PONTIFCIA UNIVERSIDADE CATLICA DE GOIS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA
DISCIPLINA DE GENTICA
Preparao do Teste Allium cepa
INTRODUO
A Genotoxicidade a rea da gentica que
estuda os processos que alteram a base
gentica da vida (DNA), processo este
classificado de mutagnese. A genotoxicidade
uma especialidade relativamente recente, e se
situa na interface entre toxicologia e gentica,
por isso denominada, frequentemente, de
gentica toxicolgica. A utilizao de Allium
cepa L. (cebola comum) tem sido recomendada
para anlises de genotoxicidade em efluentes
devido a sua elevada sensibilidade, baixo custo,
rapidez, facilidade de manipulao e da
utilizao de amostras sem tratamento prvio,
determinando-se a diminuio do ndice mittico e a formao de aberraes cromossmicas.
Sendo utilizado rotineiramente em todo o mundo em laboratrios que trabalham com testes de
gentica toxicolgica, considerado uma ferramenta valiosa quanto determinao da
contaminao ambiental, havendo extenso banco de dados de substncias qumicas j
testadas.
OBJETIVOS

Otimizar o teste de Allium cepa para estudos em mutagnese

Conhecer melhor a dinmica da mitose e as estruturas cromossmicas em cada fase mittica

MATERIAIS
100 mL gua deionizada
01 Becker
01 Cebola
02 Lminas para bisturi
01 Lmina para microscopia
01 Lamnula
01 leo de imerso (5mL)

Microscpio tico
30mL Soluo de Carnoy (3 lcool etlico: 1
cido actico)
30mL cido Clordrico (1N)
02 Pipetas pasteur
01 Pina
Papel absorvente
Orcena actica (2%)


PROCEDIMENTOS
01. O bulbo deve ser colocado para germinar no Becker, com a parte
inferior mergulhada na soluo (ex. gua deionizada).
02. Aps uma semana, as razes sero coletadas para anlise de
anomalias em mitose e microncleos quando atingirem o tamanho de
0,5 a 2,0 cm, em nmero de 3 por bulbo, e fixadas imediatamente em
Soluo Carnoy (3 partes de etanol e uma parte de cido actico).
03. As razes permanecero no fixador durante 20 minutos. Aps a
fixao, seram realizados os preparados histolgicos segundo as
seguintes etapas:
(a) lavagem das razes em gua destilada;
(b) hidrlise com HCl 1N, por 10 minutos;
(c) resfriamento do tubo em gua corrente;
(d) nova lavagem das razes hidrolisadas em gua destilada;
(e) colorao das razes sobre a lmina, em corante Orcena actica (2%) por 10
minutos;
(f) esmagamento entre lmina e lamnula da ponta da raiz envolvida com papel
absorvente;
(g) preparao da lmina retirando o excesso de corante e limpando-a para visualizao
no MO.
04. Aps a preparao das lminas de ponta de raiz de cebola, o aluno deve iniciar a
anlise microscpica.
05. Os diferentes estgios de diviso celular devem ser identificados e esquematizados
conforme tabela abaixo.
Fases

Interfase
M
Pr
i

t
f
o
a
s
s
e
e
M
e
t

f
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A
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3 partes de etanol e uma parte de cido actico

As razes permanecero no fixador durante 10 minutos

1. Orcena B: Tincin de cromosomas.

o

Orcena
2 g

cido
actico.55 ml

Agua
..55 ml

Esperar 20mn

Segunda Etapa

10.1. Misture, num vidro de relgio, 9 gotas de orcena actica com 1 gota de
cido clordrico.

Nota: O HCl tem como funo dissolver as lamelas medianas que unem
as
clulas umas s outras.

10.2. Escolha duas ou trs razes das que ficaram mergulhadas, e, corte em
cada uma delas, aproximadamente 2mm da extremidade do pice radicular da
cebola.

10.3. Com a ajuda de uma pina, coloque as extremidades do pice radicular

da cebola, na mistura que se encontra no vidro do relgio.

10.4. Com a ajuda de uma mola de madeira, aquea o vidro do relgio,

passando-o trs ou quatro vezes sobre a chama da lamparina de lcool, at se
soltarem vapores. No deixe ferver.

10.5. Tire um dos pices vegetativos para uma lmina de vidro e, com a ajuda
de um bisturi, corte cerca de 1mm a partir da extremidade, rejeitando a parte
restante.

 10.6. Coloque uma gota de orcena actica na lmina de vidro. Ponha o material
nesta gota durante 3 minutos. Fragmento-o com uma agulha espatulada.

10.7. Coloque uma lamela sobre o material e faa presso com o cabo da
agulha

Ma_Marcelina_loureiro_Fases_da_mitose_em_celulas_vegetais_Versao_aluno.pdf