UNIVERSIDAD NACIONAL

DE SAN AGUSTIN
FACULTAD DE INGENIERIA DE
PROCESOS
ESCUELA PROFECIONAL

Hidrocarburos - Bioremediacion
PRESENTADO POR:
RODRIGO NICOLAS, TANCAYLLO MAMANI

AREQUIPA PERU

BIORREMEDIACION..
INTRODUCCION

4.1. ANTECEDENTES HISTORICOS DE LA BIORREMEDIACION

4.2. FUNDAMENTACION BIOQUIMICA DE LA BIORREMEDIACION..
4.3. FACTORES QUE CONDICIONAN LA BIORREMEDIACION.
4.3.1. Factores
Medioambientales
4.3.2. Factores
Fsicos.
4.3.3. Factores
Qumicos.
4.3.4. Factores
..

Microbiolgicos.

4.4. MICROORGANISMOS EN LA BIORREMEDIACION.

4.4.1. Bacterias
...
4.4.2. Hongos
..
4.4.3. Microorganismos
Concretos.
4.5. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA BIORREMEDIACION..
4.5.1.

Ventajas

4.5.2. Desventajas
.
4.6. ETAPAS DEL TRABAJO PARA UNA BIORREMEDIACION MAS EFICAZ

4.6.2.

4.6.1. Investigacin
y
caracterizacin
de
la
contaminacin
Anlisis y eleccin de las medidas biocorrectivas..

4.6.3. Diseo
y
evaluacin
sistema.

del

4.6.4. Anlisis
e
interpretacin
resultados

de

5. METODOS DE BIORREMEDIACION..
INTRODUCCION

5.1 BIORREMEDIACION IN SITU..

5.1.1. Bioaireacin
Bioventeo

5.1.2. Inyeccin
de
aire
presin

5.1.3. Atenuacin
Natural
5.1.5. Bioaumentacin
..
5.2. BIORREMEDIACION EX SITU
5.2.1. Disposicin
suelo..
5.2.2. Bioceldas
Biopilas.
5.2.3. Tratamiento
Biosuspencin.

del

de

5.3. FITORREMEDIACION...
5.3.1. Fitodescontaminacin
Fitoestabilizacin.
5.3.2. Tolerancia
de
contaminantes.

las

5.3.3. Futuro
de
Fitorremediacin.

plantas

la

BIORREMEDIACIN
INTRODUCCIN
La biorremediacin es una tecnologa que utiliza el potencial
metablico de los microorganismos (fundamentalmente bacterias,
pero tambin hongos y levaduras) para transformar contaminantes
orgnicos en compuestos ms simples poco o nada contaminantes, y,
por tanto, se puede utilizar para limpiar terrenos o aguas
contaminadas (Glazer y Nikaido, 1995).

Su mbito de aplicabilidad es muy amplio, pudiendo considerarse

como objeto cada uno de los estados de la materia (Atlas y
Unterman, 1999):

Slido. Con aplicaciones sobre medios contaminados como

suelos o sedimentos, o bien directamente en lodos, residuos,
etc.

Lquido. Aguas superficiales y subterrneas, aguas residuales.

Gases. Emisiones industriales, as como productos derivados del

tratamiento de aguas o suelos.

Tambin se puede realizar una clasificacin en funcin de los

contaminantes con los que se puede trabajar (Alexander, 1999; Eweis
et al., 1999):

Hidrocarburos de todo tipo (alifticos, aromticos, BTEX,

PAHs,...).

Hidrocarburos clorados (PCBs, TCE, PCE, pesticidas,

herbicidas,...).

Compuestos nitroaromticos (TNT y otros).

Metales pesados. Estos no se metabolizan por los

microorganismos de manera apreciable, pero pueden ser
inmovilizados o precipitados.

Otros contaminantes. Compuestos organofosforados, cianuros,

fenoles, etc.

Los microorganismos transforman y metabolizan aerbicamente los

hidrocarburos y otros compuestos orgnicos hasta dixido de
carbono, agua y fuentes de alimento para sustentar su crecimiento y
reproduccin, es decir, la biodegradacin ocurre naturalmente. Es
conocido que los microorganismos indgenas tienen la capacidad de
adaptarse y eventualmente degradar cualquier compuesto orgnico
natural sin asistencia del hombre; sin embargo, esta adaptacin
requiere la presencia de condiciones ambientales apropiadas tales
como el pH, temperatura, el aceptor final de electrones (que en
procesos aerbicos es el oxgeno), concentraciones de contaminante
no txicas para los microorganismos y adecuadas condiciones de
humedad y conductividad del medio, entre las mas importantes. La
ausencia de alguna o varias de las anteriores condiciones puede
limitar parcial o totalmente la actividad biolgica y es cuando la mano
del hombre juega un papel fundamental en la optimizacin del
proceso, ya sea mejorando estas condiciones para aumentar la
poblacin de microorganismos (bioaumentacin) y/o manipulando
genticamente los microorganismos para la degradacin especfica de
algunos compuestos qumicos.

4.1. ANTECEDENTES HISTRICOS DE LA BIORREMEDIACIN

A mediados del siglo XX se desarrollaron las primeras investigaciones
encaminadas a estudiar el potencial de los microorganismos para
biodegradar contaminantes (Zobell, 1946; Davis, 1956). Este uso
intencionado recibi entonces el nombre de biorremediacin
("bioremediation"). Las primeras tcnicas que se aplicaron fueron
similares al "landfarming" (labranza) actual y sus actores,
lgicamente, compaas petrolferas. Las primeras patentes,

fundamentalmente para remediacin de vertidos de gasolina,

aparecen en los aos 70. En los aos 80 se generaliz el uso del aire y
perxidos para suministrar oxgeno a las zonas contaminadas
mejorando la eficiencia de los procesos degradativos. Durante los
aos 90 el desarrollo de las tcnicas de "air sparging" (burbujeo de
oxgeno) hizo posible la biorremediacin en zonas por debajo del nivel
fretico. Al mismo tiempo, la implementacin en la prctica de
aproximaciones experimentales en el laboratorio permiti el
tratamiento de hidrocarburos clorados, los primeros intentos con
metales pesados, el trabajo en ambientes anaerobios, etc.
Paralelamente, se desarrollaron mtodos de ingeniera que mejoraron
los rendimientos de las tcnicas ms populares para suelos
contaminados ("landfarming", "composting", etc.) (Riser-Roberts,
1998).

En la actualidad, la biorremediacin enfrenta un nuevo reto: el de

convencer a las compaas y a los organismos oficiales de su alto
potencial. En algunos pases, la biorremediacin fue una tcnica poco
reconocida y marginada, hoy en da se ha convertido en una
verdadera industria. Esta industria busca seguir mejorando en sus
lneas interdisciplinares, que se pueden resumir en los siguientes
puntos:

Integracin en el proceso de tcnicas innovadoras que ayuden a

comprender y controlar los fenmenos de transporte de
nutrientes y otros posibles aditivos.

Desarrollo de tcnicas rpidas de biologa molecular que

permitan caracterizar las poblaciones indgenas de los
emplazamientos contaminados as como su potencial
enzimtico (Theron y Cloete, 2000; Watanabe, 2001).

Exploracin
de
las
implicaciones
del
concepto
de
biodisponibilidad ("bioavailability") definido por las propiedades
fsico-qumicas de los contaminantes. Se trata de un factor que
en muchos casos est limitando la biodegradacin y en otros
reduciendo la toxicidad de los contaminantes.

Desarrollo definitivo de tcnicas de bioaumentacin realmente

tiles (Major et al., 2002).
4.2. FUNDAMENTACIN BIOQUMICA DE LA BIODEGRADACIN

El fundamento bioqumico de la biorremediacin se basa,

principalmente, en la serie de reacciones de xido-reduccin (cuyo fin
es la obtencin de energa) que se producen en la cadena
respiratoria, o transportadora de electrones de las clulas. La cadena
la inicia un sustrato orgnico (compuestos hidrocarburados) que es
externo a la clula y que acta como dador de electrones, de modo
que la actividad metablica de la clula acaba degradando y
consumiendo dicha sustancia (Maroto Arroyo, articulo internet).
Los aceptores ms comnmente utilizados por los microorganismos
son el oxgeno, los nitratos, el hierro (III), los sulfatos y el dixido de
carbono. Cuando el oxgeno es utilizado como aceptor de electrones
la respiracin microbiana se produce en condiciones aerobias, y los
procesos de biodegradacin sern de tipo aerobio; sin embargo, si
utiliza los sulfatos o el dixido de carbono se produce en condiciones
reductoras o anaerobias, y los procesos de biodegradacin sern de
tipo anaerobio (Figura. 3.1)

FIGURA 4.1. Esquema de las reacciones

4.3. FACTORES QUE CONDICIONAN LA BIORREMEDIACIN DE

UN SUELO

La biodegradabilidad de una mezcla de hidrocarburos presente en un

suelo contaminado depende de diversos factores, los cuales como
pueden clasificarse en cuatro grupos:

Medio ambientales.

Fsicos.

Qumicos.

Microbiolgicos.

4.3.1. Factores medio ambientales

Los factores medio ambientales son aquellos necesarios a la hora de

proporcionar las condiciones ptimas para el crecimiento de los
microorganismos que llevan a cabo la recuperacin. Los
microorganismos son muy sensibles a los cambios de temperatura,
pH, disponibilidad de nutrientes, oxgeno y humedad.

El pH. Afecta significativamente la actividad microbiana. En

consecuencia,
cuanto
mayor
sea
la
diversidad
de
microorganismos existentes, potencialmente mayor ser el
rango
de
tolerancia.
No
existen
unas
condiciones
preestablecidas que sean ptimas en todos los casos, pero en
trminos generales el crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos es mximo dentro de un intervalo de pH
situado entre 6 y 8. En general, el pH ptimo para las bacterias
hetertrofas es neutro (pH 6 - 8), mientras que es ms cido
para los hongos (pH 4 - 5). El pH ptimo establecido para
procesos de biodegradacin es neutro (pH 7,4 - 7,8) (Dibble y
Bartha, 1979).

As mismo el pH tambin afecta directamente en la solubilidad

del fsforo y en el transporte de metales pesados en el suelo. La
acidificacin o la reduccin del pH en el suelo se puede realizar
adicionando azufre o compuestos del azufre.

Temperatura. Es uno de los factores ambientales ms

importantes que afecta la actividad metablica de los
microorganismos y la tasa de biodegradacin. Generalmente,

las especies bacterianas crecen a intervalos de temperatura

bastante reducidos, entre 20 y 30 C (condiciones mesfilas),
decreciendo la biodegradacin por desnaturalizacin de las
enzimas a temperaturas superiores a 40 C e inhibindose a
inferiores a 0 C. Sin embargo, tambin se ha dado la
biodegradacin de hidrocarburos a temperaturas extremas:

10C en suelos subrticos y subalpinos (Sparrow y

Sparrow, 1988; Margesin y Schinner, 1997a,b).

5C en suelos rticos (Whyte et al., 1999)

60C
por
una
cepa
termfila
de
Bacillus
stearothermophilus aislada de un suelo contaminado
con crudo de petrleo del desierto kuwait (Sorkoh et
al., 1993).

Humedad. Los microorganismos requieren unas condiciones

mnimas de humedad para su crecimiento. El agua forma parte
del protoplasma bacteriano y sirve como medio de transporte a
travs del cual los compuestos orgnicos y nutrientes son
movilizados hasta el interior de las clulas. Un exceso de
humedad inhibir el crecimiento bacteriano al reducir la
concentracin de oxgeno en el suelo (el rango vara en funcin
de la tcnica).

Por lo anterior, la humedad del suelo puede limitar de forma

severa la biodegradacin, fundamentalmente en suelos
superficiales afectados por oscilaciones importantes en el
contenido de agua. No obstante el nivel ptimo de humedad
depende de las propiedades de cada suelo, el tipo de
contaminacin y si la biodegradacin es aerbica o anaerbica.

