INFORME N02

GRAM

COLORACION DE

COLORACION DE GRAM
1. OBJETIVOS:

Clasificar algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas de acuerdo a la coloracin de
Gram.

Comprender la importancia que tienen estas coloraciones para la caracterizacin e identificacin de las
bacterias.

2. FUNDAMENTO TERICO:
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La
principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el
medio que la rodea. El
modo ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de
colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las clulas para
suficientes los procedimientos que usan un solo colorante
simple. Sin embargo, a menudo se utilizan mtodos que no tien
clulas, es el proceso denominado tincin diferencial. Uno muy
es la coloracin Gram.

la microscopa, son
llamado de tincin
de igual modo todas las
usado en microbiologa

Basndose en su reaccin a la tincin Gram, las bacterias pueden

gram positivas y gram negativas. Esta coloracin tiene gran
taxonoma bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de
distintas bacterias.

dividirse en dos grupos:

importancia
en
la pared celular de las

Mientras que las bacterias gram negativas son constantes en su reaccin, los microorganismos gram positivos pueden
presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gram lbiles).
Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias gram positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta,
y en consecuencia, se tien por la safranina apareciendo como gram negativas. Anlogo efecto se produce en
ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecucin de la tcnica.
Por

este

motivo,

es

preciso

atenerse,

en

la

prctica,

al

procedimiento

establecido.

El mecanismo de la tincin Gram es la reseado en el siguiente esquema:

Productos que
se utilizan

Reaccin y coloracin de las bacterias

GRAM +

GRAM 1

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1) Cristal
violeta
2) Lugol
solucin iodada
3) Alcohol

4) Safranina

COLORACION DE

Clulas color violeta

Clulas color violeta

Se forma el complejo CV-I. Las clulas

continan teidas de color violeta.
Se deshidratan las paredes celulares. Se
contraen los poros. Disminuye la
permeabilidad. El complejo CV-I no
sale de las clulas que continan teidas
de color violeta.
Clulas no decoloradas; quedan teidas
de color violeta.

Se forma el complejo CV-I. Las clulas

continan teidas de color violeta.
Eliminacin por extraccin de grasas de
las paredes celulares. Aumenta la
porosidad. El complejo CV-I se separa
de la clula.
Clulas decoloradas; se tien de color
rosado.

3. Materiales:

Mechero Bunsen
Asa de platino
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen natural: Yogurt
Aceite de cedro
Goteros
Pinzas
Agua destilada
Colorantes para Tincin:
Cristal Violeta, Lugol, Safranina y Alcohol 95

3.1 EQUIPO:
Microscopio

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4. PROCEDIMIENTO:
1. EXTENSION:
En un portaobjetos limpio se coloca la muestra de yogurt con un asa de platino previamente esterilizada en
la llama.
Se fija la extensin por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque.

2. COLORACIN:
3

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Se cubre la muestra con Cristal Violeta, se espera un minuto.

Se lava con agua destilada

1 minuto en lugol (fija el cristal violeta) y se lava con agua destilada si es necesario.

Se decolora con alcohol de 95, hasta que quede de color celeste.

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GRAM

COLORACION DE

Luego se agrega safranina y se lava con agua corriente.

Se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro

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3. OBSERVACIN
:
Una vez que
la
preparacin

est totalmente seca, poner una gota muy pequea de aceite de cedro y observar al microscopio con el
objetivo de inmersin.

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5. CONCLUSIONES

Las clulas que son teidas de color violeta pertenecen a la coloracin Gram positiva y las clulas que son
teidas de color rosado pertenecen a la coloracin Gran negativa.

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio
ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms
simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.

6. BIBLIOGRAFIA:

http://www.maristasourense.com/extras/materias/bioloxia/Gram.PDF

http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcariontes/Alejandra/
Pr%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%20Gram.pdf

Madigan, M.T., Martinko, J.M. y Parker, J. Brock, Biologa de los microorganismos. 10 edicin. Prentice
Hall. USA