar estras
perpendiculares.
5ta Placa Petri: en esta placa tan solo se coloca una
gota con la misma asa, del medio de cultivo (Agar Nutritivo). Ser la PLACA
CONTROL.

Finalmente todas las placas se las

coloca en la estufa 24 horas.
NOTA: todas las placas se rotularon:
Grupo: A-1, Fecha: martes 17 de
mayo, Hora: 12:52 pm, Escuela: Biologa y Biotecnologa.

c) Clasificacin de Colonias y Bacterias.

-COLONIAS.
Para la clasificacin de colonias, elegimos una por pareja y la rotulamos.
Luego observamos sus caractersticas: forma, borde, elevacin, superficie, color y otras
caractersticas.

-BACTERIAS.
Para la clasificacin de bacterias, realizamos la tincin Gram, con el siguiente
procedimiento:
Desinfectamos las lminas portaobjeto y
colocamos una gota de agua destilada.

 De la colonia elegida, sacamos una pequea muestra con el asa con anillo y la
colocamos en la gota de agua de la lmina portaobjetos para dispersar la muestra, la
dejamos secar.

TINCIN GRAM
Una vez seca la muestra procedemos a teir con violeta de genciana (1gota), dejamos
reposar 1 minuto y lavamos suavemente con agua el exceso de colorante y secamos
al mechero.
Luego teimos con Lugol (1gota), dejamos reposar 1 minuto, lavamos suavemente
con agua el exceso de colorante, luego decoloramos con alcohol cetona gota a gota
hasta que salga un color tenue, y secamos al mechero.
Finalmente agregamos una gota de safranina, para el contraste, dejamos reposar de
30 a 45 segundos, lavamos suavemente con agua el exceso de colorante y secamos al
mechero.
Una vez seca la muestra llevamos al microscopio, enfocamos con los objetivos de
menor, mediano y mayor aumento.

Como la muestra en seco, colocamos una gota de aceite de cedro, y enfocamos con el
objetivo de inmersin.
Una vez enfocada la muestra, procedemos a clasificar las bacterias de acuerdo a su
forma y su tincin GRAM

III. RESULTADOS
a) COLONIAS
Forma: irregular
Borde: ondulado
Elevacin: convexo
Superficie: rugoso
Color: blanquecino
Otras Caractersticas: opaco

Colonia Observada

b) BACTERIAS
Forma: bacilos
GRAM: (+) Positivas

Bacterias encontradas en la Colonia.

IV. DISCUSIN
QU ES UNA COLONIA DE BACTERIAS?
Una colonia es una agrupacin de bacterias formada a partir de la reproduccin de una
Unidad Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio slido; aunque vara de tamao
generalmente es visible a simple vista. Una UFC puede ser un solo microorganismo o bien
un grupo de microorganismos de una misma especie como en el caso de bacterias que
tienen tendencia a permanecer unidas como los estafilococos o los estreptococos. Las
colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos color
caractersticos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es
constante bajo condiciones controladas y depende de la especie bacteriana que la forme.

MORFOLOGIA COLONIAL
Las colonias presentan diversas caractersticas:

FORMA

BORDE

Circular
Puntiforme
Irregular
Rizoide
Fusiforme
Entero
Ondulado
Lobulado
Filamentoso
Especulado
Rizoide

ELEVACIN

SUPERFICIE
COLOR
OTRAS CARACTERTICAS

Plana
Convexa
Elevada
Acuminada
Umbilicada
Papilada
Lisa
Rugosa
Plegada
Variados Colores
Opaca
Translucida
Transparente

En el caso de la colonia observada por sus caractersticas: forma irregular, borde ondulado, elevacin
convexa, superficie rugosa, color blanquecino y opaco; y las bacterias encontradas en ella, se
identifica que probablemente se traten

de Colonias de Bacillus subtilis.

Colonia Observada

Bacterias encontradas en la Colonia.