El oxgeno. Es el aceptor final de electrones generalmente empleado

en procesos biolgicos y tambin es necesario en determinados tipos
de reacciones de oxidacin reduccin catalizada por enzimas. Los
microorganismos, oxidan compuestos orgnicos o inorgnicos,
obteniendo as la energa necesaria para su crecimiento. El proceso
de oxidacin da lugar a electrones que intervienen una cadena de
reacciones en el interior de la clula y, al final, deben ser vertidos en
el entorno. El aceptor final de electrones es el receptor de los mismos
y, en el caso de un metabolismo aerobio, O 2 es el aceptor y H2O es el
producto.

La mayor parte de hidrocarburos presentes en los productos

petrolferos son degradados con mayor extensin y rapidez de forma
aerbica (O2 como aceptor final de electrones), ya que en ausencia de
O2, y en presencia de aceptores de electrones alternativos (NO 3-,
SO42-, CO2, Mn4+ y Fe3+) los hidrocarburos pueden ser degradados,
pero con unas tasas de biodegradacin muy inferiores a las aerbicas
(Holliger y Zehnder, 1996; Grishchenkov et al., 2000; Boopathy, 2002;
Massias et al., 2003).

Necesidad de nutrientes inorgnicos. El metabolismo microbiano est

orientado a la reproduccin de los organismos y stos requieren que
los constituyentes qumicos se encuentren disponibles para su
asimilacin y sintetizacin. Los nutrientes principalmente requeridos
son el fsforo y el nitrgeno, por tanto, las concentraciones
asimilables de dichos elementos presentes en el suelo, suelen ser
limitantes para un incremento y activacin de la poblacin
microbiana, mientras que otros nutrientes esenciales como el Ca 2+,
Na+, Fe2+ y SO42- ya estn presentes en cantidades suficientes (Menn
et al., 2000).

La adicin de fuentes de N y P inorgnicas, generalmente tiene un

efecto positivo incrementando las poblaciones microbianas y las tasas
de biodegradacin de hidrocarburos en suelos contaminados (Dott et
al., 1995; Breedveld y Sparrevik, 2001; Chaineau et al.,2003). Las
proporciones molares de C:N:P, descritas en la bibliografa, respecto al
contenido de carbono a degradar son muy distintas; el rango normal
de C:N:P depende del sistema de tratamiento a emplear, siendo de
modo habitual 100:10:1.

Aunque en general la adicin de fuentes inorgnicas de N y P al suelo

es beneficiosa para los procesos de biodegradacin, de igual manera,
el uso excesivo de nutrientes inorgnicos tambin puede inhibir los
procesos de biodegradacin (Zhou y Crawford, 1995; Margesin y
Schinner, 1997; Genouw et al., 1994). Para evitar el exceso de
nutrientes, as como la prdida de los mismos por lixiviacin, tambin

se han utilizado fertilizantes inorgnicos oleoflicos de liberacin lenta

(Inipol EPA 22) para la biorremediacin de suelos contaminados
(Lindstrom et al., 1991; Pritchard y Costa, 1991) Adems es
importante destacar que la accin de los nutrientes inorgnicos
puede estar limitada debido a la interaccin qumica con los
minerales del suelo. (el amonio se puede unir a las arcillas por
intercambio catinico y el fosfato puede unirse y precipitar con iones
calcio, hierro y aluminio) (Morgan y Watkinson ,1992).

4.3.2. Factores fsicos

Los factores fsicos de mayor importancia en la biorremediacin son la

biodisponibilidad, la presencia de agua y la provisin de un aceptor de
electrones adecuado, por ejemplo, el oxgeno (descrito en este
captulo, en el numeral 4.3.1.).

Biodisponibilidad. La tasa de degradacin depende tanto de la

capacidad de transporte y del metabolismo microbiano, como
de la transferencia de masas del compuesto. La relacin entre
estos factores se conoce como biodisponibilidad. En los suelos
uno de los factores limitantes para la biodegradacin es la
transferencia de masas, ya que los microorganismos de los
suelos contaminados, suelen tener amplias capacidades
biodegradativas al estar expuestos a una gran variedad de
compuestos orgnicos diferentes. Por lo tanto la adsorcin, la
absorcin, desadsorcin, disolucin y la difusin son fenmenos,
propios de la transferencia de masas, que condicionan la
biodisponibilidad de los contaminantes (Stucki y Alexander,
1987; Tabak et al., 1994 y 1995; Harms et al., 1996; Bosma et
al., 1997). Un fenmeno que afecta de forma negativa a la
biodisponibilidad de los contaminantes es el envejecimiento o
ageing que se define como la prdida de la biodegradabilidad
de los compuestos a lo largo del tiempo en el suelo (aunque la
poblacin
microbiana
mantenga
intacto
su
potencial
catablico), el cual es ms importante en suelos con elevado
contenido en materia orgnica (Huesemann, 1995; Nocentini,
2000; Breedveld y Sparrevik, 2001). Este efecto se produce por
una serie de fenmenos como son: la adsorcin con la materia
particulada del suelo, absorcin a la materia orgnica del suelo,
a la baja difusividad de los compuestos, principalmente desde
los microporos; a la disolucin en fases lquidas no acuosas
(FLNAs), o a la formacin de uniones covalentes con la materia

orgnica e inorgnica del suelo ( Loosdrecht et al., 1990;

Weissenfels et al., 1992; Erickson et al., 1993; Alexander, 1995;
Shuttleworth y Cerniglia, 1995; Alexander, 1999; Bosma et al.,
1997). Con la finalidad de aumentar la biodisponibilidad de los
contaminantes existen numerosos ejemplos en la bibliografa de
la utilizacin de tensoactivos sintticos y biotensoactivos en la
biorremediacin de suelos contaminados por hidrocarburos
(Volkering y Breure, 1998 ; Chritofi y Ivshina, 2002).

Presencia de agua. sta es necesaria ya que, como se ha visto

con anterioridad, los microorganismos toman en carbono
orgnico, los nutrientes inorgnicos y los aceptores de
electrones, necesarios para el crecimiento microbiano, de la
fase lquida. Por lo tanto, el agua debe estar en contacto con los
contaminantes estar presente en cantidades que permitan el
desarrollo de las comunidades microbianas. Sin embargo, el
agua puede llegar a inhibir el flujo de aire y reducir el sumito de
oxgeno necesario para la respiracin microbiana. Existen
valores de humedad ptima para biorremediacin de terrenos
no saturados, que habitualmente estn entre 150 y 250 grados
de agua por kg de terreno seco.

4.3.3. Factores qumicos

El factor qumico ms importante en la biorremediacin es la

estructura molecular del contaminante, cmo sta afecta a sus
propiedades qumicas y fsicas y su capacidad para ser biodegradado.
La capacidad para ser biodegradado est relacionada con factores
tales como la solubilidad, el grado de ramificacin, el grado de
saturacin y la naturaleza y el efecto de los sustituyentes.

Estructura qumica. La inherente biodegradabilidad de un

hidrocarburo depende, en gran medida, de su estructura
molecular. Siendo los parmetros que ms van a afectar la
halogenacin, la existencia de ramificaciones, la baja
solubilidad en el agua y la diferente carga atmica.

De las distintas familias de hidrocarburos del petrleo, los nalcanos y los alcanos ramificados (isoprenoides) de cadena
intermedia (C10-C20) son los sustratos ms fcilmente

degradables por los microorganismos del suelo, y que por lo

tanto tienden a ser eficazmente biodegradados. Sin embargo,
los alcanos de cadena larga (>C20) son ms difciles de
degradar debido a su (elevado peso molecular) y su baja
solubilidad en agua (Chaineau et al., 1995). Los cicloalcanos,
por norma general, se degradan ms lentamente que los nalcanos y alcanos ramificados. De igual forma, los HAPs que
contienen de 2 a 3 anillos aromticos pueden ser biodegradados
eficazmente en el suelo en condiciones ambientales ptimas,
mientras que los HAP de 4 anillos, y especialmente, los de 5 o
ms anillos bencnicos presentan una mayor recalcitrancia
inherente y una baja solubilidad (Kstner, 2000). Las fracciones
de resinas y asfaltenos son las que presentan una menor
degradabilidad debido a las complejas estructuras qumicas y al
elevado peso molecular de sus molculas (Harayama et al.,
1997, 1999).

4.3.4. Factores microbiolgicos

El factor microbiolgico ms importante en la biorremediacin es la

transformacin biolgica de compuestos orgnicos, catalizada por
accin de las enzimas. La biodegradacin de un compuesto especfico
es frecuentemente un proceso que se realiza paso a paso en el cual
se involucran muchas enzimas y muchos organismos. Las enzimas
son especficas en trminos de los compuestos que atacan y las
reacciones que catalizan. Ms de una enzima es normalmente
requerida para romper una sustancia orgnica. Frecuentemente, los
organismos que tienen las enzimas para degradar estn presentes en
el suelo.

4.4. MICROORGANISMOS EN LA BIORREMEDIACIN

Existen varias clases de microorganismos: mohos, levaduras,

bacterias, actinomicetos, protozoos, algas, virus. La Figura 3.1
muestra el tamao comparativo de algunos microorganismos.

FIGURA 4.1. Tamao comparativo de algunos microorganismos

(Fuente: Stanier et al, 1984)

El suelo es un ambiente muy apropiado para el desarrollo de los

microorganismos tanto eucariotas (algas, hongos, protozoos) como
procariotas (bacterias y arqueas), adems de encontrar virus y
bacterifagos. Todos estos organismos establecen relaciones entre
ellos en formas muy variadas y complejas y tambin contribuyen a las
caractersticas propias del suelo por su papel en la modificacin de las
fases slida, lquida y gaseosa antes mencionadas. Los
microorganismos desempean funciones de gran importancia en
relacin con procesos de edafognesis; ciclos biogeoqumicos de
elementos como el carbono, el nitrgeno, oxgeno, el azufre, el
fsforo, el hierro y otros metales; fertilidad de las plantas y proteccin
frente a patgenos; degradacin de compuestos xenobiticos, etc. En
un suelo agrcola estn presentes alrededor de 10 10 organismos por g
de suelo y constituyen una biomasa de aproximadamente 1500 kg
por Ha. Un gramo de suelo frtil puede contener 5 m de micelio
fngico, 108 clulas bacterianas, 106 esporos de actinomicetos.

Los microorganismos hacen parte fundamental de los procesos de

biorremediacin. En gran parte, las bacterias casi siempre son los
degradadores primarios, aunque en algunas ocasiones los hongos
juegan un papel importante. Las bacterias desempean el papel de
mayor importancia en la biodegradacin de contaminantes orgnicos
en suelos; los hongos tambin metabolizan compuestos orgnicos
pero no son tan eficientes como las bacterias.

4.4.1. Bacterias

Las bacterias son el grupo de organismos ms abundante en los

suelos y la cantidad de especies presentes en el mismo parece
relativamente constante alrededor del mundo. Dichos organismos son
un grupo diverso con variaciones extensivas en las propiedades
morfolgicas, ecolgicas y fisiolgicas y son los principales
degradadores de compuestos orgnicos naturales y xenobiticos
encontrados en el suelo. Las ms comunes son Pseudomonas,
Arthrobacter, Achromobacter, Micrococcus, Vibrio, Acinetobacter,
Brevibacterium, Corynebacterium y Flavabacterium.

Por su diversidad, las bacterias se encuentran regularmente en

comunidades heterogneas; algunas especies son degradadores
primarios, es decir, ellas inician la degradacin de la materia orgnica
en el suelo; otras crecen en compuestos resultantes de la
degradacin parcial de complejos orgnicos o productos residuales de
degradadores primarios.

Las bacterias tienen tres apariencias fsicas generales (ver Figura

3.2.):

Esfricas (cocos)

Forma de bastones (bacilos)

Forma de espiras (espirilos)

Y se clasifican usando sus caractersticas fsicas, qumicas, genticas

y metablicas.

