Laboratorio # 8

Sntesis de fluorescena, emisin y absorcin de luz.

Presentado por: Jayner Angelo Miranda Segura.

Sntesis orgnica.
Docente: Fernando Agudelo Aguirre.

Universidad del Quindo.

Facultad de ciencias bsicas y tecnologas.
Qumica.
Armenia, Quindo.
Viernes 19 de noviembre del 2014
PREPARACIN DE 3-CARBOMETOXICUMARINA.
Universidad del Quindo.
Facultad de ciencias bsicas y tecnologas.
Sntesis orgnica.

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Jayner ngelo Miranda Segura (1094944915)
Qumica
1. RESUMEN
En este laboratorio se realiz la sntesis del compuesto llamado fluorescena el cual es un pigmento fluorescente que
puede ser utilizado como indicador en reacciones acido-base, se obtuvo a partir de la sustitucin electroflica
aromtica (SEAr) del resorcinol sobre el anhdrido ftlico. En esta prctica se utilizaron cantidades muy pequeas de
reactivos, por lo cual se considera una sntesis a micro escala, la mezcla del anhdrido y el resorcinol se diluyo con
cido sulfrico, se calent, se diluyo an ms con cido clorhdrico y agua, posteriormente se calent, y filtro, con el
filtrado se analiz como actuaba la fluorescena bajo la luz ultravioleta en medio, acido, bsico y neutro. El residuo
se sec, pes y caracteriz mediante espectroscopia infrarroja y ultravioleta.
Palabras clave: fluorescena, absorcin, emisin, ultravioleta, acido-base.
ABSTRACT

This practice is done in the synthesis of compound called fluorescein which is a fluorescent dye that can
be used as an indicator in acid-base reactions, was obtained from the electrophilic aromatic substitution
(EArS) of resorcinol on the phthalic anhydride. This practice is used in very small amounts of reagents,
which is considered a micro-scale synthesis, the mixture of the anhydride and resorcinol was diluted with
one drop of sulfuric acid, was heated, further diluted hydrochloric acid and water , subsequently heated,
and filter, the filtrate was analyzed as fluorescein acting under ultraviolet light in the middle, acidic, basic
and neutral. The residue was dried, weighed and characterized by infrared and ultraviolet spectroscopy.
Keywords: fluorescein absorption, emission, ultraviolet, acid-base.
2. INTRODUCCIN

Fluorescena conocida como resorcinolftalena

fue descubierta por notable Qumico Johann
Friedrich Wilhelm Adolf von Baeyer en el ao
1905. Es un polvo de color amarillo que se
disuelve en solucin alcalina produciendo
intensa fluorescencia verde. La solucin alcalina
aparece amarilla a la luz transmitida y verde a la
luz reflejada. La fluorescencia est asociada con
la presencia de un puente de oxgeno entre los
dos anillos generando la estructura del fluorano.
La fluorescena es el 4,4- dihidroxifluorano. Los
lcalis causan la hidrlisis del anillo lactnico y
la formacin del ion colorante, que tiene una
estructura comparable a del anin fenolftalena.
La fluorescena es una sustancia de la familia de
las xantinas, es una sal de sodio de resorcinol
ftalena. Tiene propiedades colorantes y
fluorescentes. Es soluble en agua y la colorea de
amarillo. Cuando se encuentra en soluciones de
pH mayor a cinco, su color se torna verde y
altamente fluorescente. Gracias a sus dobles
enlaces conjugados, es capaz de captar un fotn

de alta energa y devolverlo como fotn de baja

energa. Dicho en otras palabras, la fluorescena
capta luz en cierta longitud de onda, y emite luz
en una longitud de onda ms larga. La energa
disipada en el proceso se traduce en calor
(vibraciones de las molculas). Es un proceso
que sucede en un muy corto lapso, del orden de
millonsimas de segundo.
El fenmeno de la fluorescencia depende de los
siguientes factores:

PH del medio en el cual se encuentra la

sustancia. Cuanto ms alcalino es el pH,
mayor es la fluorescencia.

Concentracin de dicha sustancia.

Longitud de onda de luz que acta como

excitante.

La fluorescena tiene varias aplicaciones, en

veterinaria y en medicina, se usa para el estudio

4.

METODOLOGA

de los vasos sanguneos en el ojo, y para detectar

Materiales

lesiones en la crnea. Tambin es utilizada para

detectar alteraciones en el lacrimal.

