OBJETIVOS

Reconocer los equipos cromatograficos e identificar sus partes HPLC,

Cromatografo de gases y UPLC Masa Masa.

Identificar y aplicar la lgica de manejo de los equipos, as como los
cuidados que se deben tener antes, durante y despus de su manejo.

MARCO TERICO
CROMATOGRAFA
Principios de cromatografa
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de
especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La
cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de
los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o
estacionaria y otra mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase
mvil, que puede ser un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil
se hace pasar a travs de una fase estacionaria inmiscible, la cual se
mantienen fija en una columna o sobre una superficie slida. Las fases se
eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo
distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que
son retenidos con ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente
con el flujo; por el contrario los componentes que unen dbilmente a la fase
estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas
discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
En el laboratorio de tcnicas instrumentales de la Universidad de Valladolid
disponemos de las siguientes tcnicas cromatogrficas:
CROMATOGRAFA DE LQUIDOS HPLC
CROMATOGRAFA DE GASES
CROMATOGRAFA INICA

CROMATOGRAFA DE LQUIDOS HPLC

Principios de la tcnica
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs
de una columna que contiene a la fase fija. La separacin
cromatogrfica en HPLC es el resultado de las interacciones especficas
entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos
de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography)
no est limitada por la volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas,
productos naturales lbiles, materiales polimricos y una gran variedad
de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase
mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra disponible para la
selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que
permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms
posibilidades para la separacin.
HPLC preparativa
Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de
valor en las industrias qumicas y farmacuticas as como en la
biotecnologa y la bioqumica. La cromatografa preparativa comprende
un amplio rango de aplicaciones, desde el aislamiento de 1g de
muestra para identificacin espectroscpica hasta el aislamiento de un
compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Aplicaciones
Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos

Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos

Productos

de

alimentacin:

Edulcorantes

artificiales,

antioxidantes, aflatoxinas, aditivos

Productos de la industria qumica: Aromticos condensados,

tensoactivos, propulsores, colorantes

Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB

Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos

Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

Separacin y purificacin de metabolitos

Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas

procedentes de muestras de orina

Purificacin y separacin de enantimeros

Purificacin de compuestos naturales

Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

Funcionamiento del servicio

Las muestras deben ir acompaadas de la hoja de solicitud de servicios
generada en esta pgina web una vez realizado el registro en la misma.
El ususario debe rellenar todos los campos de la solicitud de servicios
que conozca, con el fin de obtener el mejor resultado posible.

Equipos
HPLC analtico 1200 Series de Agilent Technologies

Bomba cuaternaria G1311

Detector de longitud de onda variable G1314B

Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D

Detector de ndice de refraccin G1362A

Detector de fluorescencia G1321A

HPLC preparativo 1200 Series de Agilent Technologies

Dos Bombas preparativas G1361A

Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D

Muestreador automtico G1329A

Colector de fracciones G1364B

CROMATOGRAFA DE GASES
Principios de la tcnica
En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la
cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el
flujo de una fase mvil que es un gas inerte, y a diferencia de la mayora
de los tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las
molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a
travs de la columna.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la
ventaja de disponer de detectores mucho ms universales (por ejemplo,
el de ionizacin de llama). Adems, para numerosas aplicaciones, los
mtodos son ms simples, ms rpidos y ms sensibles que los
correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La
instrumentacin requerida para cromatografa de gases tambin es
mucho ms sencilla y econmica que la empleada en HPLC. Sin
embargo, en cromatografa de gases, la influencia de la temperatura
sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a diferencia de la
cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta
limitaciones en tres casos:

compuestos poco voltiles, generalmente los de peso

molecular superior a 300 u.m.a.

compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura

incluso moderada (determinados compuestos de inters biolgico)

compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que

son e n general poco voltiles)

Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los

componentes de la mezcla problema son voltiles o semivoltiles y
trmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400C. En cambio,
cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o termolbiles, la
tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).
A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la
presencia o ausencia de un compuesto en una muestra determinada.

Aplicaciones
Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis de
hidrocarburos, semivoltiles y voltiles, anlisis del aire...
Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos
orgnicos, azcares, FAMES, steres metlicos, triglicridos, alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas,aldehdos y
cetonas, steres y glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases
inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre,
disolventes residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas
derefinera, gasolinas, gasleos, parafinas.
Funcionamiento del servicio
Las muestras deben ir acompaadas de la hoja de solicitud de servicios
generada en esta pgina web una vez realizado el registro en la misma.

El ususario debe rellenar todos los campos de la solicitud de servicios

que conozca, con el fin de obtener el mejor resultado posible.

Equipos
Cromatgrafos de gases Agilent Technologies 7890A

Detector de captura electrnica (ECD)

Detector de ionizacin de llama (FID)

CROMATOGRAFA INICA
Principios de la tcnica
En las ltimas dcadas, la cromatografa inica se ha convertido en
uno de los mtodos ms importantes para el anlisis de trazas de
aniones y cationes. Tcnica absolutamente imprescindible en el
anlisis de aguas y medio ambiente
Se basa en el uso de resinas de intercambio inico. Cuando una
muestra inica atraviesa estas columnas, los iones presentes se
separan debido a las diferentes retenciones que sufren al interactuar
con la fase fija de las columnas analticas. Una vez separada, la
muestra pasa a travs de un detector (conductimtrico, amperomtrico,
UV...) donde se registra la seal obtenida respecto al tiempo de
retencin. El resultado son unos cromatogrmas donde la posicin de
los mximos nos indica el in presente (carcter cualitativo) y su rea
nos indica que cantidad existente de dicho in (carcter cuantitativo).
Potencial analtico de la cromatografa inica
- Aniones inorgnicos y orgnicos: Fluoruros, cloruros, nitritos,
bromuros, nitratos, fosfatos, sulfatos, bromatos, cloritos, cloratos,
actico, ctrico, tartrico, lctico, srbico, benzoico

Azcares

polialcoholes:

Monosacridos,

disacridos,

oligosacridos, polisacridos.
- Cationes: Sodio, amonio, potasio, calcio, magnesio.

Aplicaciones
Aguas de consumo
Aguas minerales
Bebidas
Productos crnicos
Productos vegetales
Alimentacin infantil
Funcionamiento del servicio
Las muestras deben ir acompaadas de la hoja de solicitud de
servicios generada en esta pgina web una vez realizado el registro en
la misma. El ususario debe rellenar todos los campos de la solicitud de
servicios que conozca, con el fin de obtener el mejor resultado posible.

Equipo
Cromatgrafo Inico IC Professional 850 de Metrohm con sistema
de utrafiltracin
Detector de conductividad. Supresin qumica secuencial
Detector amperomtrico de pulsos (PAD)