Figura 4.2. Apariencias fsicas generales de las bacterias (Fuente:

Schlegel, 1993)

El uso y tolerancia al oxgeno que es uno de los mtodos ms

generales de clasificacin. Los aerobios estrictos son bacterias que
requieren oxgeno como aceptor final de electrones y crecen
solamente en presencia del mismo. Las aerobias facultativas son
bacterias que pueden utilizar aceptores de electrones terminales
alternativos y crecer en presencia o ausencia de oxgeno. Algunas
anaerobias son tolerantes al oxgeno, pero ste es txico a muchas
anaerobias estrictas.

Las bacterias tambin se pueden clasificar como eutrofas, las cuales

crecen en presencia de altas concentraciones de sustratos, y
oligotrofas, las cuales crecen con concentraciones trazas.

Los actinomicetos son un grupo intermedio entre las bacterias

procariotas ms primitivas y los hongos eucariotas; stos estn
presentes en un gran nmero de suelos. Toleran un intervalo amplio
de pH y temperatura, crecen bajo condiciones limitadas de nutrientes
y son resistentes a desecacin. Aunque su tasa de crecimiento es ms
baja que la de las bacterias, la habilidad de los actinomicetos para

crecer en ondiciones adversas permiten a estos predominar cuando

las condiciones del medio son difciles8.

Algunas bacterias son capaces de formar esporas cuando las

condiciones de crecimiento son muy adversas, como cuando el suelo
est seco o cuando los nutrientes estn limitados. Las esporas son
muy resistentes al calor y no son fciles de destruir por radiacin u
otros factores qumicos tales como cidos y desinfectantes. Las
bacterias formadas de esporas son muy comunes en suelos donde las
condiciones pueden ser muy variables.

4.4.2 Hongos

Los hongos son altamente protistas, no tienen movimiento y emplean

materia orgnica como fuente de carbono y energa. Algunos de los
hongos mejor conocidos son mohos, levaduras y setas (ver Figura 3.3
y Figura 3.4).

Figura 4.3. Aspecto de un moho (Fuente: Webster, 1986)

Figura 4.4. Aspecto de una levadura

Hawksworth et al., 1995; Webster, 1986)

una

seta

(Fuente:

En comparacin con las bacterias, los hongos son menos numerosos

y crecen a velocidades considerablemente bajas; adems, los
procesos metablicos de stos son menos diversos. Como grupo, los
hongos tienden a ser ms tolerantes a los cidos que las bacterias
(muchas especies crecen a un pH ptimo de 5 o menos) y son ms
sensibles a la variacin en la humedad.

Un hongo que tiene un considerable potencial en el tratamiento de

compuestos orgnicos peligrosos es Phanerochaete chrysoporium,
hongo de la podredumbre blanca. Este organismo produce una
encima extracelular peroxidasa que degrada la lignina en presencia
del perxido; se ha encontrado que degrada una alta variedad de
compuestos altamente clorados y recalcitrantes. El uso de dicho
hongo est limitado para condiciones en las cuales el nitrgeno est
limitado porque la peroxidasa no se produce de otra manera.

4.4.3 Microorganismos concretos

Los microorganismos aislados en suelos poseen actividades de

peroxidasas y oxigenasas, que permiten la oxidacin de algunas
fracciones del petrleo. Esta oxidacin cambia las propiedades de los
compuestos hacindolos susceptibles a ataques secundarios y
facilitando su conversin a bixido de carbono y agua.
Rhodococcus. Uno de los gneros bacterianos ms explotados
en bioprocesos no convencionales es Rhodococcus, un grupo
nico consistente en microorganismos que presentan una gran
diversidad metablica, capaz de transformar, biodegradar y
utilizar como nica fuente de carbono compuestos hidrfobos.

El Rhododoccus posee una gran variedad de vas metablicas

para la degradacin y modificacin de compuestos aromticos,
incluyendo las actividades de di-oxigenasa y mono-oxigenasa
sobre anillos, as como la actividad de ruptura de catecol.
Algunas cepas presentan tambin la va del 3-oxoadipato. Lo
anterior sumado a su capacidad de crecimiento en medios con
escasos nutrientes, la carencia de un sistema de represin

catablica y su persistencia ambiental las hacen excelentes

candidatas para los tratamientos de biorremediacin.

Dentro de las aplicaciones industriales y ambientales, se incluye

la produccin de cido acrlico y acrilamida, conversin de
esteroides, biorremediacin de hidrocarburos clorados y
fenoles, a lo que se aade su gran capacidad de degradar
hidrocarburos alifticos halogenados y numerosos compuestos
aromticos, como los HAPs (hidrocarburos policclicos
aromticos).

Nuevas especies de Rhodococcus que presentan una nueva

mutacin tienen la capacidad de degradar compuestos
alifticos con enlaces dobles principalmente en el noveno
carbono del grupo metilo terminal (alquenos).

Pseudomonas. Las bacterias de este gnero poseen la habilidad

para utilizar diversos substratos, incluyendo aquellos creados
por el petrleo. Las Pseudomonas son bacterias Gram
negativas, obicuas, que pertenecen a la subclase gamma de las
Proteobacterias.

Las Pseudomonas son bacterias productoras de biosurfactantes.

Algunos microorganismos productores de biosurfactantes
extracelulares solubilizan y facilitan la penetracin de los
hidrocarburos a travs de la pared celular hidroflica; contienen
adems enzimas degradadoras de hidrocarburos en la
membrana citoplasmtica.

La Pseudomonas aeruginosa, es otro de los microorganismos

ms usado y estudiado en biorremediacin. Estudios con
relacin al desempeo metablico de esta Pseudomona ha
permitido identificarla como degradadora de gran cantidad de
sustratos como el n-hexadecano, mineralizacin de compuestos
alifticos en condiciones anaerobias, y degradadora de
hidrocarburos aromticos y poli aromticos.

4.5 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA BIORREMEDIACIN

4.5.1 Ventajas

Mientras que los tratamientos fsicos y buena parte de los

qumicos estn basados en transferir la contaminacin entre
medios gaseoso, lquido y slido, en la biorremediacin se
transfiere poca contaminacin de un medio a otro.

Es una tecnologa poco invasiva y generalmente no requiere

componentes estructurales o mecnicos que signifiquen una
amenaza para el medio.

Comparativamente, es econmica viable y al tratarse de un

proceso natural, suele tener aceptacin por parte de la opinin
pblica.

4.5.2 Desventajas

La biodegradacin incompleta puede generar intermediarios

metablicos inaceptables, con un poder contaminante similar o
incluso superior al producto de partida y algunos compuestos
contaminantes son tan resistentes que pueden incluso inhibir a
biorremediacin.

Es difcil predecir el tiempo de requerido para un proceso

adecuado y el seguimiento y control de la velocidad y/o
extensin del proceso es dispendioso.

4.6 ETAPAS DEL TRABAJO PARA UNA BIORREMEDIACIN MS

EFICAZ

4.6.1 Investigacin y caracterizacin de la contaminacin

y del emplazamiento
La caracterizacin del emplazamiento se lleva a cabo mediante
el estudio del mismo detallando la volumetra del suelo a tratar,
las condiciones geolgicas e hidrogeolgicas, analizando las
caractersticas del suelo y sus propiedades (pH, granulometra,
humedad, porosidad, etc).

La caracterizacin del contaminante se centra en la

investigacin del tipo y concentracin del mismo, as como la
biodisponibilidad de los compuestos en el suelo (aceptores de
electrones, metales pesados, nutrientes, etc).

4.6.2 Anlisis y eleccin de las medidas biocorrectivas

Para ello se hace necesario:

a) Identificar y cuantificar los contaminantes. Definiendo sus

propiedades fsico qumicas ms importantes:

Identificacin y clasificacin de compuestos.

Concentracin en suelos y aguas subterrneas.

Caracterizacin de la presin de vapor, constante de Henry,

densidad y grado de solubilidad.

b) Conocer los factores que influyen en la transformacin biolgica

de los contaminantes:

Factores ambientales tales como humedad, oxgeno disuelto,

temperatura, pH, disponibilidad de nutrientes.

Factores
microbiolgicos
tales
como
presencia
de
microorganismos y aclimatacin de las poblaciones
microbianas.

c) Designar las medidas biocorrectivas. En funcin de los factores

anteriormente expuestos, se debe elegir el sistema de
biotratamiento ms adecuado.
4.6.3 Diseo y evaluacin del sistema

Para el diseo de un sistema de biorrecuperacin es necesario

establecer unas etapas de trabajo, en las cuales se determinan y
evalan los parmetros fundamentales necesarios para su eficacia.

Las etapas a seguir en el diseo de un sistema de biotratamiento son:

a) Evaluacin de la viabilidad de la tcnica. Se deben estudiar los

parmetros de evaluacin que definen el sistema elegido, as
como se deben evaluar las condiciones de biotratabilidad, los
objetivos de limpieza exigidos y los costes de tratamiento
necesarios.
b) Evaluacin del diseo. Se deben estudiar los factores que
afectan la eficacia de la tcnica y las posibles mejores o
acondicionamientos a aplicar.
c) Evaluacin del control y seguimiento. Para asegurar la correcta
ejecucin y un progreso adecuado del tratamiento se debe
llevar a cabo un plan de control y seguimiento del sistema. Para
una correcta optimizacin se debern controlar los siguientes
puntos:

Control de las condiciones de degradacin y biodegradacin.

Se debe registrar la variacin de concentracin de TPH,
BTEX, CO2 desprendido y Oxigeno disuelto, variacin de
nutrientes (N, P, etc).

4.6.4

Control de los parmetros que afectan directamente en el

funcionamiento del sistema.

Anlisis e interpretacin de resultados

En esta ltima etapa se deben analizar los resultados obtenidos,

haciendo un balance de los objetivos alcanzados y los marcados
inicialmente. En este punto, si fuese necesario, se deben proponer y
estudiar aquellas mejoras o modificaciones necesarias para la
optimizacin del sistema.

5. MTODOS DE BIORREMEDIACIN

INTRODUCCIN

El trmino biorremediacin se aplica a cualquier sistema o proceso en

el que se empleen mtodos biolgicos para transformar
contaminantes en el suelo o en las aguas. La biorrecuperacin en
suelos contaminados puede llevarse a cabo In Situ: excavando el
terreno y tratndolo a pie de excavacin, o bien Ex Situ, en
instalaciones aparte.

Existen parmetros que aumentan o disminuyen la probabilidad de

obtener buenos resultados en el proceso de biorremediacin en un
medio contaminado por hidrocarburos. La tcnica apropiada para
llevar a cabo este proceso, debe ser el resultado de la valoracin de
una serie de variables y de caractersticas del sitio o del
contaminante a tratar.

5.1. BIORREMEDIACIN IN SITU

Este tipo de tratamiento normalmente es la opcin ms adecuada

para la recuperacin de suelos, ya que no es necesaria la preparacin
y excavacin del material contaminado. No obstante, antes de decidir
el tipo de tratamiento deben valorarse numerosos factores entre los
que se destacan:

Impacto ambiental en la zona.

Actividades industriales que pueden verse afectadas.

Costos comparativos con otros tratamientos.

La dificultad de acceso a la zona contaminada para proveer de

oxgeno y nutrientes.

La determinacin del porcentaje de tratamiento.

La velocidad del proceso.

El potencial peligro de extensin de la contaminacin.

El mtodo de la biorremediacin In Situ de suelos se puede dividir

en dos tipos: tratamiento de compuestos voltiles y tratamiento de
compuestos semivoltiles y no voltiles. Las tcnicas ms utilizadas
se ven con detalle a continuacin:

5.1.1. Bioaireacin o bioventeo

Es una variante de la tcnica de extraccin de gas con vapor (Soil

Gas Extraction o Volatilizacin), que consiste en suministrar aire al
terreno contaminado para
promover la actividad de los microorganismos presentes en el
subsuelo y biodegradar los hidrocarburos. El aire se suministra
mediante un sistema de extraccin e inyeccin.