En algunas personas se observan reacciones adversas,
frente a la aplicacin de fluorescena, como nuseas,
vmitos, dolor de cabeza, y si la sustancia de sale del
vaso sanguneo puede causar dolor. Algunas personas
adems presentan alergias a dicha sustancia.
La fluorescena es tambin utilizada en diferentes
tcnicas de laboratorio clnico, para la realizacin de
distintos estudios.
Por ejemplo, en las tcnicas de inmunofluorescencia
directa o indirecta, se utilizan anticuerpos conjugados
con fluorescena, para que puedan ser detectados al
ser observados en un microscopio especial, que emite
luz en una longitud de onda muy corta (ultravioleta)
a fin de estimular la fluorescena.
Adems, esta sustancia tambin se utiliza en tcnicas
ELISA (enzimo-inmuno-ensayo), donde tambin se
utilizan anticuerpos marcados con fluorescena.

Reactivos

3. OBJETIVOS

Obtener
el
pigmento
fluorescente
fluorescena a partir del resorcinol y el
anhdrido ftlico, un derivado del cido
carboxlico.
Comprender la diferencia entre emisin y
absorcin de luz en la regin del ultravioletavisible.
Aislar mediante filtracin al vacio el
producto deseado.
Caracterizar la muestra obtenida mediante
espectroscopia de infrarrojo y ultravioleta.
Dar informacin puntual sobre algunos
aspectos relevantes de la prctica y el
producto obtenido, tales como: peso,
rendimiento de la reaccin, punto de fusin,
etc.

1 tubo de ensayo de 125 x 10 mm.

4 tubos de ensayo pequeos
3 Beaker de 25 mL
1 Equipo para filtracin al vaco (matraz
Kitasato pequeo, embudo Buchner, bomba
de vaco y manguera.
2 Pipetas graduadas de 1.0 mL
Pipeta graduada de 10 mL
Pipetas Pasteur
1 Agitador de vidrio
Beaker 50 mL
1 Mortero con pistilo
1 Estufa elctrica
1 Parrilla de calentamiento
1 Pinza metlica para tubo de ensayo
1 Termmetro (0-300 C)
1 Balanza de cuatro cifras decimales
1 Beaker 400 mL
1 Esptula metlica
1 Probeta 100 mL
15 hojas de papel filtro
1 Lmpara ultravioleta

Resorcinol (o m-dihidroxibenceno) C6H6O2

Anhdrido ftlico, C8H4O3
cido sulfrico concentrado, H2SO4
50 mL de cido sulfrico para utilizar como
solucin de bao maria (se desecha al
terminar la prctica)
10 mL cido clorhdrico concentrado
20 mL solucin cido clorhdrico 1.0 M
100 mL solucin NaOH 1.0 M
2.0 Litros de agua destilada
Frasco de desechos qumicos

Procedimiento
En un tubo de ensayo de 125 x 10 mm se colocaron
0.15 g de anhdrido ftlico y 0.22 g de resorcinol que
previamente se haban molido finamente en un
mortero. Se aadieron 0.05 mL de cido sulfrico (o
bien 1 gota) y la mezcla se calent a 180C hasta que
se observ la formacin de una masa slida de color
caf oscuro, lo cual ocurri 30 o 40 minutos ms
tarde. Una mezcla de 2 mL de agua destilada y 0.1

4
mL de cido clorhdrico se verti con mucho cuidado
al contenido del tubo. Para extraer el resto de
fluorescena que permaneci pegada al tubo de
ensayo, se calent el tubo con un poco de agua y, con
la ayuda de una varilla de vidrio, se procur
desintegrar la fluorescena slida. Se filtr al vaco
sobre un papel previamente pesado y se lav con un
poco de agua helada. El precipitado se sec y peso
para calcular el rendimiento de la reaccin.

medida que aumentaba la basicidad, el efecto

fluorescente era ms evidente.
Las aguas de lavado al estar impregnadas de
fluorescenas tambin presentaron una fuerte
fluorescencia.

Con las aguas de lavado, en los beackers se observ

el color de la luz reflejada y el efecto de la luz de una
lmpara
ultravioleta, procurando
no mirar
directamente la luz UV y usando la onda corta de 370
nm.
En un vaso de precipitados se aadieron 5 mL de una
disolucin 1 M de hidrxido de sodio, se agreg un
poco de fluorescena recin preparada, y se observ la
luz reflejada y el color de la disolucin bajo luz UV.
En otro vaso pequeo se colocaron 0.5 mg de
fluorescena y se agregaron 10 mL de disolucin 1.0
M de HCl.

