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Mtodo DIRECTO
Mtodo INDIRECTO
PROS
CONTRAS
PROS
CONTRAS
* Rpido
porque slo
se usa un
anticuerpo y
se necesitan
menos
etapas.
*Unin
especfica
del
anticuerpo
secundario
(no hay
reactividad
cruzada).
*
Disminucin
* Falta de
sensibilidad para
detector bajos
niveles de
expresin del
antgeno.
* Necesidad de
marcar cada
anticuerpo
primario para cada
antgeno de
inters: consume
tiempo y es
costoso.
*La
inmunoreactividad
del anticuerpo
* Mayor nivel de
sensibilidad y
genera una seal
ms intensa.
* Una amplia
variedad de
anticuerpos
secundarios
marcados
disponibles
comercialmente.
*Mxima
inmunoreactividad
del anticuerpo
primario se
mantiene, ya que
no est etiquetado.
* Unin no
especfica
del
anticuerpo
secundario
y alto ruido
de fondo.
* El uso de
un
anticuerpo
secundario
requiere
pasos
adicionales
de bloqueo
y de control.
Mtodo DIRECTO
de la
variabilidad
del ensayo y
mejora de la
calidad de
los datos.
primario puede
verse afectada
adversamente por
el marcaje.
* No hay
flexibilidad en la
eleccin marcador
del anticuerpo
primario de un
experimento a
otro.
* Amplificacin de
seal mnima.
* Altos
conocimientos
cientficos
especializados
requeridos.
Mtodo INDIRECTO
*Mayor
amplificacin de la
seal debido a la
unin de varios
anticuerpos
secundarios a cada
anticuerpo
primario.