Para disear estos sistemas es necesario conocer la permeabilidad del

suelo a los gases, con el fin de determinar el radio de influencia de los
pozos de venteo, la distancia entre pozos y las dimensiones de los
equipos de inyeccin. La bioaireacin generalmente se lleva a cabo
en reas poco profundas y pequeas; a menudo es factible la
instalacin de barreras para guiar el flujo, el uso de cubiertas, un
control intensivo, un plan de muestreo y un sistema de ventilacin.

Una caracterstica determinante en la seleccin de esta tcnica es el

tipo de contaminante, puesto que es de mayor efectividad donde los
contaminantes tienen baja volatilidad. Adems se deben tener en
cuenta las caractersticas fsicas del suelo, la profundidad de la zona
contaminada y el potencial para transportar contaminantes fuera de
la zona.

Ventajas.

Es una tcnica altamente efectiva para tratar

contaminaciones con compuestos con baja presin de
vapor (menos de 1 mmHg), ya que su tasa de
degradacin es mucho mayor que la de volatilizacin
(Matthews, 1993).

Como todos los tratamientos In Situ, cuando los costos

de excavacin son altos el bioventeo puede ser una
alternativa econmicamente interesante. No requiere
rea adicional para llevar a cabo el tratamiento, ni el uso
de maquinaria pesada.

Desventajas. Las limitantes de este mtodo son:

Tipo y concentracin del contaminante.

Perdida de nutrientes en el subsuelo.

Bajo contenido de humedad del suelo y la dificultad de

lograr el caudal de aire a travs de la zona contaminada;
por ello requiere caractersticas especiales del suelo en
cuanto a humedad, porosidad, conductividad hidrulica,
etc.

Requiere largos perodos de tiempo para obtener la

concentracin final de hidrocarburo deseada. Los tiempos
de limpieza pueden durar de meses a aos.

La descontaminacin puede llevarse a cabo por efecto de

la volatilizacin de compuestos ms que por su
biodegradacin.

5.1.2. Inyeccin de aire a presin

Consiste en inyectar aire a presin en la parte inferior para deslazar el

agua de los espacios intersticiales de la matriz del suelo. Esta
inyeccin genera principalmente dos efectos:

1. El aire inyectado absorbe gran cantidad de los hidrocarburos

voltiles presentes en el agua y el suelo.
2. El aire eleva los niveles de oxgeno del agua mejorando la
biodegradacin de los contaminantes (Matthews, 1993).
Con la inyeccin de aire a presin se llevan a cabo dos mecanismos
de remocin del contaminante, la volatilizacin de compuestos de la
zona insaturada y la fase acuosa y la biodegradacin. El mecanismo
gobernante depende de las caractersticas de los contaminantes.

Las caractersticas determinantes en la seleccin de esta tcnica son:

El tipo de contaminante. Se degradan fcilmente las

molculas ms pequeas (hasta C20), siendo ms
biodegradables los compuestos parafinados o de cadena
lineal que los compuestos aromticos. En general, son
favorables los compuestos de alta volatilidad (presin de
vapor mayor de 10 mm de Hg a 20C).

Tipo de suelo. Los suelos deben contener bajos contenidos

en arcilla y ser lo ms homogneamente posible,
con un
valor de permeabilidad al aire adecuado (> 10-10 cm2).

Los aportes de oxgeno deben ser suficientes, as como la

existencia de fuentes de carbono, aceptores de electrones
y energa suficientes.

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 a 8), de

humedad (12 a 30% en peso), potencial redox mayor de
-50 mV, temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes del
suelo en relacin N:P de 10:1.

Ventajas.

Es un proceso excelente para casos donde los compuestos

voltiles son los contaminantes principales.

Necesidad de tiempos de actuacin cortos (meses).

No requiere rea adicional para llevar a

tratamiento, ni el uso de maquinaria pesada.

cabo

el

Desventajas.
El principal problema es la biodisponibilidad de los
microorganismos. Cuanto menor es la solubilidad de los
contaminantes menor ser la biodisponibilidad.

En este sistema hay poco control del movimiento del agua

subterrnea y los contaminantes, lo cual puede acelerar y
agravar la extensin de la contaminacin.

En cuanto a las profundidades, la literatura recomienda

profundidades mnimas aproximadas de 1,2 metros,
necesarias para confinar adecuadamente el aire inyectado; y
mximas aproximadas de 9 metros, por debajo de las cuales
sera muy difcil controlar la direccin del desplazamiento del
aire.

Los cambios en la litologa del suelo pueden afectar la

direccin y la velocidad del flujo, ms an si se tiene en
cuenta que el aire a presin viaja aceleradamente.

5.1.3.

Atenuacin natural

La atenuacin natural, aunque no est considerada como una tcnica

de descontaminacin propiamente dicha, est englobada dentro de
las tcnicas de remediacin In Situ. Su caracterstica principal es la
utilizacin
de
los
procesos
fisicoqumicos
de
interaccin
contaminante-suelo y los procesos de biodegradacin que tienen
lugar de forma natural en el medio. Estos procesos se conocen como
procesos
de
biotransformacin
natural.
Los
procesos
de

biotransformacin natural son aquellos que van a reducir la

concentracin de los contaminantes y entre los que se encuentran la
dilucin, dispersin, volatilizacin, adsorcin, biodegradacin y
aquellas reacciones qumicas que se producen en el suelo y que
contribuyen de alguna forma a la disminucin de la contaminacin.
Esta tcnica se aplica en aquellos casos en los que exista
contaminacin producida por hidrocarburos de tipo halogenado o no
halogenado.

La atenuacin natural puede darse en presencia (condiciones

aerbicas) o ausencia de oxigeno (condiciones anaerbicas).

En presencia de oxgeno los microorganismos convierten en ltima

instancia los contaminantes en dixido de carbono, agua y masa
celular microbiana (mineralizacin).

En el caso de escasez de oxgeno, los microorganismos dependen de

otros aceptores de electrones disponibles (nitrato, sulfato, formas
oxidadas de Fe o Mn,...). Se trata de una biodegradacin anaerobia,
cuyos mecanismos y significado se estn comenzando a comprender
en los ltimos aos (Heider et al., 1999).

Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la

atenuacin natural destacan:

La existencia de unas
geoqumicas favorables.

condiciones

geolgicas

Las necesidades de reduccin de la masa contaminante en un

intervalo razonable de tiempo (meses a aos), tanto en la
superficie del suelo como en la zona ms subsuperficial del
mismo.

Confirmacin de la existencia de los tipos y nmero de

poblaciones de microorganismos que puedan biodegradar los
contaminantes.

La concentracin de los compuestos utilizados como

aceptores de electrones en condiciones anaerobias
debe
ser superior a 0,21 mg/l 2+
para nitratos, la de Fe 3+ para que
pueda ser reducido a Fe debe ser superior a 21,8 mg/l y
la de sulfatos mayor de 0,21 mg/l.

El potencial redox debe estar situado entre un rango de

-400 y 800 mV.

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 a 8), de

humedad (12 a 30% en peso), temperatura entre 0 y 40 C y los
nutrientes del suelo en relacin N:P de 10:1.

Existencia de un coeficiente de retardo favorable para que se

produzcan los fenmenos de sorcin con suficiente eficacia.

Si se aportan al medio algunos de los elementos de los que carece o

bien se potencian los existentes, se favorece la eliminacin del
posible contaminante. En muchos casos este tipo de intervencin ser
necesario para reforzar el proceso natural o bien para implantar unas
condiciones que reduzcan el riesgo. En esto se basan la
bioestimulacin y la bioaumentacin, que son aproximaciones
biotecnolgicas de la atenuacin natural.

Ventajas.

Es una tcnica de biorremediacin In Situ de muy bajo

costo.

Puede darse en presencia o ausencia de oxgeno, por tanto no

se hace necesario adicionar oxgeno al medio contaminado.

Desventajas.

La exigencia de proteccin y el riesgo de los potenciales

receptores durante el tiempo que dura la atenuacin.

Produccin y conservacin en el medio de subproductos de

carcter persistente o ms txico que los iniciales, durante y
despus de la atenuacin natural.

5.1.4. Bioestimulacin

En este sistema, el agua subterrnea es conducida a la superficie por

medio de un sistema de pozos de extraccin, se acondiciona en un
reactor para volverla a inyectar y estimular la degradacin bacteriana
de los contaminantes del subsuelo y del acufero. En el reactor en
superficie se agregan al agua: nutrientes, oxgeno, microorganismos
previamente seleccionados y adaptados, y el efluente se retorna al
subsuelo por medio de pozos de inyeccin, aspersores superficiales o
galeras de infiltracin distribuidas a lo largo y ancho del sitio que se
requiere remediar. Algunas veces esta tcnica utiliza biosurfactantes
para ayudar al lavado de contaminantes del suelo (Zitrides, 1990);
(Cole, 1994).

Las caractersticas determinantes en la seleccin, el xito o el fracaso

de esta tcnica de remediacin son:

Tipo de suelo. Los suelos deben ser lo ms homogneos

posible, con un -10
valor de porosidad y permeabilidad al aire
adecuado (> 10 cm2).

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 y 8), de

humedad (12-30% en peso), temperatura entre 0 y 40 C
y los nutrientes del suelo en relacin N:P de 10:1.

Ventajas.

5.1.5.

Esta tcnica es muy til en el tratamiento de extensas

zonas contaminadas de centros industriales donde no es
posible o conveniente parar el proceso operativo para
realizar el tratamiento requerido.

Bioaumentacin

Otras lneas de investigacin han llevado a la introduccin de

microorganismos aclimatados o incluso modificados genticamente
en el medio, con el fin de mejorar la biodegradacin (Walter, 1997;
Atlas y Unterman, 1999). Esta tcnica funciona en condiciones de

laboratorio o bioreactor, pero en ambientes externos (suelo o agua) su

implantacin depende de una serie de factores (Alexander, 1999).

Presencia
de
toxinas,
nutrientes
y
condiciones
ambientales,
movilidad
y/o
distribucin
de
los
microorganismos y la presencia de abundante materia
orgnica.

Los microorganismos aadidos deben sobrevivir a los

depredadores y competir con xito con la poblacin
autctona antes de ocupar los nichos potenciales.

En general, los ambientes ms selectivos y la utilizacin

de consorcios microbianos favorecen la bioaumentacin.

Ventajas.

No requiere rea adicional para llevar a cabo el tratamiento, ni

el uso de maquinaria pesada.
Desventajas.

El tamao de la poblacin
crece rpidamente como
medio y es muy difcil,
poblacin microbiana ms

de microorganismos degradadores
respuesta a la contaminacin del
si no imposible, incrementar la
all de esos valores.

5.2. BIORREMEDIACIN EX SITU

Dos son los tratamientos que se distinguen cuando el procedimiento

se realiza fuera del lugar donde est la contaminacin: tratamiento
por va slida y tratamiento por va suspensin.

La biorrecuperacin va slida se puede realizar por dos mtodos:

tratamiento en lechos y tratamiento por compostaje. La diferencia
fundamental entre ambos es el sistema de aireacin, mientras que en

el primero slo se pueden tratar las capas de suelo menos profundas,

en el compostaje se requiere la formacin de grandes apilamientos de
material degradable.

En el tratamiento va suspensin se excava el material contaminado y

se traslada a un reactor. La caracterstica de este mtodo es la
suspensin en un medio acuoso del suelo contaminado, es decir, el
tratamiento se lleva a cabo bajo condiciones de saturacin de agua.

La ventaja de estos procedimientos frente a los primeros radica en la

posibilidad de optimizar mejor los parmetros microbiolgicos, as
como el control del proceso; a cambio, lgicamente, de un mayor
costo.

5.2.1. Disposicin sobre el suelo

Tambin conocido como Landfarming, tratamiento en lechos o

tratamiento va slida. Esta es la tcnica ms usada para la
biorremediacin de los lodos contaminados con hidrocarburos y de
otros desechos de la industria petrolera. Esta tcnica consiste en
excavar los suelos contaminados, extenderlos sobre un rea
suficientemente amplia y estimular las variables de incidencia en el
proceso para promover la actividad de los microorganismos
encargados de degradar los hidrocarburos. Antes de extender el suelo
contaminado se deben adecuar las condiciones de la superficie para
controlar los lixiviados y las aguas lluvias (Zitrides, 1990).

