Biologa Molecular en el diagnstico de Hepatitis viral

Se estudia VHB y VHC, ya que producen cronicidad, mediante la deteccin, la genotipificacin y

cuantificacin del virus.
Utilidad de la deteccin de cidos nucleicos
DNA de VHB
RNA de VHC
Indica replicacin activa
Confirmacin de infeccin por VHC (IgG no
discrimina si es infeccin aguda o crnica)
Ms sensible que pruebas serolgicas
Monitoreo de respuesta sostenida a terapia
antiviral (post-tratamiento).
Resolver diagnsticos dudosos
El VHB posee un DNA circular, parcialmente doble hebra de 3215 nt. Mientras que VHC posee un
RNA lineal de 9600 nt aprox. Por lo tanto, para disear una tcnica de biologa molecular capaz de
identificar los cidos nucleicos de estos virus, se debe utilizar como blanco las regiones ms
conservadas. Para ello se utiliza un primer, que en el caso de VHB reconoce el segmento S y en el
VHC, reconoce la regin 5NC (no codificante).
Genotipificacin viral
VHB
VHC
Variabilidad >8%
Variabilidad entre 31 a 33%
10 genotipos (A-J)
7 genotipos
Genotipo F ms prevalente en Chile (84%), Genotipo 1b ms prevalente en Chile (72%).
genotipos B y C importados desde Asia (3,8% y Genotipos 4, 5 y 6 son importados.
6,1% respectivamente)
Importancia clnica
Genotipo F gran probabilidad de desarrollar Establecer pronstico de respuesta y tiempo de
hepatocarcinoma.
terapia (terapia dual con PegIFN + Ribavirina).
Establecer esquemas de tratamiento en los que
se incorporan Antivirales de Accin Directa
(AAD).
Objetivo del tratamiento: disminuir carga viral Terapia dual
y lograr seroconversin (HBeAg Anti-HBe).
Genotipo 2 o 3 respuesta virolgica
sostenida (RVS) de 70-80%
Tratamiento
con
anlogos
de
(eliminacin definitiva del virus)
nuclesidos respuesta similar en
genotipos A, B, C y D
Genotipo 1 no supera el 50% de
RVS
Tratamiento con PegIFN gran % de
xito en genotipos A, B y F. En C y D se Terapia con AAD
prefiere anlogos de nuclesidos.
Genotipo 1, 2 y 3 RVS entre 90 y
95%, el problema es el alto costo.
Para la genotipificacin de los virus se pueden realizar tcnicas tales como secuenciacin,
hibridacin y PCR-RFLP.

Carga viral
Cantidad de virus por unidad de volumen de suero o plasma (en la prctica se pide suero).
Precaucin al trabajar con VHC ya que el RNA es muy lbil.
Informar: VHB = Ul/ml y/o cp/ml ; VHC = UI/ml
Utilidad carga viral
VHB
VHC
Decisin de tratamiento en conjunto con HBeAg. Pronstico y monitoreo de respuesta a
Pronstico y monitoreo de respuesta a terapia.
terapia.
Se asocia a riesgo de desarrollo de
hepatocarcinoma. (A mayor carga, mayor riesgo)
Principal mtodo para medir cargar viral qPCR
Hematocromatosis tipo I (hereditaria)
Enfermedad autosmica recesiva, en la que existe sobrecarga sistemtica de hierro (desde el
nacimiento), provocada por un aumento en la absorcin de este mineral.
El gen responsable es el HFE (del hepatocito), regula la expresin de hepcidina.
La hepcidina impide que la ferroportina libere hierro a la sangre desde el epitelio intestinal o desde
los macrfagos que fagocitan eritrocitos senescentes. Cuando existe la mutacin en el HFE, la
hepcidina se expresa en pequeas cantidades por lo que la ferroportina libera el contenido de hierro
de las clulas antes mencionadas a la sangre.
El organismo va a considerar esto
como una disminucin de las
reservas de hierro, por lo que va a
seguir absorbiendo. El hierro
puede acumularse en distintos
rganos, siendo uno de ellos el
hgado.
Esta patologa se detecta con
transaminasas
elevadas,
medicin repetida de hierro
srico, % de saturacin de
transferrina elevada, ferritina
srica elevada.
Existen dos mutaciones puntuales que afectan al gen HFE.
G845A C282Y (cistena-tirosina)
C187G H63D (histidina asprtico)
El diagnstico de la patologa se realiza a partir de DNA genmico, en el cual se busca la mutacin
puntual mediante T de melting o PCR-RFLP.