Resultados:
IR terico:

En otro se agregaron 10 mL de agua destilada. A

continuacin se obtuvieron los espectros UV-Visible,
de las tres disoluciones y se compararon.

5.

RESULTADOS Y ANLISIS

Observaciones:
Despus de haber calentado durante 35 min
aproximadamente se not la aparicin de un slido de
color caf oscuro.
Cuando se quiso despegar la fluorescena del tubo de
ensayo esta se encontraba muy fuertemente adherida.
Al analizar el comportamiento de la fluorescena en
medio neutro, cido y bsico, se encontr que a

Punto de fusin muestra: 319,2 - 321,8C

Punto de fusin teora: 315 C
Peso muestra: 0.177 g
Anlisis IR
Posee dos bandas propias de grupo carbonilo, la
primera se encuentra a aproximadamente 1700 cm -1.
La correspondiente al segundo grupo, al ster, a 1750
cm-1; los fenoles debido al grupo hidroxilo muestran
una absorcin caracterstica extensa de IR a los 3500
cm-1, as como las bandas aromticas tradicionales en
1500 y en 1600 cm -1. Al poseer fenoles mono
sustituidos presenta actividad a los 690 y 700 cm-1.
El punto de fusin encontrado en la teora indica que
el compuesto muy probablemente sea el mismo pese a
la pequea diferencia de aproximadamente 5 grados,

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la cual puede deberse a errores en la toma del dato, o
bien contaminacin de la muestra.

0.000975 moles resorcinol

Porcentaje de rendimiento:

332.306 g fluoresceina
1 mol
=
0.324 g de fluorescena.

Clculo del porcentaje de rendimiento de la muestra

Al llevarse a cabo el mecanismo de esta forma,

reaccionan 2 moles de resorcinol con un mol de
anhdrido ftlico para formar la fluoresceina.
Entonces:
Moles de resorcinol:
0.219 g

98 g
1 mol
x
= 0,00195 mol
100 g 110.11 g

Moles de anhdrido ftalico:

0.15 g

% rendimiento=

w experimental
100
w teorico

% rendimiento=

0.177 g
100
0.324 g

% rendimiento= 54.63%
El bajo porcentaje de rendimiento era de esperarse
dado a que en el tubo de ensayo se perdi mucho de
la muestra debido a que fue muy difcil de despegar.
6.

PREGUNTAS
A. Consulte la estructura de al menos otros
dos pigmentos fluorescentes.

98 g
1mol
x
= 0,0009926 mol
100 g 148.1 g

El reactivo lmite se obtiene dividiendo las moles de

cada producto por su factor estequimtrico, y despus
se comparan para conocer cual est en menor
proporcin, as:

0,00195mol resorcinol
<
2
0,0009926 mol anhidrido
1

Quinina

0.000975 mol resorcinol < 0.0009926 mol anhdrido

Como se puede notar el reactivo en menor proporcin
es el resorcinol por lo cual, este va a ser el reactivo
limite.

POPOP

El reactivo que se encuentra en exceso es el anhdrido

ftlico, ya que el resorcinol reacciono en su totalidad
para dejar un sobrante de este reactivo, as:
0.0009926 mol anhdrido - 0.000975 mol resorcinol
=
0.0000176 moles en exceso de anhdrido ftalico
Clculo del peso terico

Naranja de acridina
B. Por qu es diferente el color de la
disolucin de fluorescena en medio cido,

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bsico y neutro? Qu cambios
estructurales se producen en la molcula
a consecuencia del medio cido o bsico?

como lquidos y gases; ms all, se puede

emplear para determinar la estructura de
compuestos orgnicos.

Son
probablemente
fluorescentes
compuestos
que
contengan
anillos
aromticos, dobles enlaces conjugados y/o
anillos aromticos fusionados. Sin embargo
los
heterociclos
simples
no
son
fluorescentes;
a
mayor
grado
de
aromaticidad, es mayor la fluorescencia, y es
as como los heterociclos fisionados con
benceno, son fluorescentes.

D. En qu difiere el color de las disoluciones

observadas a simple vista de aquellas
observadas bajo luz ultravioleta? Cmo
se nombra tal propiedad de las
sustancias?
Se diferencian a simple vista porque la luz
emitida por las soluciones bajo la luz azul es
mucho ms vistosa, a esta propiedad se le
llama fluorescencia, la sustancia absorbe luz
de cierta longitud de onda y luego la emite
con una longitud de onda diferente.