Una vez extendido el suelo contaminado se irriga con las soluciones

de nutrientes, los microorganismos y los aditivos qumicos en el caso
que sean necesarios para la biodegradacin. Peridicamente se debe
airear el suelo para suministrarle oxgeno, con la ayuda de tractores y
retroexcavadoras (aireacin mecnica) o sistemas de inyeccin de
aire comprimido. Adems, el espesor del suelo extendido debe ser
menor de 70 u 80 cm, con el fin de permitir la transferencia de
oxgeno del aire atmosfrico a la pila del suelo,

El sitio donde se realice el tratamiento debe ser adecuado para el

manejo de aguas lluvias y control de agua de escorrenta. El suelo
extendido debe tener una pendiente para retirar excesos de humedad
en la pila. Se deben construir canaletas o diques en tierra o suelo
cemento para evitar la entrada de agua de escorrenta a la zona de
tratamiento. En reas de riesgo de contaminacin de acuferos, se
debe impermeabilizar la zona de tratamiento con sellos de arcilla o
geomembranas para evitar el arrastre de hidrocarburos solubles de
las lluvias hacia las aguas subterrneas.

Para empezar el procedimiento, se hace una bsqueda y seleccin de

bacterias nativas aisladas de las muestras de suelos que se
encuentran contaminados, ya que estas tienen la capacidad
catablica para crecer bajo las condiciones fsico-qumicas y de estrs
a las que estn sometidas, y tendrn un mejor desempeo a la hora
de la biorremediacin.

La bsqueda comienza en el procesamiento de una muestra de suelo

mediante una serie de diluciones, tratando de obtener aquellos
morfotipos cultivables; ya que una gran parte de los microorganismos
del suelo no pueden ser recuperados en medios para el cultivo de
microorganismos.

Adems de una bsqueda general, se realiza una especfica a travs

de medios selectivos y diferenciales, en la cual se pretende aislar
ciertos morfotipos como las Pseudomona sp. y bacterias lactosa
positivas (bacterias capaces de utilizar la lactosa), debido a su bien
conocida actividad degradadora de hidrocarburos.

Luego, estas diluciones son sembradas en diferentes medios de

cultivo donde grandes familias de morfotipos se hacen presentes;
stas varan en densidad y diversidad. La diversidad est
determinada por los morfotipos recuperados que se diferencian segn
su morfologa macroscpica (su aspecto fsico), mientras que la
densidad est determinada por el nmero total de individuos que
pertenecen a un grupo con una morfologa macroscpica comn.

Estos datos de densidad y diversidad son de gran valor. Primero,

porque indican acerca de la calidad microbiana del suelo, ya que un

suelo que tiene gran nmero de morfotipos, es un suelo que tiene

vida y por ende presenta una buena prospeccin para la
biorremediacin debido a su posible alta actividad microbiana.
Segundo, porque aquellos morfotipos que se encuentren en mayor
nmero sern seleccionados por su habilidad para sobrevivir a la
presin selectiva del contaminante y para usarlo como fuente de
energa y carbono, pues por eso estn creciendo.

Ya seleccionados los morfotipos se conforma un consorcio o pool de

microorganismos degradadores de hidrocarburos y, utilizando la
estrategia de bioaumentacin, se hace
una produccin a mayor escala y en proporciones estratgicas de
estos. En esta produccin debe tenerse en cuenta el volumen de
suelo contaminado para biorremediar, la concentracin del
contaminante y las clases de morfotipos que se aislaron.

Los factores a tener en cuenta en la aplicacin del Landfarming son:

La existencia de unas
geoqumicas favorables.

El manejo de un consorcio microbiano sobre la utilizacin

de un solo morfotipo, debido a que los morfotipos al estar
en grupo pueden tolerar mejor los cambios fsico-qumicos
en el campo y sus actividades metablicas pueden
interactuar entre s para la parcial o final biorremediacin.

Conocer las condiciones ambientales en las cuales se

desea que los morfotipos trabajen, para as poder
optimizar la biorremediacin, cambiando los posibles
parmetros fsicos o qumicos que puedan ir en contra de
la actividad microbiana en el material a biorremediar o en
el ambiente.

Resaltar la importancia que tiene la seleccin de

microorganismos autctonos (aislados del lugar para la
biorremediacin), debido a que estos morfotipos se
encuentran mejor adaptados al contaminante; a
diferencia de morfotipos forneos, que aunque con una
gran actividad biorremediadora, pueden no funcionar bajo
las condiciones ambientales del lugar.

condiciones

geolgicas

Ventajas.

Es econmico con
biorremediacin.

Es un proceso considerado de bajo nivel tecnolgico que

no requiere exigentes consideraciones de ingeniera, y a
la vez permite una fcil manipulacin y control de las
variables de diseo y operacin.

respecto

otras

tcnicas

de

Desventajas.

Requiere grandes extensiones de terreno para disposicin

de suelos y no es viable si no se cuenta con suficiente
rea.

Cuando los contaminantes son hidrocarburos livianos la

remediacin puede ser acelerada por su volatilizacin, lo
cual generara problemas con las autoridades ambientales
donde las regulaciones de emisiones atmosfricas son
exigentes.

Cuando la contaminacin es profunda los costos de

excavacin y movimiento de tierras pueden ser altos.

5.2.2. Bioceldas o biopilas

La tcnica conocida como bioceldas o biopilas es un tratamiento de

biorrecuperacin en condiciones no saturadas, que consiste en la
reduccin de la concentracin de contaminantes derivados del
petrleo en suelos excavados mediante el uso de la biodegradacin a
partir de la construccin de un sistema cerrado que permita controlar
lixiviados, hidrocarburos voltiles y algunas variables de diseo
mediante el suministro de nutrientes y oxgeno a travs de la pila del
suelo.

La tcnica consiste en la formacin de pilas de material biodegradable

de dimensiones variables, formadas por suelo contaminado y materia
orgnica (compost) en condiciones favorables para el desarrollo de los

procesos de biodegradacin de los contaminantes. En el fondo de la

pila el sistema cuenta con un aislante que generalmente son
geomembranas o canales plsticos para el control de lixiviados. Estas
pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la
pila, o bien de forma pasiva, mediante tubos perforados de aireacin,
con distribucin permanente de nutrientes, microorganismos y aire.
En principio, las biopilas se pueden aplicar a la mayora de los
compuestos orgnicos, siendo ms eficaz en los compuestos de
carcter ms ligero.

Entre los factores que influyen en la aplicacin de las biopilas se

destacan:

Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben

encontrarse en el suelo en concentraciones menores a
50.000 ppm.

Dada la necesidad de excavacin y posterior depsito del

suelo contaminado, se requiere una superficie de trabajo
relativamente grande cuyas dimensiones dependen del
volumen de suelo a tratar.

Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas

(>1.000 CFU/gramo de suelo), condiciones de humedad (40 a
85% de capacidad de campo), temperatura (10 a 45C),
textura (baja proporcin de arcillas), pH del suelo adecuadas
(6 a 8) y baja presencia de metales pesados (< 2.500 ppm).

La concentracin de nutrientes en el suelo cuyo rango normal

de C:N:P sea de 100:10:1.

Ventajas.

Esta tcnica es muy eficiente en el tratamiento de residuos

con bajas concentraciones de hidrocarburos.

Por ser un sistema cerrado permite un mayor control de las

variables del proceso, como el control de condiciones
climatolgicas adversas (baja temperatura o alto rgimen
pluviomtrico).

Cuando no se dispone de espacio suficiente para extender el

suelo, este sistema permite construir pilas de suelo cuatro o
cinco veces ms altas que en una disposicin sobre el suelo
(ocupa diez veces menos rea)(Zitrides, 1995).

Desventajas.

Si en el proceso se generan gases o vapores de

hidrocarburos voltiles regulados por la autoridad ambiental,
o las condiciones climatolgicas de la zona pueden afectar
negativamente la eficiencia del proceso, la pila del suelo se
debe cubrir con membranas o poner techo de forma similar a
los invernaderos. Los vapores generados en el proceso se
deben colectar y tratar antes de ser emitidos a la atmsfera.
Lo que incurre a costos adicionales.

Como todos los tratamientos Ex Situ, cuando la

contaminacin es muy profunda, el movimiento de tierra
puede requerir costos ms altos.

5.2.3.

Tratamiento de biosuspensin

Tambin conocido como sistema biorreactor o contacto lquido-slido.

El procedimiento consiste en excavar el suelo contaminado y luego
introducirlo en un reactor aadiendo nutrientes, agua, y los cultivos
microbianos adecuados para que se lleve a cabo la degradacin. Se
mezcla bien y se airea la suspensin hasta que las transformaciones
de los compuestos seleccionados para su eliminacin alcanzan el
nivel deseado. A continuacin se detienen el mezclado y la aireacin,
y se deja a los slidos separarse de los fluidos por sedimentacin. El
sedimento es retirado y, si la transformacin ha tenido xito, el suelo
se devuelve a su lugar de origen, mientras que los lquidos se tratan
como aguas residuales.

El suministro de oxgeno puede realizarse mediante aireacin difusa,

turbina difusora y aireacin superficial (Metcalf y Eddy, 1991). La tasa
de transferencia de oxgeno necesaria es funcin de la tasa de
degradacin de los compuestos orgnicos y de la tasa de crecimiento
microbiano. Su determinacin no es fcil de hacer, sin embargo, las
tasas de transferencia disminuyen al aumentar la concentracin de
slidos suspendidos.

El mezclado y el suministro de nutrientes tambin son fundamentales,

ya que por el primero se incrementa el contacto entre los
microorganismos y los componentes contaminantes, dando como
resultado un incremento de las velocidades de transferencia de masa
y de reaccin. Los nutrientes normalmente optimizan la
biorrecuperacin por favorecer el crecimiento de los microorganismos.

Por otro lado, el mezclado y la aireacin ayudan a romper los flculos

de tierra y a disolver los contaminantes.

Ventajas.

En comparacin con otros procesos de tratamiento, los

reactores va suspensin proporcionan el mayor
contacto entre los contaminantes, los microorganismos,
el oxgeno, el agua y los nutrientes.

La capacidad de controlar los sistemas del tratamiento

va suspensin es mucho mayor y por tanto puede ser
la tecnologa ms efectiva.

El tratamiento va suspensin puede aplicarse en particular a

los suelos contaminados con residuos oleosos y de consistencia
alquitranada
(siendo
estos
compuestos
difciles
de
biodegradar).

Es ms rpido y requiere menos superficie que otros

sistemas.

Desventajas.

Debido al energtico mezclado y a la aireacin forzada se

favorece el escape de emisiones de aire, por ello la
suspensin no es una buena eleccin para suelos donde los
compuestos voltiles sean mayora.

Esta tcnica demanda mayor cantidad de dinero a

comparacin de otras tcnicas de biodegradacin.

5.3. FITORREMEDIACIN:
BIORREMEDIACIN

OTRA

ALTERNATIVA

DE

La fitorremediacin constituye una variacin de las tcnicas de

biorremediacin, que se basa en el uso de plantas verdes y los
microorganismos asociados a ellas as como las enmiendas del suelo
y tcnicas agronmicas dirigidas a liberar, contener, o transformar en
compuestos inocuos a los contaminantes del suelo (48).

Inicialmente, el trmino de fitorremediacin se asoci al uso de

plantas capaces de bioconcentrar niveles inusuales de metales en sus
tejidos. La mayor parte de ellas estn constituidas por pequeas
plantas herbceas que se desarrollan en zonas metalrgicas naturales
o en depsitos (49).