Una colonia de Bacillus subtilis es tradicionalmente circular, con bordes dentados, crema o
blanco. Las bacterias se propagan hacia fuera del centro, manteniendo la forma circular
irregular de la colonia.
Bacillus subtilis colonias se ven afectadas por la calidad de agar en el que se producen. La
colonia no muere si el agar no es ideal - las bacterias son resistentes, capaces de vivir en
condiciones secas y muy hmedo.
En agar seco, la colonia tiene una forma circular, sino que forma ramas que irradian desde
el centro. Las bacterias se mueven en lnea, engrasar el agar para aquellos detrs de l.
Adems, Bacillus subtilis produce esporas en el agar se seca.
Si se aade ms humedad a agar secar una formacin de tiro al blanco y la forma circular
ms irregular resultarn. Cuando agar es demasiado hmedo, la colonia crece realmente en
l, cavando hacia abajo y luego hacia adelante y formar capas efectos coloniales en los
seres humanos

QU ES UN BACILO?
Etimolgicamente el vocablo bacilo proviene del latn bacillus y significa varilla. Un
bacilo es una especie de bacteria que tiene forma de varillitas, esta es su principal
caracterstica. Y que al ingresar

dentro del organismo de un ser

vivo puede ocasionarle graves enfermedades. Los bacilos ms comunes son los que
producen enfermedades como la tuberculosis, el ttanos y la fiebre tifoidea.

Aunque muchos bacilos son patgenos para el ser humano, algunos no hacen dao, pues
son los encargados de producir algunos productos lcteos como el yogurt (lactobacilos).
Estas bacterias pueden habitar en diversos ambientes y solo pueden ser visibles a travs de
un microscopio.
TIPOS DE BACILOS
GRAM positivos: fijan el violeta de genciana en la pared celular porque carecen de
capa de| lipopolisacrido.
GRAM negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de
lipopolisacrido (peptidoglicano).

FORMAS

Cocobacilo
Bacilo
Empalizada
Diplococo
Estreptobacilo

BACILLUS SUBTILIS
Reino: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Bacillaceae
Gnero: Bacillus
Especie: Bacillus subtilis

Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, Catalasapositiva, aerobio facultativo1 comnmente encontrada en el suelo. Miembro del Gnero
Bacillus, Bacillus subtilis tiene la habilidad para formar una resistente endospora protectora,
permitiendo al organismo tolerar condiciones ambientalmente.
Patognesis
Bacillus subtilis no es considerado patgeno humano; sin embargo puede contaminar los
alimentos, pero raramente causa intoxicacin alimenticia. Sus esporas pueden sobrevivir la
calefaccin extrema que a menudo es usada para cocinar el alimento, y es responsable de causar
la fibrosidad en el pan estropeado

FUNDAMENTO DE LA TINCIN GRAM

La diferencia entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas se deba a la naturaleza
fsica de sus paredes celulares. El peptidoglicano no se tie por s mismo, ms bien parece
actuar como barrera de permeabilidad para evitar la prdida de cristal violeta. Durante el
proceso de coloracin las bacterias se tien primero con cristal violeta y luego se tratan con

yoduro para favorecer la retencin del colorante. En la decoloracin con etanol, se cree que
el alcohol contrae los poros de la capa gruesa de peptidoglicano y se retiene el complejo
colorante yoduro; as las bacterias adquieren color violeta. Por el contrario, la capa de
peptidoglicano de las bacterias Gram negativas es muy fina, con menos enlaces y con poros
de mayor tamao. Adems, es posible que le tratamiento con alcohol extraiga suficientes
lpidos de la membrana externa como para aumentar su porosidad. Por estos motivos el
alcohol elimina ms fcilmente el complejo cristal violeta yoduro en las bacterias Gram
negativas.

V. CONCLUSIONES
Se observ colonias con caractersticas similares en el agar nutritivo, forma
irregular, borde ondulada, elevacin convexa, etc. Que desarrollaron su crecimiento
en forma ptima debido al aporte nutricional del agar (carbono, el oxgeno,
nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno)
Se caracteriz a la colonia elegida por la forma irregular que present
Se identific a la bacteria Bacillus subtilis en base a investigacin sobre los tipos de
bacterias que habita naturalmente en la tierra.
Existen bacilos patgenos y no patgenos, en el caso de Bacillus subtilis, es una
bacteria no patgena, por lo que no representa ningn riego sobre nuestra salud, lo
que nos permite experimentar con este tipo de bacteria.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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