Grupos donadores de electrones (amina,

hidroxilo, metoxi, etc) como sustituyentes en
un
anillo
aromtico
aumentan
la
fluorescencia
-NH2 -NH-CH3 -OH -O-CH3

E. Observando

los
espectros
UV-Vis
obtenidos, en qu difieren? Tal
diferencia es observable a simple vista?

Grupos aceptores de electrones (nitro,

carboxilo,
halgenos,
etc)
como
sustituyentes en un anillo aromtico
disminuyen la fluorescencia
-NO2 -COOH -CH2-COOH -Br -Cl -I (CH3)3N+ -NH3+
Es por esto que al cambiar el grado de
acidez-basicidad, aumenta la fluorescencia, o
bien, decrece.
C. Investigue qu es un espectro de absorcin
y uno de emisin.
El espectro de emisin atmica de un
elemento es un conjunto de frecuencias de
las ondas electromagnticas emitidas por
tomos de ese elemento, en estado gaseoso,
cuando se le comunica energa. El espectro
de emisin de cada elemento es nico y
puede ser usado para determinar si ese
elemento es parte de un compuesto
desconocido.
El espectro de absorcin de un material
muestra la fraccin de la radiacin
electromagntica incidente que un material
absorbe dentro de un rango de frecuencias.
Es, en cierto sentido, el opuesto de un
espectro de emisin. Cada elemento qumico
posee lneas de absorcin en algunas
longitudes de onda, hecho que est asociado
a las diferencias de energa de sus distintos
orbitales atmicos. De hecho, se emplea el
espectro de absorcin para identificar los
elementos componentes de algunas muestras,

Los dos primeros espectros difieren entre s en

absorbancia, (azul, negro) que es la capacidad que
tiene el cuerpo objeto de estudio de absorber la luz
que incide sobre l, y as mismo emitirla, tienen la
misma longitud de onda, lo que cambia es la
intensidad con la cual la emiten, es decir, absorbancia,
siendo la solucin neutra (negro) la ms luminiscente
con una absorbancia menor, aproximadamente de 1
AU.
Estos dos espectro (azul, negro) difieren en longitud
de onda con el tercer espectro (rojo), que es el
espectro de la solucin bsica, esta emite luz en una
longitud de onda cercana a 500 lo que ocasiona que
veamos dicha disolucin ms intensamente.
7.

CONCLUSIONES

Se obtuvo el pigmento fluorescente

fluorescena a partir de la reaccin a micro
escala del resorcinol con anhdrido ftlico.
Se comprende que la emisin y absorcin de
radiacin electromagntica es una propiedad
inherente de muchas estructuras qumicas, lo
cual est estrechamente con la energa de los
propios orbitales atmicos, estos espectros
son como la huella dactilar de la sustancia en
cuestin.
Se aisl mediante filtracin al vaco el
producto deseado, obtenindose una masa
igual a 0.177 g.
Se caracteriz la muestra mediante
espectroscopia infrarroja encontrando as
una gran concordancia entre los grupos
funcionales presentes en el espectro con los
de la estructura; mediante el anlisis de sus
espectros ultravioleta se aprendi como
interacta la radiacin electromagntica con
algunas muestras y como esto puede ser
cuantizado.
Dar informacin puntual sobre algunos
aspectos relevantes de la prctica y el
producto obtenido, tales como: peso,
rendimiento de la reaccin, punto de fusin,
etc.
Se hall que el producto final obtuvo un
masa igual a 0.177 g, que el rendimiento de
la reaccin fue del 54.63% y que el punto de
fusin no fue muy diferente al de la teora y
fue de 319,2 - 321,8C.

8. BIBLIOGRAFA

http://translate.google.com.co/
http://www.ecured.cu/index.php/Fluoresce
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http://quimica.laguia2000.com/elementosquimicos/fluoresceina
http://sdbs.riodb.aist.go.jp/sdbs/
http://www.caslab.com/Fluorescein_CAS_2
321-07-5/
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Q
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http://en.wikipedia.org/wiki/File:POPOP.s
vg
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Ac
ridine_Orange.png
Factores fisicoqumicos que influyen en la
emisin
luminiscente
de
una
molcula.2012.
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_de_a
bsorci%C3%B3n
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_de_e
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