Hoy en da, las investigaciones en fitorremediacin se encaminan no

slo al tratamiento de contaminantes inorgnicos (metales,
metaloides, haluros y radionucleidos), sino tambin al tratamiento de
contaminantes orgnicos (50); algunas especies de plantas probadas
con xito en la fitorremediacin de suelos contaminados con
hidrocarburos del petrleo son: Zea mays L., Panicum maximun Jacq.,
Paspalum virgatum L., Echinochloa polystachya H.B.K., Sorghum
vulgare L., Phaseolus vulgaris L., Phaseolus coccineus L.,
Chamaecrista nictitans (L.) Moench., Brachiaria brizantha
(Hochst. ex A. Rich) Stapf., Triticum aestivum L., Hordeum vulgare L.,
entre otras. (Revista Latinoamericana de Microbiologa vol 48. Abril Junio de 2006)

Comprendiendo tanto los procesos dirigidos a liberar el contaminante

de la matriz del suelo (descontaminacin), como los encargados de
secuestrarlos en dicha matriz (estabilizacin).

La fitorremediacin comprende tanto los procesos dirigidos a liberar el

contaminante de la matriz del suelo (descontaminacin), como los
encargados de secuestrarlos en dicha matriz (estabilizacin).

5.3.1. Fitodescontaminacin y fitoestabilizacin

La fitodescontaminacin es el proceso por el cual la concentracin de

contaminantes del suelo se reduce a niveles tolerables a travs de la
accin de las plantas, su microflora asociada y de las tcnicas
agronmicas apropiadas. A su vez, comprende los siguientes
procesos:

Fitoextraccin. Es el proceso por medio del cual, tanto los

contaminantes metlicos, como los contaminantes orgnicos del
suelo, son absorbidos directamente por las plantas e
incorporados a su biomasa, que con posterioridad ser
recolectada para su destruccin.

Fitovolatilizacin. Proceso por el cual las plantas y la actividad

microbiana asociada, a travs de enzimas especializados,
pueden transformar, degradar y finalmente volatilizar los
contaminantes desde el suelo. La volatilizacin puede
producirse tanto desde el sistema radicular como desde la parte
superficial del suelo.

Fitodegradacin. Es el proceso mediante el cual las plantas

toman el contaminante y lo metabolizan transformndolo en un
material sin riesgos para el medio natural.

Rizodegradacin. Es el proceso por medio del cual las races de

las plantas, su microflora asociada y/o los productos excretados
destruyen el contaminante en la zona radicular.

La fitoestabilizacin es el proceso que est encaminado al secuestro y

estabilizacin de los contaminantes en los suelos. Se utilizan plantas
tolerantes al contaminante, capaces de estabilizarlo mecnicamente,
y por tanto impiden su transporte a otros medios, incluyendo el agua
subterrnea.

5.3.2. Tolerancia de las plantas a los contaminantes

Una
caracterstica
esencial
en
cualquier
tecnologa
de
fitorremediacin es la tolerancia de las plantas a los contaminantes,
que se define como la capacidad para resistir la acumulacin en sus
tejidos de elevados niveles de compuestos txicos. Para comprender
el desarrollo de las plantas hipertolerantes es necesario conocer las
estrategias moleculares que adoptan para resistir los efectos txicos
de los contaminantes inorgnicos y orgnicos.

Tolerancia a los metales pesados. La tolerancia a los metales pesados

por las plantas est limitado tanto por la admisin celular, como por
la resistencia de los metales una vez que han penetrado en las
clulas.

Las estrategias empleadas por las plantas, para resistir los efectos
txicos causados por los metales pesados, se relacionan con los
siguientes mecanismos:

Establecimiento de enlaces entre los metales y la pared celular.

Nivel de tolerancia por la membrana celular hacia los metales.

Reduccin del transporte por la membrana celular.

Flujo activo de metales desde las clulas hacia el exterior.

Nivel de tolerancia de los enzimas vegetales hacia los metales.

Compartimentacin o acumulacin del exceso de metales en

rganos subcelulares como son las vacuolas.

Quelacin del metal por ligandos orgnicos y/o inorgnicos

(fitoquelatos).

Precipitacin
solubilidad.

del

metal

al

formar

compuestos

de

baja

Tolerancia a los contaminantes orgnicos. Las plantas muestran una

variacin considerable de su tolerancia hacia los contaminantes
orgnicos; dos son los mecanismos por los que las plantas pueden

incrementar su resistencia a los contaminantes orgnicos. El primero

de ellos consiste en la transformacin de los elementos txicos en la
rizosfera, para ello la planta libera ms del 20% de su fotosintato
dentro del suelo en forma de exudado radicular. El fotosintato
liberado est constituido por una mezcla de azcares, alcoholes,
fenoles, cidos orgnicos y protenas que rpidamente son utilizados
por las comunidades microbianas existentes en la rizosfera. Estas
poblaciones pueden ser, de 100 a 10.000 veces mayores que las
poblaciones presentes en la matriz del suelo, y se caracterizan por
presentar enzimas especficos capaces de metabolizar los
contaminantes orgnicos hacia formas menos txicas.

El segundo mecanismo se produce una vez que los contaminantes

han atravesado el sistema radicular. En este caso, los elementos
txicos pueden seguir dos vas de transformacin, por un lado se
trasladan hacia brotes y hojas para, posteriormente, volatilizarse, y
por otro pueden sufrir procesos de metabolizacin hacia nuevas
formas. Estos nuevos compuestos pueden mineralizarse o pueden
acumularse como nutrientes o como nuevos contaminantes. La
inclusin en rganos subcelulares y la formacin de otros compuestos
representan las principales vas para la desintoxicacin de
xenobiticos en plantas.

5.3.3. Futuro de la fitorremediacin

La fitorremediacin es una tecnologa emergente en el tratamiento de

la contaminacin, su aplicacin es cada vez mayor y sus resultados se
estn valorando como muy positivos. La utilizacin de tcnicas, en
campo, con plantas herbceas, gramneas, vegetacin arbrea y
algunos mutantes transgnicos, pone de manifiesto que la
fitorremediacin empieza a ser una tecnologa competitiva en la
recuperacin de suelos contaminados.

El conocimiento de los procesos fisiolgicos que tienen lugar en la

planta, junto al conocimiento de los compuestos txicos, est
haciendo que se puedan seleccionar plantas con mayores niveles de
tolerancia hacia contaminantes especficos. Adems, por tcnicas
genticas se pueden incrementar la biomasa vegetal, su morfologa,
densidad radicular o penetracin en profundidad, as como favorecer
la existencia de asociaciones especficas de microorganismos-races.

La fitorremediacin podra ser particularmente atractiva en medios

con bajo riesgo, donde los contaminantes estn limitados a la zona
radicular y donde no hubiera fuertes contrastes climticos. En estas
condiciones, la velocidad de la toma de contaminantes por especies
fitoextractoras y la velocidad de fitodegradacin por enzimas
especficos podran, probablemente, ser mayores que la velocidad de
difusin de los contaminantes.

Sin embargo, la fitorremediacin est limitada por las condiciones que

impiden un crecimiento normal de las plantas como son: el clima. la
topografa, los procesos de erosin, y concentraciones de
contaminante que exceda del nivel de tolerancia de las plantas.

Tambin limita la utilizacin de esta tcnica el tiempo que haya para

la descontaminacin (la fitorremediacin es lenta), y la distancia del
contaminante a zonas sensibles: ros, lagos, lagunas y aguas
subterrneas.

BIOREMEDIACIN DE SUELOS
CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS
DERIVADOS DEL PETRLEO

Principales fuentes de contaminacin

Una investigacin realizada en 1981 por el institu-to americano de

petrleo

(API)

identifico

entre

las

principales

fuentes

de

contaminacin:
Lodos de perforacin de tipo inversa y recor-tes, estos lodos
contienen un tipo de aceite muy simi-lar a diesel en concentraciones
de aproximadamente 10% y son sumamente arcillosos. Este material
se deposita en presas, las cuales anteriormente eran construidas con
materiales

permeables

filtraban

los

hidrocarburos

al

medio

ambiente.
Suelo contaminado por derrames de tuberas corrodas, existen
campos petroleros con alrededor de cincuenta de 50 aos de
antigedad, ubicados en zonas pantanosas, manglares u otras selvas
inndales. Los ductos de estos se instalaron conectando los po-zos
individuales a bateras de separacin y desde ah hasta las
petroqumicas y refinera, generndose co-rrosin anaerobia, debido
principalmente a bacterias reductoras de sulfato dando como
resultado ductos corrodos y derramamientos. Los tipos de suelos
afec-tados son de zonas bajas con altos contenidos de materia
orgnica y arcilla y los menos afectados, son por lo general los ms
aptos para la agricultura por poseer texturas menos finas y alta
fertilidad. Los si-tios que se encuentren en la planicie costera, son los
que ms preocupan en caso de contaminacin por el impacto que
puede tener sobre los acuferos, debido a su alta permeabilidad.
La biorremediacin del suelo, puede ser dividida en estrategias in
situ y ex situ. In situ corresponde a la biorremediacin referente a
tratamientos que no requie-ren excavacin del suelo contaminado; ex
situ es un mtodo donde se excava el suelo o el material a tratar y se
le maneja en un sistema controlado como una celda de landfarming o
algn tipo de biorreactor (11-13).
Las tcnicas de biorremediacin in situ presentan una mayor
ventaja sobre las ex situ por el menor costo y la disminucin de la

generacin de residuos a elimi-nar en la superficie (14). La

biorremediacin in situ es la ms aplicada y utiliza microorganismos
autctonos, estos en el suelo pueden degradar un gran nmero de
constituyentes de lodo pero su eficacia y su poblacin son afectados
cuando algunos contaminantes txicos estn presentes en altas
concentraciones. La reintroduccin de microorganismos aislados de
un sitio contaminado ayuda a resolver este problema ya que los
microorganismos pueden degradar los constituyen-tes y tiene una
gran tolerancia a la toxicidad (15).
Los mtodos, ms empleados en biorremediacin son:
(i) Biofiltracin, en esta entra el aire contaminado a unos
biorreactores

en

los

cuales

la

flora

microbiana

degrada

los

contaminantes voltiles en dixido de carbono, agua y biomasa, (ii)

Bioventing, el cul es un proceso de biorremediacion in situ que
consiste en la ventilacin forzada del suelo mediante la inyeccin de
O2 en la zona no saturada mediante pozos de inyeccin; debido a la
aireacin se va a favorecer la degradacin de los hidrocarburos por
volatilizacin y migracin de la fase ms voltil del contaminante, y
por biodegradacin, ya que al incrementar la oxigenacin del suelo se
va a estimular la actividad microbiana, (iii) el Biosparging es un
mtodo in situ que combina el efecto de la ventilacin con la
utilizacin

de

los

microorganismos

autctonos

para

degradar

compuestos orgnicos absorbidos por el suelo en la zona saturada. En

este el aire y los nutrientes se inyectan en la zona saturada para
mejorar la actividad de los microorganismos presentes.

Est tcnica se utiliza para la degradacin de compuestos orgnicos

en el suelo y aguas subterrneas. (iv) las biopilas, son un tipo de
biorremediacin de tipo ex situ en condiciones no saturadas, consiste
en la reduccin de la concentracin de contaminantes derivados del
petrleo de suelos excavados mediante el uso de la biodegradacin.

La

tcnica

consiste

biodegradable

de

en

la

formacin

dimensiones

variables

de

pilas

de

formadas

material

por

suelos

contaminados y materia orgnica, compost, en esta se aplica una

aireacin activa volteando la pila o pasiva por tubos de aireacin. Este
principio se puede aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos
siendo ms eficaz en los ligeros (16-21).
Entre los factores que influyen en la aplicacin de
esta tcnica se destacan: los hidrocarburos deben ser no halogenados
con concentraciones en suelo meno-res a 50.000ppm, superficie de
trabajo

relativamente

grandes,

necesidad

de

una

poblacin

microbiana ma-yor a 1000UFC (Unidades Formadoras de Colonias) por

gramo de suelo.
(v) la atenuacin natural, es una tcnica de biorremediacin in situ
de bajo costo, su caractersti-ca principal es la utilizacin de los
procesos fsico-qumicos de interaccin contaminante suelo y los proceso de biodegradacin tienen lugar de forma natu-ral. estos procesos
se conocen como procesos de biotransformacin natural, que van a
reducir la con-centracin de los contaminates. Entre ellos se encuentra la dilucin, la dispersin, volatilizacin, adsorcin, biodegradacin
y la reacciones qumicas que se pro-ducen en el suelo (22).
Las tcnicas de recuperacin para acuferos contaminados ms
empleadas son el bombeo de agua contaminada y posterior
tratamiento en superficie, inyeccin de soluciones acuosas con
reactivos e inyeccin de airea para eliminar sustancias voltiles y el
uso de microorganismos para trasformar y degradar el contaminante.

Tiraderos de desechos aceitosos semislidos, se utilizan pozos que

nunca produjeron petrleo o un pozo antiguo que no produce y esta
tapado, puesto que nunca fueron diseados para dicho fin y son
construi-dos de materiales impermeables, muchas veces se termina el
espacio disponible y se sigue depositando el relleno sobre la

plataforma lo que resulta en escurrimientos e infiltraciones de

hidrocarburos al medio ambiente cercano.

S i t i o s c o n t a m i n a d o s p o r d e s c a rg a s petroqumicas y
refineras, estos tienen sistemas antiguos de tratamiento de aguas
residuales,

las

cua-les

generalmente

contienen

sales

de

los

yacimientos de petrleo, lo que puede afectar los pantanos y cuer-pos

de agua.

Biorremediacin: una alternativa saludable

Las

prcticas

de

biorremediacion

consisten

en

el

uso

de

microorganismos como plantas, hongos, bac-terias naturales o

modificadas

genticamente para

neutralizar

sustancias

toxicas,

transformndolas en sustancias menos txicas o convirtindolas en

inocuas para el ambiente y la salud humana (6,8).
La biorremediacin puede clasificarse de acuerdo al organismo que
efecte

la

degradacin

del

compues-to

xenobitico.

La

fitorremediacin, es el uso de plan-tas para la remocin de

contaminantes de suelo y aguas, es una tcnica apropiada para la
remocin de metales pesados y radionucleos. Sin embargo, no se
conoce sobre la habilidad de esta en el tratamiento de suelos con
contaminantes orgnicos persistentes, un ejemplo lo constituye la
especie T h l a s p i caurulencens en suelos contaminados con zinc y
cadmio donde se encontr que los eliminaba del suelo agrcola (1,9).
As

mismo,

existen

animales

que

actan

como

agentes

descontaminates, ya que pueden desarrollar-se en medios con fuerte

toxicidad y poseen en su in-terior microorganismo capaces de retener
metales pesados; tal es el caso de la lombriz de tierra (lumbricus
terrestris) la cul absorbe los contami-nantes a travs de los tejidos y
los acumula en las vas digestivas (1,10).

Las

bacterias

biorremediacin,

son

las

aunque

ms

empleadas

tambin

se

en

han

el

proce-so

em-pleado

de

otros

microorganismos como hongos, algas, Cianobacterias y Actinomicetes

para la degradacin de compuestos txicos en el suelo (1).

Microorganismos degradadores de petrleo

En Long Beach (California), aplicaron la biorremediacin in situ en
suelos

contaminado

con

aceite

diesel

mediante

el

uso

de

microorganismos autctonos complementada con la adicin de

nutrientes y oxigeno en el suelo bioestimulacin (23), e inoculacin de
una mezcla enriquecida de consor-cios bacterianos previamente
extrada del mismo suelo bioaumentacin. Esto permiti encontrar
consorcios bacterianos degradadores de hidrocarburos identifi-cados
por secuenciacin de genes 16S-RNA, demos-trando la presencia de
Bacillus cereus, Bacillus sphaericus, Bacillus fusiformis, Bacillus
pumilis, Acinetobacter junii, y Pseudomonas sp (24).
El

estudio

hecho

sobre

la

adaptacin

seleccin

de

microorganismos autctonos en medios de cultivo enriquecidos con

petrleo crudo realizado por Maria del Carmen Rivera-Cruz 2002
indic que los microorganismos con crecimiento abundante aislados
de suelos receptores de derrames recientes y crni-cos de petrleo
crudo y otros no contaminados, son considerados degradadores de
petrleo (25).
Los microorganismos aislados en suelos poseen actividades de
peroxidasas y oxigenasas, que permi-ten la oxidacin de algunas
fracciones del petrleo (26). Esta oxidacin cambia las propiedades de
los compuestos haciendolos susceptibles a ataques se-cundarios y
facilitando su conversin a bioxido de carbono y agua (27, 28).
Uno de los gneros bacterianos ms explotados en bioprocesos no
convencionales es Rhodococcus, un grupo nico consistente en

microorganismos que presentan una gran diversidad metablica,

capaz de transformar, biodegradar y utilizar como nica fuente de
carbono compuestos hidrfobos (29).
Los

Rhodococcus

son

aerbios,

Gram

positivos,

inmviles,

Nocardiformes, Actinomicetos, que en algunas ocasiones presentan pequeas proyecciones filamentosas. Las
caractersticas bioqumicas encontradas

en

algunas

cepas

son

la

produccin

de

poli-3-

hidroxialcanoatos, acumulacin de metales pesados y

enzimas tiles como la fenilalanina, deshidrogenasa y

endoglucosidasas.
El Rhododoccus poseen una gran variedad de vas metablicas para
la degradacin y modificacin de compuestos aromticos, incluyendo
las actividades de di-oxigenasa y mono-oxigenasa sobre anillos, as
como la actividad de ruptura de catecol. Algunas cepas pre-sentan
tambin la va del 3-oxoadipato. Lo anterior sumado a su capacidad
de crecimiento en medios con escasos nutrientes, la carencia de un
sistema de re-presin catablica y su persistencia ambiental las hacen excelentes candidatas para los tratamientos de biorremediacin
(29).
El Rhodococcus sp. utiliza el dibenzotiofeno (DBT) como nica
fuente de azufre, el DBT y sus derivados son los rganoazufrados ms
abundantes en el diesel primario. En Mxico, investigadores del
Instituto Mexi-cano del Petrleo han aislado cepas de Rhodococcus de
sitios contaminados con petrleo capaces de desulfurar muestras de
diesel. Otros microorganismos reportados como capaces de utilizar el

DBT como fuente de azufre son las cepas de Gordona y Nocardia sp.
Dentro de las aplicaciones industriales y ambientales, se incluye la
produccin de cido acrlico y acrilamida, conversin de esteroides,
biorremediacion de hidrocar-buros clorados y fenoles, a lo que se
aade su gran ca-pacidad de degradar hidrocarburos alifaticos
halogenados y numerosos compuestos aromaticos, como los PHAs
(hidrocarburos policiclicos aromticos) (30), evidenciandose que tanto
R. rhodochorus como R. erythropolis demostraron ser una excepcin,
pues la degradacin de naftaleno por parte de estos no es significativa, debido a que la actividad degradadora de PAHs por parte de
estos microorganismos, se ve regulada por las proteobacterias del
medio afectado (31-33).
Otras aplicaciones potenciales son la produccin
de biosurfactantes emulsificantes naturales de hidro-carburos, los
cuales son producidos por algunos hongos o bacterias y el anlisis de su metabolismo permi-te obtener
biomolculas a escala comercial y la
biodesulfuracin de combustibles, la deshalogenacin de emisiones
gaseosas y la construccin de
biosensores (34).
Nuevas especies de Rhodococcus que presentan una nueva
mutacin tienen la capacidad de degradar compuestos alifticos con
enlaces dobles principal-mente en el noveno carbono del grupo metilo
termi-nal (alquenos). Las bacterias del gnero
Pseudomonas poseen la habilidad para utilizar diver-sos substratos,
incluyendo aquellos creados por el petrleo. Las Pseudomonas son
bacterias Gram ne-gativas, obicuas, que pertenecen a la subclase
gamma de las Proteobacterias.

Las Pseudomonas son bacterias productoras de biosurfactantes

como los ramnolipidos involucrados en procesos de remocin de
aceites y productos rela-cionados, Bushnell y Hass fueron de los
primeros en describir bacterias productoras de biosurfactantes, como
el Corynebacterium simplex y cepas de
Pseudomonas (29,35).
Algunos

microorganismos

productores

de

biosurfactantes

extracelulares que solubilizan y facili-tan la penetracin de los

hidrocarburos a travs de la pared celular hidroflica; contienen
adems enzimas degradadoras de hidrocarburos en la membrana
citoplasmtica.

La

Pseudomonas

aeruginosa,

es

otro

de

los

microorganismos ms usado y estudiado en biorremediacin y

presenta una serie de actividades naturales sobre xenobiticos.
Lamentablemente, tam-bin es conocida por ser un patgeno
oportunista en humanos y causante de complicaciones graves en personas inmunosuprimidas, con quemaduras severas o con fibrosis
qustica. Por estas razones existe mucho inters en el estudio de las
relaciones filogenticas entre serotipos clnicos y ambientales (36).
Estudios con relacin al desempeo metablico de la Pseudomonas
aeruginosa ha permitido identificarla como degradadota de gran
cantidad de sustratos como el n-hexadecano, mineralizacin de
compuestos alifticos en condiciones anaerobias, y degradadora de
hidrocarburos aromticos y poli aromticos, as como
del pireno en estudios in vitro (37,38).

La P. aeruginosa tiene la capacidad de sintetizar ramnolipidos

cuando se encuentra en la fase estacio-naria de su crecimiento, por
tal razn esto slo se puede realizar en la primera fase del proceso de
biorremediacion

contribuyendo

as

con

la

moviliza-cin

solubilizacin de los contaminantes durante la fase siguiente de

mineralizacin. Al mismo tiempo que pueden tranformarse bajo
microcosmos en el suelo con un tratamiento fsico o qumico
especifico,

ca-racterstica

que

comparte

con

el

Agrobacterium

tumefasciens (39).
La Pseudomona putida es un saprofito del suelo , oportunista,
cosmopolita, metablicamente verstil, por poseer una dioxigenasa
inicial, una tolueno dioxigenasa, aunque no presenta la dioxigenasa
es-pecfica para los PAHs por lo cul es una buena candidata para las
aplicaciones biotecnolgicas, tales como agricultura, biocatlisis,
biorremediacin, biocontrol en proteccin de las plantas y produccin
de bioplsticos (14).
La P. putida posee la capacidad de colonizar la rizosfera de plantas
de cosecha y una gran capacidad metablica que facilita el desarrollo
de biopesticidas y promotores de crecimiento de la planta. La
degrada-cin de los alcanos por Pseudomona putida se ha estudiado
por secuenciacin en el plasmido OCT que codifica una enzima
dioxigenasa

que

convierte

alcanos

aldehdos

travs

del

hidroperoxidasa del n-alkyl sin un intermediario del alcohol, conocido

como la va de Finnerty; un proceso similar lo presentan los gneros
Acinetobacter sp y Nocardiodes sp. aunque ellos no poseen este
plasmido.
La Pseudomonas fluorescens es degradadora de naftaleno y
fenantreno, ventaja que tiene frente a las otras Pseudomonas, que
solo metabolizan naftaleno y asfaltenos (36).
Estudios

realizados

demuestran

que

Flavobacterium

Pseudomonas son los microorganismos ms aislados en la fase de

degradacin de los TPH (Hidrocarburos Totales). La Pseudomonas
stutzeri es una degradadora de PHAs (33).

Burkholderia

es

otro

gnero

bacteriano

utilizado

para

biorremediacin de herbicidas y pesticidas re-calcitrantes y tambin

es usado para proteger culti-vos contra hongos. Debido a su genoma
extremada-mente

flexible,

Burkholderia

cepacia,

bacilo

Gram

negativo no fermentador, productora de pigmento amarillo tiene una

gran capacidad mutagenica y adaptativa, ha sido recuperada a partir
de agua y su-perficies hmedas, es resistente a mltiples antibiticos
y sta capacidad es altamente transmisi-ble entre especies. Por todas
estas razones, la selec-cin de cepas seguras para su uso ambiental
no es posible por el momento y su uso en la agricultura tam-bin
debe ser cauteloso. Aunque es una excelente degradadora de los
hidrocarburos aromticos (34,40)
El Acinetobacter sp es un bacilo Gram negativo, es productor de
cido a partir de la glucosa, se desarrolla a 41 y 44C, produce axilosa y utiliza el malato. Dentro de las especies de importancia
ambiental se destacan, A. baumanii, Acinetobacter calcoaceticus
carente de cido metlico. Las cepas de Acinetobacter baumanii son
eficientes en la degradacin de fracciones de alcanos (41).
Los productos de petrleo ampliamente usados como gasolina,
keroseno y Diesel son contaminantes comunes del ambiente, se ha
observado que la biodegradacin de gasolina por microflora de suelo
y agua de sitios contaminados es eficiente; compuestos como el
benceno,

tolueno,

etilbenceno,

n-alcanos

son

realmente

biodegradables. Se aisl una cepa con una alta capacidad de

degradar dichos compuestos identi-ficada como Mycobacterium
austroafricanum (42).
Se selecciono una cepa en un acufero contaminado con gasolina, la cul tiene la capacidad de utilizar el isoctano
(2,2,4-trimetilpentano) como nica

fuente

de

carbono

energa.

El

microorganismo

aislado

fue

identificado por medio de la secuenciacin

del 16S ribosomal. Se identifico una cepa perteneciente a M y c o b a
c t e r i u m a u s t ro a f r i c a num(42); y otra cepa como Mycobacterium sp. Esta de manera
inusual utilizo como fuente de carbono y

sustrato de crecimiento n-alcanos y multimetil, donde

degrado el metil t-butil eter, y grupos 3-metil, posiblemente por
mecanismos de carboxilacin y
deacetilacin; logrando finalmente la degradacin del 86% de los
sustratos contenidos en este sitio
contaminado con gasolina (43).
La degradacin de gasolina por microflora de suelo y agua en sitios
contaminados, es realmente eficiente, se puede alcanzar un nivel de
biodegradacin hasta del 90%. La limitacin de esta microflora
aparentemente se presenta a nivel de la degradacin de compuestos
como el ciclohexano y trimetilpentano, los cuales se presentan como
compuestos recalcitrantes (44).
La

microflora

degradadora

de

ciclohexano

isoctano

es

seleccionada directamente de las mues-tras tomadas del ambiente.

La cepa que utiliza el ciclohexano como nica fuente de carbono no se
ha logrado aislar pura, debido a los fenmenos de meta-bolismo y
cometabolismo involucrados en la degrada-cin de este compuesto.
En cuanto a la capacidad de degradacin del isoctano, resulta ser
complicada en las muestras na-turales, solo se ha aislado el

Mycobacterium austroafricanum con esta capacidad, as como tambin se ha encontrado que esta cepa se caracteriza por el uso de
ciclohexano como un cosustrato, pues su habilidad radica en el uso de
isoctano como nica fuente de carbono (42).
Otro gnero estudiado dentro de las tcnicas de biorremediacion es
Sphingomonas, bacilos no fermentadores y dentro de estos la
Sphingomona wittichi es un microorganismo capaz de degradar en
condiciones

anaerobias

el

2.7diclorobenceno,

produ-ciendo

el

metabolito 4 clorocatenol y el 1,2,3,4 tetraclorodibenceno, y cepas

como Sphingomonas yanoikuyae, y Sphingomonas paucimobilis como
degradadoras de PAHs utilizandolos como unica fuente de energa,
tienen actividad Catecol 2,3-dioxigenasa, fenantreno y antraceno.
Se han aislado cepas capaces de metabolizar
naftaleno y fenatreno como nica fuente de carbono, estas fueron
taxonmicamente

implicadas

en

diferen-tes

subclases

de

las

Proteobacterias (Sphingomonas sp, Acidovorax sp, Comamonas sp, y

Pseudomonas sp), y a bacterias Gram positivas con bajo y alto contenido de DNA G+C (P a e n i b a c i l l u s s p y Rhodococcus sp,
respectivamente) (45).
Alcalgenes, Micobacterium y Bacteroides han sido reportados como
degradadores de hidrocarburos de petrleo, y estos filotipos son
candidatos para el tratamiento de terrenos contaminados con TPH.
Sin embargo su poca abundancia se convierte en una desventaja para
su aplicacin (46).
La degradacin del bifenil policlorinato PCBs y otros hidrocarburos
por microorganismos como Comamonas acidovorans, Acinetobacter
calcoaceticus, Achromobacter sp. Pseudomonas sp. Flavobacterium
devorans, Bacillus lentus, Bacillus mascerans y Bacillus thuringensis
ha sido aplicada con buenos re-sultados para el tratamiento de los
mismos (47,48).

Se ha referenciado que las Comamonas son degradadoras de

fenaltreno, Gordona sp. degrada el Pireno, de 5 a 35 das luego de ser
inoculada.
Azoarcus spp. puede degradar benceno, tolueno, etilbenzeno y xileno
(31,32).
En el estudio hecho por Christopher W. Kaplan y Christopher L. Kitts
en cuanto al dinamismo de las comunidades bacterianas en relacin
con la concen-tracin de petrleo en el suelo, la importancia de las
comunidades microbianas radica en su maquinaria celular como
responsable de la bioconversin de es-tos contaminantes (43).
Los microorganismos que conforman el consorcio microbiano
extremo haltolerante para la biodegradacin de crudos es altamente
empleados en medios con gran cantidad de salinidad y contaminados
con benceno.
Las poblaciones microbianas usadas para degra-dar hidrocarburos
recalcitrantes (aromticos), son menos eficientes, debido a que
producen sustancias txicas que pueden inhibir los microorganismos
degradadores de aceite diesel.
La persistencia de los PAHs en el ambiente se de-ben a factores como
los nutrientes, la viabilidad, la tem-peratura, el oxigeno y la presencia
de microorganismo degradadores y el mayor problema para la
degrada-cin de esto es la baja solubilidad en agua para poder
implementar un sistema aerbico, por esto la degrada-cin
anaerbica a bajas temperaturas ha sido estudia-da como posible
causa de una baja degradacin donde encontraron que las bajas
temperaturas no afectan la poblacin microbiana sino que la
disponibilidad de oxigeno, siendo este el agente ms limitante y que
con-duca a formacin metabolitos txicos que inhiban el crecimiento
bacteriano.

2. EL PETRLEO

INTRODUCCIN

El petrleo es el producto de la degradacin anaerbica de materia

orgnica, durante largos perodos de tiempo y bajo condiciones de
alta presin y temperatura, que la convierte en gas natural, crudo y
derivados del petrleo. El petrleo crudo es una mezcla
extremadamente compleja y variable de compuestos orgnicos,
donde la mayora de los ellos son hidrocarburos, que varan en peso
molecular desde el gas metano hasta los altos pesos moleculares de
alquitranes y bitmenes. Estos hidrocarburos pueden presentarse en
un amplio rango de estructuras moleculares: cadenas lineales y
ramificadas, anillos sencillos, condensados o aromticos. Los dos
grupos principales de hidrocarburos aromticos son los monocclicos,
el benceno, tolueno y xileno (BTEX) y los hidrocarburos policclicos
(HAPs) tales como el naftaleno, antraceno y fenantreno.

La degradacin microbiana constituye el principal proceso de

descontaminacin natural (Prince, 1993). Este proceso se puede
acelerar y/o mejorar mediante la aplicacin de tecnologas de
biorremediacin (Alexander, 1999). El crudo de petrleo se
caracteriza por ser una matriz contaminante que contiene una
elevada diversidad de compuestos, por lo que es un sustrato ideal
para evaluar el potencial catablico de cepas o consorcios
microbianos de inters en biorremediacin.

2.1.

COMPOSICIN DEL CRUDO DEL PETRLEO

2.1.1.

Composicin general

El crudo de petrleo se caracteriza por ser un lquido negro, viscoso y

con una composicin qumica sumamente compleja, pudiendo
contener un sin numero de compuestos, bsicamente de la familia de
los hidrocarburos (Rosini, 1960). Los hidrocarburos hacen parte de la
familia predominante de compuestos5, por lo que constituyen uno de
los grupos de contaminantes ambientales ms importantes, tanto por
su abundancia, como por su persistencia en distintos compartimentos
ambientales (Casellas et al., 1995).
En su mayora son alcanos de cadena lineal (n alcanos o n
parafinas), alcanos ramificados (en menor cantidad), cicloalcanos (o
naftenos) y cantidades variables de hidrocarburos aromticos.
(Fernndez et al., 1992). La composicin elemental de un crudo est
condicionada por la predominancia de los compuestos tipo
hidrocarburo: 84 a 87% de carbono (C), 11 a 14% de hidrgeno (H),
de 0 a 8% de azufre (S), y de 0 a 4% de oxgeno (O) y nitrgeno (N) y
metales como el nquel y el vanadio (Clark y Brown 1977; HoweGrant, 1996). Los principales componentes se subdividen y purifican
en distintas fracciones:

Fraccin saturada. n-alcanos, alcanos ramificados con cadenas

alqulicas, las cicloparafinas o cicloalcanos y los hopanos.

Fraccin aromtica. Hidrocarburos monoaromticos, diaromticos

y aromticos policclicos (HAP).

Fraccin de resinas. Agregados de piridinas, quinolinas, carbazoles,

tiofenos, sulfxidos y amidas.

Fraccin de asfaltenos. Agregados de HAP, cidos naftnicos,

sulfuros, cidos grasos, metaloporfirinas, fenoles polihidratados.
Son menos abundantes y consisten en compuestos ms polares,
pudindose encontrar hidrocarburos heterocclicos, hidrocarburos
oxigenados y agregados de alto peso molecular (Speight, 1991).
2.2.

CLASIFICACIN DEL CRUDO SEGN GRAVEDAD API

La gravedad API es una unidad implementada por el American

Petroleum Institute en
1921. Bsicamente creada para clasificar lquidos menos densos que
el agua en una escala relacionada con la gravedad especifica de dicho
fluido. La Gravedad API se calcula as:

141.5

API

GravedadEspecificadelF
luido

131.5

(2.1)

Como se ve en la ecuacin 2.1, los petrleos con menores gravedades

especficas (ms livianos), tendrn mayores valores API. En lneas
generales los petrleos con gravedades API entre 40 y 45 tienen ms
altos precios en el mercado. El petrleo se clasifica como liviano,
mediano o pesado de acuerdo a su gravedad API:

Petrleo liviano. Es el que tiene una gravedad API mayor que 31.1
API.

28

Los Ingenieros Hacemos Girar el Mundo

Petrleo mediano. Esta definido por una gravedad API entre 22.3
API y 31.1 API.

Crudos pesados. Se caracterizan por tener gravedades API por

debajo de 22.3 API.

Crudos extrapesados o bitumen. Se caracterizan por tener

gravedades API menores de 10 API.

Estas clasificaciones pueden variar por regiones, especialmente en el

caso de crudos pesados y extrapesados (bitumen). El bitumen se
hunde en el agua mientras que el petrleo flota.

En Colombia se han encontrado petrleos con un amplio rango de

grados API, desde los livianos de Cusiana hasta los ms pesados del
Magdalena Medio o de los Llanos.
En su gran mayora el crudo colombiano es pesado, llamado Crudo
Castilla que luego de ser mezclado con otros crudos pesados se
vende en el mercado como Crudo Castilla Blend con una Gravedad
API de 18.8 API aproximadamente.

Los crudos livianos han empezado a escasear y el mundo ha tenido

que comenzar a mirar los crudos ms pesados, o de menor grado API,
como alternativa de negocio; incluso las refineras han tenido que
hacer reconversiones para cargar un mayor volumen de pesados.

Hidrocarburos

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Los petrleos tambin se clasifican entre dulces y agrios. Los

primeros son aquellos que contienen menos de 0,5% de azufre; los
segundos los que tienen ms de 1,0% de azufre.

Al refinarlos, los petrleos livianos y dulces producen ms gasolina y

causan menos contaminacin. Por eso son tan apetecidos
(ECOPETROL S.A, 2009).

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